Effects of prolactin on HLA- DR and CD40 expressions by human thyrocytes

Objective To study the effects of prolactin (PRL) on HLA- DR and CD40 expressions by human thyrocytes, and to investigate the possible mechanisms for PRL to affect the de velopment of Graves’ disease (GD). Methods Thyrocytes in secondary culture, which were from GD thyroid glands and the tissu es adjacent to the lesions of multinodular goiter and adenoma (control group), w ere treated respectively with ovine PRL (oPRL), interferon- γ (IFN- γ), interl ukin- 4 (IL- 4) and oPRL plus IFN- γ (10 U/ml) or IL- 4 (5 ng/ml) for 7 days . HLA- DR and CD40 expressions on the thyrocytes were determined by immunofluor escent staining and flow cytometry. Results oPRL (12. 5 ng/ml-1000 ng/ml) had no significant direct effect on HLA- DR or C D40 expression. It did not significantly affect the stimulation of HLA- DR exp ressions on the two groups of thyrocyte treated with IFN- γ or on GD thyrocytes treated with IL- 4. oPRL could antagonize the stimulation of CD40 expressions by IFN- γ and the inhibition by IL- 4 on both groups of thyrocytes. The antago nizing effects were related to the concentrations of PRL. IFN- γ- stimulated p ercentages of CD40［+］ thyrocytes and delta mean fluorescence intensity (dMF) in both thyrocyte sources were significantly reduced in the presence of 200 ng/ml oPRL (both GD and Control: P<0. 01 and P<0. 05, respectively; Contro l: P<0. 05) and 1000 ng/ml oPRL (GD: P<0. 01; Control: P<0. 05). oPRL caused significant increasing in IL- 4- inhibited percentages of CD40［+］ ce lls from the two groups of thyrocytes at 12. 5 ng/ml and 1000 ng/ml and dMF fr om GD thyrocytes at 1000 ng/ml (P<0. 05). Conclusions PRL can exert indirect effects on CD40 expressions on thyrocytes by antagonizing the modulatory actions of IFN- γ and IL- 4 with dose- related effects. This m ay be one important mechanism for PRL to affect the development of GD.     

干扰素-γ对甲状腺细胞钠/碘转运体基因调控的研究

目的研究干扰素-γ(IFN-γ)对甲状腺滤泡细胞膜上钠/碘转运体(NIS)基因表达的影响,探讨细胞因子在甲状腺生理功能调控和甲状腺疾病发病机制中的作用和地位.方法取Graves病(GD)患者的甲状腺组织,进行甲状腺细胞原代培养,培养5天后,吸去培养液,换用含不同浓度IFN-γ的试验液,与单层培养的滤泡上皮细胞共同孵育48 h,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测钠碘转运体(NIS)mRNA表达的变化.结果IFN-γ浓度在0、1 U/ml时,GD甲状腺滤泡上皮细胞膜上NIS mRNA表达无明显差异;IFN-γ浓度在10、100U/ml时,NIS基因表达比前一浓度时明显受抑制(P＜0.05);IFN-γ浓度为1000U/ml时,NIS基因表达量与前一浓度比较无统计学差别.结论IFN-γ可抑制甲状腺滤泡细胞基膜上NIS基因的表达,提示细胞因子在甲状腺生理功能调控和甲状腺疾病发病机制中发挥重要作用.     

再生障碍性贫血患者血清IFN-γ、IL-4和T细胞亚群的表达

目的 探讨再生障碍性贫血患者血清IFN-γ、IL-4和T细胞亚群的表达.方法 采用酶联免疫双抗体夹心法和单克隆抗体对40例再生障碍性贫血患者(A组)血清IFN-γ、IL-4和T细胞亚群的表达进行检测,同期选择40例门诊健康体检者作为对照组(B组).观察各组血清IFN-γ、IL-4和T细胞亚群的表达水平.结果 A组血清IFN-γ、IL-4表达水平及Th1/Th2明显高于B组(P＜0.05);A组CD4、CD4/CD8比值明显低于B组(P＜0.05),而CD3和CD8明显高于B组(P＜0.05).结论 再生障碍性贫血患者发病与免疫功能异常密切相关,Th1偏移和T淋巴细胞亚群失调在发病机制中发挥着重要作用.     

白细胞介素21对SHIV感染的恒河猴外周血CD8+ T细胞分泌γ干扰素的影响

目的 研究白细胞介素21(interleukin 21,IL-21)对SHIV感染CD8+T细胞分泌干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的影响.方法 从SHIV/恒河猴模型外周血中分选出CD8+T细胞,加入IL-21诱导培养,应用ELISA方法检测细胞培养上清液中IFN-γ浓度,RT-PCR方法检测细胞中IFN-γ mRNA的表达水平,流式细胞术检测分泌IFN-γ的CD8+T细胞所占的百分比.结果 10 ng/mL,IL-21明显促进CD8+T细胞分泌IFN-γ(P＜0.05),IFN-γ mRNA的表达明显升高,4h为刺激CD8+T细胞胞内IFN-γ合成的最佳时间.结论IL-21对CD8+T细胞分泌IFN-γ有促进作用.     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞与CD4+Th细胞分化的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎患者树突状细胞(dendritic cells,DCs)与CD4+Th细胞亚群分化的关系.方法 分离慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞,以rhlL-4(50ng/mL)、rhGM-CSF(10ng/mL)和rhTNF-α(100μ/mL)诱导培养DC.以流式细胞仪检测DCs表面CD1a、CD83、CD80、CD和HLA-DR分子的表达情况.免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞亚群,PMA+Ionomycin刺激后胞内荧光染色,流式细胞仪检测Th细胞内特征性细胞因子IFN-γ/IL-4以判断Th1/Th2分化.ELISA法检测DCs或Th细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量.结果 慢性乙型肝炎患者的DCs表达CD1a、CD83、CD80、CD86和HLA-DR分子的水平明显低于正常人;培养至第7天.慢性乙型肝炎患者DCs分泌的IL-12水平低于正常人,而分泌的IL-6水平高于正常人.与正常人相比,慢性乙型肝炎患者外周血中Th1细胞占CD4+T细胞的百分比较低,Th细胞培养上清中IFN-γ的量也较低.患者DCs与同种异体的健康人Th细胞共培养,刺激Th1型细胞因子IFN-γ产生的能力低于正常人.结论 慢性乙肝患者体内DCs功能的异常可能导致了外周血Th1分化不足.     

白介素12在γδT细胞表达L-选择素中的调控作用

目的观察白介素12（IL-12）对γδT细胞表面L-选择素（CD62L）表达的调控作用。方法人外周血活化γδT细胞经诱导及扩增后,采用Mtb-Ag首次刺激和再次刺激,在细胞分孔培养时分别加入不同的细胞因子（IFN-γ、IL-12＋抗IFN-γ、IL-12＋抗IL-12、IL-12＋IFN-γ）和不同浓度（0、0.1 ng/mL、1 ng/mL）IL-12。收集各组培养第0、3、5、7天的细胞,流式细胞术检测γδT细胞表面CD62L的表达。结果 Mtb-Ag首次刺激和再次刺激后,IL-12组、IL-12＋抗IFN-γ组和IL-12＋IFN-γ组γδT细胞表面CD62L的表达量均较空白对照组显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;而IFN-γ组、IL-12＋抗IL-12组的CD62L表达量与空白对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。随着IL-12浓度的增加,γδT细胞表面CD62L的表达量增加,其中Mtb-Ag首次刺激后第3和5天时,0.1 ng/mL和1.0 ng/mL IL-12组CD62L表达量均明显高于阴性对照组（P〈0.05）,且1.0 ng/mL IL-12组明显高于0.1 ng/mL IL-12组（P〈0.05）,具有浓度依赖性;Mtb-Ag再刺激后CD62L的表达量下调,但在加入IL-12后CD62L表达的下调速度减缓,且1.0 ng/mL IL-12比0.1 ng/mL IL-12更能使CD62L表达维持在相对较高水平（P〈0.05）。结论 IL-12在γδT细胞活化时调控CD62L的表达并且具有浓度依赖性。     

2型糖尿病患者NK细胞活性降低及其临床意义

目的 探讨2型糖尿病患者NK细胞活性降低及其临床意义.方法 采用免疫荧光标记和流式细胞仪技术对40例2型糖尿病患者及40例健康人的外周血单个核淋巴细胞亚群表面标记物的表达及NK细胞百分比的检测,用ELISA法测定单个核细胞培养上清液中的IFN-γ,IL-2,IL-6、可溶性白介素-2受体(sIL-2R)水平,并对结果 进行分析.结果 CD3 ,CD4 /CD3 ,CD4 /CD8 ,CD56 CD16 /CD3-与正常对照组比较有显著性降低(P＜0.05或P＜0.01).CD19 ,CD8 /CD3 ,CD18 /CD8 显著升高(P＜0.01).CD2 ,CD28 /CD8 ,两组比较无明显改变(P＞0.05).T2DM组IFN-γ,IL-2较对照组显著性降低(P＜0.01).sIL-2R水平较对照组显著性升高(P＜0.01).IL-6两组间无明显变化(P＞0.05).结论 2型糖尿病患者NK细胞活性降低,使T细胞免疫功能、细胞因子分泌及受体水平异常,造成2型糖尿病患者免疫功能障碍.     

变应性鼻炎辅助性T细胞免疫球蛋白功能区和黏液素样功能区-1的表达

目的 探讨人辅助性T细胞(helperT lymphocyte,Th)表达T细胞免疫球蛋白功能区和黏液素样功能区-1(T cell immunoglobulin domain and mucin domain-1,TIM-1)在变应性鼻炎(allergicrhinitis,AR)中的作用.方法 密度梯度离心分离20名健康人和20例AR患者外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,PBMC),免疫磁珠分选CD4+T细胞,CD4+CD45RA+T细胞,免疫荧光和流式细胞仪检测TIM-1阳性细胞.对比植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA,20μg/ml)非特异性刺激上述细胞后表达TIM-1阳性细胞的差异.标准变应原(屋尘螨,50000 SOU/ml)和内毒素(脂多糖,lipopolysaccharide,LPS,20ng/ml)特异性刺激树突状细胞(dendritic cells,DC),观察DC提呈抗原并诱导初始Th细胞表达TIM-1的特点.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养液中IL-4、IFN-γ的分泌.结果 AR患者组CD4+T细胞中TIM-1阳性CD4+T细胞9.48%4±1.51%,高于健康组3.12%±0.32%(P＜0.05);PHA刺激后两组表达TIM-1的CD4+T细胞均高于刺激前(P值均<0.05).DC提呈抗原刺激健康组初始Th细胞后,检测混合细胞液中表达TIM-1的细胞,标准变应原组10.81%±1.48%,高于LPS组6.07%±1.45%(P＜0.05).ELISA检测相应IL-4、IFN-γ的分泌,标准变应原组IL-4为(74.61±13.82)pg/ml、(25.31±7.23)pg/ml;LPS组分别为(28.57±3.36)pg/ml、(163.41±82.37)Pg/ml.结论 AR患者中表达TIM-1的Th细胞高于健康者,DC提呈抗原后可以促进其表达;TIM-1的表达有利于初始Th细胞向Th2分化,由此诱发以Th2细胞因子为主的免疫反应.     

子宫内膜异位症患者血浆和PBMC培养上清液中IFN-γ、IL-4的表达及其临床意义

目的 检测子宫内膜异位症患者血浆和PBMC培养上清液中IFN-γ、IL-4的表达水平,并分析其临床意义.方法 对25例子宫内膜异位症患者和25例健康生育年龄妇女的外周血单个核细胞(PBMC)进行分离和培养,并采用ELISA方法检测血浆和PBMC培养上清液中IFN-γ、IL-4的表达水平.结果 (1)在PBMC诱生培养上清液中,内膜异位症组IL-4的表达水平为(33.6±11.7)ng/L,明显比对照组[(23.4±4.8)ng/L]升高(P＜0.01),而IFN-γ的表达水平(1 038.8±356.7)ng/L较对照组[(1463.1±348.3)ng/L]明显下降,子宫内膜异位症组的IFN-γ/IL-4比值(38.5±18.2)较对照组(73.2±13.6)也明显下降(P＜0.01).(2)在血浆中,除子宫内膜异位症组IL-4水平[(30.1±10.8)ng/L]高于对照组[(21.4±5.7)ng/L](P＜0.05)外,IFN-γ的表达水平及IFN-γ/IL-4比值与对照组比较,差异均无显著性(P＞0.05).结论 子宫内膜异位症患者体内存在Th1/Th2失衡,使子宫内膜能够逃避免疫监视及杀伤而在异位种植,引起内异症的发生发展.     

Graves'病患者血清中IFN-γ,IL-4和IL-18水平检测及其相关研究

目的:探讨IFN-γ, IL-4, IL-18在Graves'病(GD)发病机制中的作用及相互关系和GD免疫动态. 方法:用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测40例初发GD患者及其中38例治疗后患者和30例正常人血清中IFN-γ, IL-4和IL-18水平. 结果:①初发GD患者与正常组比较,血清IFN-γ, IL-4, IL-18水平及IFN-γ/IL-4比值均显著升高(P<0.01). ②治疗后GD患者与初发GD患者比较,血清IFN-γ水平无差异(P>0.05),血清IL-4水平显著升高(P<0.01);血清IL-18水平及IFN-γ/IL-4比值降低(分别为 P<0.05,P<0.01) .治疗后GD患者与正常组比较,血清IFN-γ, IL-4水平显著升高(P<0.01),IL-18升高(P<0.05),血清IFN-γ/IL-4比值显著下降(P<0.01). ③初发GD患者血清中IFN-γ与IL-18之间呈直线正相关(r=0.677,P<0.05);治疗后GD患者血清中IL-4与TT3, TT4之间呈直线负相关(r=-0.678,-0.626,P<0.05),血清中IL-18与TT3, TT4之间呈直线正相关(r=0.601,0.535,P<0.05). 结论:GD患者血清中IFN-γ, IL-4和 IL-18水平的变化可能在GD的发病机制中起重要作用,初发GD以Th1型免疫反应为主,抗甲状腺药物治疗后则向Th2型漂移.     

Expression of ICAM-1, B7.1 and TPO on human thyrocytes induced by IFN-alpha

Objective　To detect expression of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), B7.1 and thyroid peroxidase (TPO) on thyrocyte and study the possible mechanism of interferon-alpha (IFN-α) in the pathogenesis of autoimmune thyroid disease (AITD). Methods　Thyrocytes were cultured from 6 normal persons. Antigen expression on thyrocytes induced by cytokines was examined using immunofluorescence staining with flow cytometer. Results　IFN-α significantly stimulated the expression of ICAM-1, B7.1 and TPO, as compared with those of control group. IFN-γ markedly enhanced the expression of HLA-DR and ICAM-1, but not B7.1. Prolactin (PRL) resulted in increased expression of ICAM-1, B7.1, as well as overexpression of TPO, which is more significant than that stimulated by IFN-α. Conclusions　Thyroid autoimmunity induced by IFN-α is associated with the expression of ICAM-1, B7.1 and TPO. IFN-γ could not induce the expression of B7.1, therefore it is not an initiator in AITD. In addition, we should pay more attention to PRL which possibly plays an important role in the initiation and perpetuation of postpartum thyroiditis.     

小鼠骨髓源半成熟树突状细胞的培养与初步鉴定

目的探索培养与鉴定小鼠骨髓来源半成熟树突状细胞(smDC)的可行方法。方法分离、纯化6周龄C57BL/6小鼠骨髓单核细胞,以含10%胎牛血清、2 ng/ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和20ng/ml重组小鼠白细胞介素(IL)-4的RPMI-1640培养基培养9 d;再以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(40 ng/ml)刺激24 h获得smDC,同时以脂多糖(1μg/ml)刺激和不加刺激培养24 h获得成熟DC(mDC)和未成熟DC(iDC)。扫描电子显微镜、流式细胞术、ELISA检测iDC、smDC和mDC的形态、细胞表面标志及细胞因子的表达。建立体外淋巴细胞反应模型,采用细胞计数试剂盒检测smDC对异基因淋巴细胞的活化作用。结果smDC的体积介于iDC和mDC之间、多呈类圆形或圆形,胞体直径约为15μm,树突长度多在5~10μm。smDC、iDC与mDC均高表达CD11c,smDC表达CD40、CD80、CD86及MHC-Ⅱ介于iDC和mDC之间。smDC分泌IL-1β、IL-6和IL-12显著低于mDC(P<0.01)、分泌IL-12显著低于iDC(P<0.05),分泌IL-1β、IL-6与iDC比较差异无显著性(P>0.05);smDC、iDC与mDC分泌IL-10差异无显著性(P>0.05)。smDC对异基因淋巴细胞激活作用显著低于mDC和阳性对照(P<0.01),而与阴性对照和iDC差异无显著性(P>0.05)。结论smDC可能是一个功能和形态上相对独立的DC亚群,体外利用GM-CSF、IL-4和TNF-α诱导骨髓单核细胞是获得smDC的有效方法。     

慢性乙型肝炎合并肝癌患者树突状细胞负载乙型肝炎病毒抗原后表型和功能的研究

目的研究慢性乙肝合并肝细胞癌(HCC)患者外周血髓样树突状细胞(mDC)负载乙型肝炎病毒(HBV)抗原后表型和功能的变化。方法用成分血分离机采集21例肝细胞癌患者和4名健康人的外周血单核细胞(PBMC),用无血清AIMV培养基加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)和白细胞介素(IL)4等因子诱导mDC分化、发育和成熟,同时加入HBcAg或HBsAg致敏mDC,通过流式细胞仪分析mDC表面分子的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测mDC培养上清中IL12、IL10的含量,通过自体混合淋巴细胞反应(AMLR)比较抗原致敏后mDC刺激淋巴细胞增殖的能力。结果在肝细胞癌患者中,(1)经HBcAg致敏的mDC表面分子CD80、CD86、CD40、HLADR的表达率(55%±26%、80%±13%、70%±13%、73%±24%)明显高于无抗原致敏组mDC(29%±25%、35%±18%、44%±26%、45%±23%,P<005);经HBsAg致敏的mDC仅HLADR的表达率(63%±15%)高于无抗原致敏组(45%±23%,P<005),其他表面分子差异无统计学意义。(2)在AMLR中经HBV抗原致敏的mDC刺激淋巴细胞增殖的能力明显高于无抗原致敏组(P<005),而且HBcAg的致敏效果优于HBsAg的致敏效果(P<005)。(3)经HBcAg致敏的mDC分泌IL10和IL12的量(236pg/ml±95pg/ml,733pg/ml±212pg/ml)明显高于经HBsAg致敏的mDC(35pg/ml±9pg/ml,135pg/ml±63p     

舒芬太尼对人脐血树突状细胞免疫功能的影响

目的探讨舒芬太尼对人脐血树突状细胞(DC)免疫功能的影响。方法无菌条件下采集脐带血70 ml,经密度梯度离心法获得脐血单个核细胞,然后分3组进行培养。阴性对照组(N组):只加rhGM-CSF 50 ng/ml和rhIL-4 10 ng/ml培养10 d;阳性对照组(P组):在加入rhGM-CSF、rhIL-4培养的同时加入rhTNF-α50 ng/ml培养10 d诱导成熟树突状细胞;药物组(S组):加入rhGM-CSF、rhIL-4的同时加入舒芬太尼其浓度分别为(0.2、0.5、1.0)ng/ml(S_(0.2)、S_(0.5)、S_(1.0)培养10 d。培养过程中在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态学变化;以流式细胞仪分析各组细胞免疫表型CD80、CD86、CD83、HLA-DR分子的表达;ELISA法测定其分泌IL-12的水平;MTT法检测DCs刺激混合淋巴细胞的增殖能力。结果与N组比较,S组和P组细胞具有典型的树突状细胞形态学特征,CD80、CD86、CD83和HLA-DR分子的表达增加(P<0.05),促进同种异体混合淋巴细胞增殖的能力较强(P<0.05),IL-12表达增加(P<0.05);与P组比较,S组细胞随舒芬太尼药物浓度增加树突状伪足逐渐不明显,CD80、CD86、CD83和HLA-DR分子表达以及促进混合淋巴细胞增殖能力呈不典型的剂量依赖性下降趋势(P<0.05),IL-12表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论脐血来源的单个核细胞可在舒芬太尼的刺激下诱导为成熟的树突状细胞,但舒芬太尼对树突状细胞成熟和免疫功能的影响具有剂量依赖性下降趋势。     

系统性红斑狼疮患者血清中IL-10抑制抗原递呈细胞表面HLA-DR和CD80的表达

目的:研究系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)患者血清中的IL-10对正常单核细胞分化形成的树突状细胞(dendriticcells,DCs)及其前体单核细胞抗原递呈相关膜表面分子表达的影响。方法:分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),并采用GM-CSF IL-4方案诱导分化形成DCs,在此过程中加入不同IL-10水平的SLE患者血清或混有IL-10中和抗体的SLE患者血清,联合培养7天后收集细胞,经形态学鉴定,以流式细胞术检测HLA-DR、CD80、CD86的表达。结果:在SLE血清的作用下,DCs的HLA-DR、CD80的表达下调,CD86表达不受影响;中和SLE血清中的IL-10后,HLA-DR、CD80表达能够恢复。其前体细胞单核细胞的HLA-DR、CD80的表达也可被SLE血清下调,用中和抗体中和IL-10后,其表达可部分恢复。结论:高IL-10水平的SLE血清能够抑制DCs及其前体单核细胞表面分子HLA-DR、CD80的表达,对抗原递呈细胞的功能可能产生影响。     

碘化钠和IL-1β对人甲状腺上皮细胞TRAIL表达的影响

目的 研究不同浓度碘化钠(NaI)和白细胞介素-1β(IL-1β)对体外培养的原代人甲状腺上皮细胞(TEC)肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的表达及凋亡的影响,探讨自身免疫性甲状腺疾病(AITD)的可能发病机制.方法 收集正常、Graves病(GD)和桥本甲状腺炎(HT)患者甲状腺组织进行原代细胞培养,以不同...     

CD40 siRNA对 MRL/Lpr狼疮小鼠炎症反应的影响

目的：观察CD40的小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）对系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）动物模型MRL/Lpr小鼠细胞因子IFN γ、IL 17、IL-4和抗双链DNA(anti-double strand DNA,anti-ds-DNA)抗体表达水平的影响,探讨CD40 siRNA治疗MRL/Lpr小鼠的可能性。方法：16只MRL/Lpr小鼠随机分为对照组、空载体组、CD40-siRNA1组及CD40-siRNA2组,每组4只,将成功构建的CD40 siRNA表达载体尾静脉注射MRL/Lpr小鼠,对照组和空载体组小鼠分别注射等剂量、等比例的磷酸盐缓冲液（PBS）和pGFP-V-RS空载体,每隔1天1次,共6次,14 d处死小鼠,称其脾的质量,组织切片在荧光显微镜下观察小鼠脾是否有CD40 siRNA的表达,注射前及注射后第2、5、8、11和14 天小鼠尾部采血,ELISA法检测4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-dsDNA抗体的表达水平变化, RT-PCR法检测小鼠脾组织中CD40 mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测小鼠脾组织中CD40蛋白的表达水平。结果：注射后的siRNA表达载体可以在小鼠脾中表达;注射CD40 siRNA组的小鼠脾质量减轻,由对照组（141.88±7.81） mg和空载体组（153.10±7.60） mg降低至CD40-siRNA1组（78.85 ±5.61） mg和CD40-siRNA2组（80.25±4.07） mg,注射前4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-dsDNA抗体的（质量）浓度比较,差异无统计学意义;而注射后第2、5和8天 CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组MRL/Lpr小鼠血清中IFN-γ、IL-17和（质量）浓度明显下降,CD40-siRNA1组的IFN-γ的（质量）浓度依次为（118.74±10.32） ng/L（pg/mL）、 （115.24±8.26） ng/L、（113.71±5.02） ng/L ,CD40-siRNA2组依次为（117.83±6.83） ng/L 、（114.07±0.97） ng/L、（112.67±9.66） ng/L; CD40-siRNA1组的IL-17的(质量)浓度依次为（7.05±0.41） ng/L、（6.34±0.76） ng/L、（5.83±0.43） ng/L,CD40-siRNA2组依次为（7.07±0.22） ng/L、（6.35±0.49） ng/L、（6.12±0.80） ng/L;CD40-siRNA1组的anti-dsDNA的浓度依次为（7.51±0.29） ng/L、（6.74±0.45） ng/L、（6.32±0.39） ng/L;CD40-siRNA2组依次为（8.19±0.38） ng/L、（7.14±0.50） ng/L、（6.48±0.29） ng/L。IL-4的（质量）浓度明显升高,CD40-si-RNA1组IL-4的（质量）浓度依次为（26.51±1.81） ng/L、（27.80±1.72） ng/L、（28.08±2.21） ng/L,CD40-siRNA2组依次为（26.28±2.03） ng/L、（28.15±2.95） ng/L、（28.37±1.71） ng/L。 CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组与对照组和空载体组比较差异有统计学意义（P<0.05）, 注射后第11和14天 CD40 siRNA1组和CD40-siRNA2组中这4个指标的（质量）浓度逐渐恢复至对照组和空载体组的（质量）浓度水平,IFN-γ、 IL-17、IL-4的（质量）浓度4组小鼠比较,差异无统计学意义,注射后第11天 CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组anti-dsDNA抗体的水平尽管与对照组和空载体组比较有所提高,4组比较差异有统计学意义（P<0.05）,而注射后第14天 anti-dsDNA抗体的水平4组小鼠比较,差异无统计学意义。注射后第14天 CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组 MRL/Lpr小鼠脾组织中CD40 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论： MRL/Lpr小鼠注射CD40 siRNA载体后,血清中IFN-γ、IL 17和anti-dsDNA抗体水平降低,IL-4的浓度升高,CD40 mRNA和蛋白的表达水平下降,说明CD40 siRNA抑制其mRNA和蛋白后,MRL/Lpr小鼠炎症反应减轻,疾病活动度下降,提示其对SLE动物模型MRL/Lpr小鼠有治疗作用。     

辛伐他汀对人单核源树突状细胞成熟及免疫功能影响的研究

目的:探讨辛伐他汀对人单核源树突状细胞(Dendritic cell,DC)成熟和免疫功能的影响。方法:梯度离心法分离人外周血单核细胞(peripheral blood monouclear cells,PBMC),经含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,rhGM-CSF)和重组人白介素-4(recombinant human interleukin-4,rhIL-4)的Cellgro培养,使其分化为DC。以PBS组作阴性对照,LPS组作阳性对照,将DC与Dil染料标记的氧化低密度脂蛋白共同孵育48 h及DC与100μmol/L辛伐他汀和50 mg/L DiI染料标记的氧化低密度脂蛋白(oxy-Low Density Lipoprotein,0x-LDL)共同孵育48 h作实验组,流式细胞术(Fluorescence Activated Cell Sorting,FACS)检测DC表型(CDla、CD80、CD86、HLA-DR)的表达,同时镜下观察DC吞噬0x-LDL的形态变化。结果:经辛伐他汀处理的DC可下调CDla、HLA-DR的表达,抑制DC对0x-LDL的吞噬作用。结论:辛伐他汀可明显抑制DC的免疫活性,他汀类药物可能具有免疫调节的新机制。     

高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应

目的观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放细胞因子的影响及其对脂多糖(LPS)诱导细胞因子白细胞介素6(IL-6)表达的作用。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白(15ng/ml)诱导HUVEC11种细胞因子/趋化因子的水平变化;检测不同浓度HMGB1(0~75ng/ml)刺激后不同时间点(0、1、3、6、12和24h)HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1(15ng/ml)与LPS(10ng/ml)共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平明显升高(均P<0.01),分别是对照(未加刺激)的5.7、4.2、27.8、12.8和5.4倍;HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌,在刺激后3~6h,IL-6水平开始增加,在6h时IL-6由对照的32pg/ml±21pg/ml增加到75pg/ml±22pg/ml(P<0.01),12h(453pg/ml±78pg/ml)~24h(901pg/ml±184pg/ml)持续升高(P<0.01);随着HMGB1浓度的增加,IL-6的水平也明显增加,当HMGB1浓度为3、15、75ng/ml时,IL-6分别是155pg/ml±33pg/ml、901pg/ml±184pg/ml、1508pg/ml±378pg/ml,与基础值32pg/ml±21pg/ml相比,差异有统计学意义(P<0.01)。分别用LPS(10ng/ml)和HMGB1(15ng/ml)单独刺激HUVEC时,IL-6的含量从基础的32pg/ml±22pg/ml分别增加至289pg/ml±42pg/ml和901pg/ml±184pg/ml(均P<0.01);如果用二者共同刺激HUVEC,IL-6的生成量大大增加(2361pg/ml±299pg/ml),二者存在协同作用(F=69.405,P<0.01)。结论HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子;HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系,并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6,在脓毒症的发生和发展中起重要作用。     

全腔镜下手术对早期分化型甲状腺癌患者T细胞亚群及其细胞因子的影响

目的 探讨全腔镜下手术对早期分化型甲状腺癌患者T细胞亚群及其细胞因子的影响。 方法 自2013年1月—2015年1月,前瞻性收集收治的早期分化型甲状腺癌患者50例作为研究组,同期随机选取健康体检成人50例作为对照组。研究组给予全腔镜下甲状腺癌切除术。主要观察指标为2组研究对象外周血T细胞亚群及其细胞因子。 结果 与对照组比较,研究组CD4+T细胞比例显著降低[(20.48±6.43)% vs.(27.53±7.38)%,P=0.000];CD4+/CD8+T细胞比例显著降低(0.63±0.12 vs.0.80±0.15,P=0.015);IL-6水平显著降低[(20.73±5.39) ng/ml vs.(28.94±7.39) ng/ml,P=0.000];IL-10水平显著升高[(45.39±15.62) ng/ml vs.(23.94±5.39) ng/ml,P=0.000];TNF-α水平显著降低[(8.48±2.14) ng/ml vs.(13.58±3.49) ng/ml,P=0.000]。2组研究对象CD8+T细胞水平差异无统计学意义[(32.48±7.49)% vs.(34.58±8.12)%,P=0.463]。与术前比较,研究组术后CD4+T细胞显著增加[(24.82±3.32)% vs.(20.48±6.43)%,P=0.012];IL-6显著增加[(20.48±6.43) ng/L vs.(20.73±5.39) ng/L,P=0.000];IL-10显著降低[(38.59±9.83) ng/L vs.(45.39±15.62) ng/L,P=0.002];TNF-α显著升高[(11.75±3.29) ng/L vs.(8.48±2.14) ng/L,P=0.000]。 结论 早期分化型甲状腺癌患者可呈免疫抑制状态,全腔镜下手术有助于改善早期分化型甲状腺癌患者免疫功能。