乳腺癌组织中miR-199b-5p、miR-597的表达及临床意义

目的检测乳腺癌组织中微小RNA-199b-5p(miR-199b-5p)、微小RNA-597(miR-597)的表达,同时分析miR-199b-5p、miR-597表达与乳腺癌临床病理特征及预后的关系,并分析其早期诊断的价值。方法收集95例乳腺癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测组织中miR-199b-5p、miR-597的相对表达量,分析miR-199b-5p、miR-597表达与乳腺癌临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-199b-5p、miR-597表达对患者术后5年总生存率的影响,并采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析miR-199b-5p和miR-597表达对患者早期诊断的预测价值。结果与癌旁正常组织相比,miR-199b-5p、miR-597在乳腺癌组织中的表达均降低(P均0. 05)。miR-199b-5p低表达与有淋巴结转移和较高TNM分期有关(P均0. 05); miR-597低表达与肿瘤低分化、有淋巴结转移和较高TNM分期有关(P均0. 05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果表明,miR-199b-5p、miR-597低表达患者的总生存率均分别低于miR-199b-5p、miR-597高表达患者(P均0. 05)。此外,miR-199b-5p和miR-597对乳腺癌早期诊断的ROC曲线下面积(area under the cure,AUC)分别为0. 813和0. 721,联合诊断的敏感度和特异度分别为0. 825、0. 813。结论乳腺癌组织中,miR-199b-5p和miR-597表达降低与淋巴结转移、病情恶化、低生存率相关,miR-199b-5p和miR-597有望成为乳腺癌早期诊断和预后预测靶标。     

miR-20a-3p、miR-449b-5p在妊娠糖尿病中的表达及临床意义

目的 通过基于基因表达数据库（GEO）的基因表达数据,描述miR-20a-3p、miR-449b-5p与妊娠糖尿病之间的关系。方法 本研究选择了GEO数据库中的GSE182737及GSE98403两个数据集,将妊娠糖尿病组（GDM）和正常组（normal）的外周血标本分别作为实验组和对照组,分别筛选表达差异cicrRNA及miRNA,通过cicrRNA数据库筛选靶向miRNA,取交集miRNA。利用mirPATH软件对交集的差异miRNA行京都基因与基因组百科全书（KEGG）、基因本体（GO）功能分析。收集2019年1月至2020年12月在常熟市第二人民医院产科就诊的GDM的患者60例,同期正常妊娠的产妇60例,对采集的血液标本进行qPCR验证miR-20a-3p、miR-449b-5p的表达。结果 GSE182737的差异cicrRNA为10个,GSE98403的差异miRNA为73个,两个数据集表达差异miRNA交集为7个。通过miPATH软件对交集的差异miRNA行KEGG富集,结果显示在脂肪酸代谢及合成等通路上显著富集。GO富集分析显示在应激反应及细胞死亡等通路上显著富集。通过...     

多囊卵巢综合征患者血清miR-143-5p及miR-34a-5p表达水平及其临床意义

目的 探讨血清中miR-143-5p和miR-34a-5p在多囊卵巢综合征患者中的表达水平及与PCOS患者临床病理特征的关系,评估miR-143-5p和miR-34a-5p作为诊断PCOS的生物标志物潜能。方法 选取2019年1月至2021年6月在南京市第一医院收治确诊为PCOS的患者40例（PCOS组）和同期50例体检正常的非PCOS女性（对照组）,分析两组研究对象的生殖激素及胰岛素相关指标,采用qRT-PCR检测miR-143-5p及miR-34a-5p表达水平,ROC曲线分析miR-143-5p及miR-34a-5p对PCOS的诊断价值。结果 血清中基础LH值PCOS组为（7.88±1.21）mIU/mL,对照组为（5.46±1.21）mIU/mL,两组相比差异具有统计学意义（P<0.001）;空腹胰岛素PCOS组为（9.37±2.88）mIU/L,对照组为（8.04±1.98）mIU/L,组间相比差异具有统计学意义（P=0.036）;PCOS组胰岛素抵抗指数和睾酮显著高于对照组,两组间均有统计学差异（P<0.05）。PCOS组血清中miR-143-5p及miR-34...     

强直性脊柱炎患者外周血中miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495表达的分析

目的:为了探讨microRNA在强直性脊柱炎患者发病过程中的作用,我们通过检测强直性脊柱炎患者外周血液中miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的表达情况,从而为研究microRNA在强直性脊柱炎发病机制中的调控作用和临床诊断价值提供新的思路。方法:收集强直性脊柱炎患者及正常人的外周血液,对外周血液中单个核细胞进行分离,并提取PBMC small RNA,用特异性茎环引物反转录成cDNA,并构建成熟的miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的T载体,制作标准曲线,利用stem-loop法通过Real-time PCR技术,检测miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的表达量。结果:本实验共收集临床样本92例,其中AS患者61例,正常人31例。通过Real-time PCR检测发现,与正常人相比,在强直性脊柱炎患者外周血中表达上调的有miR-106(P>0.05)与miR-30(P>0.05);表达下调的有miR-181(P<0.05)、miR-495(P<0.05)和miR-17(P>0.05),其中miR-181和miR-495有统计学意义。结论:与正常人相比在强直性脊柱炎患者外周血中miR-181和miR-495的表达量存在差异,它们可以靶向调控TLR-4,HLA-B,DVL和GSK/3β等基因,这一发现可能为强直性脊柱炎发病机制的研究提供新的思路,成为临床诊断中新的标志物。     

过氧化氢处理的脐静脉血管内皮细胞miR-125b-5p水平降低但Smad4表达增加

目的探讨miR-155、miR-125b-5p、miR-210及其靶基因蛋白在氧化应激血管内皮细胞中的表达和作用。方法分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并通过免疫荧光染色法检测内皮细胞Ⅷ因子相关抗原、流式细胞术检测CD31的表达进行鉴定;将分离的HUVEC进行原代培养,采用子痫前期患者血清和H2O2建立氧化应激的血管内皮细胞的模型,实验分为正常妊娠血清组、子痫前期血清组、0μmol/L H2O2组、100μmol/L H2O2组;实时定量PCR检测造模后24 h细胞内miR-155、miR-125b-5p、miR-210的水平;Western blot法检测细胞内miR-125b-5p靶基因Smad4蛋白的水平;免疫荧光染色法检测细胞内Smad4蛋白的表达;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与0μmol/L H2O2组相比,100μmol/L H2O2处理的内皮细胞miR-125b-5p显著降低、Smad4蛋白显著增加、细胞凋亡率和坏死率显著增加。与正常孕妇血清组相比,子痫前期血清处理的内皮细胞凋亡率和坏死率显著增加,但miR-125b-5p及Smad4蛋白变化不明显。结论 H2O2处理的HUVEC miR-125b-5p降低,Smad4蛋白增加。     

miR-26b-5p通过抑制REST表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭

目的探究miR-26b-5p通过抑制抑制元素1-沉默转录因子(repressor element 1-silencing transcrip-tion factor,REST)表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭情况.方法逆转录-聚合酶链反应检测miR-26b-5p和REST表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-26b-5p和REST的靶向关系;Hoechst染色检测细胞凋亡;Colony形成法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测细胞Ki67、MMP-9、cleaved caspase-3蛋白表达水平.结果miR-26b-5p和REST存在直接靶向作用关系,与Control组比较,mimic组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显降低,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显升高,inhibitor组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显升高,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显降低.结论miR-26b-5p可以通过抑制对REST的表达调节胶质瘤细胞生长、侵袭、凋亡能力.     

核内miR-199b-5p通过上调CDK9表达促进心肌细胞肥大

目的:研究核内微小RNA-199b-5p(miR-199b-5p)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制.方法:利用RT-qPCR检测健康人与心衰患者心肌组织中miR-199b-5p的表达水平.通过核质分离及RT-qPCR技术确定miR-199b-5p在人心肌AC16细胞中的核质分布.原代分离培养C57BL/6乳小鼠心室肌细...     

miR-125b-5p 靶向STAT3 调控血管内皮细胞凋亡

目的:探讨miR-125b-5p靶向STAT3对血管内皮细胞凋亡影响。方法:过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡,qPCR法测定miR-125b-5p表达。血管内皮细胞中转染miR-125b-5p mimics,MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞PCNA和C-caspase-3蛋白水平。靶基因预测软件预测STAT3与miR-125b-5p的靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。血管内皮细胞共转染STAT3过表达载体及miR-125b-5p mimics,检测细胞活力、凋亡及PCNA、C-caspase-3蛋白表达。结果:过氧化氢处理后的血管内皮细胞中miR-125b-5p水平下降,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞PCNA蛋白表达降低,C-caspase-3蛋白表达提高。转染miR-125b-5p mimics可提高过氧化氢条件下血管内皮细胞活力,减少细胞凋亡,提高细胞PCNA蛋白水平,降低细胞C-caspase-3蛋白水平。miR-125b-5p靶向调控STAT3表达。STAT3过表达载体可逆转miR-125b-5p mimics对过氧化氢诱导的血管内皮细胞活力和凋亡的影响。结论:miR-125b-5p靶向STAT3抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡。     

SOX11、miR-15b-5p在子宫内膜癌组织中表达及与患者临床病理特征的关系

目的 探讨转录因子性别决定区Y框蛋白11(SOX11)、微小RNA-15b-5p(miR-15b-5p)在子宫内膜癌组织中表达及与患者临床病理特征的关系。方法 选取2015年10月至2016年10月120例惠州市第一人民医院行手术治疗的子宫内膜癌患者癌组织及癌旁组织标本。采用免疫组化法检测组织中SOX11的表达,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中SOX11mRNA、miR-15b-5p的表达水平;Pearson法分析子宫内膜癌组织中SOX11mRNA与miR-15b-5p表达水平相关性;Kaplan-Meier法分析SOX11和miR-15b-5p表达水平与子宫内膜癌患者5年生存率的关系;Cox回归分析影响子宫内膜癌患者总生存的危险因素。结果 子宫内膜癌组织中miR-15b-5p表达水平低于癌旁组织,SOX11蛋白阳性率、SOX11 mRNA表达水平高于癌旁组织（P<0.05）。SOX11蛋白及miR-15b-5p表达与患者淋巴结转移、FIGO分期、肌层浸润有关（P<0.05）。miR-15b-5p在SOX11的3’UTR存在相应的结合位点,子宫内膜癌组织...     

miR-181b-5p通过靶向结合PAX9促进人急性髓细胞性白血病细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探究miR-181b-5p通过靶向结合配对盒基因9(PAX9)对急性髓细胞性白血病(AML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 分别用基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库和肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析AML患者中PAX9的表达水平和预后的关系。在Kasumi-1细胞和AML5细胞中转染空载体(Vector组)或PAX9(PAX9组),CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)和细胞周期蛋白B1(CCNB1)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)的表达。生物信息学分析预测PAX9靶作用的微小RNA(miRNA)、荧光素酶报告系统验证其靶向作用,实时定量PCR检测PAX9 mRNA水平,Western blot法检测PAX9蛋白表达。在Kasumi-1细胞和AML5细胞中转染miR-NC(miR-NC组)或miR-181b-5p(miR-181b-5p组),在miR-181b-5p组细胞中进一步转染PAX9(miR-181b-5p联合PAX9组),采用前述方法分别检测细...     

miR-181a-5p对坐骨神经损伤后神经细胞凋亡的影响

目的 探究miR-181a-5p对坐骨神经损伤后神经细胞再生及凋亡的影响。方法 建立坐骨神经损伤大鼠模型,通过FISH和qRT-PCR检测坐骨神经miR-181a-5p表达。鞘内注射antagomiR-181a-5p,通过qRT-PCR检测坐骨神经miR-181a-5p表达,通过HE染色检测坐骨神经病理学变化,通过TUNEL检测坐骨神经细胞凋亡。结果 miR-181a-5p在坐骨神经损伤大鼠坐骨神经近侧断端表达升高。鞘内注射antagomiR-181a-5p降低坐骨神经损伤大鼠坐骨神经miR-181a-5p表达,改善大鼠坐骨神经损伤,降低坐骨神经细胞凋亡水平。结论 miR-181a-5p在损伤的坐骨神经中高表达,抑制miR-181a-5p表达降低坐骨神经细胞凋亡水平。     

miR-21在脑出血患者外周血中表达特点的研究

目的研究脑出血患者外周血中microRNA的表达特点,探讨miR-21在脑出血患者外周血中的表达与脑出血后时间相关性。方法采用病例对照研究方法,病例组选择基底节区脑出血患者作为研究对象,正常对照组来自健康志愿者,并要求年龄和性别等因素与病例组匹配。采集4例病例组患者和与之相匹配的4例对照组患者外周静脉血,提取血清,抽提RNA,采用microRNA芯片技术分析microRNA在各组间的表达情况,运用统计学方法分析病例组与对照组临床资料的差异性及microRNA表达的差异性。运用靶基因预测软件及文献复习,挑选出可能与ICH相关的microRNA(miR-21)及其靶基因,采集31例病例组患者在脑出血后6h、24h、72h及7d的外周血,采集11例对照组患者外周血,提取血清,抽提RNA,采用real-time PCR方法扩大样本量进一步研究miR-21在脑出血患者外周血中的表达与出血时间的相关性,探讨其可能的分子作用机制。结果microRNA芯片结果显示,脑出血患者外周血中,共有101种microRNA表达下调(fold change1.5),53种microRNA有统计学差异;表达上调的microRNA共有10种,其中2种呈差异性表达;通过靶基因预测软件及文献复习,分析miR-21可能与脑出血的多个病理机制相关;real-time PCR验证实验结果与芯片结果一致,miR-21在脑出血患者外周血中表达下调;且miR-21在发病6h、24h、72h及7d各个时间点表达随时间呈曲线变化趋势。结论脑出血患者血清中存在着特异性的mico RNA表达谱;miR-21在脑出血患者外周血中随时间变化表达下调,且其变化趋势与脑出血后水肿程度相一致。     

外泌体miR-181b-5p诱导M2型巨噬细胞极化促进喉癌细胞转移的功能研究北大核心CSCD

目的:探究外泌体miR-181b-5p对巨噬细胞极化和喉癌转移的影响。方法:THP-1诱导分化为M0型的巨噬细胞,M0型巨噬细胞分为TU-212 exo、TU-177 exo、Hep-2 exo、NP69 exo、miR-NC exo、miR-181b-5p exo组和PBS组。外泌体诱导后的巨噬细胞与TU-212细胞共孵育,qRT-PCR检测miR-181b-5p、TNF-α、CCR7、Arg1、CD206、CD163表达,Western blot检测PI3K p110γ、PTEN、p-AKT、AKT表达,Transwell小室法检测各组细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p与PTEN的靶向关系。结果:TU-212、TU-177、Hep-2细胞及其外泌体中miR-181b-5p高表达,TU-212 exo、TU-177 exo、Hep-2exo、miR-181b-5p exo促进巨噬细胞中miR-181b-5p、Arg1、CD206、CD163、PI3K p110γ表达及AKT磷酸化,抑制PTEN、TNF-α、CCR7表达。PTEN为miR-181b-5p的靶基因。TU-212 exo、TU-177 exo、Hep-2 exo、miR-181b-5p exo诱导的巨噬细胞显著促进TU-212细胞的迁移和侵袭。结论:外泌体miR-181b-5p激活PTEN/PI3Kγ信号通路诱导M2型巨噬细胞极化,从而促进喉癌细胞的转移。     

卵巢癌中E2F1通过影响miR-106b-5P调节RhoC的表达

目的探讨卵巢癌中E2F1、miR-106b-5P以及RhoC三者的表达的关系。方法使用Spearman相关分析方法分析卵巢癌组织中E2F1和miR-106b-5P表达水平的相关关系;OVCAR3和A2780细胞中转染或沉默E2F1,通过RT-PCR检测miR-106b-5P和RhoC的表达,转染miR-106b-5P后检测RhoC的表达。结果经分析发现卵巢癌组织中E2F1和miR-106b-5P表达水平呈负相关。卵巢癌细胞转染E2F1后miR-106b-5P表达水平下降,RhoC的表达水平上升;转染si-E2F1后结果相反;而在卵巢癌细胞中转染miR-106b-5P后发现RhoC的表达水平下降。结论 E2F1负调控miR-106b-5P表达调控RhoC的表达。     

食管癌患者外周血中双微体观察

食管癌患者外周血中双微体观察李桂信邵桂泉丰建淑张玫裘立群宋光江随着细胞遗传学的发展，癌细胞的特异性染色体畸变——双微体（ｄｏｕｂｌｅｍｉｎｕｔｅｓｂｏｄｙ，ＤＭ），日益引起人们的关注。目前资料证实，ＤＭ是癌基因扩增的细胞遗传学表现［１］。癌基因一旦扩...     

类风湿关节炎患者外周血单核细胞miR-24、miR-132表达及临床意义

目的:miR-24、miR-132在类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及临床意义。方法:收集160例RA患者、65例骨关节炎(OA)患者和65名健康对照者作为研究对象。RA患者按照DAS28评分分为低活动组(n=64)和中高活动组(n=96),Sharp评分分为非骨侵蚀组(n=73)和骨侵蚀组(n=87)。采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测各组PBMC中miR-24、miR-132表达水平。应用ROC曲线分析miR-24、miR-132对RA的诊断价值,Pearson相关分析RA患者miR-24、miR-132与DAS28评分、Sharp评分的相关性。结果:RA组PBMC中miR-24(3.62±0.75 vs 0.91±0.18,0.86±0.13)及miR-132(2.48±0.23 vs 1.07±0.14,0.96±0.11)表达水平均明显高于OA组和对照组(P<0.01)。中高活动组PBMC中miR-24(5.86±1.15 vs 1.20±0.41)及miR-132(3.25±0.42 vs 1.14±0.19)表达水平明显高于低活动组...     

miR-130b-3p有望作为人膀胱癌的标志物

目的进一步了解miRNA在膀胱癌中的潜在机制。方法芯片分析4对人膀胱癌组织和相邻正常组织中的miRNA的表达。并用RT-q PCR来验证两个最上调的miRNA及其靶基因的表达是否符合miRNA/mRNA芯片结果。通过相关性分析和双荧光素酶报告实验推断并验证miR-130b-3p可以靶向PTEN。应用CCK8、EDU、流式细胞术、划痕、Transwell和细胞骨架等实验证明miR-130b可以影响膀胱癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。用Western blot检测PI3K/AKT和整合素β1/FAK信号通路的关键靶蛋白。结果人膀胱癌中miR-130b-3p表达高于癌旁且与PTEN表达呈负相关。miR-130b-3p可下调PTEN表达,导致PI3K/AKT和整合素β1/FAK信号通路的激活,且与膀胱癌EJ细胞的增殖、迁移和侵袭相关。细胞转染miR-130b-3p抑制剂时,可以重排细胞骨架。结论本结果揭示miR-130b/PTEN有望用于人膀胱癌诊断和治疗的标志物。