国产丙型肝炎病毒NS3抗原的质量检定

目的为了研究我国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）诊断试剂用抗原的质量，加快改进丙型肝炎病毒抗体诊断试剂。方法特选国内“八五”攻关课题研究出的丙型肝炎ＮＳ３抗原和目前我国的主要使用的两种国外丙型肝炎ＮＳ３抗原，建立了单片段检测ＮＳ３抗体的试剂，对ＮＳ３抗原质量利用我国抗－ＨＣＶ第二代国家检验参考品以及中国药品生物制品检定所最近收集的部分血清样品，对其抗原性进行了比较研究。结果发现我国生产单位对ＮＳ３抗原的纯化条件及在试剂中的组装条件的研究尚嫌薄弱，使得在利用这些ＮＳ３抗原组成诊断试剂检测时出现了检出率较低及假阳性等问题。结论提示国内有关单位应加强对这方面的研究。     

丙肝病毒NS5A蛋白对NS5B的RdRP活性影响的研究

丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus,HCV )非结构蛋白 (Nonstructural,NS) 5 A在 HCV基因组复制中的作用目前尚不清楚。本文研究 His- NS5 A对 NS5 B的 RNA依赖性 RNA酶 (Rd RP)活性的影响 ,以了解 NS5 A在HCV RNA复制中的作用。采用变性 -复性方法 ,纯化大肠杆菌表达的重组组氨酸 NS5 A融合蛋白。 GST结合洗脱实验 (GST pull- down assay)研究 NS5 A和 NS5 B是否结合。以不同的摩尔浓度比 ,将纯化的 NS5 B和 NS5 A蛋白混合 ,检测 NS5 A对 NS5 B的 Rd RP活性的影响。获得高得率的纯化 His- NS5 A蛋白。重组 NS5 A蛋白可在体外与NS5 B结合并抑制后者的 Rd RP活性。本研究报道了纯化重组 His- NS5 A蛋白的变性 -复性方法 ,结果显示纯化的重组 NS5 A在体外可与 NS5 B相互结合 ,并明显抑制 NS5 B Rd RP活性。提示了 HCV NS5 A在病毒复制中的可能作用。     

庚型肝炎病毒NS3蛋白大肠杆菌中的表达

目的 获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３抗原。方法 从重组质粒Ｉｗｑ２利用反应扩增出ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ ＮＳ３基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ诱导重组工程菌,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ对重组蛋白进行鉴定。结果 酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧ     

HCV NS3 N末端部分氨基酸缺失对NS3/NS3与NS3/NS4A分子间相互作用的影响

目的旨在弄清ＮＳ３参与分子间相互作用的确切区段，为研究针对ＮＳ３的抗ＨＣＶ寡肽小分子药物的设计提供依据。方法参照ＨＣＶ中国河北株序列设计ＮＳ３引物，将其Ｎ末端的前１５个和前３０个氨基酸分别缺失掉。然后用酵母双杂交系统检测ＮＳ３／ＮＳ３及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用强度在缺失前后的变化，从而判明ＮＳ３Ｎ末端氨基酸在分子间相互作用中的意义。核苷酸序列分析采用ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍ３７３Ａ型自动测序仪。结果ＮＳ３Ｎ末端氨基酸缺失前后，ＮＳ３／ＮＳ３分子间及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用的强度相差有显著性（Ｐ＜０．０１），但缺失１５个氨基酸和缺失３０个氨基酸对上述相互作用强度的影响差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论ＮＳ３Ｎ末端的１～３０个氨基酸在ＮＳ３／ＮＳ３及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用中有一定意义，其Ｎ末端前１５个氨基酸（ＡＰＩＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＬＧ）对于分子间相互作用更为关键。本研究结果将为抗ＮＳ３丝氨酸蛋白酶活性的寡肽抑制物的研究打下基础，并为抗ＨＣＶ的寡肽小分子药物的设计提供依据     

庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３ 抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ 反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ 后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ 诱导重组工程菌,用ＳＤＳＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 对重组蛋白进行鉴定。结果　酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段。ＳＤＳＰＡＧＥ 分析诱导表达产物发现在相对分子质量约４３ ８１０处有一条明显的蛋白表达带,占菌体总量的１７ ．７ ％ 。用ＮｉＮＴＡ 亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定发现重组蛋白可与ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＲＮＡ 阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论　获得了具备免疫反应原性的ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 抗原,该重组蛋白可用于ＧＢＶＣ／ＨＧＶ 感染的检测。     

抗人类免疫缺陷病毒gp41和丙型肝炎病毒NS3杂交瘤细胞株的建立

目的为检测血清中人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）抗原提供血清学指标。方法用纯化的重组ＨＩＶ（ｇｐ４１）和ＨＣＶ（ＮＳ３）抗原蛋白作为联合免疫原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合，并采用挑单个细胞的方法进行一次克隆。结果分别获得４株和６株能稳定分泌高效价抗ＨＩＶ（ｇｐ４１）和ＨＣＶ（ＮＳ３）抗原蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株。初步建立了双抗体夹心法检测ＨＩＶ（ｇｐ４１）和ＨＣＶ（ＮＳ３）抗原的酶联免疫吸附试验。结论本方法是建立单抗杂交瘤细胞株的快速方法，所建杂交瘤细胞株特异性强，效价高，分泌抗体性能稳定，有推广价值。     

登革2型病毒NS3蛋白NTPase/RNA解旋酶结构域的原核表达及活性研究

目的 表达登革病毒非结构蛋白NS3 NTPase／RNA解旋酶结构域（dNS3），纯化表达产物并对其活性作初步研究。方法提取感染登革2型病毒的BHK-21细胞总RNA，RT-PCR扩增目的基因，经NcoⅠ、HindⅢ双酶切后连入表达载体pET28a，转化宿主菌BL21（DE3），优化诱导表达条件，SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达蛋白。表达产物经亲和层析纯化，超滤浓缩脱盐，孔雀绿钼酸铵法检测NTPase活性。结果成功构建重组表达载体pET28a-dNS3并在大肠杆菌中获得可溶性表达，纯化产物经测定具有良好的NTease活性及抗原性。体外条件下证实登革2型病毒非结构蛋白NS5（RDRP）对dNS3的ATPase活性有促进作用，提示在病毒复制时NS3与NS5间的相互作用对NS3的生物活性及对病毒复制过程可能具有调控作用。结论本研究为基于抑制NS3 NTPase／RNA解旋酶活性的抗病毒药物的筛选提供了实验依据。     

丙型肝炎病毒NS3蛋白单克隆杂交瘤细胞株的建立及…

应用国产基因工程表达的丙型肝炎病毒ＮＳ３区抗原免疫小鼠，然后取其脾与小骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０融合，筛选出４株稳定分泌抗ＨＣＶ ＮＳ３区蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｂ６，２Ｆ３，３Ｄ８，３Ｄ９，经初步研究表明这４株单抗与ＮＳ３抗原具有良性的反应性。     

鼠抗丙型肝炎病毒NS3蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

鼠抗丙型肝炎病毒ＮＳ３蛋白单克隆抗体的制备及鉴定潘秀珍唐家琪李越希李先富（南京军区军事医学研究所，南京２１０００２）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是严重危害人民身体健康的病原。感染ＨＣＶ的病人血液中，很难直接检测到病毒抗原，只能通过检测病人血液中特异性抗体来...     

肝细胞癌中丙型肝炎病毒NS3抗原和HBsAg的表达

肝细胞癌中丙型肝炎病毒ＮＳ３抗原和ＨＢｓＡｇ的表达汪荣泉周子成杨建民房殿春作者单位：６３００３８重庆第三军医大学西南医院消化科１９９６年９月１８日收稿１９９７年６月１７日修回原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）是我国目前最常见的恶性肿瘤之一，血清学和分子流行病学...     

HCV感染者体内病毒NS3区部分区段的演变观测

目的　观察２ 例慢性 Ｈ Ｃ Ｖ 携带者及１ 例 Ｈ Ｃ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ 转阴者体内包含 Ｃ Ｔ Ｌ 抗原表位的 Ｈ Ｃ Ｖ Ｎ Ｓ３ 区部分区段的长期演变。方法　通过反转录 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增, Ｍ１３ 亚克隆,对３ 例 Ｈ Ｃ Ｖ 感染者的 Ｈ Ｃ Ｖ Ｎ Ｓ３ 区部分区段的一级结构进行测定。对感染者的 Ｈ Ｌ Ａ 进行分型。根据基序（ ｍｏｔｉｆ） 及 Ｈ Ｌ Ａ 分型资料预测该区段中的 Ｃ Ｔ Ｌ 抗原表位。结果　文献报道的 Ｈ Ｌ Ａ Ａ２ 限制的抗原表位在无 Ｈ Ｌ Ａ Ａ２ 的感染者 Ｃ 中,１９９１ 年至１９９６ 年氨基酸序列无变异。具有 Ｈ Ｌ Ａ Ａ２ 的感染者 Ｗ, Ｚ 部分氨基酸序列中该表位的起始密码子发生无义突变,测序资料中包含稳定的变异位点的肽段,符合 Ｍ Ｈ Ｃ结合肽的基序（ ｍｏｔｉｆ） 。结论　无义突变可能与 Ｃ Ｔ Ｌ 的免疫压力有关。稳定变异位点产生的原因可能是免疫逃避。     

咖啡因引起平滑肌钙的量子释放依赖于肌浆内质网Ca~（2＋）ATP酶的活性

咖啡因引起平滑肌钙的量子释放依赖于肌浆内质网Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的活性［英］Ｊ．Ｍ．Ｓｔｅｎｂｅｒｇｅｎ，ｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌｃｈｅｍ．１９９６；２７１（４）：１８２１－１８２４细胞内贮存钙的释放在一定程度上反应了１，４，５—三磷酸肌醇或咖啡因的含量增加...     

丙型肝炎病毒NS3区辅助性T细胞抗原表位的应答

观察２例慢性ＨＣＶ携带者及１例ＨＣＶＲＮＡ转阴者外周血淋巴细胞对ＨＣＶＮＳ３区辅助性Ｔ细胞抗原表位的应答。方法用血清学方法检测患者的ＨＬＡ分型。根据计算机软件分析和文献资料,合成了１个位于ＨＣＶＮＳ３区长度为１４个氨基酸的辅助性Ｔ细胞表位,与在ＧｅｎｅＢａｎｋ中已发表达的３４个ＨＣＶ全长序列进行了比较。     

丙型肝炎病毒NS3蛋白单克隆杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

应用国产基因工程表达的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３区抗原免疫小鼠，然后取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０融合，筛选出４株稳定分泌抗ＨＣＶＮＳ３区蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｂ６，２Ｆ３，３Ｄ８，３Ｄ９，经初步研究表明这４株单抗与ＮＳ３抗原具有良好的反应性，与ＨＣＶ核心区多肽及乙型肝炎病毒表面抗原和ｅ抗原均无反应。抑制实验表明这４株抗体分别针对ＮＳ３抗原分子上的２个不同的抗原决定簇。     

抗人类免疫缺陷病毒gp41和丙型肝为病毒NS3杂交？…

目的 为检测血清中人类免疫缺陷病毒和丙型肝炎病毒抗原提供血清学指标。方法 用纯化的重组ＨＩＶ和ＨＣＶ抗原蛋白作为联合免疫原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取脾细胞与Ｓ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合,并采用挑单个细胞的方法进行一次克隆。结果 分别获得４株和６株能稳定分泌高效价抗ＨＩＶ和ＨＣＶ抗的蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株。     

肝细胞肝癌中丙型肝炎病毒C区,E区,NS3区,NS4区…

本文报道研究丙型肝炎病毒抗原在肝细胞肝癌细胞内的定位分布情况。以丙型肝炎病毒的Ｃ、Ｅ、ＮＳ３、ＮＳ４区四种单克隆抗体用免疫组化方法检测了１３９例肝细胞肝癌的肝脏标本，结果总的阳性率为１５．１％。２１例阳性标本中，Ｃ区单抗检测阳性占８０．９％（１７／２１），Ｅ区内３３．３％（７／２１），ＮＳ３，ＮＳ４区均占５７．１％（１２／２１），表明应用多区段单抗有助于提高ＨＣＤ抗原的检出率。阳性物质主要存在于胞     

苏拉明对流行性乙型脑炎病毒E及NS3蛋白质合成的影响

苏拉明作为抗非洲锥虫药1920年应用于临床,其药理作用机制目前还不十分清楚。为探明苏拉明对流行性乙型脑炎病毒(乙脑病毒)有否抗病毒活性及对宿主细胞的影响,我们进行了初步研究,结果报道如下。     

肝细胞肝癌中丙型肝炎病毒C区、E区、NS3区、NS4区抗原的表达

本文报道研究丙型肝炎病毒抗原在肝细胞肝癌组织内的定位分布情况。以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的Ｃ、Ｅ、ＮＳ３、ＮＳ４区四种单克隆抗体用免疫组化方法检测了１３９例肝细胞肝癌（ＨＣＣ）的肝脏标本，结果总的阳性率为１５．１％。２１例阳性标本中，Ｃ区单抗检测阳性占８０．９％（１７／２１），Ｅ区占３３．３％（７／２１），ＮＳ３、ＮＳ４区均占５７．１％（１２／２１），表明应用多区段单抗有助于提高ＨＣＶ抗原的检出率。阳性物质主要存在于胞浆中，呈细、粗颗粒及块状，３例出现膜及膜下型，１例核内有阳性反应。ＨＣＶ感染与ＨＣＣ的发生发展有一定的关系。