应用液体蛋白芯片-飞行时间质谱系统研究乳腺癌血清差异蛋白表达

目的：分析乳腺癌与健康人血清蛋白质谱差异,筛选特异性蛋白标志物,建立乳腺癌诊断预测模型,评价其诊断价值。方法将58例乳腺癌和57例健康女性的血清,随机分为建模组和验证组,应用弱阳离子纳米磁珠（MB-WCX）结合基质辅助激光解吸离子飞行质谱（MALDI-TOF-MS）技术建立血清蛋白质谱,选择遗传算法建立乳腺癌诊断预测模型,利用诊断模型对验证组进行盲筛验证。结果通过蛋白质谱,筛选出29个显著差异蛋白质峰（P＜0．05）。其中乳腺癌中表达上调2个,表达下调27个,利用其中8个差异峰（质荷比分别为698．3、797.37、1449.56、1466．65、1520．74、1584．55、2379．26、2739．69）建立诊断模型,获得了96．55％（28/29）的敏感性和96.42％（27/28）的特异性,经独立样本双盲验证,得到灵敏度为93．10％（27/29）,特异度为96．55％（28/29）。结论应用弱阳离子纳米磁珠联合MALDI-TOF-MS技术可筛选出血清蛋白质谱中的差异蛋白质,据此建立的诊断模型具有较高的敏感性和特异性,对于乳腺癌的辅助诊断有一定的临床意义。     

运用蛋白质指纹图谱技术建立系统性红斑狼疮诊断模式的研究

目的 运用蛋白质指纹图谱技术筛选系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的特异性蛋白标志物,建立SLE疾病相关的蛋白质组学诊断模型.方法 联用弱阳离子磁珠与蛋白质芯片阅读仪绘制64例SLE患者组及168例对照组的血清蛋白质指纹图谱,用Biomarker Patterns Software 5.0(BPS)软件筛选特异性的血清蛋白标志物并建立SLE诊断模型.结果 在SLE患者组和对照组之间找到60个差异蛋白峰(P<0.05),其中28个蛋白峰在SLE患者表达增高,32个蛋白峰表达降低.由BPS软件筛选的4个蛋白标志物(质荷比为3376.02、4070.09、7770.45、28045.10)建立的诊断模型能很好的把SLE患者与其他自身免疫性疾病和健康对照者区分出来,经过盲法验证,其对SLE的诊断敏感性为78%,特异性为96%.结论 采用蛋白质指纹图谱技术能筛查识别出与SLE疾病相关的特异性血清蛋白标志物,由4个质荷比分别为3376.02、4070.09、7770.45和28045.1的SLE特异性血清蛋白标志物建立的SLE疾病诊断模型具有高敏感性及特异性.     

SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术在宫颈癌早期诊断和鉴别诊断中的应用

目的 采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片技术检测宫颈浸润癌和原位癌患者血清蛋白质指纹图谱,通过差异蛋白组学筛选特有的蛋白标记物.方法 应用SELDI-TOF-MS技术和WCX2(弱阳离子)芯片采集74例宫颈癌(44例宫颈浸润癌和30例宫颈原位癌)患者和51例健康人血清蛋白质指纹图谱,采用Biomarker Wizard软件筛选差异蛋白,应用Biomarker patternsoftware 5.0.2版建立诊断模型,并盲法验证其诊断效率.结果 宫颈癌患者与对照组血清蛋白质指纹图谱有12个差异表达的蛋白质峰(P<0.05),筛选出分子量分别为5642、5912、5905、5660、2288和8700 Da 6个标志蛋白,将125例血清随机分为30例宫颈癌和30例健康人血清作为训练组用于建立人工神经网络(ANN)模型,44例宫颈癌和21例健康人血清作为验证组,其对宫颈癌的诊断敏感性为95.45%,特异性为95.23%.宫颈浸润癌与原住癌血清蛋白质谱有16个差异表达的蛋白质(P<0.01),筛选出分子量分别为13776、2796、2697、2070、2768和9222 Da 6个标志蛋白,随机将15例宫颈浸润癌和15例原位癌血清分为训练组,29例浸润癌和15例原位癌作为验证组,其鉴别宫颈浸润癌的敏感性为93.10%.特异性为93.33%.宫颈原位癌患者与对照组血清蛋白质谱比较有6个差异表迭的蛋白质(P<0.05),分别随机选取15例宫颈原位癌和15例健康人血清作为训练组,15例原位癌和36例健康人血清作为验证组,其诊断宫颈原位癌的敏感性为60%,特异性为98.08%.结论 血清蛋白质谱技术可望用于宫颈浸润癌和原位癌的鉴别,标志蛋白的鉴定可能对宫颈癌浸润机制的探讨和新的治疗手段的开展具有重要的指导意义.     

采用血清蛋白指纹图谱技术筛选食管鳞状细胞癌特异相关性蛋白的研究

目的应用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测食管鳞状细胞癌患者血清蛋白指纹图谱,筛选候选肿瘤标志物并建立诊断模型,初步探讨所建的诊断模型在食管鳞癌诊断中的临床意义。方法144例经手术后病理证实的食管鳞状细胞癌患者和50例健康人血清,用SELDI—TOF—MS检测各血清标本获得血清蛋白指纹图谱。用Biomarker Wizard筛选差异峰。扩大样本量,采用SPSS12．0中ROC曲线分析入选差异峰用于食管癌诊断的灵敏度和特异性。结果在分子量1500～30000范围内,共检测到93个蛋白峰,其中10个差异峰有统计学意义（P〈0．01）。ROC曲线面积超过08的有2768、2745、3403、6638、5972、6440、3321和3978m/z差异峰。当差异峰3403m／z以3．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为87．5％和94．0％;3978m/z以2．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为8417％和72．0％。其诊断价值均超过CA724、CEA和CA242单独或联合检测。结论3978和3403m/z两个蛋白对区分食管鳞癌患者和健康人群具有较好的诊断价值。     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选2型糖尿病肾病血清差异表达蛋白

目的 采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术建立2型糖尿病肾病血清蛋白指纹图谱,筛选其差异表达蛋白.方法 收集2型糖尿病肾病(T2DN)患者31例、2型糖尿病(T2DN)不伴肾病患者32例和正常对照血清30例,采用SELDI-TOF-MS技术建立蛋白指纹图谱,应用BioMarker Wizard 3.1软件对实验数据进行分析.结果 糖尿病肾病组与糖尿病不伴肾病组相比较,有14个差异表达蛋白峰(P＜0.05),其中糖尿病肾病组有2个蛋白峰高表达,12个蛋白峰低表达;糖尿病肾病组与正常对照相比较,有25个差异表达蛋白峰(P＜0.05),其中糖尿病肾病组有13个蛋白峰高表达,12个蛋白峰低表达.结论 糖尿病肾病具有多种差异表达蛋白,这些蛋白可能为其诊断的潜在标志物.     

应用液体芯片-质谱技术筛选肺鳞癌患者血清标志蛋白

目的 探讨液体芯片-质谱技术(CLINPROT系统)在肺鳞癌患者血清标志蛋白筛选中的应用.方法 应用CLINPROT系统检测34例肺鳞癌患者(肺鳞癌组)、46例良性肺疾病患者(良性对照组)及44名正常人(正常对照组)的血清蛋白表达谱,应用FlexAnalysis 3.0软件进行数据分析,筛选差异表达蛋白质;采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术鉴定标志蛋白.结果 分别比较肺鳞癌组与正常对照组以及肺鳞癌组与良性对照组血清蛋白表达谱,在质荷比(M/Z)800～10 000范围内,前者筛选出96个差异表达蛋白峰,其中M/Z为4054.13和4267.46的蛋白峰在2组间差异最大,用这2种差异蛋白建立的坐标系具有良好的区分肺鳞癌与正常人的能力;后者筛选出99个差异表达蛋白峰,其中M/Z为5065.27和4054.02的蛋白峰在2组间差异最大,用这2种差异蛋白建立的坐标系具有良好的区分肺鳞癌与良性肺疾病的能力.取M/Z为1778和1865的蛋白行LC-MS/MS鉴定,结果提示二者可能均为补体C3片段或C3前体.结论 肺鳞癌患者与正常人以及与良性肺疾病患者之间血清蛋白表达谱存在明显差异,应用液体芯片-质谱技术可能从血清中筛选出敏感性高、特异性强的肺鳞癌标志蛋白.     

应用蛋白质组学技术筛选胰腺癌血清肿瘤标志物

目的:比较胰腺癌患者与健康志愿者血清蛋白的差异以寻找候选血清肿瘤标志物,为胰腺癌早期诊断提供依据.方法:通过免疫亲合柱去除丰度最高的14种血清蛋白,用双向电泳分离蛋白并比较差异.选取在胰腺癌患者血清中明显差异表达蛋白点,行质谱鉴定和生物信息学分析.结果:建立了稳定性、重复性良好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在胰腺癌患者血清中明显差异表达的78个蛋白点,共有54个蛋白点被成功鉴定,其中胰腺癌患者血清中高表达者29个,低表达者25个.结论:胰腺癌患者、健康志愿者血清蛋白之间存在明显差异,通过蛋白质组学方法可筛选并鉴定出这些差异蛋白,后者有望为早期诊断胰腺癌提供依据.     

SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术建立胃癌血清特异性标志物诊断分类树研究

目的:观察胃癌手术前后血清蛋白质谱的变化,筛选能够快速诊断胃癌的特异性标志物。方法:采用IMAC#3蛋白质芯片和表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片技术,对46例胃癌患者和40例正常人的血清蛋白质谱进行分析。结果:胃癌术前血清与正常人血清蛋白质谱有14个蛋白质表达量有明显差异。以热休克蛋白27、葡萄糖调节蛋白、抑制素、蛋白质二硫化物异构酶A 3这4个蛋白质所组成的模板,可将胃癌与正常人正确分组,利用该模板建立胃癌诊断的分类树模型用于诊断胃癌的灵敏度95.7%,特异性92.5%,术后血清蛋白质谱中,原表达上调的蛋白质明显下调。结论:SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术为建立蛋白质模板用以诊断胃癌提供了可靠的技术平台。     

SELDI蛋白质芯片技术在结直肠癌临床诊断中的应用研究

目的：利用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF—MS）技术及蛋白质芯片检测结直肠癌病人血清蛋白质指纹图谱,初步探讨其用于结直肠癌诊断的临床价值。方法：利用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术及弱阳离子交换表面CM10蛋白芯片监测70例结直肠癌患者和48例良性病变对照及25例正常对照的血清蛋白质谱。分为训练集（40例患者40例对照）和验证集（30例患者和33例对照）,前者用于筛选结直肠癌的差异蛋白标志物并建立人工神经网络（ANN）诊断模型,后者用于诊断效度的盲法验证。结果：结直肠癌患者和对照组血清蛋白指纹图谱共有148个明显表达差异的蛋白峰,筛选质荷比（m／z）为2957、2974、2982、3016、3282、5928、5948、6647、6661的9个蛋白质峰作为标志蛋白（P〈0．01）建立人工神经网络诊断模型,利用该模型对结直肠癌进行盲法预测,结果表明该诊断模型检测结直肠癌的灵敏度为94．2％,特异度为91．3％。结论：应用蛋白芯片技术检测到对结直肠癌有鉴别意义的血清蛋白标志物,可能为结直肠癌的早期诊断提供了新的手段。     

燃煤污染型砷中毒患者血清差异蛋白的筛选

目的 应用血清蛋白组学技术,对比分析燃煤污染型砷中毒患者与正常人血清中差异蛋白的表达,筛选与燃煤污染型砷中毒发生发展密切相关的蛋白质.方法 2008年收集经临床诊断的贵州燃煤污染型砷中毒患者和健康人空腹血清标本各6例,用双向凝胶电泳(2-DE)分离砷中毒患者血清和健康人血清的总蛋白质,银染显色后经图像分析识别差异表达的蛋白质,再应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质点.结果 两组血清2-DE图谱平均点数分别为779±35和865±30,匹配率为90.1%.筛选出两组间的差异蛋白点60个,砷中毒组表达上调25个,表达下调35个.对其中表达量差异3倍以上的35个蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析,鉴定出包括角蛋白10、载脂蛋白A-V、转铁蛋白、α1抗胰蛋白酶、锌α2糖蛋白、细胞外信号调节激酶3、空泡分选蛋白33、O-GlcNAc糖基转移酶等13个蛋白质,其中5个蛋白质在砷中毒组表达上调,8个蛋白质在砷中毒组表达下调.结论 本研究建立了分辨率高、重复性较好的燃煤污染型砷中毒患者血清双向凝胶电泳图谱,识别并鉴定了一些与健康人血清差异表达的蛋白质,为进一步探讨地方性砷中毒发病机制,筛选燃煤污染型砷中毒早期特异性血清分子标志物奠定了初步基础.     

多发性骨髓瘤患者铁蛋白检测及临床意义

目的 探讨血清铁蛋白（serum ferritin,SF）在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者中的变化及临床意义.方法 选择30例多发性骨髓瘤患者（MM组）和30名健康志愿者（对照组）作为研究对象,检测其SF、血清β2-微球蛋白（β2-microglobulin,β2-MG）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的水平,并对检测结果和阳性检出率进行统计分析.结果 MM组的SF水平（613.6±274.6μg/L）明显高于对照组（131.8±59.0μg/L）,差异具有统计学意义（P〈0.01）.MM组SF与血清β2-MG水平呈明显正相关（r=0.545,P〈0.01）;而与血清LDH水平无明显相关（r=0.349,P〉0.05）.MM组患者SF的阳性检出率与血清β2-MG之间没有显著性差异（χ2=1.071,P〉0.05）;而SF的阳性检出率明显高于血清LDH,差异具有统计学意义（χ2=18.373,P〈0.01）.结论 多发性骨髓瘤患者SF水平明显升高; SF和血清β2-MG水平呈明显正相关,且二者阳性检出率相近.SF对多发性骨髓瘤的辅助诊断有一定参考价值.     

miR-324-5p和miR-215-5p在多发性骨髓瘤中的表达及预后分析

目的 检测多发性骨髓瘤（MM)患者血清中miR-324-5p和miR-215-5p的表达水平,研究其表达水平和预后的关系。方法收集60例MM患者血清标本,为初治组（20例）、巩固治疗组（20例）、复发难治组（20例）;20例健康人血清标本（健康对照组）,实时荧光定量PCR检测血清中miR-324-5p和miR-215-5p的表达水平。结果与健康对照组比较,MM患者血清中miR-215-5p表达水平下降（P<0.008 3）,初治组和难治复发组患者血清miR-324-5p表达水平下降（P<0.008 3）,巩固治疗组与健康对照组血清miR-324-5p表达水平差异无统计学意义（P>0.008 3）;巩固治疗组血清miR-324-5p表达水平高于初治组及难治复发组（P<0.008 3）;巩固治疗组血清miR-215-5p表达水平高于初治组（P<0.008 3）,巩固治疗和难治复发患者间差异无统计学意义（P>0.008 3）;初治组与复发难治组之间两种miRNAs表达水平差异无统计学意义（P>0.008 3）。miR-324-5p和miR-215-5p表达水平与β2微球蛋白和红细胞体积分布宽度呈负相关,与血红蛋白呈正相关。初治MM患者血清miR-324-5p和miR-215-5p高表达组无进展生存期高于低表达组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论miR-324-5p和miR-215-5p在MM血清中表达水平降低,miR-324-5p和miR-215-5p可能与疾病密切相关,其低表达可能提示预后不良。     

阿托伐他汀对急性脑梗死患者血清hs—CRP、IL-6、IL-10及神经功能缺损的影响

目的观察阿托伐他汀对急性脑梗死（ACI）患者血清超敏c-反应蛋白（hs—CRP）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）以及神经功能缺损的影响,探讨其抗炎作用机制。方法将90例ACI患者随机分为阿托伐他汀组45例和常规治疗组45例。阿托伐他汀组在常规治疗基础上加用阿托伐他汀20mg,每日1次,连服4周。治疗前后检测血清hs—CRP、IL-6和IL-10含量,并进行神经功能缺损程度评分（NDS）评定。另选同期健康查体正常者20例为正常对照组。结果ACI患者较健康对照组血清hs—CRP、IL-6显著升高,IL-10显著下降（P〈0．05）;两组ACI患者治疗前hs—CRP、IL-6和IL-10差异无统计学意义（P〉0．05）,治疗4周后阿托伐他汀组hs—CRP、IL-6较常规治疗组明显下降,而IL-10明显升高（P〈0．05）。此外,阿托伐他汀组治疗后NDS评分较常规治疗组显著升高（P〈0．05）。结论ACI患者较健康者血清hs—CRP、IL-6水平升高,IL—10水平下降。阿托伐他汀能明显降低ACI患者血清hs—CRP、IL-6水平,升高血清IL—10水平,有助于ACI患者的神经功能恢复,具有减轻炎症反应的神经保护作用。     

多发性骨髓瘤患者血清炎症因子的变化及其临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者血清炎症因子的变化及其临床意义。方法采用ELISA法测定150例多发性骨髓瘤患者（MM组）和50例正常体检者（对照组）血清白细胞介素-6（IL--6）及肿瘤坏死因子-α（TNF—α）水平，同时采用胶乳增强免疫透射比浊法检测两组患者血清高敏C-反应蛋白（hsCRP）水平，并分析各指标间相关性。结果MM组血清IL-16、TNF—α和hsCRP水平明显高于对照组，且随临床分期增加依次增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。MM患者血清中IL-6与hsCRP呈正相关（γ=0．546，P〈0．01），与TNF—α亦呈正相关（1=0．711，P〈0．01），TNF—α与hsCRP呈正相关（γ=0．568，P〈0．01）；与治疗前相比，MM治疗有效组血清IL-6、TNF—α和hsCRP水平明显下降（P〈0．01，t=9．770，3．448，18．390），而治疗无效组则差异无统计学意义（P〉0．05）。结论血清炎症因子检测可用于MM患者的病情判断和疗效监测。     

血清β_2微球蛋白、乳酸脱氢酶在多发性骨髓瘤诊治中的临床意义

目的探讨血清β2微球蛋白(β2-MG)、乳酸脱氢酶(LDH)在多发性骨髓瘤(MM)临床诊断和治疗中的意义。方法选择2007年8月至2013年2月鄂州市中心医院收治的MM患者68例,其中Ⅰ期22例,Ⅱ期25例,Ⅲ期21例,另外选择同期的正常门诊体检者24例作为对照组,采用速率法和放免法检测MM患者和对照组血清β2-MG、LDH表达,比较各组血清β2-MG、LDH表达水平及其与Durie-Salmon分期的相关性。结果各期MM患者血清β2-MG、LDH表达水平均显著高于对照组(P<0.05),随疾病分期增高,血清β2-MG、LDH表达水平显著增高(P<0.05);血清β2-MG、LDH表达水平与DS分期呈正相关(rs=0.587,0.254,P<0.05),血清β2-MG表达水平与LDH表达水平呈正相(rs=0.273,P<0.05)。结论 MM患者的血清β2-MG、LDH表达水平显著增高,其对MM患者的临床诊断和治疗具有较高的价值。     

γ干扰素诱导蛋白10（IP-10）对糖尿病合并活动性肺结核的临床诊断价值

目的探讨γ干扰素诱导蛋白10（IP-10）对糖尿病合并活动性肺结核的临床诊断价值。方法选取糖尿病合并活动性肺结核病例（A组）24例、活动性肺结核病例（B组）34例、非结核肺部疾病病例（C组）10例、糖尿病（D组）10例、健康志愿者（E组）12例,检测血IP-10水平。结果A组IP-10水平均高于其他4组（P均〈0．01）;IP-10诊断活动性肺结核的曲线下面积为0．872,临界值为146．80ng／L,敏感性和特异性分别为65．5％和93．7％。结论血IP-10在糖尿病合并活动性肺结核患者中显著增高,可作为其诊断的辅助指标。     

增殖诱导配体在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的定量分析多发性骨髓瘤患者化疗前后外周血单个核细胞和血浆中增殖诱导配体(APRIL)mRNA及蛋白的表达水平。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)技术测定靶基因及靶蛋白的准确含量。结果 MM患者化疗前APRIL mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常对照(P<0.05);化疗前Ⅲ期APRIL mRNA及蛋白表达水平显著高于Ⅰ期及Ⅱ期(P<0.05);化疗后PD组显著高于CR及PR组(P<0.05)。结论 APRIL可能参与MM的发生与发展并与肿瘤负荷量及疗效密切相关,其mRNA与蛋白表达水平相一致,且可能成为有效治疗MM的新靶点。     

多发性骨髓瘤患者血清IL-33和IL-6水平的变化及其临床意义

目的 检测多发性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）患者血清中IL-33和IL-6水平,探讨其在疾病发展中的作用.方法 选取2012年1月至2013年1月间37例多发性骨髓瘤患者和50例健康对照者作为研究对象,应用ELISA方法检测所有研究对象血清中IL-33和IL-6水平,并进行统计学分析.结果 两组研究对象的IL-33检出率差异无统计学意义;IL-33水平与MM分期呈负相关,MM患者IL-33水平与健康对照者相比显著降低,其差异具有统计学意义（P＜0.05）; IL-6水平与MM分期呈正相关,MM患者IL-6水平与健康对照者相比显著升高,其差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 MM进展过程中IL-33和IL-6分泌改变可能导致免疫失衡而使疾病逐步恶化,其有助于病情监测和为免疫治疗提供理论依据.     

单核细胞趋化因子-1、高敏C反应蛋白与2型糖尿病大血管病变关系的研究

目的探讨2型糖尿病患者血清单核细胞趋化因子-1（MCP—1）、高敏C反应蛋白（hsCRP）水平的变化及其与大血管病变的关系。方法选择2型糖尿病患者62例,其中2型糖尿病并发大血管病变组（A组）32例,无大血管病变组（B组）30例,另选择30例健康者为对照组（C组）。分别测定3组患者血清中MCP—1、hsCRP水平,并进行相关性分析。结果A组和B组血清MCP-1、hsCRP水平均高于C组,差异有统计学意义（P〈0．01）;A组明显高于B组,差异有统计学意义（P〈0．01）。相关分析：血清MCP—1与hsCRP正相关（r=0．748,P〈0．05）。结论血清hsCRP、MCP-1水平的检测对预测2型糖尿病大血管病变的发生发展有重要的临床意义。     

TAp63基因在多发性骨髓瘤中的表达及作用

目的:探讨TAp63 mRNA在多发性骨髓瘤(MM)中的表达及其在MM发病和预后中的可能作用。方法:采用RTPCR检测19例MM患者骨髓及10例非恶性血液病患者骨髓中TAp63 mRNA的表达水平。结果:TAp63 mRNA在MM患者骨髓及非恶性血液病患者骨髓中平均灰度值分别为0.912±0.424、0.315±0.035,两者比较有显著性差异(P<0.001);其中ISS分期Ⅲ期患者的TAp63 mRNA平均灰度值显著高于Ⅰ期及Ⅱ期患者(P=0.000),同时MM患者TAp63 mRNA的表达强度与血清β2MG有显著正相关性(r=0.607,P=0.006)。结论:TAp63基因在MM患者中呈现了高表达状态,参与了MM的发生、发展,并与预后相关。