脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞基因表达谱分析

目的　利用基因芯片技术分析脂多糖 (LPS)活化的小鼠腹腔巨噬细胞基因表达谱 ,以更全面地了解LPS诱导的巨噬细胞反应。方法　以未刺激的和用 1mg/LLPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞制备3 3 P标记的cDNA探针 ,分别与含有 1176个已知基因的小鼠cDNA芯片杂交。结果　活化组和未刺激组间的 2倍差异表达基因为 118个 ,3倍差异表达基因为 6 9个 ,其中 4 4个上调 ,2 5个下调。转录因子、细胞内信号调节蛋白、炎症细胞因子和细胞凋亡相关基因的转录发生明显的调节变化。结论提供了LPS活化的巨噬细胞综合基因表达信息 ,并筛选出一些新的可能与LPS活化相关的基因。     

α-MSH对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞SOCS-3mRNA表达的影响

目的:观察α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞SOCS-3mRNA表达及NO释放的影响,以探讨α-MSH拮抗LPS的作用机制。方法:用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)的方法检测LPS诱导体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞SOCS-3mRNA表达水平和给予α-MSH后对SOCS-3mRNA表达的影响;用Griess试剂检测单独给予LPS与同时给予α-MSH和LPS作用巨噬细胞后对NO生成量的影响。结果:未受LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞表达低水平的SOCS-3。LPS组SOCS-3的表达和NO的生成显著高于对照组,而同时给予α-MSH和LPS培养,巨噬细胞的SOCS-3的表达明显低于LPS组,NO的生成则几乎完全阻断。结论:LPS在启动炎症的过程中可能也激活了SOCS介导的负调节机制;但SOCS可能不参与α-MSH的抗LPS作用。     

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞parkin表达及线粒体自噬形成

目的:探讨巨噬细胞在脂多糖(LPS)处理后parkin表达及对线粒体自噬的影响。方法:无菌分离并原代培养小鼠腹腔巨噬细胞;200 ng/ml LPS作用巨噬细胞,JC-1标记线粒体,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化;RT-PCR检测巨噬细胞parkin mRNA水平;Western blot检测parkin及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达水平;激光共聚焦显微镜分别检测巨噬细胞在LPS处理前后parkin在细胞内的分布及与LC3和线粒体三者的共定位情况。结果:JC-1染色流式细胞仪检测结果显示,LPS处理后,巨噬细胞线粒体膜电位降低,并随LPS作用时间延长呈持续下降趋势;parkin mRNA在LPS处理6 h内仅有少量的增加,但parkin蛋白水平在LPS刺激6 h后增加明显;parkin在巨噬细胞定位结果表明,未受LPS处理时parkin呈弥散均匀分布,而LPS刺激后parkin呈明显的点状聚集;Western blot检测结果显示巨噬细胞在LPS刺激后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增大,表明巨噬细胞发生明显的自噬;激光共聚焦显微镜结果显示,巨噬细胞在LPS刺激后,parkin、LC3和线粒体三者存在共定位关系。结论:巨噬细胞在LPS刺激后,parkin表达增加并介导线粒体自噬形成,参与对损伤线粒体的清除,可能在巨噬细胞参与的炎症反应中发挥一定的调控作用。     

α-MSH对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA 表达的影响

目的：观察α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达的影响，探讨α-MSH拮抗LPS的作用机制。方法：用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）的方法检测LPS诱导体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达水平和给予α-MSH后对CD14和TLR4 mRNA表达的影响。结果：正常静息小鼠腹腔巨噬细胞只表达少量的CD14和TLR4 mRNA,给予LPS刺激后6 h，两者表达明显强于正常对照（P<0.01），并且其表达量随着LPS刺激时间的增加维持在高水平，24 h达到峰值，在48 h CD14 mRNA的表达降到正常水平，而TLR4 mRNA的表达仍然维持在高水平。在LPS刺激的同时给予α-MSH，CD14和TLR4 mRNA的表达则明显低于LPS组（P<0.05），而且α-MSH这种效应与其使用浓度有关，0.1 nmol/L α-MSH不影响LPS诱导的CD14和TLR4 mRNA的表达，而当α-MSH的浓度达到1、10、100 nmol/L则能显著影响CD14和TLR4 mRNA的表达（P<0.05），但各个浓度组之间的作用没有明显差别（P>0.05）。结论：α-MSH抗LPS的效应可能与其下调LPS信号转导通路关键受体CD14和TLR4 mRNA的表达有关，从而干扰LPS跨膜信号转导，阻碍巨噬细胞活化。     

脂多糖增强小鼠腹腔巨噬细胞14.2 kD蛋白质磷酸化

目的：探索ＬＰＳ对小鼠腹腔巨噬细胞小分子蛋白质磷酸化的影响。方法：利用同侠素掺入,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,放射自显影和蛋白质印迹,结合蛋白激酶抑制剂与激活剂的作用,研究 ＬＰＳ对巨噬细胞处理后小分子蛋白质磷酸化及其相关蛋白激酶对此磷酸化的影响。结果：１４．２ｋＤ蛋白磷酸化被ＬＰＳ强烈地促进;ＭＡＰＫ的表达量未见明显变化;ＴＰＫ抑制剂三羟异黄酮明显抑制上述磷酸化;ＰＫＡ激活剂佛斯可林和Ｇｉ蛋白抑制剂百日咳     

雌二醇诱导小鼠腹腔巨噬细胞程序性死亡

研究雌二醇和它莫西芬对培养的小鼠腹腔巨噬细胞的影响，发现雌二醇能够诱导巨噬细胞产生典型的细胞程序性死亡的形态学改变和特征性的ＤＮＡ“梯形”结构，而它莫西芬能够抑制雌二醇诱导细胞程序性死亡的作用。     

二甲双胍对脂多糖致炎性反应小鼠的抗炎作用

目的探究二甲双胍(Met)对脂多糖(LPS)致炎性小鼠的抗炎效应。方法 ICR小鼠分为对照组、LPS组、二甲双胍高、中和低剂量组(400, 200和100 mg/kg)。对照组和LPS组腹腔注射0.9%氯化钠溶液,其余3组注射不同剂量的二甲双胍;0.5 h后,除对照组外,其余4组腹腔注射等体积的LPS致小鼠炎性反应,6 h后测量小鼠的脾指数;ELISA检测小鼠血清中炎性因子IL-6、TNF-α和IL-10的表达;RT-PCR检测小鼠肝脏组织IL-6、TNF-α和IL-10 mRNA表达的变化;HE染色检测小鼠肝脏组织炎性反应变化。结果相对于LPS组,二甲双胍用药组小鼠的脾指数降低(P0.05);外周血IL-6和TNF-α及肝脏组织中IL-6和TNF-αmRNA的表达明显下降(P0.05);而外周血IL-10及肝脏组织中IL-10 mRNA显示上升(P0.05);二甲双胍高剂量组可明显减轻由LPS所致小鼠肝脏的炎性反应。结论二甲双胍对于LPS致炎性小鼠具有一定的抗炎活性。     

莫西沙星对脂磷壁酸诱导的人肺泡巨噬细胞凋亡及炎症因子释放的影响

目的 探讨脂磷壁酸(LTA)对人肺泡巨噬细胞(AM)凋亡及炎症因子释放的影响和莫西沙星(MXF)对其反应的抑制作用.方法 收集、提纯及体外培养人AM,LTA刺激4h后,加或不加MXF与其共孵育,于各实验终点用MTT法计算细胞相对活力,光学显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测TLR2、IL-1β、IL-8及TNF-α的mRNA水平,ELISA检测IL-8蛋白水平,验证RT-PCR.结果 LTA对AM有细胞毒性,并呈浓度递增关系(P＜0.05),MXF对AM活力无影响(P＞0.05),且可抑制LTA的毒性作用(P＜0.05).LTA促进AM凋亡(P＜0.05),此作用可被MXF抑制(P＜0.05).LTA上调AM中TLR2、IL-1β、IL-8及TNF-α的mRNA表达(P＜0.05),各峰值时间及峰值分别为:12 h(3.56±0.03)、6 h(46.63±7.06)、12 h(28.07±1.24)、3 h(2.34±0.50),上调24 h IL-8蛋白水平,上述效应可被MXF抑制.结论 LTA对人AM有细胞毒性,促进AM凋亡,上调AM中TLR2及炎症因子IL-1β、IL-8及TNF-α的表达,MXF抑制LTA诱导的AM炎症及凋亡,可能在革兰氏阳性菌肺炎中发挥杀菌、抗炎、保护宿主AM免疫活性的作用.     

槲皮素对细菌脂多糖诱导流产小鼠子宫蜕膜巨噬细胞功能的影响

目的:探讨槲皮素对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的免疫抑制机制及其保胎作用。方法:将孕鼠随机分为对照组和实验组,对照组为PBS处理组,实验组分别为LPS流产模型组、槲皮素处理组、槲皮素+LPS处理组。每组小鼠分别在末次注射后的1、3、6、12、24h脱颈椎处死,剖腹取其子宫,观察妊娠结果。免疫组织化学方法检测CD14~+巨噬细胞数量和CD14表达量,ELISA方法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量。结果:模型组小鼠流产率和胚胎吸收率均为100%,槲皮素+LPS处理组流产率降低为40%,胚胎吸收率降至36.18%。与对照组相比,槲皮素+LPS组小鼠子宫蜕膜组织CD14~+巨噬细胞数量、CD14表达量、TNF-α和MCP-1的含量均显著增加。与模型组相比,槲皮素+LPS组小鼠各时间点CD14~+巨噬细胞数量及CD14表达量、TNF-α和MCP-1的含量均显著降低。结论:槲皮素通过抑制MCP-1的生成,从而阻止巨噬细胞向子宫内膜迁移,并且下调CD14的表达,减少TNF-α的分泌,是其对抗LPS诱导流产的免疫作用机制之一。     

ROS对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的 探讨ＲＯＳ影响巨噬细胞凋亡的机制。方法 激光扫描共聚集显微术,流式细胞术和荧光标记技术等,结果（１）凋亡巨噬细胞内ＤＡＤＰＨ氧化酶活性急剧降低使得胞内ＲＯＳ水平快速上降;（２）ＲＯＳ清除剂促进地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡;（３）ＰＫＣ促进巨细胞凋亡和ＲＯＳ急剧减少;ｃＡＭＰ抑制巨噬细胞凋亡和ＲＯＳ急剧减少。结论 （１）ＲＯＳ抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡;（２）ＰＫＣ,ｃＡＭＰ等因素通过影响地     

脂多糖体内外诱导年轻和衰老小鼠腹腔巨噬细胞表达IL-6的差异研究

目的 探讨脂多糖(LPS)对年轻和老龄小鼠腹腔巨噬细胞体内外表达炎性细胞因子IL-6的影响.方法 年轻(2个月)和年老(18个月)小鼠分别腹腔注射LPS,对照组注射PBS,24h后处死小鼠,分离腹腔巨噬细胞,收集细胞,real time PCR检测IL-6的表达水平.未经LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞,体外用LPS处理2...     

蝎毒耐热多肽对脂多糖诱导的BV2细胞炎性反应的抑制作用

目的:观察蝎毒耐热多肽(SVHRP)对细菌脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞炎性反应的影响,探讨其是否具有抑制神经炎症的作用。方法:LPS诱导BV2细胞活化,进行免疫细胞化学染色(OX-42抗体)检测细胞的形态,MTT法检测SVHRP对细胞的毒性;分别用Griess试剂法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞外液炎性介质一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;Western Blot检测诱导型NO合成酶(iNOS)蛋白表达水平。结果:不同浓度的SVHRP(2~50μg/ml)对BV2细胞均无毒性。SVHRP(20μg/ml)预处理能明显抑制LPS诱导的BV2细胞的形态活化改变,减少细胞激活后产生的炎性因子NO和TNF-α,抑制iNOS的蛋白表达。结论:SVHRP明显抑制BV2小胶质细胞的炎性反应,提示SVHRP具有抗神经炎症作用。     

漏芦脱皮甾酮对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

漏芦(Rhaponticum uniflorum(L·)DC·)属菊科多年草本植物.从漏芦根中提取的植源性蜕皮甾酮是一种常见的蜕皮激素。它具有较强的生物活性,如改善细胞膜脂流动性,保护细胞膜结构完整性和     

巨细胞病毒感染小鼠对腹腔巨噬细胞功能的影响

巨细胞病毒（ＣＭＶ）在人群中的感染较为普遍，且多为隐性感染。为了观察ＣＭＶ感染对宿主免疫功能的影响，选择了机体重要的防御细胞－巨噬细胞作为研究对象。利用小鼠腹腔渗出细胞（ＰＥＣ）总数、巨噬细胞含量、ＦＣ花环形成率和肿瘤坏死因子（ＴＮＦａ）释放量检测鼠...     

雌酮诱导小鼠胸腺细胞和腹腔巨噬细胞凋亡

研究雌酮对培养的小鼠胸腺细胞和腹腔巨噬细胞的影响，发现雌酮能够诱导胸腺细胞和巨噬细胞产生典型凋亡的形态学改变和特征性ＤＮＡ“梯形”结构。用２０μｍｏｌ／Ｌ，６０μｍｏｌ／Ｌ和８０μｍｏｌ／Ｌ的雌酮处理胸腺细胞２小时，或用２０μｍｏｌ／Ｌ和４０μｍｏｌ／Ｌ雌酮处理巨噬细胞２４小时，均可出现典型的ＤＮＡ“梯形”结构。２０μｍｏｌ／Ｌ雌酮介导巨噬细胞出现ＤＮＡ“梯形”结构的效应呈时间依赖性。１０μｍｏｌ／Ｌ的它莫西芬能够有效抑制由２０μｍｏｌ／Ｌ雌酮诱导胸腺细胞和巨噬细胞产生凋亡的特征性ＤＮＡ片段；这种抑制效应具有剂量依赖性。Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和放线菌酮亦能够抑制雌酮诱导胸腺细胞和巨噬细胞产生ＤＮＡ“梯形”结构的作用。     

没食子酸减轻香烟烟雾诱导的小鼠气道炎性反应

目的 研究没食子酸(GA)对香烟烟雾(CS)诱导的小鼠慢性阻塞性肺病(COPD)相关的肺部炎性反应的作用。方法 构建CS诱导的小鼠模型。分析支气管肺泡灌洗液中的炎性细胞的数量和促炎细胞因子的水平。相应试剂盒检测肺组织匀浆中活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和蛋白羰基的活性。Western blot分析IL-13/STAT6通路活性。结果 GA抑制SC诱导的炎性细胞浸润(中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞)和促炎细胞因子(IL-6、TNF-α和IL-1β)的水平。GA可以减轻暴露于CS的小鼠肺组织氧化还原失衡。结论 GA有效地减轻COPD模型小鼠肺部炎性反应和氧化应激。     

没食子酸通过拮抗脂多糖诱导的TLR4/NF-κB活化抑制RAW264.7巨噬细胞炎性反应

目的观察没食子酸对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路的影响。方法将巨噬细胞分为空白对照组、LPS组、LPS联合没食子酸组、LPS联合NF-κB抑制剂吡咯二硫代甲酸(PDTC)组和LPS联合地塞米松(DM)组。处理后的细胞培养24 h,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、IL-6水平,实时定量PCR检测TLR4、NF-κB mNRA水平,Western blot法检测p65、p-p65、TLR4、磷酸化的NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白表达水平。结果 LPS诱导RAW264.7巨噬细胞后TNF-α、IL-1、IL-6水平升高,没食子酸可降低LPS诱导引起的TNF-α、IL-1和IL-6表达水平升高。LPS刺激后TLR4 mRNA及蛋白表达增加,NF-κB活化,没食子酸可拮抗以上作用,阻止NF-κB活化。结论没食子酸可通过TLR4/NF-κB通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应。     

IL-6对IFNγ诱导的小鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫作用的影响

通过体外实验，观察了ＩＬ ６对ＩＦＮγ诱导的小鼠腹腔巨噬细胞（ｍｏｕｓｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＭＰＭ）的抗弓形虫作用。结果显示，ＩＬ ６可促进弓形虫在ＭＰＭ内的增殖，并能够部分逆转ＩＦＮγ诱导的ＭＰＭ的抗弓形虫效应，其逆转作用随ＩＬ ６剂量的增加而增加。