应用抗生素清除咽部菌群对RSV感染后小鼠肺部CD11c~+细胞的影响

目的探讨呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染后,使用广谱抗生素头孢哌酮引起的咽部优势菌群清除对其气道炎症、气道高反应,以及对肺部CD11c+细胞状态的影响。方法 3周龄雌性Balb/c随机分入空白对照组、RSV感染组和RSV感染后口服头孢哌酮组。7 d后检测口服头孢哌酮对咽部优势菌群的清除作用,并对各组小鼠进行肺泡灌洗液炎症细胞分类计数、病理切片HE染色及气道高反应性检测,流式细胞术检测肺部CD11c+细胞MHC-II及共刺激分子表达。结果 1)正常小鼠咽部优势菌群为链球菌,RSV感染未影响咽部优势菌群的改变,口服头孢哌酮可有效清除链球菌;2)RSV感染后急性期支气管肺泡灌洗液中炎症细胞明显增多[(13.20±1.72)×105 vs(6.17±0.28)×105 cells/ml,P<0.05],肺部病理损伤加重,气道高反应性轻微上升,肺部CD11c+细胞上MHC-II表达较空白对照明显上调(平均荧光强度:14 205±1 519 vs 9 707±1 140,P<0.05);头孢哌酮致咽部优势菌的清除未进一步加重气道炎症及气道高反应性,但在一定程度上抑制了CD11c+细胞的成熟,表现为单个细胞表面MHC-II表达水平较单独感染RSV组降低,与空白对照无明显差异。结论 Balb/c小鼠感染RSV同时使用广谱抗生素头孢哌酮导致咽部优势菌被清除,可能减少抗原对肺部CD11c+细胞刺激,从而一定程度上影响CD11c+细胞的成熟。     

非小细胞肺癌患者外周血CD11b~+CD33~+CD15~+CD14~-及CD11b~+CD33~+CD15~-CD14~+髓系细胞的比例变化及临床意义

髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)是一群具有免疫抑制作用的细胞,其在外周血中的表达规律与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的外周免疫逃逸及临床分期密切相关。本研究纳入116例NSCLC患者及30例健康者,流式细胞术检测外周血PBMC中MDSC、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的比例,研究其与临床分期、病理及免疫的相关规律。结果显示:与健康组比较,粒系髓源性抑制细胞(G-MDSC)、单核系髓源性抑制细胞(M-MDSC)在NSCLC外周血中比例升高,具有统计学意义(P<0.05);G-MDSC、病理类型与临床分期具有相关性(n=116,r=0.330,P<0.001;n=116,r=0.441,P<0.001),而M-MDSC、Treg与临床分期之间未发现相关性(n=116,r=-0.053,P=0.558;n=116,r=0.173,P=0.052);G-MDSC与Treg具有相关性(n=116,r=0.343,P<0.001)且与病理类型也呈现正相关(r=0.333,P<0.001);而M-MDSC与Treg未发现相关性(r=0.122,P=0.174),与病理类型不具有相关性(r=-0.143,P=0.109)。研究表明NSCLC患者外周血PBMC中MDSC比例升高,其中G-MDSC与NSCLC临床分期及Treg呈正相关,调控MDSC的表达有望成为防治肺癌发生及术后复发与转移的新策略[临床研究国际注册号NCT02603003]。     

活动性肺结核患者外周血CD11c~+抗原提呈细胞增多且功能增强

目的检测活动性肺结核(APT)患者外周血CD11c+抗原提呈细胞(CD11c+APC)的比例及其表达HLA-DR和CD86的情况。方法采用流式细胞术对52例APT患者外周血CD11c+APC的比例及其HLA-DR和CD86的表达进行检测,并以15例健康志愿者作为对照。结果 APT患者外周血CD11c+APC的比例显著高于对照组,治疗后组显著高于治疗前组;患者CD11c+APC中表达HLA-DR的细胞数以及HLA-DR表达的平均荧光强度均显著高于对照组,而且CD11c+APC中表达CD86的细胞数也显著高于对照组。结论 APT患者外周血CD11c+APC增加,CD11c+APC中HLA-DR和CD86表达增强。     

mTSLPR-Ig调节CD11c+细胞改善哮喘小鼠炎症反应

本研究探讨mTsLPR-Ig逆转哮喘小鼠Th1/Th2失衡以及改善哮喘气道炎症的可行性及其诱导哮喘免疫耐受的机制.实验包括用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发BALB/c小鼠,建立哮喘动物模型.于OVA激发前,将mTSLPR-Ig进行小鼠滴鼻灌注,光镜下对BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞、淋巴细胞进行计数;EL...     

养血解毒汤对咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损的干预作用

目的:观察养血解毒汤对咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损的干预作用。方法:STAT3转基因小鼠24只,随机分为正常对照组、模型组、养血解毒汤组和甲氨蝶呤组,每组6只,采用外用咪喹莫特诱导皮肤银屑病样模型。分别观察皮损面积和疾病严重程度(psoriasis area and severity index,PASI),光镜下观察皮损组织形态学变化和表皮层厚度;采用皮肤水分油分测试笔检测小鼠背部皮肤水分和油分含量;免疫组织化学法检测皮损中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和T淋巴细胞表面标志CD3表达;采用实时荧光定量PCR技术检测皮损Th17类细胞因子(IL-17A、IL-17C、IL-22和RORγt)mRNA表达;采用Western blot检测皮损STAT3通路蛋白(STAT3、p-STAT3、JAK3、p-JAK3和SOCS3)的表达水平。结果:(1)养血解毒汤组PASI评分明显低于模型组,HE染色观察发现养血解毒汤组皮损表皮增生较模型组少,角化不全的细胞明显减少,皮肤厚度降低(P0.01);(2)养血解毒汤组皮损油分和水分含量均明显高于模型组(P0.05);(3)养血解毒汤组PCNA阳性表达远低于模型组(P0.01);(4)养血解毒汤组脾脏重量低于模型组(P0.05);(5)养血解毒汤组Th17相关因子(IL-17A、IL-17C、IL-22和RORγt)表达水平均低于模型组,此外,p-STAT3和p-JAK3表达量亦低于模型组,而SOCS3的表达高于模型组。结论:养血解毒汤可能通过抑制STAT3的磷酸化,减少Th17相关因子(IL-17A、IL-17C、IL-22和RORγt)的分泌,由此改善咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损改变。     

催乳素对小鼠脾脏CD11c+树突状细胞合成细胞因子的调控

本研究采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,在mRNA水平上了解不同浓度的催乳素(PRL)对小鼠脾脏树突状细胞CD11c+(spleen CD11c-positive dendritic cells,SDC)合成细胞因子的影响。结果表明,低(0.01 nmol/L)、中浓度(0.1nmol/L)的PRL可以上调IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α的水平而高浓度(1 nmol/L)则降低它们的表达(IL-12除外)。这提示PRL可能通过改变抗原提呈细胞SDC细胞因子的合成,进而参与调节机体的生理或病理性免疫反应。     

IL-6协同M-CSF体外诱导CD14~+单核细胞向M2样巨噬细胞分化

目的探讨IL-6协同M-CSF体外诱导CD14~+单核细胞向M2样巨噬细胞分化的作用机制,并检测诱导而来的M2样巨噬细胞的表型特点以及对肿瘤细胞的作用。方法体外构建IL-6诱导单核细胞分化模型,q RT-PCR检测M2表型分子(IL-10、TGF-β)在不同质量浓度IL-6刺激下的表达水平;Western blot检测STAT3信号通路的活化水平;采用细胞迁移、增殖实验验证IL-6诱导的M2样巨噬细胞对肿瘤细胞增殖、迁移的作用。结果在IL-6诱导分化的巨噬细胞中,IL-10、TGF-β表达增高呈IL-6剂量依赖性,且IL-6大量激活JAK/STAT3信号通路中的STAT3蛋白,使其磷酸化,si RNA沉默STAT3后,IL-10、TGF-β表达水平相应降低;此外,M2样巨噬细胞上清处理的实验组比对照组胃癌细胞增殖速度和迁移能力显著增强。结论 IL-6可以通过激活STAT3信号通路诱导单核细胞高表达IL-10、TGF-β,低表达IL-12的M2样巨噬细胞分化,并且M2样巨噬细胞可以促进肿瘤细胞的增殖和迁移。     

V_γ4~+γδT细胞清除可缓解咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎

目的观察V_γ4~+γδT细胞在咪喹莫特乳膏诱导的Balb/c小鼠银屑病模型中的作用。方法雌性8周龄Balb/c小鼠随机分为野生型组和V_γ4清除型组。咪喹莫特乳膏诱导银屑病模型后,采用PASI评分标准分别评判2组小鼠银屑病模型皮损的严重程度,HE染色观察皮损组织形态学改变,流式细胞仪分别检测2组小鼠正常及炎症时真皮组织中V_γ4T细胞的比例,Western blot检测2组小鼠正常及炎症时真皮组织蛋白IL-17、IL-23、IL-1β的表达水平。结果连续6 d涂抹0.5%咪喹莫特乳膏后,野生型组小鼠背部脱毛区域出现红斑、鳞屑、斑块的典型银屑病样皮损比V_γ4清除型组小鼠严重。流式细胞仪检测到野生型组正常小鼠真皮细胞内在少量的V_γ4T细胞,炎症时该细胞数量增多,V_γ4清除型组正常及炎症小鼠均无V_γ4T细胞表达。同时Western blot检测到V_γ4清除组小鼠真皮组织蛋白IL-17、IL-23、IL-1β炎性因子的表达水平也低于野生型组。结论清除小鼠体内V_γ4T细胞后,咪喹莫特诱导的银屑病样皮炎减轻,同时IL-17、IL-23、IL-1β3种炎性因子的蛋白表达水平均降低。     

双氢青蒿素通过抑制角质形成细胞的增殖和促炎因子的产生改善小鼠银屑病样皮肤炎症

目的:明确双氢青蒿素抑制银屑病样小鼠皮肤炎症反应,并初步探讨其可能的作用机制。方法:BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、双氢青蒿素低剂量组和高剂量组。将5%咪喹莫特乳膏涂抹小鼠背部皮肤诱导银屑病样小鼠模型,双氢青蒿素于咪喹莫特处理前1 h灌胃处理。结果:PASI临床评分和小鼠背部皮肤大体变化结果显示,双氢青蒿素可以明显抑制小鼠红斑、银屑和皮肤厚度,呈剂量依赖性,且PASI临床评分具有统计学意义(P<0.05);HE染色结果显示,双氢青蒿素明显抑制表皮增厚,钉状突起明显缩短,炎症细胞浸润减少;免疫组织化学染色结果显示,双氢青蒿素可以使小鼠皮肤中Ki67阳性细胞数量明显减少;相对于模型组,双氢青蒿素处理小鼠在银屑病诱导后的第3天和第6天小鼠皮损组织中的IL-1β、IL-18、IL-6以及CXCL-1表达显著下降,但并未表现出明显的计量依赖性(P<0.05);免疫印迹试验结果显示,双氢青蒿素明显抑制银屑病小鼠皮损中NF-κB(p65)和p-p38的表达,呈剂量依赖性(P<0.05),磷酸化ERK的表达在双氢青蒿素高剂量组表现有统计学差异(P<0.05)。结论:双氢...     

绿色荧光蛋白转基因小鼠CD34+/CD45+细胞在脊髓全横断大鼠模型中的存活及迁移

目的:探讨CD34⁺/CD45⁺细胞移植入脊髓全横断大鼠模型后的存活、迁移及分布情况。方法:体外培养绿色荧光蛋白（GFP）转基因小鼠骨髓细胞，经CD34、CD45单克隆抗体鉴定后移植入脊髓全横断大鼠模型脊髓横断处尾侧，分别在术后24 h、48 h、1周、2周、4周和8周行左心腔内灌注，取出脊髓，连续切片（片厚 10 μm），置于荧光显微镜下观察切片中有无绿色荧光细胞，并观察荧光细胞的分布范围；用免疫组化法检测CD34⁺/CD45⁺细胞的存活。 结果:脊髓横断处头尾两侧均可见绿色荧光细胞，且多分布于灰质中，散在或聚集成片；免疫组化法可见切片中有CD34⁺/CD45⁺细胞散在。 结论: CD34⁺/CD45⁺细胞可在脊髓全横断大鼠模型的脊髓中存活，并可迁移至脊髓横断处头侧，且随时间的延长迁移距离有所增加。     

间充质干细胞诱导小鼠CD8α+ CD11b+ jagged2high调节性树突状细胞的方法

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外诱导CD8α+CD11b+jagged2high调节性树突状细胞(DCregs)的方法。方法:应用4种细胞因子体外刺激BALB/c(H-2d)小鼠骨髓有核细胞(BMCs)3 d,流式细胞术(FCM)分选树突状细胞(DCs),与BMSCs共培养10 d,诱导DCregs产生。FCM分析共培养前后DCs的表型、细胞周期及Notch信号通路中Jagged1、Jagged2配体的表达变化。结果:小鼠BMSCs在体外成功诱导新型DCs转变为DCregs,其CD86、CD80、CD40、MHC-II表达均明显下降(P<0.05),而CD205、Jagged1、Jag-ged2表达均明显上升(P<0.05);细胞周期中(G2+S)期细胞增加。结论:MSC可诱导DC细胞向DCregs转化,该MSC-DCregs具有致免疫耐受性表型,增殖能力提高;MSC诱导免疫耐受的机制可能与上调DC的Jagged1和Jagged2基因表达,激活T细胞Notch信号通路相关。     

间充质干细胞通过诱导髓系来源CD11b~+Gr1~+细胞的抑制功能促进小鼠乳腺癌进展

目的探讨间充质干细胞(MSC)诱导骨髓来源的CD11b+Gr1+细胞免疫抑制功能对肿瘤的影响。方法将骨髓中CD11b+Gr1+细胞与MSC共培养后,通过流式细胞术测定CD11b+Gr1+细胞免疫表型,通过T细胞抑制性实验分析T细胞活化情况,采用小鼠4T1乳腺癌模型观察MSC通过CD11b+Gr1+细胞对肿瘤生长的影响。结果 MSC能够促进骨髓中CD11b+Gr1+细胞的存活和生成,同时可诱导正常小鼠骨髓中CD11b+Gr1+细胞对T细胞的抑制作用。动物实验结果显示,MSC处理后的骨髓CD11b+Gr1+细胞可以促进肿瘤的生长,加速小鼠的死亡。结论 MSC可以通过促进骨髓来源的CD11b+Gr1+细胞的抑制作用加速肿瘤的生长进程。     

CD11b激动剂leukadherin-1通过促进髓源性抑制细胞聚集和活化缓解小鼠内毒素休克发病

目的研究CD11b激动剂白细胞黏附素1(LA1)对髓源性抑制细胞(MDSC)的聚集和免疫抑制功能的影响,并检测其对脂多糖(LPS)诱导的内毒素休克模型小鼠的治疗效果。方法 C57BL/6雌性小鼠腹腔注射LA1 (40μg/g),12 h和48 h后,流式细胞术检测脾脏MDSC及其亚型粒细胞性髓源性抑制细胞(G-MDSC)和单核细胞性髓源性抑制细胞(M-MDSC)的比例。取C57BL/6雌性小鼠股骨及胫骨,体外诱导MDSC,通过实时定量PCR分析LA1处理对其免疫抑制相关因子白细胞介素10(IL-10)、NADPH氧化酶1 (NOX1)及诱导型一氧化氮合酶(i NOS) mRNA水平的影响。用C57BL/6雌性小鼠随机分为PBS组、LA1组、PBS联合LPS组和LA1联合LPS组,通过流式细胞术检测MDSC、G-MDSC及M-MDSC的比例及巨噬细胞表面CD86和CD40的表达,HE染色检测肝肺组织病理损伤,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝肺组织细胞凋亡情况,观察小鼠死亡率反映小鼠病情的严重程度。通过以上检测指标分析LA1对内毒素休克小鼠体内MDSC的聚集及对病情的影响。结果 LA1处理12、48 h,均显著上调小鼠脾脏中MDSC的比例。与对照组相比,LA1处理12 h可显著上调G-MDSC的比例;体外实验发现,LA1可诱导MDSC中IL-10、NOX1及i NOS高表达;体内实验中,与PBS联合LPS组相比,LA1联合LPS组脾脏MDSC及G-MDSC的比例显著增加,肝、肺组织损伤减轻,死亡率下降,巨噬细胞活化程度显著降低。结论 CD11b激动剂LA1可通过促进MDSC的聚集及其免疫抑制相关因子的表达缓解内毒素休克的发病。     

间充质干细胞诱导的CD8α~+ Jagged2~(high) CD11b~(high)调节性树突状细胞防治小鼠aGVHD

目的:观察间充质干细胞诱导的CD8α+Jagged2highCD11bhigh调节性树突状细胞(MSC-DCregs),对小鼠急性移植物抗宿主病(a GVHD)的影响。方法:体外诱导MSC-DCregs。以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、接受清髓性全身照射(TBI)预处理的BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠进行移植。分为以下5组:为正常对照组;TBI组;移植组:移植物为1×107骨髓细胞(BMCs);a GVHD组:移植物为1×107BMCs+1×107脾细胞(Sp Cs);MSC-DCregs组:移植物为1×107BMCs+1×107Sp Cs+1×106MSC-DCregs。监测植入情况、H2-Kb嵌合率、a GVHD评分、生存和病理学改变。结果:处理1 0 d后所有小鼠造血恢复,30 d后嵌合率检测转为供鼠型。a GVHD组和MSC-DCregs组中位生存期分别为27 d和33 d,MSC-DCregs组生存期较a GVHD组延长(P0.01),临床评分比a GVHD组低(P0.01),33 d的皮肤、肝脏病理学改变均优于a GVHD组。结论:MSC-DCregs具有防治a GVHD的作用,其相关作用机理待进一步研究。     

Cholera toxin adjuvant promotes a balanced Th1/Th2/Th17 response independently of IL-12 and IL-17 by acting on Gsα in CD11b+ DCs

Despite an extensive literature on the mechanism of action of cholera toxin (CT), we still lack critical information about how the toxin acts as an adjuvant and, especially, which dendritic cells (DCs) are the target cells. Although a T helper type 2 (Th2)-skewing effect of CT is most commonly reported, effective priming of Th17 cells as well as suppression of Th1 responses are well documented. However, the ability of CT to block interferon regulatory factor 8 (IRF8) function and interleukin (IL)-12 production in DCs, which blocks CD8α DC and Th1 cell development, is inconsistent with priming of Th1 and CD8 T cells in many other reports. This prompted us to investigate the adjuvant effect of CT in wild-type, IL-12p40−/−, Batf3−/−, and IL-17A−/− mice and in mice that selectively lack the Gsα target protein for CT adenosine diphosphate (ADP)-ribosylation in DCs. We found that CT promoted Th1 priming independently of IL-12, and whereas Th2 and also Th17 responses were augmented, the gut IgA responses did not require IL-17A. Adjuvanticity was intact in Batf3−/− mice, lacking CD8α⁺ DCs, but completely lost in mice with Gsα-deficient CD11c cells. Thus, our data demonstrate that the adjuvant effect requires Gsα expression in CD11b⁺ DCs, and that priming of mucosal IgA and CD4 T cells appears unbiased and is independent of IL-12 and IL-17A.