miR-488-3p下调 BRCA2蛋白促进乳腺癌细胞系MCF7的侵袭与增殖

目的探讨miR-488-3p的表达与乳腺癌患者临床特征的相关性,及通过抑制易感基因(BRCA2)促进乳腺癌细胞侵袭、增殖、迁移及细胞周期在S期聚集的作用。方法用RT-qPCR检测乳腺癌组织、远端转移肿瘤组织和未转移肿瘤组织miR-488-3p的表达;检验BRCA2是否为miR-488-3p的潜在靶基因;RT-qPCR检测乳腺癌组织BRCA2 mRNA表达量;Western blot检测乳腺癌肿瘤组织BRCA2蛋白表达;用CCK8法检测吸光光度值;用流式细胞计量术检测细胞周期S期的细胞比值;用Tranwell小室法检测乳腺癌细胞系MCF7的侵袭、增殖、迁移及S期的聚集;构建乳腺癌异种移植裸鼠模型,检测裸鼠肿瘤体积和重量及miR-488-3p在miR-488-3p模拟物转染组裸鼠肿瘤组织中的表达量。结果在乳腺癌细胞miR-488-3p表达显著增高(P0.01);在远端转移肿瘤组织中明显高表达(P0.01);miR-488-3p与淋巴结转移及TNM分期表达呈明显相关(P0.05);miR-488-3p能抑制BRCA2的mRNA翻译及其蛋白表达。BRCA2对乳腺癌有抑制效果,可促进乳腺癌细胞MCF7的侵袭、增殖、迁移及在细胞周期S期聚集。上述作用可被BRCA2抑制;在裸鼠体内,miR-488-3p能促进MCF7细胞的增殖。结论 miR-488-3p抑制BRCA2,促进乳腺癌细胞增殖,有可能成为乳腺癌诊疗的新靶向。     

miR-425-5p靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用研究

目的 探讨微小RNA-425-5p(miR-425-5p)靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用.方法 用Lipofiectamine2000分别将miR-425-5p inhibitor及NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞作为miR-425-5p inhibitor组和NC组,不做任何处理的为对照组.通过RT-qPCR测乳腺上皮细胞MCF10A及miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组中miR-425-5p及FOXJ3mRNA表达水平.通过MTT法测miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组细胞增殖情况;通过流式细胞仪测3组细胞凋亡情况;Transwell小室实验测细胞侵袭情况;Western-blot测细胞中FOXJ3、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况;双荧光素酶实验验证miR-425-5p与FOXJ3的靶向关系.结果 与乳腺上皮细胞MCF10A比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-425-5p表达水平显著升高(P<0.05),FOXJ3mRNA表达水平显著下降(P<0.05);与对照组和NC组比,miR-425-5p inhibitor组细胞增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,细胞凋亡率升高(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示抑制miR-425-5p表达显著增加野生型FOXJ33'UTR萤光素酶活性,对突变型FOXJ33'UTR的萤光素酶活性无影响.结论 下调miR-425-5p可能通过靶向FOXJ3抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭,并促进细胞凋亡.     

miR-129-5p靶向HMGB1对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制

为探讨miR-129-5p对卵巢癌(ovarian cancer,OC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制,qRT-PCR检测不同OC细胞株和正常人卵巢上皮细胞株中miR-129-5p的表达水平;在SKOV3细胞中分别转染miR-129-5p模拟物或无关序列,qRT-PCR检测转染后细胞中miR-129-5p的表达情况。生物信息学软件TargetScan预测miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein, HMGB1)基因靶向结合位点,qRT-PCR、Western blotting和双荧光素酶报告基因实验分析miR-129-5p对HMGB1的靶向调控作用。分别采用MTT和Transwell实验检测SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移能力。将miR-129-5p模拟物和HMGB1 siRNA或siRNA Control共转染至SKOV3细胞,MTT和Transwell实验检测其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果显示,SKOV3细胞中miR-129-5p的表达量显著低于正常人卵巢上皮细胞(P0.05)。在SKOV3细胞中转染miR-129-5p模拟物可显著提高miR-129-5p的表达量(P0.05)。miR-129-5p与HMGB1 3’非翻译区存在靶向结合位点,且过表达miR-129-5p可抑制HMGB1的表达,miR-129-5p模拟物转染后相对荧光素酶活性显著下降(P0.05)。过表达miR-129-5p后,SKOV3细胞增殖能力明显减弱,侵袭和迁移能力明显受到抑制(P0.05)。而转染HMGB1 siRNA后,miR-129-5p模拟物对SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用明显减弱(P0.05)。以上结果表明miR-129-5p通过靶向调控HMGB1的表达抑制SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移。     

白头翁皂苷A通过调控miR-24-3p/RNF2的表达影响乳腺癌细胞增殖及放射敏感性

目的:探讨白头翁皂苷A对乳腺癌细胞增殖及放射敏感性的影响及其作用机制。方法:用浓度为0、5、10、15和20 mg/L的白头翁皂苷A作用于人乳腺癌MCF-7细胞,并转染微小RNA-24-3p(miR-24-3p)过表达载体或抑制表达载体。用MTT法检测细胞活力的变化;集落形成实验检测细胞放射敏感性;RT-qPCR分析miR-24-3p和环指蛋白2(RNF2)的mRNA表达水平;Western blot检测RNF2的蛋白表达;萤光素酶报告基因实验检测miR-24-3p和RNF2的靶向关系。结果:与对照组(0 mg/L)相比,5、10、15和20 mg/L的白头翁皂苷A组MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P<0.05),白头翁皂苷A处理的MCF-7细胞经射线照射后存活分数显著降低,RNF2表达水平显著降低(P<0.05);miR-24-3p靶向负调控RNF2。白头翁皂苷A和miR-24-3p同时处理的MCF-7细胞经射线照射后,存活曲线下移;抑制miR-24-3p表达可逆转白头翁皂苷A对MCF-7细胞的增殖抑制和放射增敏作用。结论:白头翁皂苷A可能通过miR-24-3p/RN...     

白花蛇舌草上调miR-485-5p抑制人膀胱癌细胞系KU-19-19增殖、迁移和侵袭

目的探讨白花蛇舌草对膀胱癌细胞系KU-19-19增殖、迁移和侵袭的影响和可能的分子机制。方法将KU-19-19细胞分为对照组、白花蛇舌草组、miR-NC组、miR-485-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-485-5p组、白花蛇舌草+anti-miR-NC组、白花蛇舌草+anti-miR-485-5p组、白花蛇舌草+anti-miR-485-5p+LY294002组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测细胞增殖、迁移侵袭以及miR-485-5p的表达。蛋白质印迹(Western blot)检测磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果白花蛇舌草干预后KU-19-19细胞增殖率、迁移侵袭细胞数显著降低,miR-485-5p表达显著升高(P0.05);过表达miR-485-5p后,KU-19-19细胞增殖率、迁移侵袭细胞数显著降低(P0.05);抑制miR-485-5p表达后,KU-19-19细胞增殖率、迁移侵袭细胞数显著升高(P0.05)。抑制miR-485-5p可以逆转降低白花蛇舌草对KU-19-19细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P0.05);LY294002可以逆转降低抑制miR-485-5p对白花蛇舌草处理的KU-19-19细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用(P0.05)。结论白花蛇舌草通过上调miR-485-5p可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

IL-6调控miR-204及Notch1促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

为探讨IL-6在人乳腺癌组织中的表达水平及其对人乳腺癌细胞MCF-7 Notch信号通路、增殖、迁移和侵袭的影响,采用免疫组化法检测IL-6在人乳腺癌组织中的表达水平,并以50 ng/mL外源性IL-6干预MCF-7细胞,采用MTT、Transwell和qRT-PCR检测细胞增殖、迁移、侵袭能力及细胞中miR-204和Notch1的表达。在MCF-7细胞中过表达miR-204后检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。用TargetScan在线预测、双荧光素酶报告基因试验和Western blotting验证miR-204与Notch1的靶向关系。将miR-204 mimics转染至MCF-7细胞并联合外源性IL-6干预后检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果显示,与癌旁正常组织比较,IL-6在人乳腺癌组织中高表达(P0.05)。以50 ng/mL外源性IL-6干预MCF-7细胞对细胞的增殖、迁移和侵袭具有促进作用(P0.05),同时能够下调miR-204 mRNA(P0.05)、上调Notch1 mRNA表达(P0.05)。而过表达miR-204能够抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P0.05)。miR-204能够靶向调控Notch1表达(P0.05)。过表达miR-204能够减弱外源性IL-6对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用(P0.05)。该研究提示,IL-6可通过调控miR-204和Notch信号通路促进MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-299-3p靶向下调TRIM27表达抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的观察miR-299-3p对舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨可能的分子机制。方法应用q PCR技术检测miR-299-3p在人舌鳞状细胞癌细胞株Tscca、Tca8113、CAL27、SCC15、HN13和人正常口腔黏膜细胞HOK中的表达。以表达量最低的舌鳞状细胞癌细胞为后续研究对象,利用慢病毒Lenti-miR-299-3p(实验组)、Lenti-miR-NC(对照组)感染舌鳞状细胞癌细胞。MTT法检测高表达miR-299-3p对细胞增殖的影响,通过Transwell迁移和侵袭实验检测高表达miR-299-3p对CAL27细胞迁移能力的影响。基于microRNA. org数据库对miR-299-3p进行靶基因预测,通过双荧光素酶报告基因验证miR-299-3p和TRIM27的靶向关系。q PCR和Western blot法检测TRIM27基因及相关蛋白的表达。结果 q PCR结果表明miR-299-3p在舌鳞状细胞癌细胞株中表达下调,在CAL27细胞中表达最低。与对照组相比,高表达miR-299-3p的舌鳞状细胞癌细胞CAL27增殖能力明显降低,迁移和侵袭能力均受到抑制。miR-299-3p的靶基因为TRIM27,高表达miR-299-3p后TRIM27的表达水平明显受到抑制(P 0. 01)。结论 miRNA-299-3p可通过靶向下调TRIM27表达抑制舌鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,为舌鳞状细胞癌的靶向治疗提供新的方向。     

miR-195-5p通过靶向STAT3调控免疫抑制基因PD-L1参与卵巢癌增殖和侵袭的机制研究

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-195-5p通过靶向STAT3调控免疫抑制基因程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)参与卵巢癌增殖和侵袭的机制。方法通过双荧光素酶报告基因检测方法验证miR-195-5p靶向STAT3。将卵巢癌细胞系SKOV-3分为4组:对照组、mimic组、mimic+STAT3组和STAT3组。通过质粒转染技术过表达miR-195-5p和STAT3。qPCR和Western blot检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、Transwell实验检测各组的细胞活力、侵袭能力。通过荷瘤裸鼠实验在体内验证过表达miR-195-5p对肿瘤生长、STAT3和PD-L1的影响。结果 miR-195-5p直接靶向STAT3。过表达miR-195-5p抑制STAT3 mRNA和蛋白的表达水平(P0.05),过表达STAT3显著逆转miR-195-5p对STAT3的抑制作用(P0.05)。Mimic组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于对照组(P0.05),STAT3组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于对照组(P0.05),并且mimic+STAT3组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于mimic组(P0.05)。荷瘤裸鼠实验显示miR-195-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤体积和质量均显著低于对照组(P0.05)。miR-195-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤组织中STAT3和PD-L1蛋白水平显著低于对照组(P0.05)。结论 miR-195-5p可通过靶向STAT3抑制PD-L1的表达并抑制卵巢癌细胞生长、侵袭和免疫抑制反应。     

miR-129-5p靶向KLK7对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响及分子机制

目的 探讨高表达miR-129-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR方法检测卵巢癌SKOV3细胞与人正常卵巢上皮细胞株中miR-129-5p的表达。在卵巢癌SKOV3细胞中瞬时转染miR-129-5p模拟物及无意义序列,采用CCK8法及Transwell实验检测各组细胞的增殖能力和侵袭能力;实时荧光定量PCR检测miR-129-5p和KLK7的相对表达水平;Western blot检测各组细胞中KLK7蛋白表达;Targetscan 7.2和双荧光素酶实验分析miR-129-5p与KLK7的靶向关系。结果 miR-129-5p在卵巢癌SKOV3细胞中的表达低于人正常卵巢上皮细胞(P<0.05),过表达miR-129-5p降低SKOV3细胞中KLK7 mRNA和蛋白的表达,Targetscan 7.2网站分析及双荧光素酶实验证实KLK7为miR-129-5p的靶基因,过表达miR-129-5p抑制SKOV3细胞增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论 过表达miR-129-5p可通过靶向调控KLK7抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭。     

miR-200b调控PDCD4的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-200b对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响及其可能的分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测人乳腺癌组织及乳腺癌细胞株中miR-200b的表达差异;利用生物信息学方法预测miR-200b的靶基因,并使用免疫蛋白印迹实验对靶基因的表达进行验证;分别将miR-200b siRNA、PDCD4 mimics以及相应对照miRNA转染MCF-7细胞,通过CCK-8实验检测细胞的增殖能力;采用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果miR-200b在乳腺癌组织中呈低表达水平,进一步抑制miR-200b的表达,乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力显著增强(P<0.05);将miR-200b siRNA、PDCD43′-UTR共转染到乳腺癌MCF-7细胞中,双荧光素酶报告基因结果显示抑制miR-200b的表达后,PDCD4的表达及活性相应上调(P<0.05);同时通过蛋白免疫印迹实验可以发现,抑制miR-200b表达后,PDCD4蛋白表达含量降低,乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力明显增强(P<0.05);而过表达PDCD4后PDCD4蛋白表达含量增加(P<0.05),乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论miR-200b可靶向上调PDCD4基因的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力。     

微小RNA-138-5p抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的机制研究

目的:探讨微小RNA-138-5p(miR-138-5p)抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的相关机制。方法:以肺癌细胞A549和H460作为研究对象,分别转染miR-NC(对照组)或miR-138-5p(实验组);生物信息学技术预测miR-138-5p的靶基因;RT-qPCR检测转染后细胞miR-138-5p、叉头框蛋白C1(FOXC1)mRNA和波形蛋白(vimentin)mRNA的相对表达量;Western blot法检测FOXC1、vimentin、E-cadherin、N-cadherin和β-catenin蛋白表达变化;MTS法和集落形成实验分别检测细胞的增殖能力;划痕愈合实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果:miR-138-5p过表达显著降低FOXC1和vimentin的mRNA及蛋白的表达(P0.05),E-cadherin和β-catenin蛋白表达上调,N-cadherin蛋白表达下调,显著抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P0.05)。结论:miR-138-5p可以通过靶向干扰FOXC1和vimentin的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,可能是肺癌基因治疗的潜在靶点。     

miR-24-3p靶向KLF6基因调控IL-6/STAT3信号通路影响食管癌细胞的活力和凋亡

目的:探讨微小RNA-24-3p(miR-24-3p)对食管癌细胞活力和凋亡的影响及机制。方法:以人正常食管上皮细胞HEEC为对照,采用RT-qPCR检测食管癌细胞TE11、Eca109和EC9706中miR-24-3p和KLF6 mRNA的表达,Western blot检测KLF6蛋白的表达。用anti-miR-24-3p和KLF6 siRNA转染EC9706细胞,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测检测细胞中与增殖、凋亡相关的蛋白以及IL-6/STAT3信号通路相关蛋白的表达,ELISA法检测IL-6的表达。双萤光素酶报告基因实验验证miR-24-3p与KLF6靶向调控的关系。结果:食管癌癌细胞TE11、Eca109和EC9706中miR-24-3p表达上调(P<0.05),KLF6的mRNA和蛋白表达下调(P<0.05)。敲减EC9706细胞miR-24-3p表达可抑制其细胞活力,诱导其凋亡,并抑制细胞CDK4、cyclin D1、CDC25A、p-STAT3、IL-6及Bcl-2的表达,促进caspase-3和Bax的表达。结论...     

miR-143-3p 靶向MAPK1对人结肠癌细胞增殖，凋亡和侵袭的调节作用#br#

目的　研究miR-143-3p靶向MAPK1与人结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的关系。 方法　qRT-PCR检测miR-143-3p mimic转染效果和MAPK1的mRNA表达水平;双荧光素酶报告实验分析miR-143-3p与MAPK1的靶向关系;蛋白质印迹检测MAPK1的蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖倍数,Hoechst染色检测细胞增殖,体外侵袭实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹检测Ki67、VEGF、MMP-2和cleaved caspase-3的表达。 结果　miR-143-3p mimic抑制人结肠癌细胞SW620中MAPK1 mRNA和蛋白的表达水平;miR-143-3p mimic与MAPK1野生型报告载体共转后,荧光素酶的活性显著降低;miR-143-3p mimic转染SW620细胞后,细胞增殖、侵袭能力显著降低,凋亡细胞数目显著增加,Ki67、VEGF和MMP-2的表达水平显著降低,cl-caspase-3的表达水平显著上升;miR-143-3p mimic能缓解MAPK1高表达对SW620细胞增殖、侵袭的诱导作用和对细胞凋亡的抑制作用。 结论　miR-143-3p抑制人结肠癌细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向抑制MAPK1有关。     

miR-3619-5p对乳腺癌细胞MCF-7和T47D增殖、凋亡的影响及分子机制

目的探讨miR-3619-5p转染对乳腺癌细胞系MCF-7和T47D增殖和凋亡的影响及可能的分子机制。方法乳腺癌培养至对数生长期,根据对其不同处理分为2组:对照组(转染ds Control)和实验组(转染miR-3619-5p)。5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)增殖实验和集落形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力变化;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测乳腺癌细胞周期分布和凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p21、CDK6和Cyclin D1 mRNA的表达;Western blot法检测p21、CDK6和Cyclin D1蛋白的表达变化。结果与dsControl组相比,转染miR-3619-5p的乳腺癌细胞增殖能力显著降低(P0.05)。转染miR-3619-5p后,位于G_0/G_1期的细胞比例明显升高,位于S期和G_2/M期的细胞比例明显降低,细胞凋亡率显著上升。与ds Control组相比,转染miR-3619-5p后两种细胞系中p21 mRNA均明显上调(P0.01),而CDK6和Cyclin D1 mRNA的表达均明显下调(P0.01)。Western blot检测结果与qRT-PCR结果一致。结论 miR-3619-5p可显著抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡,其分子机制可能是通过激活乳腺癌细胞中抑癌基因p21的表达。     

MiR-215-5p经AKT/GSK-3β/Snail信号通路抑制乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭

目的探究miR-215-5p对乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭能力的影响以及机制。方法乳头状甲状腺癌TPC1细胞体外转染miR-215-5p mimic后利用MTT实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;预测并验证miR-215-5p的靶基因,并且在TPC1细胞过表达和低表达miR-215-5p的靶基因后,检测TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;利用Western blot检测转染后靶基因的表达水平,AKT和GSK-3β的磷酸化水平,以及Snail的表达水平。结果 miR-215-5p mimic能够显著抑制TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力(P0.05);通过双荧光素酶报告实验验证了miR-215-5p的靶基因为ARFGEF1;低表达ARFGEF1的TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力被显著抑制(P0.05);miR-215-5p mimic可显著抑制过表达ARFGEF1引起的TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的增加(P0.05);Western blot结果显示miR-215-5p mimic可引起ARFGEF1和Snail表达水平显著降低(P0.05),AKT和GSK-3β的磷酸化水平降低(P0.05),但是miR-215-5p inhibitor和过表达ARFGEF1均可恢复ARFGEF1和Snail表达水平以及AKT和GSK-3β的磷酸化水平。结论 MiR-215-5p通过AKT/GSK-3β/Snail信号通路以ARFGEF1为目标发出信号抑制乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭。     

CDKN2B-AS1靶向miR-411-3p调节乳腺癌细胞的生物学行为

目的探究CDKN2B-AS1靶向miR-411-3p对乳腺癌MCF-7细胞的生物学行为的影响.方法将sh-CDKN2B-AS1、miR-411 inhibitor转染于MCF-7,再共同转染于MCF-7.检测各组细胞增殖、迁移、侵袭及蛋白表达.MCF-7及转染sh-CDKN2B-AS1的MCF-7接种于小鼠体内,为Ctrl及sh-CDK组,检测肿瘤组织CDKN2B-AS1、miR-411-3p、Ki67及VEGF.结果miR-411-3p是CDKN2B-AS1的靶向位点,相比于Ctrl组,sh-CDKN2B-AS1组CDKN2B-AS1、VEGF及P38表达量降低;miR-411-3p,ki67、HIF-1 a,Caspase-3表达量上升,细胞增殖数、侵袭数及迁移率降低(P均<0.05).与Ctrl组比较,sh-CDKN2B-AS1组肿瘤质量降低,肿瘤组织CDKN2B-AS1、ki67、VEGF表达量降低,miR-411-3p表达量上升(P均<0.05).结论抑制CDKN2B-AS1表达可靶向提升miR-411-3p水平,从而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及移植瘤生长.     

雌激素对ERα-/ERβ-乳腺癌细胞增殖和侵袭的调节作用及分子机制

目的 研究雌激素对ERα-/ERβ-乳腺癌细胞增殖和侵袭的调节作用及分子机制.方法 选择乳腺癌细胞株SK-BR-3(GPR30+,ERα-/ERβ-)进行研究,用不同水平的雌二醇进行处理,同时将GPR30的siRNA和阴性对照的siRNA转染进入细胞.处理24h后,检测细胞的增殖情况和侵袭情况.结果 雌二醇处理能够以剂量依赖的方式增加细胞活力以及侵袭细胞的数目;转染GRP30-siRNA能够显著降低GPR30的mRNA含量,抑制效率为75.42％;雌二醇处理组的细胞活力以及侵袭数目均高于对照组,雌二醇联合GRP30-siRNA组的细胞活力以及侵袭数目均低于雌二醇处理组(P＜0.05).结论 雌激素能够促进ERα-/ERβ-乳腺癌细胞的增殖和侵袭,受体GPR30可能是雌激素发挥作用的分子机制.     

受翻译调节的肿瘤蛋白在PRL-3促进结肠癌转移中的作用

目的: 研究受翻译调节的肿瘤蛋白(TCTP)在肝再生磷酸酶-3(PRL-3)促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法: 构建载体pAcGFP-C3-PRL-3及pAcGFP-C3并分别转染至结肠癌LoVo细胞中,获得稳定表达PRL-3的LoVo-PRL-3细胞及对照细胞LoVo-control。Western blotting及real-time PCR 检测2种细胞PRL-3及TCTP表达。设计并合成特异性干扰TCTP mRNA的siRNA序列(TCTP-siRNA)和阴性对照序列(control-siRNA),并将siRNA瞬时转染至LoVo-PRL-3细胞。 在转染siRNA后24 h、48 h和72 h,Western blotting及real-time PCR 检测LoVo-PRL-3细胞TCTP表达。 CCK8-8和Transwell方法检测LoVo-control、LoVo-PRL-3及转染TCTP-siRNA和转染control-siRNA的LoVo-PRL-3细胞间增殖、迁移和侵袭能力差异。结果: 转染PRL-3可以显著上调LoVo细胞TCTP mRNA和蛋白的表达(P＜0.05)。TCTP-siRNA在转染后的24 h、48 h和72 h可以有效抑制LoVo-PRL-3细胞TCTP mRNA表达(P＜0.01),同样TCTP蛋白在转染后的48 h和72 h也显著受到抑制(P＜0.01)。转染PRL-3能显著促进LoVo细胞增殖、迁移和侵袭能力(P＜0.05),然而siRNA干扰抑制上调的TCTP表达后又能显著抑制LoVo-PRL-3细胞增殖、迁移和侵袭能力(P＜0.05)。结论: PRL-3通过上调TCTP表达促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。用siRNA靶向抑制TCTP表达可能是预防和治疗结肠癌转移的有效手段。     

miRNA-224-3p对人结肠癌细胞株SW480的增殖及侵袭的作用

目的探讨低表达miRNA-224-3p对结肠癌细胞株SW480增殖及侵袭的作用机制。方法采用siRNA技术沉默miRNA-224-3p在结肠癌细胞株SW480中的表达,实验分为si RNA组和NC组;采用CCK8法检测细胞增殖率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用Western blot检测细胞中miRNA-224-3p、Cyclin D1以及CDK4蛋白的表达;采用Transwell小室检测细胞侵袭力。结果转染si RNA后,siRNA组中miRNA-224-3p蛋白表达明显低于NC组(P0.05);CCK8结果表明在结肠癌细胞株在转染24 h、48 h和72 h时的细胞增殖率分别明显低于NC组(P0.05);流式检测结果表明在siRNA组中,处于G0～G1期的SW480的细胞数量显著高于NC组(P0.05),处于S期的SW480细胞数量显著低于NC组(P0.05);Western blot结果表明siRNA组中的Cyclin D1和CDK4蛋白表达明显高于NC组(均P0.05);Transwell小室检测表明siRNA组细胞的侵袭力明显低于NC组(P0.05)。结论低表达miRNA-224-3p可显著抑制结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭,其机制可能与阻滞细胞周期进程有关。     

miR-153-3p靶向下调Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)基因抑制乳腺癌细胞增殖及迁移

目的探究miR-153-3p调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法利用生物信息学软件检索预测miR-153-3p的候选靶基因;采用双荧光素酶报告实验分析miR-153-3p与候选基因的靶向关系;应用实时荧光定量PCR和Western blot法检测miR-153-3p对MDA-MB-231细胞mRNA和蛋白质表达水平的影响;通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,并以Transwell~(TM)检测细胞的迁移和侵袭能力。结果软件预测显示miR-153-3p与Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)有连续的结合区域;共转染miR-153-3p模拟物(miR-153-3p mimics)与ROCK1野生型报告载体的细胞相对荧光素酶活性降低;转染hsa-miR-153-3p-mimics后, MDA-MB-231细胞的miR-153-3p表达水平显著增高,且ROCK1蛋白的表达量明显降低。与对照组相比,转染组MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱。结论 miR-153-3p通过靶向下调ROCK1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。