SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术在宫颈癌早期诊断和鉴别诊断中的应用

目的 采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片技术检测宫颈浸润癌和原位癌患者血清蛋白质指纹图谱,通过差异蛋白组学筛选特有的蛋白标记物.方法 应用SELDI-TOF-MS技术和WCX2(弱阳离子)芯片采集74例宫颈癌(44例宫颈浸润癌和30例宫颈原位癌)患者和51例健康人血清蛋白质指纹图谱,采用Biomarker Wizard软件筛选差异蛋白,应用Biomarker patternsoftware 5.0.2版建立诊断模型,并盲法验证其诊断效率.结果 宫颈癌患者与对照组血清蛋白质指纹图谱有12个差异表达的蛋白质峰(P<0.05),筛选出分子量分别为5642、5912、5905、5660、2288和8700 Da 6个标志蛋白,将125例血清随机分为30例宫颈癌和30例健康人血清作为训练组用于建立人工神经网络(ANN)模型,44例宫颈癌和21例健康人血清作为验证组,其对宫颈癌的诊断敏感性为95.45%,特异性为95.23%.宫颈浸润癌与原住癌血清蛋白质谱有16个差异表达的蛋白质(P<0.01),筛选出分子量分别为13776、2796、2697、2070、2768和9222 Da 6个标志蛋白,随机将15例宫颈浸润癌和15例原位癌血清分为训练组,29例浸润癌和15例原位癌作为验证组,其鉴别宫颈浸润癌的敏感性为93.10%.特异性为93.33%.宫颈原位癌患者与对照组血清蛋白质谱比较有6个差异表迭的蛋白质(P<0.05),分别随机选取15例宫颈原位癌和15例健康人血清作为训练组,15例原位癌和36例健康人血清作为验证组,其诊断宫颈原位癌的敏感性为60%,特异性为98.08%.结论 血清蛋白质谱技术可望用于宫颈浸润癌和原位癌的鉴别,标志蛋白的鉴定可能对宫颈癌浸润机制的探讨和新的治疗手段的开展具有重要的指导意义.     

结核病患者血清蛋白质/多肽谱的初步研究

目的 了解结核病患者血清蛋白质/多肽的表达,为新型结核病血清学诊断方法的研究提供基础依据.方法 (1)应用WCX蛋白质芯片和表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对99例肺结核患者和18例肺外结核患者进行了血清蛋白质/多肽谱检测,采用ClinProTools分析软件进行比较分析.(2)以"结核"、"双向电泳"、"表面增强激光解析-电离飞行时间质谱"、"血清学"、"蛋白质组学"及相应英文为检索词在万方医学数据库、PUBMED中检索中、外文献进行文献复习.结果 WCX蛋白质芯片从血清中捕获到99种蛋白质/多肽,其中m/z为5 753.76的蛋白质在肺结核与肺外结核两组间差异有显著性,在肺外结核患者血清中表达上调,其平均质谱峰面积在肺结核患者和肺外结核患者中分别为15.42±4.86、28.29±14.08.结论 结核病的发生可产生大致相同的血清蛋白质/多肽谱,在不同类型结核结核病患者血清中可以找到共同的血清学诊断标志物.     

应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱筛选大肠癌血清特异标志物

目的 采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测大肠癌患者与健康对照者血清中蛋白的差异,为大肠癌的早期诊断提供理论依据.方法 应用SELDI-TOF-MS技术及弱阳离子蛋白质芯片(WCX2)检测36例健康成人(对照组)和36例大肠癌患者(大肠组)血清中蛋白含量.结果 在质荷比为2 000Da～30 000Da的范围内,两组样本检测到了对照组82个蛋白峰.其中3 604.240 Da蛋白峰大肠癌组明显高于对照组(P＜0.05),而12 861.368 Da的蛋白峰对照组明显高于大肠癌组(P＜0.05).利用这两个蛋白筛查大肠癌的特异度为86.11%(31/36),敏感度为77.78%(28,36),阳性预测值为87.5%.结论 质荷比为3 604.240 Da与12 861.368 Da的两个蛋白峰可以作为大肠癌早期诊断的备选标志物.     

血清蛋白质指纹图谱对紫杉类联合蒽环类化疗一线治疗乳腺癌的预测作用

目的 寻找能预测紫杉类联合蒽环类（AT）一线治疗转移性乳腺癌疗效的潜在蛋白质标志物。方法 以2015年8月至2018年7月浙江大学医学院附属第二医院经AT一线化疗的转移性三阴性乳腺癌的26例患者为对象,使用实体瘤疗效评价标准（RICIST）区分经过2个疗程治疗后的化疗受益者和化疗无效者,使用血清蛋白质指纹图谱技术分析比较化疗受益者和化疗无效者的血清蛋白质谱的差异,并构建预测模型。结果 经AT一线化疗,26例患者中17例有效,9例无效。表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）和人工神经网络（ANN）分析发现,两组患者间5个蛋白质峰存在差异。基于血清蛋白质指纹图谱构建的乳腺癌患者AT方案化疗疗效的潜在预测模型可有效区分化疗受益者与化疗无效者,灵敏度达1.000,特异度达0.889。结论 血清蛋白质指纹图谱模型可有效筛选出可能从AT方案化疗中受益的转移性乳腺癌患者。     

血清蛋白指纹图谱筛选食管鳞癌特异相关性蛋白与临床病理因素关系分析

目的应用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测食管鳞状细胞癌患者血清蛋白指纹图谱,分析特异相关性蛋白与临床病理因素的关系。方法 144例经手术后病理证实的食管鳞状细胞癌患者,用弱阳离子交换芯片(WCX2)检测各血清标本获得血清蛋白指纹图谱,用Biomarker Wizard筛选差异峰;比较不同年龄、临床分期、淋巴结转移及食管外膜侵犯各组差异有统计学意义的蛋白峰。结果年龄40～60岁(77例)和>60岁(67例)患者表达的蛋白差异峰差异无统计学意义(>0.05)。28例I期与51例III期患者比较发现10个差异峰差异有统计学意义(<0.05);28例I期与6例IV期患者比较发现1个差异峰差异有统计学意义(<0.05)。而28例I期与59例II期患者比较,未发现差异峰差异有统计学意义(>0.05)。69例淋巴结转移和75例无淋巴结转移患者比较,发现5个差异峰差异有统计学意义(<0.05)。53例无外膜浸润和91例有外膜浸润患者比较,发现有9个差异峰差异有统计学意义(<0.05)。结论应用SELDI-TOF-MS技术检测分析食管鳞状细胞癌患者血清蛋白指纹图谱,对个体化治疗、预后判断有一定的预测提示作用。     

血清蛋白指纹图谱技术筛查前列腺癌患者特异性血清标志物的应用价值

目的 应用蛋白指纹图谱技术筛查前列腺癌患者血清蛋白质表达谱,寻找血清中的特异性标志物.方法 选择前列腺癌患者22例和前列腺增生患者26例以及同期正常对照者25例,用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术检测各血清样本的血清蛋白指纹图谱,比较血清蛋白指纹图谱的差异.结果 前列腺癌组的血清蛋白质谱图中质荷比为3 165、3 982、4 291的蛋白质相对含量(9.794±4.449、3.968±2.247、11.020±6.069)高于正常对照组(5.062±2.245、1.823±1.432、6.525±5.270),而质荷比为2 747、10 268的蛋白质相对含量(22.390±12.179、0.953±0.338)低于正常对照组(42.231±16.970、1.932±0.864);质荷比为10 268的蛋白质的相对含量前列腺癌组(0.953±0.338)低于前列腺增生组(1.314±0.493),差异均有统计学意义(均P<0.05).但前列腺增生组与正常对照组差异均无统计学意义(均P >0.05).PSA阳性的前列腺癌组质荷比为3 960的蛋白质相对含量(3.447±1.434)高于PSA阳性的前列腺增生组(1.473±0.971),而PSA阳性的前列腺癌组质荷比为10 268的蛋白质相对含量(0.847±0.408)低于PSA阳性的前列腺增生组(1.538±0.182),差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 血清蛋白质谱图存在差异的6个不同质荷比蛋白质组成的蛋白质组有可能成为前列腺癌筛查的血清标志物.质荷比为10268Da的蛋白指纹峰有助于区分前列腺癌患者与前列腺增生患者和正常人群.     

SELDI-TOF质谱技术分析乳腺癌血清蛋白质谱的变化

目的 研究乳腺癌患者血清蛋白质的变化,建立灵敏度和特异度高的乳腺癌诊断模型.方法 利用SELDI-TOFMS技术对194例乳腺癌患者和60例正常人血清蛋白质分别进行检测,IMAC30芯片结合蛋白质后,用蛋白芯片仪读取数据,分析得到区分乳腺癌患者和正常人的树状分类规则,并构建诊断模型.结果 M11368、M7768、M2943等3个蛋白质组成的模型1可将2组准确分组,灵敏度和特异度分别为94.8%(184/194)和96.7%(58/60);以M11368蛋白质单独组成诊断模型2进行区分,灵敏度和特异度分别为89.69%(174/194)和93.33%(56/60).结论 SELDI-TOFMS技术可以应用于乳腺癌的诊断.     

SELDI—TOF—MS技术建立早期肝硬化患者血清蛋白质谱筛选模型

目的：比较早期肝硬化患者和健康人的血清蛋白质谱并建立相关血清诊断模型。方法：用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱（SELDI-TOF—MS）技术及CM10蛋白芯片对50例早期肝硬化患者、50例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析。结果：早期肝硬化患者与健康人对照组共有25个差异有统计学意义的蛋白质峰;建立诊断模型的灵敏度为96％（48／50）,特异度为90％（45／50）,准确率为93％（93／100）。结论：两组人的蛋白质谱有明显的差异,建立的诊断模型能够区分早期肝硬化患者与健康人,SELDI—TOF—MS技术在诊断及特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值。     

SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术在原发性肝癌诊断中的应用研究

目的：筛选AFP阴性原发性肝癌（肝癌）患者与健康人血清中的差异蛋白,构建能与血清AFP联合使用的疾病诊断模型。方法：应用表面增强激光解析—电离飞行时间—质谱（SELDI-TOF-MS）技术和CM10芯片检测33例AFP阴性肝癌患者与35例健康人的血清,获得差异蛋白峰并建立疾病诊断模型。结果：32个蛋白峰差异具有统计学意义（P〈0.05）,在AFP阴性肝癌组血清中有6个上调,26个下调;诊断模型的准确度为80.9%,灵敏度为81.8%,特异度为80.0%。结论：应用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术建立的疾病诊断模型有望与血清AFP联合使用从而提高肝癌的诊断效率。     

血清蛋白质指纹图谱与人工神经网络模型在肺癌诊断中的应用

目的筛选肺癌相关标志物并建立诊断肺癌的蛋白质谱模型。方法应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术检测了86例肺癌、80例健康对照样本的血清蛋白质质谱,结合人工神经网络建立肺癌诊断模型。结果从肺癌组与健康对照组中筛选出了4个蛋白质荷比峰建立肺癌诊断模型,该诊断模型的特异性为 100％（95％的置信区间为93.9％～100.0％）,敏感性为93.6％（87.6％～96.4％）,准确率为96.7%（88.1％～98.3％）。结论成功建立了肺癌诊断模型,该模型在肺癌的诊断中具有较高的敏感性和特异性。     

激光捕获显微切割联合SELDI蛋白质芯片筛选肺腺癌早期诊断标志蛋白

目的 探讨应用激光显微切割(LCM)联合表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱蛋白质芯片(SEL,DI-TOF-MS)及模式识别分类技术-支持向量机(SVM)筛选肺腺癌标志蛋白的可行性.方法 将6例新鲜肺腺癌组织标本及其配对的4例正常肺组织制备8μm厚度冰冻切片,改良HE染色;用LCM技术选择性获取同质腺癌细胞和配对正常肺组织细胞.应用PBSⅡ+型SELDI-TOF-MS分析仪(IMAC芯片)分析腺癌及其配对正常细胞的蛋白质表达谱,比对差异点;应用SVM筛选并验证候选标志蛋白的判别效能.结果 平均每个LCM帽子的激光点数约4000 shots,获得了同质性>95%的肿瘤细胞和正常细胞.比较腺癌和配对正常细胞之间的SELDI谱图,共筛选出84个蛋白峰.将差异最明显的10个蛋白峰作为候选标志蛋白.和正常组织相比,6种蛋白在腺癌中呈低表达,4种蛋白在腺癌中呈高表达.差异有统计学意义(P<0.05).初步筛选出3191 m/z蛋白峰作为腺癌诊断标志蛋白.结论 LCM联合SEIDI蛋白质芯片技术有可能筛选出敏感性高、特异性强的肺腺癌标志蛋白;该技术将为肺腺癌早期诊断研究提供新的强有力的工具.     

复发性卵巢癌血清蛋白质质谱分析

目的 探讨复发性卵巢癌早期筛查的血清标志物.方法 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析21例复发性卵巢癌和18例完全临床缓解期卵巢癌的血清蛋白质质谱差异. 结果在Mr 1 000～12 000 D区段,Mr 1944、1980、2080、2661、2993、4450、4659、535...     

应用蛋白质芯片与人工神经网络建立胃癌诊断模型

目的应用血清蛋白质芯片质谱技术结合生物信息学方法筛选胃癌相关标记, 建立诊断胃癌的蛋白质标记模型。方法应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术检测了74例胃癌、70例健康对照样本的血清蛋白质质谱,结合人工神经网络建立胃癌诊断模型。结果从胃癌组与健康对照组中筛选出了4个蛋白质荷比峰,建立胃癌诊断模型,该诊断模型的特异性为100％（95％的置信区间为94.6％～100.0％）,敏感性为92.0％（88.7％～95.2％）,准确率为95.8%（86.4％～97.5％）。结论成功建立了胃癌诊断模型,该模型在胃癌的诊断中较传统方法具有更高的敏感性和特异性,可进一步研究与应用。     

新发展晚期血吸虫病患者血清肽谱分析

目的:分析新发展晚期血吸虫病患者血清多肽,筛选有潜在应用价值的标志蛋白,为其诊断与发病机制研究奠定基础?方法:采集新发展晚期血吸虫病患者与健康人血清,利用包被有弱阳离子的磁珠富集纯化血清多肽,应用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS)Flex分析技术结合Mascot生物信息学分析血清多肽指纹图谱?结果:与健康对照组比较,在0.8~13.0 ku区段,新发展晚期血吸虫病患者血清中m/z 2 082?4 282多肽表达上调(P < 0.01),2 661?2 991?3 241?5 337?5 906多肽表达下调(P < 0.05);常规晚期血吸虫病患者血清中m/z 2 662?4 209?5 337与5 906处显著下调,2 082处显著上调?结论:m/z 3 241?4 282血清差异多肽对新发展晚期血吸虫病患者的诊断可能具有潜在应用价值,对该病发生发展的机制也奠定了理论基础?     

利用磁珠分离联合MALDI-TOF-MS技术判定早期IgA肾病的病理表现

目的利用尿蛋白质组学的新方法,寻找无创性尿液标记物,用以判断临床早期IgA肾病的病理表现。方法对55例早期IgA肾病患者[其中23例病理表现较重（重病理损伤组）,32例病理表现较轻（轻病理损伤组）]及14例病理检查完全正常者（正常对照组）的尿液,利用阳离子磁珠分离技术联合基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱法（MALDI-TOF-MS）分析尿液蛋白质质谱。结果建立了3个尿蛋白质／多肽模型。发现潜在的生物标志物及其诊断模型可以区分重病理损伤组和轻病理损伤组,其敏感性和特异性分别为90．48％和96．77％。区分轻病理损伤组和正常对照组的诊断模型,其敏感性和特异性分别为9355％和85-71％。区分重病理损伤组和正常对照组的诊断模型,其敏感性和特异性分别为100％和9286％。结论利用磁珠分离联合MALDI-TOF-MS的尿蛋白质组技术在判定早期IgA肾病的病理表现显示出较大潜力。     

联合磁性微球和基质辅助的激光解吸/离子化-飞行时间质谱筛选肾细胞癌血清差异蛋白

目的 采用联合磁性微球和基质辅助的激光解吸/离子化-飞行时间(MALDI-TOF-MS)技术筛选肾细胞癌患者血清差异蛋白峰.方法 采用弱阳离子磁性微球从99份血清标本(肾细胞癌62份,肾脏良性占位病变37份)捕获血清蛋白,MALDI-TOF-MS质谱仪检测蛋白峰,Biomarker Wizard 3.1和Biomarker Patterns Software 5.0分析数据,以47例肾细胞癌及26例肾脏良性占位病变标本建立肾细胞癌诊断模型,15例肾细胞癌和11例肾脏良性占位病变标本进行盲法验证.结果 发现7个蛋白峰具有统计学差异(P＜0.05),以质荷比2945.35、15340.8、6984.51、5819.23的4个蛋白峰建立肾细胞癌诊断模型,该模型区分肾细胞癌与肾脏良性占位病变的敏感性为83.0%,特异性为84.6%;盲法验证,该模型诊断肾细胞癌的敏感性为80.0%,特异性为81.8%.结论 采用磁性微球与MALDI-TOF-MS技术可以检测肾细胞癌血清中的差异蛋白峰,并建立敏感性、特异性较高的肾细胞癌诊断模型.     

发展蛋白质组学为基础的乳腺癌诊断学的探索

在过去的十余年里,多种基因组学和组织学技术加快了新的乳腺癌诊疗模式的发展,对患者进行分子水平诊断和个性化治疗成为今后的发展趋势.与基因组学和组织学技术快速发展相比较,用于指导乳腺癌的筛查和治疗的肿瘤标志物研究进展却微乎其微,尤其是对血清或组织中乳腺癌特异性标志物的检测.该文就基因组学与蛋白质学在乳腺癌分子诊断学应用进展中存在巨大差距的潜在原因,以及改进蛋白质组学研究设计的策略予以综述.     

人宫颈癌组织及癌旁正常组织蛋白质组的比较研究

目的:构建人宫颈癌组织及癌旁组织双向凝胶电泳图谱,筛选差异表达的蛋白质.方法: 人宫颈癌组织及癌旁正常组织标本10例,应用固相pH梯度双向凝胶电泳后,ImageScanner扫描图像、ImageMaster 2-DE Elite4.01软件分析识别差异表达的蛋白质;应用质谱仪得到相应的肽质指纹图谱,联网ExPASY网站查询相关数据库鉴定获得的差异蛋白质点.结果: 癌组织和癌旁正常组织凝胶的平均蛋白质点数分别为1285±85和1063±76,凝胶上蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦方向的偏差是(1.78±0.18) mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.89±0.21) mm;比较10例宫颈癌组织及癌旁正常组织的双向凝胶电泳图谱,未匹配总点数为156±18,对31个差异蛋白质点进行肽质指纹图分析,初步鉴定了8个与肿瘤基因、细胞周期调控、信号转导等有关的蛋白质.结论: 建立了分辨率高且重复性较好的人宫颈癌组织与癌旁正常组织的双向凝胶电泳图谱,并成功鉴定出部分与宫颈癌癌变相关的差异表达的蛋白质,为筛选宫颈癌特异性的诊断分子标志物奠定了的基础.     

血清差异表达多肽谱用于人卵巢癌诊断的研究

目的:建立卵巢癌患者血清差异表达多肽谱,并探讨其潜在诊断价值?方法:应用磁珠富集多肽结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)检测方法,筛选上皮性卵巢癌组和健康对照组差异表达多肽峰,利用ClinProTools软件比较两组血清多肽表达差异并建立差异表达多肽谱及早期诊断模型?结果:在卵巢癌组血清中,m/z 2 662.02?2 653.68?5 859.21?5 901.69?5 937.06表达显著上调;m/z 1 857.82?2 074.28?2 856.33表达显著下调?差异表达图谱建立的诊断模型预测早期卵巢癌的准确率达到81.8%(9/11),利用9例宫颈癌血清验证均为阴性,特异性达100%(0/9)?结论:磁珠富集-质谱结合ClinProTools生物信息学分析技术,有望成为新的人卵巢癌辅助诊断技术?