盐酸小檗碱通过PI3K/Akt信号通路促进小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的分化

目的:研究盐酸小檗碱对小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1分化与矿化的调控作用及其机制。方法:MC3T3-E1细胞给予不同浓度(0、1、5、10和20 mg/L)的盐酸小檗碱刺激3 d,CCK-8法检测细胞活性。不同浓度的盐酸小檗碱分别干预3 d和7 d,检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。进一步将实验随机分为4组:对照组、盐酸小檗碱组、盐酸小檗碱+LY249002(PI3K/Akt通路抑制剂)组及LY249002组。干预2 d后,采用real-time PCR检测成骨细胞分化相关因子ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达情况,采用Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt的表达水平。将MC3TC-E1细胞用矿化培养基诱导21 d,茜素红染色检测其矿化情况。结果:与对照组相比,不同浓度的盐酸小檗碱对细胞活性的影响没有明显差异;不同浓度的盐酸小檗碱处理MC3T3-E1细胞后ALP活性有不同程度升高。Real-time PCR结果表明,盐酸小檗碱(5 mg/L)促进ALP、OCN、OPN及Runx2的mRNA表达(P 0. 01),而LY294002能抑制这些分化相关因子的表达。Western blot检测结果表明,盐酸小檗碱(5 mg/L)促进p-Akt蛋白的表达(P 0. 01),其作用被LY249002抑制。茜素红染色发现盐酸小檗碱组矿化明显,但LY294002能抑制盐酸小檗碱的促进作用。结论:盐酸小檗碱可以促进小鼠前成骨细胞的分化与矿化,其机制可能与其激活PI3K/Akt信号通路有关。     

小檗碱对人高转移肺癌细胞与脐静脉内皮细胞黏附的影响

目的： 探讨小檗碱对人高转移肺癌细胞株PG细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）黏附的影响及其机制。方法：用MTT法检测不同浓度（2.5-40 mg/L）的小檗碱对HUVECs增殖的影响,用2.5、5和10 mg/L小檗碱分别处理人高转移肺癌细胞株PG细胞6、12和24 h, 用虎红染色法测定小檗碱对PG细胞与HUVECs黏附能力的影响, 用荧光抗体染色法测定小檗碱对PG细胞表面黏附分子CD44s表达的影响, 用双光子各向异性度成像系统观察小檗碱对PG细胞膜流动性的影响。结果：（1）2.5、5和10 mg/L小檗碱作用HUVECs 6、12和24 h后对其生长无影响。（2）用不同浓度小檗碱处理PG细胞6、12和24 h后,与TNF-α刺激后的HUVECs相互作用后,能够显著抑制其黏附率,且呈浓度依赖性(P<0.05, P<0.01)。（3）各剂量组的小檗碱均能使PG细胞表面的CD44s分子表达增高（P<0.05或P<0.01）。（4）小檗碱作用PG细胞24 h后能够抑制PG细胞膜的流动性,且随药物浓度的升高这种抑制作用增强。结论：小檗碱对PG细胞与HUVECs的黏附具有抑制作用,可能与小檗碱增加PG细胞表面黏附分子表达、降低其细胞膜流动性有关。     

Aliskiren抑制LPS诱导HUVECs新生血管的形成及可能机制

 目的: 研究阿利吉仑(aliskiren)对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)新生血管形成能力的影响及可能的机制。方法: 常规培养的HUVECs随机分为空白组和肾素组,ELISA法测定炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平,Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)和ICAM-1的蛋白水平。将常规培养的HUVECs随机分为空白对照组、LPS模型组以及aliskiren低剂量(1μ mol/L)、中剂量(10μ mol/L)和高剂量(100μ mol/L)组。MTT法和BrdU法检测HUVECs的增殖能力,Transwell法测定HUVECs的迁移率,以HUVECs在Matrigel胶上形成管腔结构情况来判断其血管形成能力。ELISA测定炎性细胞因子TNF-α、ICAM-1和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平,RT-PCR和Western blot法检测肾素、TLR4、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA和蛋白水平。结果: 肾素能够刺激HUVECs炎症因子的分泌及TLR4的表达;aliskiren呈浓度依赖性抑制HUVECs增殖、迁移及新生血管形成,降低MCP-1、TNF-α、IL-6水平及肾素、MMP-2、MMP-9的表达,抑制TLR4表达(P<0.05)。结论: Aliskiren能够有效抑制LPS诱导HUVECs新生血管形成能力,可能与其下调肾素表达抑制TLR4途径介导的炎症反应及MMP-2、MMP-9生成有关。     

低温等离子体对胫骨骨折大鼠骨折愈合的作用及机制

目的 探究低温等离子体对胫骨骨折大鼠骨折愈合的作用及可能机制。方法 30只SD大鼠分为假手术组、模型组和低温等离子体照射组，每组10只。HE染色检测大鼠骨折处病理形态改变；ELISA检测大鼠血清ALP水平及骨组织IL-1β和IL-18水平；qRT-PCR和Western blot检测大鼠骨组织成骨相关基因RUNX2、OCN和COL1A1 mRNA和蛋白表达水平；Western blot检测大鼠骨组织NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、cleaved-caspase1和GSDMD表达水平。结果 低温等离子体照射促进胫骨骨折大鼠骨折愈合，增加大鼠血清ALP水平及骨组织成骨相关基因RUNX2、OCN和COL1A1 mRNA和蛋白表达水平，降低大鼠骨组织IL-1β和IL-18水平及NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、cleaved-caspase1和GSDMD表达水平。结论 低温等离子体照射通过抑制NLRP3炎症小体激活促进胫骨骨折大鼠骨折愈合。     

小檗碱对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用

目的：观察小檗碱对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用，以探讨小檗碱抑制肿瘤生长与转移的机制。 方法： 用小檗碱与体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共同孵育，以MTT法检测细胞的增殖活性，免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，荧光染色法观察凋亡细胞核形态，用Rhodamine123染色，激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位。 结果： 不同浓度小檗碱与HUVEC共同孵育可明显抑制HUVEC的增殖(P<0.05，P<0.01)，呈现一定的浓度依赖性和时效性；20 mg/L小檗碱与HUVEC共同孵育48 h，可显著降低细胞核PCNA的表达（P<0.01），并可见凋亡细胞数增多、线粒体膜电位明显降低（P<0.01）。 结论： 小檗碱抑制血管内皮细胞的增殖，并促进血管内皮细胞凋亡，从而抑制肿瘤血管形成，可能是小檗碱抑制肿瘤生长与转移的机制之一。     

彝药恒古骨伤愈合剂缓解去势树鼩骨质疏松症

目的探讨恒古骨伤愈合剂(OK)可否缓解去势树鼩模型的骨质疏松症(OP)。方法雌性树鼩随机分为正常组和OP模型组去除双侧卵巢(经检测全身骨密度下降25%),每组8只。分别给予OK 0.5、1.5和3. 0 mL/d灌胃治疗,阳性药物对照组给予1. 5 mL/d雌激素灌胃治疗,10周后处死树鼩,收集血清和骨骼,检测血清和尿液中Ca~(2+)、P~(3+)的浓度,E2、BGP和ALP的浓度以及BMD;分别用RT-qPCR和Western blot检测OPG、RANKL和RUNX2的表达。结果低、中、高浓度OK可显著增高OP血清中Ca、P、E2和ALP的浓度(P0. 05),降低血清中BGP和尿液中Ca~(2+)、P~(3+)的浓度(P0. 05),上调骨组织中OPG和RUNX2的表达(P0. 05),下调RANKL的表达。结论 OK能够通过增加E2分泌、抑制骨吸收和促进骨形成,增加全身骨密度,治疗OP。     

小檗碱对2型糖尿病大鼠巨噬细胞MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的： 探讨小檗碱对2型糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞（AM）和腹腔巨噬细胞（PM）基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。 方法：SD大鼠随机分成4组，正常对照组、高脂组、糖尿病组、小檗碱治疗组。治疗12周后，测定各组大鼠血清葡萄糖、胰岛素和血脂含量，并检测肺泡和腹腔巨噬细胞氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）含量、MMP-9和TIMP-1的基因表达水平。结果：糖尿病组大鼠血糖、血胰岛素、血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）浓度明显高于对照组，AM和PM内ox-LDL浓度、MMP-9 mRNA表达明显高于对照组；而TIMP-1 mRNA的表达低于对照组。小檗碱治疗组大鼠血糖、血胰岛素、LDL、TC、TG浓度低于糖尿病组，AM、PM内MMP-9 mRNA的表达低于糖尿病组，而TIMP-1 mRNA的表达高于糖尿病组。 结论：小檗碱具有降低血糖、调节血脂、防治2型糖尿病动脉粥样硬化的作用，其机制可能与其减少ox-LDL生成，直接下调巨噬细胞中MMP-9的表达有关。     

白藜芦醇对维生素D_3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化的抑制作用

目的:观察白藜芦醇(RES)对维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化的抑制作用和可能机制。方法:32只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为4组,每组各8只:对照组(CON组);血管钙化组(VDN组);RES低剂量处理组[VDN+RES(L)组];RES高剂量处理组[VDN+RES(H)组]。实验第6周末进行各组大鼠主动脉Von Kossa染色,比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性及钙含量,Western Blot检测成骨细胞标志性蛋白骨桥蛋白(OPN)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达,并比较各组间差异。结果:与CON组比较,VDN组大鼠主动脉Von Kossa染色显示主动脉中膜弹力纤维排列紊乱,其间广泛分布黑色银染颗粒,主动脉ALP活性、钙含量、OPN和BMP-2水平均显著升高(P0.01);与VDN组比较,两种剂量RES干预组大鼠主动脉中膜弹力纤维紊乱程度下降、黑色银染颗粒减少,主动脉ALP活性、钙含量、OPN和BMP-2水平均明显降低(P0.05或P0.01),高剂量RES干预组较低剂量RES干预组降低更明显(均P0.05)。结论:RES能够有效抑制维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化,其机制可能与其能降低主动脉ALP活性及抑制OPN和BMP-2表达有关。     

神经支配对兔后肢缺血诱导侧支血管生长过程中巨噬细胞标记物、细胞间黏附分子和血管细胞黏附分子表达的影响

目的:通过比较去除支配血管壁的神经,观察神经支配对侧支血管巨噬细胞标记物(RAM11)、细胞间黏附分子(ICAM)和血管细胞黏附分子(VCAM)表达的影响.方法:20只新西兰大白兔,左侧行股动脉结扎,右侧行股动脉结扎加坐骨神经和股神经切除,7 d后将动物处死,应用免疫荧光组织化学技术,观察单纯结扎和结扎加去神经侧RAM11、 ICAM和VCAM在侧支血管的表达变化,兔前肢大小相似的正常血管用作正常对照.结果:正常血管ICAM和VCAM的表达非常低,外膜中可见数目很少的RAM11阳性细胞;股动脉结扎侧,侧支血管ICAM、VCAM和RAM11的表达均明显上调,RAM11阳性细胞主要在外膜聚集,在中膜也可见,ICAM表达主要在血管内皮细胞,而VCAM除了在血管内皮细胞有表达外,在外膜也有表达;股动脉结扎加去神经侧,ICAM、 VCAM和RAM11的表达比股动脉结扎侧有所下调,其荧光强度的比较有统计学意义.结论:在缺血诱导的兔后肢侧支血管生长模型中,去除血管壁的神经导致了炎症分子ICAM、 VCAM和RAM11的阳性细胞减少,表明血管壁神经对RAM11、 ICAM和VCAM的表达调节有重要影响.     

血管内皮生长因子复合骨形态发生蛋白-2转染骨髓间充质干细胞修复兔股骨头坏死模型

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)联合骨形态发生蛋白(BMP-2)基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)在治疗兔非创伤性股骨头缺血性坏死(ANFH)中的作用。方法:分离、培养兔BMSCs,采用电转法分别转染重组表达载体pcDNA3.1-BMP-2质粒和重组表达载体pcDNA3.1-VEGF质粒,分为4组,空白组、VEGF组、BMP-2组、混合培养组。免疫蛋白印迹检测各组BMSCs的BMP-2和VEGF蛋白的表达。检测各组碱性磷酸酶(ALP)活性和钙的含量。将64只新西兰大白兔制作ANFH模型,然后随机分为4组,分别转染上述4组质粒,减压后植入ANFH模型,收集股骨头标本分别做X线检查、股骨头组织H-E染色检查。结果:体外实验显示,ALP活性和钙含量,空白组VEGF转染组BMP-2转染组混合转染组。体内实验结果显示第4、8周X线和组织学观察,VEGF和BMP-2真核表达载体联合转染BMSCs组股骨头修复效果优于其他3组。结论:VEGF和BMP-2均能提高BMSCs体外培养中ALP的含量和促进体外培养时BMSCs向骨细胞转化。VEGF复合BMP-2转染BMSCs可增强骨坏死区骨修复和血运重建能力。     

冠状动脉血管直径测量方法的研究

心脏是人体生命活动的重要器官，能否正常工作主要是由心血管系和心传导系决定。冠状动脉是给心脏供血的唯一途径，心肌能否得到足够的营养、保持连续有节奏地运动，完全取决于冠状动脉是否能不断地供给其营养。冠状动脉直径的测量以及血管直径参数对于反映心脏功能和疾病的诊断具有重要意义。文中提出一种新型的、简便的血管直径测量方法，利用计算得到的血管直径，我们就可以判别心血管狭窄位置。     

肝门阻断和再开放对兔胰腺功能的影响

目的：观察肝门阻断（HVO）及再开放（HVR）后胰腺内外分泌功能的改变。方法：选择健康日本大耳白兔25只，体重2.3-3.0 kg，分别于HVO前、HVO 10、20 min及HVR后（10、30、60、120 min）不同时点取血，并在HVO前、HVO 20 min、HVR后120 min 3个时点取胰腺组织，电镜下观察其超微结构的变化。结果：HVO时，血浆葡萄糖、胰岛素水平及一氧化氮代谢产物（NO₂^-/NO₃^-）含量均明显低于阻断前，胰高血糖素/胰岛素及丙二醛（MDA）浓度显著高于阻断前（P<0.05或P<0.01），并随阻断时间延长而加重；血浆淀粉酶、脂肪酶、游离脂肪酸水平则无明显差异（P>0.05）；胰岛细胞的线粒体肿胀、粗面内质网扩张，细胞核形态、结构基本正常，而胰腺腺泡细胞变化则不明显。HVR后上述差异逐渐不明显，至120min才接近阻断前水平。结论：急性肝门阻断和再开放对胰腺内分泌功能有较大的影响。     

Wnt信号通路在血管钙化中作用的研究进展

血管钙化是一种主动的可调控的类似于骨或软骨性发育的复杂过程，涉及许多疾病的发病过程，如动脉粥样硬化、高血压、糖尿病及慢性肾病等。研究发现Wnt信号通路以旁分泌或自分泌的方式参与心脏发育、心肌肥厚、动脉粥样硬化及血管再生等病理生理过程。近年来，Wnt信号通路在血管钙化发病过程中的作用亦日益受到重视。     

促进内皮细胞在小口径人工血管表面的黏附方法探讨

人工血管内皮化是解决人工血管移植体内后血栓形成和提高远期通畅率的最有前途的途径之一.为了使内皮细胞在小口径人工血管表面形成一层完整的覆盖并减少血栓形成,一般采用对人工血管做黏附基底预处理、在生物反应器中对人工血管进行三维流动培养、对内皮细胞进行基因修饰以及改变内皮细胞的带电性质等方法.本文对此方面的研究进展进行了综述,初步探讨了促进内皮细胞在小口径人工血管表面黏附的方法.     

血管生成抑制素对胃癌细胞的影响

目的探讨血管生成抑制素对胃癌细胞增殖和游走的影响及对胃癌细胞分泌血管内皮生长因子A和C(VEGF-A和VEGF-C)的影响并分析其作用机制。方法采用MTT法和划线法观察0、0.5、1.0、1.5μg/ml浓度的血管生成抑制素对胃癌细胞增殖和游走的影响。免疫组化的方法检测0、0.5、1.0、1.5μg/ml浓度的血管生成抑制素对胃癌细胞内血管内皮生长因子(VEGF)-A和VEGF-C的影响。结果 MTT法显示不同浓度的血管生成抑制素对胃癌细胞增殖无明显影响(p0.05),同样,划线法测得的胃癌细胞迁移距离同对照组相比无明显差异(p0.05)。但免疫组化法结果显示,0.5、1.0、1.5μg/ml浓度的血管生成抑制素组胃癌细胞VEGF-A和VEGF-C的表达同对照组相比明显减少(p0.05)。结论血管生成抑制素明显减少胃癌细胞内的VEGF-A和VEGF-C的分泌,但对胃癌细胞的增殖和游走无明显作用。     

Action of defensin on healing of aseptic skin wounds and on vascular permeability

Department of Human and Animal Physiology, Faculty of Biology, Moscow University. Laboratory, Research Institute of Experimental Medicine, Academy of Medical Sciences of the USSR, Leningrad. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR I. P. Ashmarin.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 109, No. 4, pp. 391–393, April, 1990.     

An update on cutaneous vascular tumours

The classification of vascular lesions is complex. There is a slight overlap between reactive, developmental and benign vascular tumours, and some conditions defy precise classification. This review follows the most recent World Health Organization (WHO) classification of cutaneous vascular tumors and provides the framework for a systematic study, incorporating as many recent advances in molecular and immunohistochemical diagnostics as possible at this moment in time.     

氧环境对血管内皮生长因子、色素上皮衍生因子的影响及其与血管发育的关系

目的：研究视网膜发育过程中血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)所起的调节作用及其机制。方法：C57BL/6J 小鼠从出生后7～12 d 饲养于75%氧环境,分别用抗 VEGF、抗 PEDF 和抗 CD31抗体作免疫组织化学标记视网膜切片。结果：持续处于高氧环境时,VEGF 表达处于低水平而 PEDF 快速上升,血管生长减缓。高氧处理5 d 后回到普通环境,VEGF 的表达迅速上升而 PEDF 却逐渐减少,出现了一过性的血管快速增长现象。结论：氧含量变化可调节 VEGF 和 PEDF 表达,参与视网膜血管发育。     

基于冠脉造影图像血管树分割的血管狭窄自动识别方法

针对冠状动脉造影图像中的血管狭窄位置进行自动识别,并且定量评估其狭窄程度,为临床医生提供一种计算机辅助诊断方法,从而提高对冠状动脉狭窄的诊断准确率,同时减轻医生的劳动强度。所提出的基于冠脉造影图像的血管狭窄自动识别方法包括血管树分割以及血管狭窄识别两部分。在血管树分割部分,首先通过基于Frangi Hessian的改进模型进行图像增强,随后利用基于统计学区域融合方法对血管区域进行分割。在血管狭窄识别部分,首先利用水平集算法对分割结果进行细化获得血管骨架,随后提取血管边缘进行血管直径测量,最后采用局部最小点法计算整幅图像血管段狭窄的百分比,对狭窄段进行定位并分级。实验在153例患者的血管造影图像中检测出狭窄共计208段,其中轻度84段,中度42段,重度82段。统计分析结果显示,血管狭窄识别平均准确率为93.59%,敏感性为88.76%,特异性为95.58%,阳性预测值为90.51%,表明该方法能够有效地检测和定量评价动脉血管的狭窄程度,有助于心血管疾病的临床诊断。     

同型半胱氨酸对培养内皮细胞损伤的研究

目的:本研究拟探讨同型半胱氨酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应,以揭示同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的可能机制。方法:将人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸24h后,观察细胞形态并测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果:(1)同型半胱氨酸不仅可诱导细胞凋亡而且在较高浓度时可致细胞坏死;(2)同型半胱氨酸有较强的促脂质过氧化的效应,并呈量效关系;(3)同型半胱氨酸的上述效应因加入LDL而增强,示同型半胱氨酸与LDL有协同作用。结论:同型半胱氨酸可能是通过氧化应激机制导致内皮细胞出现坏死,凋亡等损伤的改变。