绿茶多酚对脑缺血大鼠血脑屏障通透性的影响

目的探讨绿茶多酚对局灶性脑缺血大鼠血脑屏障的通透性及紧密连接蛋白occludin、claudin-5和蛋白激酶PKCα表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型,伊文思蓝法检测血脑屏障通透性的变化,免疫组化方法检测缺血脑组织occludin、claudin-5的表达,western blot方法检测脑缺血组织PKCα蛋白的表达。结果大鼠局灶性脑缺血60min、120min的脑组织血脑屏障通透性显著增加,同时点的脑组织BBB紧密连接开放;而绿茶多酚显著降低血脑屏障的通透性(P0.01),使BBB紧密连接处于关闭状态。大鼠局灶性脑缺血60min及120min脑组织紧密连接相关蛋白occludin、claudin-5的蛋白表达水平显著降低,绿茶多酚显著上调这些蛋白表达水平(P0.01)。大鼠局灶性脑缺血30min至120min脑组织中PKCα的蛋白表达水平显著升高,绿茶多酚显著降低PKCα蛋白的表达水平(P0.01)。结论绿茶多酚降低缺血大鼠脑组织血脑屏障通透性可能与上调紧密连接蛋白occludin、claudin-5的表达及下调蛋白激酶PKCα的表达有关。     

大鼠脑缺血时紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5表达的变化

目的研究脑缺血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的变化。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,采用伊文氏兰(EB)法检测缺血后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法观察occludin和claudin-5在缺血脑组织中的分布,采用RT-PCR、Wesrern blot法检测大鼠缺血脑组织occludin和claudin-5的mRNA和蛋白的表达变化。结果脑缺血2h后血脑屏障通透性显著增加(P0.01),紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5在脑微血管内皮细胞上呈阳性表达,occludin和claudin-5的mRNA和蛋白均比正常对照组显著降低(P0.01)。结论脑缺血时血脑屏障通透性的增加可能与紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的降低相关。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体改善脊髓损伤后血脊髓屏障的完整性北大核心

背景:研究发现,干细胞衍生的外泌体可通过多种途径促进脊髓损伤后运动功能的恢复。目的:研究骨髓间充质干细胞来源外泌体是否通过减轻血脊髓屏障的破坏来促进脊髓损伤后运动功能的恢复。方法:60只SD大鼠随机分成假手术组、模型组和外泌体组(n=20),采用改良Allen’s法建立大鼠脊髓损伤模型,外泌体组在损伤后30 min,1 d分别经尾静脉注射200μL骨髓间充质干细胞来源外泌体,在损伤后第3天,通过伊文思蓝染色观察血脊髓屏障通透性,Western blot检测基质金属蛋白酶9及紧密连接蛋白claudin-5,Occludin,ZO-1的表达,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶9的活性,免疫荧光检测中性粒细胞浸润情况,苏木精-伊红染色观察脊髓损伤形态学变化;在损伤后第1,3,5,7,10,14,21天,采用BBB评分量表评价运动功能恢复情况。结果与结论:①外泌体组大鼠的BBB评分在第10,14,21天显著高于模型组(P<0.05),苏木精-伊红染色结果显示外泌体组相比于模型组损伤区明显缩小(P<0.05);②外泌体治疗后血脊髓屏障染料渗出量显著减少(P<0.05),紧密连接蛋白claudin-5、Occludin、ZO-1的表达相比于模型组显著增加(P<0.05);③外泌体抑制基质金属蛋白酶9的表达和活性(P<0.05);④损伤后第3天于病变部位观察到髓过氧化物酶阳性的中性粒细胞浸润,外泌体治疗能显著减少中性粒细胞的浸润(P<0.05);⑤结果表明,骨髓间充质干细胞来源外泌体通过下调基质金属蛋白酶9的表达和活性来减少紧密连接蛋白的降解,从而减轻血脊髓屏障的破坏和随后的中性粒细胞浸润,进而促进脊髓损伤后运动功能的恢复。     

α硫辛酸对后肢缺血再灌注损伤大鼠血神经屏障的保护作用研究

目的:研究α硫辛酸(ALA)对大鼠后肢缺血再灌注(I/R)损伤后血神经屏障的保护作用。方法:54只成年雄性SD大鼠分为3组,分别为假手术组(sham)、缺血再灌注模型组(I/R)和ALA处理组(ALA),通过手术结扎大鼠左侧髂总动脉4 h制备后肢I/R注模型,ALA处理组大鼠于术前7 d连续给予ALA。伊文思蓝(EB)渗透实验检测血神经屏障的通透性,分别于再灌注后24 h检测各组大鼠坐骨神经组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以及丙二醛(MDA)的含量,应用Western Blot检测坐骨神经组织中紧密连接蛋白occludin和claudin-5表达变化。结果:与sham组相比,I/R组大鼠坐骨神经EB漏出增多(P 0. 05),SOD和GSH-Px活性降低(P 0. 05),MDA水平升高(P 0. 05),occludin和claudin-5蛋白表达下降(P 0. 05); ALA预处理的大鼠EB漏出减少(P 0. 05),GSH-Px和SOD活性增加(P 0. 05),MDA水平降低(P 0. 05),occludin和claudin-5蛋白表达增加(P 0. 05)。结论:ALA通过抑制机体的氧化应激水平对I/R损伤大鼠的血神经屏障起到保护作用。     

帕金森病模型大鼠十二指肠黏膜紧密连接蛋白表达下调

目的研究紧密连接蛋白在6-羟多巴(6-OHDA)制备的帕金森病(PD)大鼠模型十二指肠黏膜的表达变化。方法用6-OHDA损毁双侧中枢黑质多巴胺能神经元建立大鼠模型。用免疫荧光组织化学和蛋白免疫印迹检测紧密连接蛋白claudin-1、occludin和ZO-1肠黏膜的定位和表达。结果紧密连接蛋白claudin-1、occludin和ZO-1在PD大鼠模型十二指肠黏膜上均有表达,但仅ZO-1(P0.001)和occludin(P0.01)表达明显下调,而claudin-1无显著变化。结论 PD大鼠模型十二指肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、occludin的表达显著下调,可能与帕金森病十二指肠溃疡的发生发展相关。     

MiRNA-125a-5p对大鼠脊髓损伤后血脊髓屏障及运动功能的影响

目的:通过干预大鼠脊髓中miRNA-125a-5p的表达量,探讨miRNA-125a-5p在脊髓损伤(SCI)后对血脊髓屏障(BSCB)的作用及对大鼠运动功能的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脊髓损伤组(SCI组)、miRNA空载组(NC组)和miRNA-125a-5pagomir鞘内注射组(miRNA组)。RT-PCR检测miRNA-125a-5p在各种大鼠脊髓中的表达,免疫印迹和免疫荧光实验检测脊髓微血管内皮细胞间紧密连接蛋白(ZO-1)表达,尼氏染色观察脊髓前角运动神经元的数量以及通过BBB评分评价大鼠运动功能恢复。结果:MiRNA组的miRNA-125a-5p的相对表达量明显高于SCI组,且ZO-1的mRNA的相对表达量和相对蛋白质表达量较SCI组和显著增加。MiRNA组的脊髓前角运动神经元相对数量明显多于SCI组。MiRNA组大鼠脊髓损伤后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d和28 d运动功能恢复明显优于SCI组。结论:MiRNA-125a-5p可以有效保护脊髓损伤大鼠的血脊髓屏障功能并促进运动功能恢复。     

STAT3通路参与白细胞介素-22促进人结肠癌细胞系HT29紧密连接蛋白的表达

目的探讨白细胞介素-22(IL-22)对肠上皮屏障紧密连接的影响及机制。方法将人结肠癌细胞系HT29分为对照组、IL-22组(100 ng/mL)、FLLL32组(IL-22干预前使用FLLL32预处理)、colivelin组(IL-22干预前使用colivelin预处理)。转染处理组:shNC组、shNC+IL-22组(IL-22干预前转染阴性对照)、shSTAT3组(转染LV-STAT3-RNAi)、shSTAT3+IL-22组(IL-22干预前转染LV-STAT3-RNAi)。用Western blot、real-time PCR检测HT29细胞STAT3、p-STAT3和紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin-1和claudin-2及其mRNA的表达;用透射电镜观察HT29细胞紧密连接结构。结果相比于对照组,IL-22组的STAT3、p-STAT3、 ZO-1、occludin、claudin-1和claudin-2蛋白及mRNA表达水平明显升高(P0.05),且紧密连接更致密。相比于IL-22组,FLLL32组中上述指标的蛋白及mRNA表达量明显下调(P0.05),紧密连接较差,colivelin组则表达上调(P0.05),紧密连接完好。相比于shNC组,shNC+IL-22组的所有紧密连接的蛋白及mRNA表达量明显增加(P0.05),紧密连接结构更致密;而相比于shSTAT3组,shSTAT3+IL-22组的所有紧密连接的蛋白及mRNA表达量的差异无统计学意义。结论 STAT3通路参与IL-22促进HT29细胞紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin-1和claudin-2的表达。     

电针刺激经Wnt / β-catenin 信号通路促进脊髓损伤大鼠移植骨髓间充质干细胞的存活及分化

目的:探讨电针(EA)刺激对移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)在脊髓损伤(SCI)大鼠局部存活和分化的影响,及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法:体外分离和培养大鼠BMSCs,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)进行标记用于移植。将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(SCI)、BMSCs移植组(BMSCs)、BMSCs移植+EA组(BMSCs+EA)和抑制剂IGC-001干预组(BMSCs+EA+IGC-001),每组12只。除sham组外,各组采用改良Allen′s打击法建立SCI模型,尾静脉注射被BrdU标记的BMSCs,并给予EA和IGC-001干预4周。移植后第1、7、14、21、28天采用BBB运动评定量表评估各组大鼠后肢运动功能;4周后,采用ELISA法检测损伤脊髓组织匀浆中神经营养素3(NT-3)的含量;免疫荧光实验检测损伤脊髓组织局部BrdU和神经元特异性核蛋白(NeuN)表达,评估BMSCs移植后的存活及分化情况;Western blot检测损伤脊髓组织β-catenin、c-Myc和cyclin D1等蛋白表达水平。结果:BMSCs组大鼠BBB评分、损伤脊髓组织中NT-3含量及β-catenin、c-Myc、cyclin D1等蛋白表达水平均较SCI组显著升高(P0.05);BMSCs+EA组大鼠BBB评分,损伤脊髓组织中NT-3含量和β-catenin、c-Myc、cyclin D1等蛋白表达水平及移植后BMSCs存活数量和BMSCs分化的神经元样细胞数量均较BMSCs组显著增加(P0.05)。IGC-001干预可显著逆转EA刺激作用。结论:EA刺激可促进SCI大鼠移植BMSCs存活及向神经元样细胞分化,其机制可能与激活Wnt/β-catenin通路介导的NT-3表达有关。     

PARP抑制剂3-AB对糖尿病大鼠血脑屏障的影响

目的探讨多聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰(3-AB)对实验性糖尿病(DM)大鼠血脑屏障(BBB)的影响。方法实验动物分为正常对照组(control组),糖尿病组(DM组),糖尿病加3-AB组(DM加3-AB组),3个月后检测各组大鼠BBB通透性,BBB紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达;Western blot法检测各组大鼠PARP1,p-ERK1/2和ERK1/2的表达。结果和control组相比,DM组体质量显著下降(P0.01),血糖明显升高(P0.01),3-AB对DM大鼠的体质量和血糖没有显著影响。DM组大鼠BBB通透性显著增加(P0.01),ZO-1和occludin的表达显著降低(P0.01),PARP1的表达明显增加(P0.01),p-ERK1/2/ERK1/2的表达显著增加(P0.01)。上述作用可被3-AB抑制。结论应用3-AB可通过增加ZO-1和occludin的表达,降低DM大鼠BBB通透性,保护DM大鼠的BBB。其保护作用可能与ERK1/2通路有关。     

骨髓基质干细胞移植治疗大鼠脊髓挫伤中碱性成纤维生长因子的变化

探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)对脊髓损伤修复的可能作用及其对bFGF表达的影响,为BMSCs修复脊髓损伤提供实验依据。采用改良的Allen的WD法建立脊髓(T12节段)损伤模型,将66只SD大鼠随机分为正常组(A组)、损伤后未移植的对照组(B组)和BMSCs移植治疗组(C组)。通过BBB行为学评分记录两组动物后肢恢复功能,免疫组织化学方法检测bFGF的表达。结果显示:BMSCs移植组BBB评分高于对照组;bFGF在各组大鼠脊髓中均呈阳性表达,损伤后对照组与BMSCs移植组各个时点的表达量仍高于正常组(P<0.05),7d最高,后渐下降,但21d表达仍高于正常。其中BMSCs移植组与对照组各个时点的bFGF表达量均有显著差异(P<0.05)。结果提示:BMSCs移植治疗大鼠脊髓损伤模型有助于其功能的恢复。     

青蒿素减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤的实验研究

目的:探究青蒿素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠肠上皮IEC-6细胞屏障功能损伤的影响。方法:体外培养IEC-6细胞,随机分为5组:对照组、LPS(100 mg/L)组和LPS+青蒿素(30、50和100μmol/L)组,MTT法检测各组细胞毒性变化,ELISA检测各组细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化,电阻仪检测肠上皮细胞跨上皮电阻(TER),酶标仪检测单层细胞对辣根过氧化物酶(HRP)的通透性,RT-qPCR和Western blot检测各组细胞紧密连接蛋白(ZO-1、claudin-1和occludin)以及TLR4/My D88/NF-κB mRNA和蛋白表达的变化。结果:LPS与青蒿素在本实验浓度范围对IEC-6细胞均无毒性。与对照组相比,LPS处理下,细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及TLR4/My D88/NF-κB的mRNA和蛋白表达明显增加,ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达降低。而青蒿素干预下,细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及TLR4/My D88/NF-κB mRNA和蛋白表达明显降低,ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达升高(P0.05),均呈现浓度依赖性。结论:青蒿素可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB通路减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤。     

活血解毒方通过修复表皮屏障减轻银屑病样小鼠皮损复发表现

目的:通过对比凉血解毒方,观察活血解毒方对咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠皮损紧密连接蛋白表达以及皮损复发的干预作用,为中医药通过调节皮肤屏障治疗及延缓银屑病复发提供生物学证据。方法:选用C57BL/6J小鼠,随机分为空白对照组、模型组、阳性药(氨甲蝶呤)组、活血解毒方组和凉血解毒方组,小鼠背部剃毛后给予咪喹莫特涂抹诱导银屑病样皮损模型。初次干预7 d后,间隔30 d,除空白对照组外各组仅涂抹咪喹莫特诱导银屑病复发皮损模型。期间对皮损拍照并进行银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分;水油笔检测皮损表皮含水量;HE染色观察其病理改变并测量表皮厚度;免疫荧光法检测小鼠表皮Ki67表达;免疫组化法检测表皮兜甲蛋白(loricrin),真皮中紧密连接蛋白claduin-1、claudin-7和occludin的表达及CD3+T淋巴细胞浸润。Western blot法检测皮损occludin的表达。结果:活血解毒方可缓解咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损,降低PASI评分及表皮厚度(P0.05);与模型组比较,活血解毒方可增加皮损区表皮水分含量(P0.05),减少表皮Ki67和loricrin的异常表达和真皮CD3+T细胞浸润(P0.01),增加claudin-1、claudin-7和occludin的表达(P0.05),增强紧密连接的结构完整性。活血解毒方亦可减轻二次诱导的小鼠银屑病样皮损表现,降低PASI评分及表皮厚度(P0.05)。结论:活血解毒方可能通过调节紧密连接蛋白表达,恢复受损的表皮屏障功能,从而减轻银屑病复发皮损表现。     

siRNA-Tie1下调紧密连接相关蛋白claudin-5、occludin和ZO-1增加血肿瘤屏障通透性

目的研究Tie1 AS和Tie1表达变化对血肿瘤屏障通透性的影响和相关机制。方法建立体外血脑屏障和血肿瘤屏障模型,Real-time PCR检测h CMEC/D3细胞中Tie1 AS和Tie1的表达水平。转染p IRES2-EGFPTie1 AS表达载体上调体外血肿瘤屏障模型h CMEC/D3细胞中Tie1 AS的表达,Western blot检测Tie1的表达变化。将si RNA-Tie1转染人h CMEC/D3细胞并建立体外血肿瘤屏障模型,跨内皮电阻测量系统分析血肿瘤屏障通透性变化;Western blot和免疫荧光法检测h CMEC/D3细胞中紧密连接相关蛋白claudin-5、occludin和ZO-1的表达和分布变化。结果和正常脑微血管内皮细胞相比,体外血肿瘤屏障模型h CMEC/D3细胞中Tie1的表达显著增加,而Tie1 AS的表达显著降低。上调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中Tie1 AS的表达水平,能够显著降低Tie1的表达。下调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中Tie1的表达后屏障通透性显著下降,伴有claudin-5、occludin和ZO-1的表达下调以及在细胞膜上呈不连续分布。结论体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中低表达的Tie1 AS能够负性调控Tie1的表达,进而通过调节紧密连接相关蛋白的表达和分布影响屏障的通透性。     

袖状胃切除术对高脂饮食诱导肥胖大鼠肠道屏障的影响

目的研究袖状胃切除术对高脂饮食诱导肥胖大鼠肠道屏障的影响。方法建立高脂饮食诱导肥胖大鼠模型共30只,随机分为普通饮食组(CD,n=10)、假手术组(SO,n=10)和袖状胃切除组(SG,n=10),术后4周时分别检测24 h尿乳果糖/甘露醇比值(L/M)、门静脉血清内毒素水平和小肠黏膜紧密连接蛋白claudin-1和occludin表达水平。结果术后4周时,SG组大鼠体质量明显低于CD组(P0.001)和SO组(P0.001)。SG组大鼠24 h尿L/M值明显低于CD组(P0.001)和SO组(P0.01)。SG组门静脉血清内毒素水平明显低于CD组(P0.01)和SO组(P0.05)。术后4周时,SG组大鼠小肠黏膜中claudin-1表达水平明显高于CD组(P0.001)和SO组(P0.01),occludin表达水平明显高于CD组(P0.001)和SO组(P0.001)。结论袖状胃切除术可使高脂饮食诱导的肥胖大鼠体质量下降,降低24 h尿L/M值和门静脉血清内毒素水平,提高小肠黏膜中claudin-1和occludin蛋白的表达水平。     

全反式维甲酸对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性和claudin-5表达的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性和紧密连接蛋白claudin-5的影响。方法选取180只健康雄性大鼠,随机分为假手术组(Sham,60只),缺血再灌注组(I/R,60只)和全反式维甲酸干预组(ATRA,60只),每组又细分为1d、3d和7d三个亚组。采用Zea Longa法制作局灶性脑缺血再灌注模型,伊文思蓝渗透性实验检测血脑屏障通透性变化,免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组大鼠脑组织claudin-5蛋白的表达,Real-time PCR方法检测各组大鼠脑组织claudin-5 m RNA的表达。结果缺血再灌注后,EB含量在1d时最高,3d时开始逐渐下降,而与相同时间点的I/R组相比,ATRA组EB含量显著降低(P0.01)。与Sham组相比,I/R组大鼠脑组织claudin-5蛋白及m RNA的表达水平均显著降低,而与相同时间点的I/R组相比,ATRA组则显著升高(P0.01)。结论全反式维甲酸降低大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性可能与上调脑缺血再灌注后脑组织中claudin-5的表达相关。     

一氧化碳释放分子2对心肺复苏大鼠复苏后肠屏障功能的影响

目的:探讨一氧化碳释放分子2(CORM-2)对心肺复苏(CPR)后大鼠肠黏膜上皮屏障功能的影响。方法:采用冰氯化钾停跳联合窒息4 min、人工胸外心脏按压3 min的方法建立大鼠心脏骤停(CA)-CPR后肠缺血再灌注损伤模型。32只健康雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组、CPR组、CORM-2组及灭活型CORM-2(i CORM-2)组,每组8只。假手术组仅置入相关导管,不行CPR术,其余各组均置入相关导管并经历CA-CPR。假手术组使用4 m L/kg生理盐水、CPR组使用4 m L/kg 2%二甲基亚砜、CORM-2组及i CORM-2组使用4 mg/kg相应干预药物,于术前12 h腹腔注射。各组复苏(或置管)后连续监测4 h血流动力学,并于复苏(或置管)后4 h留取回肠组织及血清。HE染色及透射电镜观察回肠组织病理形态及超微结构。ELISA法测定血清肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)含量。Western blot检测回肠组织紧密连接蛋白claudin-3、occludin和ZO-1及促炎因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:假手术组和复苏各组之间置管后即刻平均动脉压(MAP)的变化差异均无统计学显著性;CPR组、CORM-2组和i CORM-2组复苏后各时点MAP均明显低于置管后即刻,并持续至复苏后4 h(P 0.05);复苏各组复苏后各时点MAP均显著低于假手术组置管术后同一时点MAP(P 0.05);CORM-2组复苏后各时点MAP均显著高于CPR组及i CORM-2组(P 0.05)。CPR组大鼠肠道组织病理形态和超微结构损伤严重;CORM-2组大鼠肠黏膜病理形态和超微结构完整性明显优于其它复苏各组。与假手术组比较,CPR组和i CORM-2组的I-FABP水平明显升高(P 0.05);CORM-2组的I-FABP水平与假手术组比较差异无统计学显著性,但显著低于CPR组及i CORM-2组(P 0.05)。与假手术组比较,CPR组和i CORM-2组的claudin-3、occludin和ZO-1蛋白表达均降低(P 0.05),CORM-2组仅claudin-3和ZO-1蛋白表达降低(P 0.05);CORM-2组上述蛋白表达均高于CPR组及i CORM-2组(P 0.05)。与假手术组比较,CPR组和i CORM-2组的促炎因子TNF-α蛋白表达均升高(P 0.05);CORM-2组TNF-α蛋白表达与假手术组比较差异无统计学显著性,但显著低于CPR组及i CORM-2组(P 0.05)。结论:心脏骤停-心肺复苏可造成大鼠肠机械屏障损伤。CORM-2可上调肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白表达,降低肠黏膜通透性,从而有效维持心肺复苏大鼠肠屏障完整性。     

雌激素对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障作用研究

目的观察雌激素对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的通透性、Occludin表达的影响,探讨雌激素在脑缺血中的作用。方法随机将去势雌性大鼠分为假手术组、模型组、雌激素预处理组,选取缺血再灌后4 h,24 h,3 d3个时间点作为观察点,对各个时间点脑水肿情况、Occludin蛋白表达、血脑屏障通透性改变进行考察分析,并选取24 h和3 d作BBB超微结构电镜观察,脑水肿改变情况采用脑含水量百分数测定;蛋白质表达采用western blot方法;血脑屏障通透性改变采用伊文思蓝(EB)比色法。结果与假手术组比较,局灶性脑缺血再灌4 h模型组大鼠脑组织含水量及EB含量均增加(P0.05),随缺血再灌时间延长,脑组织含水量、脑组织EB含量持续增加,至24 h,达到高峰(P0.01),与同时间点模型组比较,各治疗组大鼠脑组织含水量、EB含量均有不同程度降低(P0.05或P0.01),以24 h组降低最为显著(P0.01)。电镜观察雌激素预处理组较模型组同时间点比较BBB TJ开放减轻,星形胶质细胞足突及毛细血管管周水肿较轻,以3 d组显著。Western blot检测Occludin蛋白表达,发现模型组4 h时Occludin蛋白表达较假手术组减弱,但无显著性差异(P0.05),24 h组Occludin蛋白表达较假手术组减弱,有显著性差异(P0.05),3 d组Occludin蛋白表达进一步减弱,有明显差异(P0.01),雌激素组4 h时Occludin蛋白表达较同时间点模型组比较无显著性差异(P0.05),雌激素24 h及3 d组Occludin蛋白表达较同时间点模型组比较均升高,有显著性差异(P0.05)。结论局灶性脑缺血大鼠动物血脑屏障超微结构可见紧密连接发生断裂,内皮细胞内小泡数量增加及星形胶质细胞足突肿胀,可能是大鼠局脑缺血时血管源性脑水肿的重要因素。大鼠局灶性脑缺血,随缺血再灌时间延长,紧密连接相关蛋白occludin的表达明显下降,提示occludin在调节紧密连接通透性变化的过程中有重要作用。雌激素上调紧密连接Occludin蛋白的表达,有可能是其维护血脑屏障完整性减轻脑水肿的机制之一。     

银杏叶提取物对大鼠急性脊髓损伤后运动功能恢复及Nogo-A蛋白表达的影响

目的研究银杏叶提取物(EGb)对大鼠急性脊髓损伤后运动功能的恢复及脊髓Nogo-A蛋白表达的影响。方法选用健康的成年Sprague-Dawley(SD)大鼠72只,雌雄不拘,体质量250~300 g。将大鼠分为正常组、急性脊髓损伤组和急性脊髓损伤后EGb治疗组(简称EGb治疗组)。采用Allen’s打击方法损伤大鼠胸椎T_8~T_(10)节段,分别于术后3、7、21 d进行BBB评分和斜板实验,并取受损节段大鼠脊髓,运用Western blot方法测定各时相点Nogo-A蛋白表达量及其变化。结果术后21 d EGb治疗组比急性脊髓损伤组BBB评分和斜板实验临界角度升高,差异有统计学意义(P0.05)。Nogo-A蛋白在各组大鼠脊髓组织中均呈阳性表达,急性脊髓损伤组与EGb治疗组各个时相点Nogo-A蛋白表达量均显著高于正常组(P0.05),7 d时最高,21 d有所下降,但表达量仍高于正常组。EGb治疗组在各个时间点的NogoA表达量显著低于急性脊髓损伤组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 EGb可促进急性脊髓损伤后大鼠运动功能的恢复,对脊髓损伤后Nogo-A蛋白表达量的升高具有明显的抑制作用。     

突触活性带蛋白1在大鼠脊髓损伤后的表达变化

目的观察突触活性带蛋白1(Complexin-1,CPLX-1)在大鼠脊髓损伤后的表达变化。方法采用Allen's法制备SD大鼠脊髓钝挫伤模型,BBB评分评估大鼠的运动功能,免疫组织化学技术观察CPLX-1在脊髓中分布,实时定量PCR(qRT-PCR)检检测CPLX-1基因在损伤后的表达变化。结果脊髓损伤后,大鼠后肢运动功能明显障碍,BBB评分于损伤后第1d最低,术后7d才有所恢复(p0.05)。免疫组织化学结果显示,CPLX-1在脊髓前角运动神经元和神经胶质细胞中表达。此外,脊髓损伤后CPLX-1在神经元中表达逐渐降低,至术后第3d时最低,后随时间逐渐增加,但在神经胶质细胞中表达逐渐增加,至术后第3d时最高,后随时间逐渐降低;qRT-PCR结果显示脊髓损伤后CPLX-1的基因表达急剧下降,至术后3d达到最低,随后逐渐上升,但一直到术后28d仍低于正常水平(p0.05)。结论 CPLX-1在脊髓运动神经元和神经胶质细胞中表达,在脊髓损伤后其基因和蛋白的表达量下降,可能在大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复中起重要作用。     

七氟醚减轻蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤

目的 探讨七氟醚(Sev)对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠早期脑损伤(EBI)的保护机制。方法 将大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(model组)(用血管内穿刺法建立SAH模型)、Sev低(Sev-L,1.5%)、高剂量组(Sev-H,3%)、Sev+Wnt/β-catenin信号通路的特异性抑制剂DKK1(Sev 3%+DKK1 5μg/kg)组(在模型制备前30 min,侧脑室注射DKK1),每组18只。24 h后使用改良的Garcia量表对大鼠神经功能进行评分;伊文思蓝(EB)检测血脑屏障通透性,并通过SAH分级系统评估SAH的严重程度;计算脑组织含水量(BWC);TUNEL免疫荧光染色检测神经元凋亡;Western blot检测脑组织Wnt3a、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、ZO-1、occludin、claudin-5、MMP-9、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 与sham组相比,model组大鼠神经功能评分、脑组织Bcl-2、occludin、ZO-1、claudin-5、Wnt3a、β-catenin表达显著降低(P<0.05);SA...