Sirt1参与异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大

目的:观察Ⅲ类组蛋白去乙酰基酶1(Sirt1)在异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌肥大中的表达及作用。方法:昆明小鼠随机分为正常对照组、ISO模型组和ISO+NAM(烟酰胺,Sirt1抑制剂)组。皮下注射ISO诱导小鼠心肌肥大。以心脏重量指数(心脏重量/体重)、HE染色、透射电镜以及脑钠肽(BNP)mRNA表达水平观察心肌肥大的变化。同时采用RT-PCR、Western blotting检测各组心肌Sirt1 mRNA、蛋白质的表达。结果:与对照组相比,心脏重量指数,HE染色,透射电镜以及BNP mRNA表达水平均显示皮下注射ISO可明显诱导小鼠心肌肥大;Sirt1在心肌肥大模型组表达显著增多(P0.01),其抑制剂NAM可明显减轻ISO诱导的心肌肥大(P0.05),并降低Sirt1的表达(P0.01)。结论:Sirt1的激活可能参与ISO诱导的小鼠心肌肥大。     

miR-195抑制剂降低1型糖尿病小鼠肝脏氧化应激损伤

目的探究miR-195对1型糖尿病C57BL/6小鼠肝脏的Sirt1及其下游氧化应激和线粒体凋亡相关蛋白表达的影响。方法将小鼠分为对照组(Control组)、糖尿病组(DM组)、miR-195抑制剂组(DM+antago组)。按常规法复制DM组模型,miR-195抑制剂(2.5 mg/kg)转染DM+antago组小鼠。DM组及对照组只注射scrambled shRNA(2.5 mg/kg)作为对照。每周观察记录小鼠的体质量和血糖的增减情况。取新鲜的肝脏组织,一部分处理后制片并HE染色进行组织病理学观察;另一部分用于测定肝脏组织中MDA含量及T-SOD活力,并通过RT-qPCR和Western blot检测3组小鼠肝组织中相关指标的mRNA及蛋白含量。结果1)与对照组相比,DM组肝脏组织的小叶都表现出结构紊乱,肝细胞明显水肿,胞质疏松;与糖尿病组相比,DM+antago组肝细胞水肿情况有所减轻。2)与对照组相比,DM组miR-195mRNA的表达,MDA含量及AcFoxo1/Foxo1蛋白表达均明显升高(P<0.05),而Sirt1、Foxo1 mRNA及蛋白表达,T-SOD活力均显著下降(P<0.05);与DM组相比,DM+antago组miR-195mRNA的表达,MDA含量及AcFoxo1/Foxo1蛋白表达明显下降(P<0.05),而Sirt1、Foxo1 mRNA及蛋白表达,T-SOD活力均明显升高(P<0.05)。结论miR-195在1型糖尿病大鼠肝脏氧化应激中表达增加,Sirt1可能是miR-195的作用靶点。     

黄芩苷通过影响miR-141上调Sirt1表达而抑制高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡

目的:探讨黄芩苷在高糖环境下对小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响,并从微小RNA-141(miR-141)/沉默信息调节因子1(Sirt1)通路深入阐释黄芩苷对糖尿病肾病的治疗机制。方法:高糖(25 mmol/L葡萄糖)培养小鼠肾小球系膜细胞系SV40-MES-13模拟构建糖尿病肾病细胞模型,并分为正常对照组、高糖组、黄芩苷组和高糖+黄芩苷组。q PCR检测miR-141的表达水平,Western blot检测Sirt1的表达水平。双萤光素酶实验检测Sirt1与miR-141的调控关系。流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与正常对照组相比,高糖条件下培养的系膜细胞内miR-141表达水平明显上调,Sirt1蛋白表达水平明显下调,细胞凋亡水平显著增加(P0.01);与高糖组比,高糖+黄芩苷组的细胞凋亡和miR-141表达水平明显降低,Sirt1蛋白表达水平明显升高(P0.01)。敲减Sirt1表达可以逆转下调miR-141对系膜细胞细胞凋亡和细胞内Sirt1蛋白水平的作用。过表达miR-141可以逆转黄芩苷抑制高糖对Sirt1蛋白水平和细胞凋亡的作用;过表达miR-141对系膜细胞的作用可以进一步被Sirt1的过表达所逆转。结论:黄芩苷可以通过抑制miR-141过表达,促进Sirt1表达水平上升,最终缓解高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡,达到治疗糖尿病肾病的作用。     

神经断离处移植间充质祖细胞延缓骨骼肌萎缩

目的探讨间充质祖细胞(MPC)移植于神经断离处延缓失神经性骨骼肌萎缩。方法取GFP转基因C57小鼠后肢长骨进行MPC培养及鉴定。选取C57小鼠36只,随机分为MPC移植组、神经断离组及对照组,MPC移植组坐骨神经断离处注入5μL MPC悬液,神经断离组注入等量PBS,对照组不作处理。观察小鼠后肢活动能力,术后2和4周测量腓肠肌湿重、肌纤维横截面积维持率及观察超微结构,用Western blot检测α-actin、MHC及RT-PCR检测Myogenin、MyoD的表达。结果术后2和4周,MPC移植组腓肠肌湿重及肌纤维横截面积维持率显著高于神经断离组(P<0.05);术后4周,MPC移植组肌细胞核、线粒体、内质网的退变及肌肉纤维化程度明显低于神经断离组,α-actin、MHC、Myogenin、MyoD表达强度显著高于神经断离组(P<0.05)。结论异体间充质祖细胞体内移植可有效延缓失神经肌肉萎缩。     

mTOR复合物在糖尿病肾病小鼠肾组织中的不同分布和表达

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶分子复合物(mTORC)在糖尿病肾病(DN)小鼠肾组织中的分布、表达。方法 14只C57BL/6小鼠随机分成对照组和DN组,每组各7只。DN组小鼠予以链脲菌素腹腔注射建立小鼠DN模型,采用生化技术检测小鼠血、尿肌酐以及白蛋白水平,组织学染色检测肾脏病理变化,免疫荧光以及免疫印迹技术检测肾组织中mTOR、mTOR第2448位丝氨酸磷酸化修饰后mTOR(p-mTOR)、mTORC1(Raptor)、mTORC2(Rictor)以及mTOR信号通路下游的效应蛋白磷酸化S6K1(p-S6K1)的分布和表达。结果 DN组小鼠血糖、尿白蛋白/肌酐比值明显增加(P0.01),肾小球明显增大(P0.05)。mTOR、Raptor以及Rictor在正常以及DN小鼠肾皮质和髓质中均有表达,主要表达在肾小球系膜区、毛细血管袢、皮质近曲小管以及外髓和内髓集合管上皮细胞中。其中正常小鼠内髓肾组织中未见p-S6K1表达,正常以及DN小鼠肾小球中未见p-mTOR表达。免疫印迹检测表明,DN小鼠肾组织中mTOR、p-mTOR、Raptor、Rictor以及p-S6K1均明显上升(P0.05)。结论 mTORC广泛分布于小鼠肾组织且参与DN的发生发展,但mTOR第2448位丝氨酸磷酸化并不直接参与高血糖介导的肾小球损伤。     

运脾和络方通过调控Sirt1/AMPK信号通路并激活自噬而减轻糖尿病肾损伤

目的:观察运脾和络方减轻Ⅱ型糖尿病大鼠肾损伤的作用并从Sirt1-AMPK-自噬角度探讨其机制。方法:取12周雄性Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠24只,根据空腹血糖水平随机分为模型组、Sirt1过表达组和运脾和络方组,高脂高糖喂养10周;另设ZL大鼠作为正常对照组,普食喂养10周。10周后留取尿液和血液检测肾功能指标,处死大鼠并取材留用。Western blot技术测定Sirt1、AMPK、p-AMPK、LC3和P62蛋白水平的变化;real-time PCR技术检测Sirt1的mRNA表达;HE染色和Masson染色法检测肾组织的病理变化。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠空腹血糖(FBG)、尿蛋白(UP)、尿白蛋白(U-ALB)和血清肌酐(SCr)均明显升高(P0.01); Sirt1的mRNA下降(P0.05),Sirt1、AMPK、p-AMPK和LC3-Ⅱ/-Ⅰ的蛋白水平明显降低(P0.01),P62的表达明显升高(P0.01);肾小球局灶性纤维化,局灶性肾小管上皮细胞空泡变、坏死脱落及萎缩,出现管型,肾间质纤维增生。与模型组比较,Sirt1过表达组的FBG明显降低(P0.01),运脾和络方组的FBG无明显变化(P0.05),Sirt1过表达组和运脾和络方组的SCr和U-ALB均降低(P0.05);Sirt1的mRNA表达增加(P0.05),Sirt1、AMPK、p-AMPK和LC3-Ⅱ/-Ⅰ的蛋白水平明显升高(P0.01),P62的表达明显降低(P0.01);Sirt1过表达组和运脾和络方组的肾脏病变均有不同程度减轻。结论:运脾和络方可能通过提高Sirt1表达水平,激活AMPK,调节自噬,从而起到保护肾脏的作用。     

Sirt3 抑制血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖

目的 检测小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中Sirtuin3(Sirt3)的表达,探讨Sirt3在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠VSMCs增殖中的作用.方法 用RT-PCR、Western blot法检测细胞中是否有Sirt3基因和蛋白表达;用不同浓度AngⅡ(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5 mol/L)分别刺激细胞,用RT-PCR、Western blot法检测AngⅡ对Sirt3表达的影响;用Sirt3 siRNA转染干扰Sirt3mRNA水平后5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Edu)试剂盒检测细胞增殖水平.结果 Western blot法、RT-PCR结果均显示正常C57小鼠VSMCs中有一定量Sirt3蛋白和mRNA表达;10-7 mol/L、10-6 mol/L、10-5mol/L AngⅡ刺激细胞后Sirt3 mRNA水平及蛋白表达量均明显升高(P＜0.01),其中10-6 mol/L组比10-7 mol/L组和10-5mol/L组升高更明显,差异有统计学意义(P ＜0.05);Sirt3敲减组细胞增殖较对照组明显增加(P＜0.01),Sirt3沉默+AngⅡ(10-6 mol/L)组较AngⅡ组细胞增殖明显增加(P＜0.01).结论 小鼠VSMCs中有一定量的Sirt3表达,AngⅡ刺激可使Sirt3 mRNA水平和蛋白表达量明显升高;Sirt3可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖.     

miR-138在乙醇诱导的大鼠心肌细胞系H9C2氧化应激中表达增加

目的观察miR-138对乙醇诱导的大鼠心肌细胞系H9C2的Sirt1表达及其下游氧化应激和线粒体凋亡相关蛋白表达的影响。方法将心肌细胞分为对照组(control组)、乙醇组(E组)、miR-138抑制剂组(I组);分别用含不同浓度乙醇的细胞培养液培养;MTT法检测H9C2细胞的活力;选择细胞活力接近80%的200 mmol/L乙醇浓度为最佳干预浓度。用Lipo2000,将miR-138抑制剂转染I组H9C2心肌细胞,孵育12 h后,分别用羟胺法测定心肌细胞中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力;硫代巴比妥酸(TBA)法测定心肌细胞丙二醛(MDA)含量;用RT-qPCR检测心肌细胞内miR-138与Sirt1 mRNA的表达;用Western blot测定心肌细胞内Sirt1、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的表达。结果 1)乙醇可以抑制心肌细胞的活力。2)与对照组相比,乙醇组心肌细胞中miR-138 mRNA的表达及MDA的含量、Bax和caspase-3的蛋白表达均明显升高(P0.05),T-SOD的活力、Sirt1 mRNA的表达及Sirt1和Bcl-2蛋白的表达均明显降低(P0.05);与乙醇组相比,miR-138抑制剂组心肌细胞中miR-138 mRNA的表达及MDA的含量及Bax、caspase-3的蛋白表达均明显降低(P0.05),T-SOD的活力、Sirt1 mRNA的表达、Sirt1和Bcl-2蛋白的表达和均明显升高(P0.05)。结论 miR-138在乙醇诱导的大鼠H9C2心肌细胞氧化应激中表达增加。Sirt1可能是miR-138的作用靶点。     

miR-204通过靶向Sirt1/p53信号通路抑制霍奇金淋巴瘤细胞增殖

目的:探讨微小RNA-204(miR-204)对霍奇金淋巴瘤细胞增殖的作用,并研究其初步机制。方法:采用RT-qPCR检测霍奇金淋巴瘤组织中miR-204和Sirt1 mRNA的表达水平。在L428细胞中分别转染miR-204模拟物(miR-204 mimic)、Sirt1小干扰RNA(Sirt1 siRNA)和miR-204 mimic+pcDNA3.1-Sirt1后,CCK-8法与BrdU实验分别检测细胞活力和BrdU掺入量;Western blot检测Sirt1和乙酰化p53(acetylated p53, ac-p53)的表达水平。双萤光素酶报告基因法验证miR-204与Sirt1的靶向关系。结果:霍奇金淋巴瘤组织中miR-204低表达,Sirt1 mRNA高表达。与对照组相比,L428细胞转染miR-204 mimic或Sirt1 siRNA后,细胞活力、BrdU掺入量及Sirt1和ac-p53表达水平均显著降低(P0.05)。与单纯miR-204 mimic转染组相比,miR-204 mimic+pcDNA3.1-Sirt1共转染组L428细胞活力、BrdU掺入量Sirt1和ac-p53蛋白表达水平均显著升高(P0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,Sirt1是miR-204的靶基因。结论:miR-204对L428细胞增殖的抑制作用可能是通过抑制Sirt1表达和促进ac-p53上调来实现的。     

肝细胞特异性Sirt1缺失加重小鼠肝脏炎性反应

目的探究沉默信息调节因子1 (Sirt1)基因的缺失对小鼠肝脏炎性反应的影响及其作用机制。方法每周记录在高脂喂养下的野生型C57BL/6J雄性小鼠和肝脏特异性Sirt1敲除(Sirt1-LKO)雄性小鼠的体质量,用Western blot和q-PCR检测炎性因子的表达;给小鼠腹腔注射20 mg/kg LPS,用生存曲线来反映小鼠对炎性反应的敏感性。结果与对照组WT小鼠相比,Sirt1-LKO小鼠表现为体质量明显减轻(P<0.05)。另外,生存曲线KaplaneMeier图显示Sirt1-LKO小鼠对LPS刺激呈现低敏感性(P<0.05)。Sirt1-LKO小鼠原代肝细胞中NF-κB蛋白水平增高(P<0.05),及NF-κB下游靶基因炎性因子Tnfα和IL6明显上调(P<0.05)。结论肝细胞特异性Sirt1缺失加重肝脏炎性反应。     

探索GalR1在雌性CUMS C57小鼠海马表达及M617对干细胞增殖的影响

目的:探究GalR1在雌性CUMS C57小鼠海马表达及GalR1激动剂M617对干细胞增殖的影响。方法:(1)将小鼠分为实验组及对照组,对照组不给予任何刺激,实验组给予慢性温和不可预知应激(CUMS)。通过糖水偏好、悬尾实验及血清皮质酮比较两组的抑郁水平;部分小鼠行免疫荧光染色比较两组海马DG的增殖情况;另一部分小鼠行qPCR检测,比较两组海马甘丙肽及其受体的表达。(2)行细胞培养,传代细胞给予不同浓度的M617处理3 d,取每组细胞铺板并加入10μmol/L的Brd U,继续孵育4 h后PFA固定,行Brdu免疫荧光染色并比较各组的阳性细胞数。结果:(1)第2、3周的糖水偏好实验显示两组糖水的消耗量未见差异,第4周CUMS组糖水消耗量少于对照组(P0.05);悬尾实验中,CUMS组静止不动时间延长(P0.05);CUMS组血清皮质酮水平明显高于对照组(P0.01)。(2)CUMS组海马DG区的Brd U+及Ki67+细胞数明显少于对照组(P0.05)。(3)q PCR结果显示CUMS组甘丙肽及GalR1基因表达水平明显增加(P0.01)。(4)不同浓度M617对干细胞增殖无明显组间差异。结论:(1)GalR1在雌性CUMS C57小鼠海马表达增高,可能参与调节抑郁症的发生过程。(2)不同浓度M617对干细胞增殖无明显影响,提示GalR1可能不参与神经干细胞增殖的调节。     

Rapsyn对正常及实验性自身免疫性重症肌无力小鼠乙酰胆碱受体的作用

目的: 探讨突触后膜乙酰胆碱受体缔合蛋白(rapsyn)对正常小鼠及实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠肌肉组织内乙酰胆碱受体(AChR)的作用。方法: 将扩增的pcDNA-rapsyn质粒注入小鼠左后肢,右后肢相同部位注射等量生理盐水,2周后将实验小鼠随机分为E组和C组,E组经腹腔注射AchR单克隆抗体35 (mAb35)诱导EAMG动物模型,C组经腹腔注射相同剂量的生理盐水,模型诱导48 h后处死实验动物分离双侧后肢肌肉,注射pcDNA-rapsyn质粒的左后肢肌肉分别为LE组和LC组,注射生理盐水的右后肢肌肉分别为RE组和RC组。免疫荧光染色法观察突触后膜AChR与运动终板的结合情况,RT-PCR和Western blotting法检测AChRα mRNA和蛋白表达情况。结果: 结果表明,LC组与RC组相比AChRα蛋白表达量增多(P<0.05),LE组与RE组相比AChRα蛋白表达量增多(P<0.05); LC组与RC组相比AChRα mRNA表达变化无统计学意义(P>0.05),LE组与RE组相比AChRα mRNA表达有明显降低(P<0.01)。结论: 在肌肉组织内上调rapsyn蛋白的表达对正常及EAMG小鼠AChR受体发挥保护性作用。     

益生菌改善高脂高糖饲养诱导的肥胖小鼠脂代谢紊乱

目的研究益生菌对高脂高糖饲养诱导的肥胖小鼠脂代谢紊乱的改善机制。方法将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组(高脂高糖饲料饲养)、益生菌组(2×10~9 CFU的益生菌菌液)、抑制剂组(AMPK抑制剂dorsomorphin, 10 mg/kg)和益生菌+抑制剂组,每组10只。苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理学变化:油红O染色观察肝脏组织中脂肪蓄积情况;蛋白免疫印迹(Western blot)检测通路蛋白表达。结果与对照组相比,模型组肝脏组织出现脂质空泡、细胞核染色加深、出现大量脂肪蓄积、自噬小体减少、脂代谢指标(TC、TAG、LDL)、脂代谢蛋白SREBP-1c表达水平及mTOR磷酸化水平升高(P0.05);脂代谢指标HDL、自噬相关蛋白LC3和Beclin1表达水平及AMPK磷酸化水平降低(P0.05)。益生菌组与模型组相比,脂质空泡及脂肪蓄积明显缓解、自噬小体增多、TC、TAG、LDL,SREBP-1c表达水平及mTOR磷酸化水平降低(P0.05);HDL、LC3和Beclin1表达水平及AMPK磷酸化水平升高(P0.05)。抑制剂组与模型组相比、益生菌+抑制剂组与益生菌组相比,脂质空泡增多且变大、脂肪蓄积加重、自噬小体减少、TC、TAG、LDL,SREBP-1c表达水平及mTOR磷酸化水平升高(P0.05);HDL、LC3和Beclin1表达水平及AMPK磷酸化水平降低(P0.05)。结论益生菌可能通过激活AMPK通路,负调控mTOR通路,促进肝细胞自噬,改善高脂高糖饲养诱导的肥胖小鼠的脂代谢紊乱。     

Fmr1小鼠的跳台实验和海马哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的关系

目的观察Fmr1基因敲除(KO)小鼠跳台实验行为及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的变化,探讨mTOR与KO小鼠学习记忆能力的关系。方法利用PCR技术鉴定20只4周龄FVB近交系KO及20只野生型(WT)小鼠,随机分为行为学前WT组、行为学后WT组、行为学前KO组和行为学后KO组。通过避暗实验测试行为学WT及KO组小鼠的学习记忆能力,Western blot检测各组海马区p-mTOR及mTOR表达的变化。结果跳台实验第1天KO鼠的潜伏期较WT鼠短,错误次数较WT鼠多。跳台实验第2天KO鼠的潜伏期较WT鼠短,错误次数较WT鼠多。Western blot检测显示:KO鼠空白组mTOR表达较WT鼠空白组增高(P0.05);KO鼠空白组PmTOR与WT鼠空白组相比表达增高(P0.05)。结论 Fmrp对mTOR信号通路具有负性调节作用;Fmr1基因敲除小鼠学习记忆能力障碍与mTOR信号通路受损有关。     

Sirt6通过调控P53/SLC7A11/GPX4通路抑制骨骼肌细胞铁死亡

目的：探讨骨骼肌细胞铁死亡的发生及sirtuin 6 (Sirt6)对其调控的分子机制。方法：将C2C12小鼠成肌细胞分为对照组、erastin(Era；铁死亡诱导剂)组、Era+ferrostatin-1(铁死亡拮抗剂)组、Era+MDL-800(Sirt6激动剂)组和Era+OSS-128167(Sirt6抑制剂)组；通过细胞活力和C2C12成肌细胞肌源性分化情况观察铁死亡诱导剂及拮抗剂的影响；RT-qPCR和Western blot测定成肌细胞及肌管中Sirt6、肌萎缩标志物、铁死亡标志物的mRNA及蛋白表达水平；进一步检测P53蛋白乙酰化水平、胞内亚铁离子(Fe²⁺)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)及脂质过氧化指标Liperfluo；免疫荧光法检测肌管分化标志物肌球蛋白重链(MHC)荧光信号。结果：Era降低成肌细胞活力和肌管分化质量，伴有Sirt6的mRNA和蛋白水平下降(P<0.05)，肌萎缩标志物肌肉环指蛋白1(MuRF1)和肌萎缩F盒蛋白(MAFbx)表达增加(P<0.05)。激活Sirt6可抑制P53蛋白第381位赖氨酸乙酰化，...     

宁夏无果枸杞叶提取物对衰老小鼠海马神经细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察宁夏无果枸杞叶提取物(FLE)对衰老小鼠脑海马区神经细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。方法:13月龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为老年对照组和FLE低剂量组(FLE1组)、FLE中剂量组(FLE2组)、FIE高剂量组(FLE3组),6月龄为成年对照组。FLE1组、FIE2组、FLE3组分别用5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg FLE灌胃,0.2 mmol/I/(10 g·d),老年及成年对照组灌胃等量生理盐水,持续8周。流式细胞术检测海马区神经细胞凋亡率,免疫荧光组织化学方法观察小鼠海马齿状回神经细胞的增殖。免疫组化SP法及WesternBlot技术检测小鼠海马区凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达,结果:流式细胞术检测结果显示,各组均检测到早期凋亡细胞,与成年对照组比较,老年对照组早期细胞凋亡率明显增多(P0.05);FLE2组、FLE3组早期细胞凋亡率明显低于FLEl组和老年对照组(P0.05)。免疫荧光染色结果显示:老年对照组海马齿状回神经细胞增殖率较成年对照组低(P0.05),FLE2及FLE3组小鼠海马齿状回神经细胞增殖率较老年对照组增高(P0.05)。免疫组化及Western Blot检测结果显示:老年对照组海马区Bcl-2蛋白的表达较成年对照组低(P0.01);Bax、Caspase-3蛋白的表达较成年对照组高(P0.01);FLE2及FLE3组Bcl-2蛋白的表达较老年对照组增加(P0.01);Bax、Caspase-3蛋白的表达量较老年对照组降低(p0.01)。结论:中、高浓度的FLE能够促进海马区神经细胞的增殖,提高凋亡蛋白Bcl-2表达,降低Bax、Caspase-3蛋白的表达,减少神经细胞的凋亡,发挥抗衰老作用。     

慢性铅暴露对小鼠脑海马组织雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响

目的研究慢性铅暴露对小鼠脑海马组织雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)表达的影响,探讨mTOR在慢性铅暴露所致小鼠海马神经元学习记忆功能障碍中的作用。方法 5⁶周龄小鼠交-1配后,铅暴露组仔鼠通过胎盘、乳汁和饮水饲醋酸铅2.4,4.8和9.6mmol·L,连续42d。对照组鼠饮用自来水。第42天检测血及脑铅浓度,Western印迹法检测脑海马总量mTOR(t-mTOR)及磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达。结果各慢性染铅组小鼠血铅和脑铅含量均明显高于对照组(<0.01),升高的程度与饮用水的铅浓度呈正相关。慢性染铅组小鼠大脑海马组织p-mTOR表达水平呈下降趋势,各染铅组p-mTOR表达与对照组比较,差异有统计学意义,并具有浓度效应关系(<0.05)。p-mTOR表达与血、脑铅浓度呈负相关(r=-0.82,铅对小鼠大脑皮层神经元t-mTOR的磷酸化没有影响。结论 p-mTOR蛋白的表达量随着铅暴露的浓度升高而降低,与铅致小鼠学习记忆功能减退有关。P P P<0.01),铅对小鼠大脑皮层神经元t-mTOR的磷酸化没有影响。结论　p-mTOR蛋白的表达量随着铅暴露的浓度升高而降低,与铅致小鼠学习记忆功能减退有关。     

S1PR2在小鼠后肢缺血模型血管新生和血流恢复中的作用

目的观察S1PR2对不同时间点小鼠后肢缺血模型血流恢复情况的影响,探讨其在后肢缺血模型血管新生和血流恢复中的作用。方法采用戊巴比妥麻醉野生型小鼠和S1PR2~(-/-)小鼠,取仰卧位,钝性分离皮肤肌肉等外周组织后,分别结扎小鼠左后肢股动静脉及其分支后缝合,建立小鼠后肢缺血模型。分别于术后第1、3、5、7、10和14天采用激光多普勒血流分析仪观察缺血后肢血流变化情况。于术后第14天处死动物取腓肠肌组织行CD31、NG2免疫荧光染色,计数微脉管密度。结果术后7~14天,S1PR2~(-/-)小鼠血流恢复情况显著优于野生型小鼠(P0.05),且术后第14天,S1PR2~(-/-)小鼠缺血后肢CD31和NG2阳性的微血管密度显著高于野生型小鼠(P0.05)。结论敲除S1PR2基因可促进小鼠后肢缺血模型血管新生和血流恢复。     

硫化氢通过调节Sirt1/eNOS信号通路延缓人脐静脉内皮细胞衰老

目的:我们既往研究已证实外源性硫化氢能够延缓内皮细胞衰老,本研究拟进一步探讨沉默信息调节因子1(Sirt1)与内皮型一氧化氮合酶(e NOS)系统对硫化氢抗内皮细胞衰老作用的影响。方法:建立葡萄糖(33 mmol/L)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老模型,根据细胞活力、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVECs衰老;同时采用RNA干扰技术抑制Sirt1蛋白表达,检测e NOS表达及衰老相关指标。结果:HUVECs经高糖处理后,细胞活力减低,SA-β-Gal阳性细胞比例增加,PAI-1表达增高,Sirt1及e NOS表达均明显减少(P0.05);与高糖处理组比较,100μmol/L硫氢化钠(硫化氢供体)处理组的细胞活性增加,SA-β-Gal染色阳性细胞比例及PAI-1蛋白表达显著下降,Sirt1及e NOS蛋白表达增加,NO含量增加(P0.05)。与硫化氢处理组比较,Sirt1 siRNA处理后e NOS表达减少,PAI-1表达增加,SA-β-Gal染色阳性细胞数目增多,NO含量减少(P0.05或P0.01)。结论:硫化氢通过上调Sirt1、增加e NOS表达而促进NO的合成,从而抵抗高糖诱导的HUVECs衰老。     

侧脑室注射NMDA对精神分裂症小鼠海马颗粒细胞层NMDA受体NR1亚基表达的调控

目的:阐明N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(NR1)在精神分裂症小鼠海马CA1、CA3、DG区颗粒细胞层的表达及NMDA对其表达的调控作用。方法:将小鼠随机分为实验组、对照组及空白组,实验组每日连续腹腔注射MK-801(0.6 mg/kg)14 d后侧脑室注射NMDA 1次,72 h后取材,应用免疫荧光标记法检测各组小鼠海马CA1、CA3、DG区颗粒细胞层NR1阳性细胞的表达。结果:对照组小鼠DG区NR1阳性细胞的表达比实验组和空白组明显升高(P0.05);在CA1区,实验组NR1的表达与对照组及空白组相比显著降低(P0.05);在CA3区,对照组NR1的表达与空白组相比显著降低(P0.05)。结论:(1)精神分裂症小鼠海马颗粒细胞层NR1阳性细胞的表达在DG区和CA1区显著升高,CA3区显著降低;(2)NMDA可调节精神分裂症小鼠海马结构颗粒细胞层NR1阳性细胞的表达趋于正常水平。