抗CD3与抗CD28单克隆抗体共刺激对淋巴细胞免疫活化基因mRNA表达的影响

目的　观察ＣＤ２８ 共刺激信号对淋巴细胞免疫活化基因表达的影响及环孢素Ａ（ＣｓＡ）对它们的抑制作用。方法　分离健康人外周血单个核细胞, 分别给予抗ＣＤ３ 单克隆抗体（ 抗ＣＤ３ｍＡｂ） 单刺激或抗ＣＤ３ ｍＡｂ＋ 抗ＣＤ２８ 单克隆抗体（抗ＣＤ２８ ｍＡｂ）共刺激培养; 加或不加入ＣｓＡ。于培养后６ ｈ 和２４ ｈ 收集细胞。以逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 检测βＡｃｔｉｎ、ＣＤ４０Ｌ、ｂｃｌｘＬ、ＴＧＦβ１ 、Ｆａｓ、ＦａｓＬ、穿孔素和颗粒酶ＢｍＲＮＡ 表达水平。结果　ＣＤ２８ 共刺激信号能显著增强免疫活化基因ｍＲＮＡ 的表达;ＣｓＡ 对ＦａｓＬ和颗粒酶Ｂ的ｍ ＲＮＡ表达能产生抑制, 而对共刺激后其余免疫活化基因的表达无明显抑制。结论　ＣＤ２８ 共刺激信号通过提高多种Ｔ 淋巴细胞相关的免疫活化基因的表达水平, 而使免疫反应的活化、增殖和效应过程均得到增强;ＣｓＡ 对这一过程并非完全无效, 仍可能具有调节作用。     

淋巴细胞CD28通路活化后Th1/Th2细胞因子mRNA表达及CsA的抑制作用

采用ＲＴＰＣＲ方法，观察ＣＤ２８通路活化后淋巴细胞Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞因子ｍＲＮＡ表达水平及ＣｓＡ的抑制作用。取正常人外周血淋巴细胞，培养过程中分别给予抗ＣＤ３ｍＡｂ单独刺激或抗ＣＤ３ｍＡｂ＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ共同刺激。提取细胞总ＲＮＡ并逆转录成ｃＤＮＡ，对Ｔｈ１细胞因子（ＩＦＮγ、ＩＬ２）和Ｔｈ２细胞因子（ＩＬ４、ＩＬ１０）ｃＤＮＡ进行扩增。结果显示：共刺激信号可使Ｔｈ１细胞因子基因ｍＲＮＡ转录增加，且对ＣｓＡ的抑制作用产生抵抗；而对Ｔｈ２细胞因子则不产生明显影响。研究表明：ＣＤ２８共刺激信号主要增强淋巴细胞Ｔｈ１细胞因子基因ｍＲＮＡ表达，并可能参与其分化调节；这一活化通路不被ＣｓＡ阻断。     

CsA,MPA和RPM对CD28通路共刺激后淋巴细胞IL—4mRNA表达？…

目的 观察环孢素Ａ（ＣｓＡ）霉酚酸（ＭＰＡ）和雷帕霉素（ＲＰＭ）对ＣＤ２８通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ－４ｍＲＮＡ表达的影响。方法 以ＰＣＲ扩增方法获得了ＩＬ－４特异的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆至ＰＧＥＭ－３Ｚ载体中，以此作为探针对ＲＴ－ＰＣＲ产物进行杂交定量，比较三种免疫抑制剂对ＣＤ２８通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ－４ｍＲＮＡ表达的影响。结果 以抗ＣＤ３ｍＡｂ＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ共刺激后，发现淋巴细胞稳定地     

淋巴细胞CD28通路活化后Th1／Th2细胞因子mRNA表达及CsA的 …

采用ＲＴ－ＰＣＲ方法，观察ＣＤ２８通路活化后淋巴细胞Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞因子ｍＲＮＡ表达水平及ＣｓＡ的抑制作用。取正常人外周血淋巴细胞，培养过程中分别给予抗ＣＤ３ｍＡｂ单独刺激或抗ＣＤ３ｍＡｂ＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ共同刺激。提取细胞总ＲＮＡ并逆转录成ｃＤＮＡ，对Ｔｈ１细胞因子基因ｍＲＮＡ转录增加，且对ＣｓＡ的抑制作用产生抵抗；而对Ｔｈ２细胞因子则不产生明显影响。研究表明：ＣＤ２８共刺激信号主要增强淋巴细     

CsA、MPA和RPM对CD_(28)通路共刺激后淋巴细IL-4 mRNA表达的影响

目的　观察环孢素Ａ（ＣｓＡ） 、霉酚酸（ ＭＰＡ） 和雷帕霉素（ＲＰＭ） 对ＣＤ２８ 通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ４ ｍ ＲＮＡ 表达的影响。　方法　以ＰＣＲ 扩增方法获得ＩＬ４ 特异的ｃＤＮＡ 片段,并将其克隆至ＰＧＥＭ３Ｚ 载体中。以此作为探针对ＲＴＰＣＲ 产物进行杂交定量,比较三种免疫抑制剂对ＣＤ２８通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ４ ｍ ＲＮＡ 表达的影响。　结果　以抗ＣＤ３ ｍ Ａｂ ＋ 抗ＣＤ２８ ｍ Ａｂ 共刺激后,发现淋巴细胞稳定地表达ＩＬ４ ｍ ＲＮＡ;ＣｓＡ 和ＭＰＡ 未能抑制淋巴细胞ＩＬ４ ｍ ＲＮＡ 的表达,而ＲＰＭ则能产生显著抑制。　结论　ＲＰＭ 能抑制ＣＤ２８ 通路共刺激后ＩＬ４ ｍ ＲＮＡ 的表达,而ＣｓＡ 和ＭＰＡ对这一过程无抑制作用。     

肿瘤浸润性淋巴细胞结合偶联半乳糖抗CD3单克隆抗体的肝脏？…

探讨结合偶联半乳糖（Ｃａｌａｃｌｏｓｅ，Ｇａｌ）抗ＣＤ３单克隆抗体（Ａｎｔｉ－ＣＤ３－ＭｃＡｂ）肿瘤浸润性淋巴细胞（Ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＴＩＬ）肝脏靶向性。方法本组把大鼠抗小鼠ＣＤ单克隆抗体和半乳糖偶联在一起，与＾３Ｈ－ＴｄＲ标记ＴＩＬ结合后，从鼠尾静脉注入小鼠体内，在注射不同是时间眼眶取血０．５ｍｌ，然后处死，切除肝，脾，肺，     

肿瘤浸润性淋巴细胞结合偶联半乳糖抗CD3单抗趋肝性初探

目的 探讨结合偶联半乳糖（Ｇａｌ）的大鼠抗小鼠ＣＤ３单克隆抗体（Ｍｏｕｓｅ－ａｎｔｉ－ｒａｔ－ＣＤ３ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｎｔｉ－ＣＤ３－ＭｃＡｂ）肿瘤浸润性淋巴细胞的（ＴＩＬ）趋肝性，方法 本实验把小鼠抗小鼠ＣＤ３单克隆缺本和半乳糖（Ｇａｌ）偶联在一起，与＾３Ｈ－ＴｄＲ标记ＴＩＬ结合后，从尾静脉注入小鼠体内，分别在注射后不同时间抠眼取血０．５ｍｌ，然后处死，切除肝、脾、肺组织     

抗CD3McAb和IL—2培养的肝癌TIL的表型变化

目的 研究抗ＣＤ３单克隆抗体对肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的表型变化的影响。方法 应用间接免疫荧光法检测肝癌ＴＩＬ的ＣＤ３,ＣＤ４,ＣＤ８,Ｔａｃ表达。结果 初始分离的ＴＩＬ的ＣＤ＾＋３为主,经ＩＬ－２培养４周后,ＣＤ３,ＣＤ４,ＣＤ８,Ｔａｃ表达均升高,１μｇ／ｍｌ抗ＣＤ３ＭｃＡｂ与ＩＬ－２共同培养ＴＩＬ的ＣＤ３,ＣＤ４,ＣＤ８,Ｔａｃ的表达升高明显,尤以ＣＤ８,Ｔａｃ表达升高显著。结论抗ＣＤ３ＭｃＡｂ     

环孢素A对T细胞活化CD28通路的影响

Ｔ细胞需两种以上刺激信号才能充分活化。环孢素Ａ通过阻断ＣＤ３经通路而产生免疫抑制效应，本文研究ＣｓＡ对ＣＤ２８活化通路的影响。研究发现以抗ＣＤ２单抗和抗ＣＤ２８单抗共刺激后，淋巴细胞增殖比以ＣＤ３单抗单独刺激时显著增强，且对ＣｓＡ不敏感，ＩＤ５０较单独刺激时高４－５倍，研究表明．：ＣＤ２８通路能提供共刺激信号，使ＴＸ以分活化增殖，并且这一活化通路能对ＣｓＡ产生抵抗 。     

类风湿关节炎与骨性关节炎成纤维样滑膜细胞蛋白酪氨酸磷酸化状态的比较

目的 比较类风湿关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＲＡ）与骨性关节炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＯＡ）成纤维样滑膜细胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ,ＦＬＳ）蛋白酪氨酸磷酸化状态的差异。方法滑膜细胞原代培养,流式细胞仪鉴定滑膜细胞型别,提取蛋白进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ单向电泳和ＩＣＥ－ＰＡＧＥ双向电泳分离后,应用抗蛋白酪氨酸磷酸化抗体进行ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测。结果 滑膜细胞原代培养至第三代时,ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ｖｏｎ Ｗｉｌｌｉｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ阳性细胞比例小于１％,ＲＡ ＦＬＳ蛋白酪氨酸磷酸化程度是ＯＡ ＦＬＳ的４～６倍。结论 滑膜细胞原代培养至第三代时即可以获得型别均一的ＦＬＳ,ＲＡ ＦＬＳ酪氨酸磷酸化程度较ＯＡ ＦＬＳ明显增     

抗人大肠癌免疫毫微球的制备及其抗癌效果观察

目的 制备抗人大肠癌免疫毫微球,并观察其活性及疗效。方法 抗人大肠癌单克隆抗体ＳＣ３Ａｂ通过异型双功能交联剂ＳＰＤＰ与载５－Ｆｕ人血清白蛋白毫球〔ＨＳＡ（５－Ｆｕ－ＮＳ〕偶联,制成抗人大肠癌免疫毫微球ＳＣ３Ａｂ－ＨＳＡ（５－Ｆｕ）－ＮＳ。使用凝集试验及免疫荧光检 春活性,光镜和电镜下观察其与大肠癌细胞ＳＷ１１１６的特异性结合。ＭＴＴ法检测该免疫毫微球的体外杀伤性。于人大肠癌裸鼠模型上分别使用ＳＣ３Ａｂ－ＨＳＡ（５－Ｆｕ）－ＮＳ、ＨＳＡ（５－Ｆｕ）－ＮＳ及５－Ｆｕ,检测三乾的肿瘤抑制率。结果 ＳＣ３Ａｂ－ＨＳＡ（５－Ｆｕ）－ＮＳ具有单抗活性,能与大肠癌细胞特异结合;其体外杀伤ＳＷ１１１６细胞ＩＣ５０值为２４．６ｕｇ／ｍｌ,与ＨＳＡ（５－Ｆｕ）－ＮＳ（３４５．３ｕｇ／ｍｌ）及５－Ｆｕ（３２５．６ｕｇ／ｍｌ）相比,明     

mAbCD28及其Fab片段在移植免疫中的免疫抑制作用

目的 探讨ｍＡｂＣＤ２８及其Ｆａｂ片段在移植免疫中的免疫抑制作用。方法 在混合淋巴细胞培养和同种异体甲状旁腺移植模型中，以ｍＡｂＣＤ２８及其Ｆａｂ片段阻断Ｔ细胞共刺激通路，观察体外Ｔ细胞增殖情况以及体内移植物功能的恢复，存活时间以及在急性排斥反应过程中的损伤程度。结果 ｍＡｂＣＤ２８及共Ｆａｂ片段在体外要以抑制Ｔ细胞的增殖，在体内可以明显延长移植存活时间并减轻其在排斥过程中的损伤程度，结论 ｍＡｂ     

mAbCD28在同种异体移植中的免疫抑制作用

为探讨ＣＤ２８单克隆抗体在移植免疫中的作用，以混合淋巴细胞培养和大鼠同种异体甲状旁腺移植为模型，观察ｍＡｂＣＤ２８在体外和体内实验中的作用。结果：ｍＡｂＣＤ２８在体外可以抑制淋巴细胞的增殖，在体内可以延长甲状旁腺移植物的存活时间。本实验结果提示：ｍＡｂＣＤ２８可以阻断ＣＤ２８Ｂ７之间共刺激信号的传递，并在同种异体大鼠甲状旁腺移植中起到免疫抑制作用。     

环孢素A与抗B7-1单克隆抗体联用诱导T淋巴细胞耐受的研究

目的 探讨抗原特异性无能Ｔ淋巴细胞的诱导及其耐受特性。方法 在体外建立抗原递呈细胞－Ｔ淋巴细胞－Ｂ淋巴细胞反应系统,利用环孢素Ａ（ＣｓＡ）与抗Ｂ７－１单克隆抗体联用阻断Ｂ７：ＣＤ２８共刺激途径,采用＾１３Ｈ－ＴｄＲ法检测Ｔ淋巴细胞增殖,酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ法）测定Ｂ淋巴细胞分泌的抗体。结果 ＣｓＡ与抗Ｂ７－１单克隆抗体联用可诱致Ｔ淋巴细胞无能,无能Ｔ淋巴细胞不产生白细胞介素２（ＩＬ－２）;     

肿瘤浸润性淋巴细胞结合偶联半乳糖抗CD3单克隆抗体的肝脏靶向性研究

目的　探讨结合偶联半乳糖（ Ｇａｌａｃｔｏｓｅ , Ｇａｌ） 抗 Ｃ Ｄ３ 单克隆抗体（ Ａｎｔｉ Ｃ Ｄ３ Ｍｃ Ａｂ） 肿瘤浸润性淋巴细胞（ Ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ , Ｔ Ｉ Ｌ） 肝脏靶向性。 方法　本组把大鼠抗小鼠 Ｃ Ｄ 单克隆抗体和半乳糖偶联在一起,与３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 标记 Ｔ Ｉ Ｌ结合后,从鼠尾静脉注入小鼠体内,在注射不同时间眼眶取血０５ ｍｌ,然后处死,切除肝、脾、肺,分别称重后进行放射性强度测定。 结果　结果显示：注射 Ｇａｌａｎｔｉ Ｃ Ｄ３ Ｍｃ Ａｂ Ｔ Ｉ Ｌ小鼠肝脏比注射单纯 Ｔ Ｉ Ｌ 的小鼠肝脏具有较高的放射性（ Ｐ＜ ００１） ,且该放射性持续较长一段时间,而脾、肺、血液内放射性强度差异无显著意义（ Ｐ＞ ００５ , Ｐ＞ ００５ , Ｐ＞ ００５） 。结论　该结果提示： Ｇａｌａｎｔｉ Ｃ Ｄ３ Ｍｃ Ａｂ Ｔ Ｉ Ｌ较单纯 Ｔ Ｉ Ｌ具有更好的肝脏靶向性。     

结合半乳糖基抗CD3单抗的肿瘤浸润淋巴细胞对自体肝癌 …

目的 获取与半乳糖基抗ＣＤ３单抗结合的肿瘤浸润淋巴细胞（ＭｃＡｂ－ＴＩＬ）杀伤自体肝癌细胞的形态学证据，并进行杀伤机制探讨。方法 制备ＭｃＡｂ－ＴＩＬ，将其与Ｈ２２小鼠肝癌细胞共同孵育，于不同时间在倒置显微镜和透射电镜下观察。结果 ＭｃＡｂ－ＴＩＬ呈增殖活化状态，与靶细胞共同孵育０．５ｈ即可导致靶细胞严重损伤。杀伤靶继细胞后的ＭｃＡｂ－ＴＩＬ结构清晰、完整。凋亡与坏死形态学改变可共存于同一个被杀伤     

Heymann肾炎自身单克隆抗体C3—6制备和特征

为了进一步研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）的病理损伤机制，发展有效的治疗手段。方法 应用大鼠肾小管刷状缘抗原ＦＸＩＡ免疫近交系Ｌｅｗｉｓ大鼠，诱导了主动型ＨＮ模型。并用该ＨＮ大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，建立异种大鼠／小鼠之间的杂交瘤细胞株，产生了大鼠抗致病原Ｃ３－６自身单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。结果 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ显示，ＭｃＡｂＣ３－６识别分子量为３３００     

转移生长因子—β,碱性成纤维细胞生长因子诱导人成骨细胞表达血小板衍生生

目的 探讨转移生长因子（ＴＧＦ）－β、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对人成骨细胞血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）－ＢｍＲＮＡ表达的影响及其意义。方法 体外分离培养人成骨细胞。在体外培养的成骨细胞中分别加入１０、２０、４０、８０、１６０ｕｇ／Ｌ梯度浓度的ＰＤＧＦ－ＢＢ培养细胞２４ｈ,以摄取＾３Ｈ－ＴｄＲ为细胞增殖指标检测细胞增殖状况。以４ｕｇ／Ｌ的ＴＧＦ－β和１０ｕｇ／Ｌ的ｂＦＧＦ培养细胞２４ｈ,寡核苷酸探针检测细胞ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ的表达。结果 １０～１６０ｕｇ／Ｌ的ＰＤＧＦ－ＢＢ可促进成骨细胞增殖（Ｐ〈０．０５）。在普通培养条件下,细胞下表达ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ;当培养体系中加入ＴＧＦ－β和ｂＦＧＦ,可见ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ的表达。结论 ＰＤＧＦ－Ｂ基因的表达可能是骨组织生长的储备因素,ＴＧＦ－β和ｂＲＮ     

Heymann肾炎自身单克隆抗体C_（3－6）制备和特征

为了进一步研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）的病理损伤机制，发展有效的治疗手段。方法应用大鼠肾小管刷状缘抗原ＦＸＩＡ免疫近交系Ｌｅｗｉｓ大鼠，诱导了主动型ＨＮ模型。并用该ＨＮ大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，建立异种大鼠／小鼠之间的杂交瘤细胞株，产生了大鼠抗致病原Ｃ３－６自身单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。结果ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ显示，ＭｃＡｂＣ３－６识别分子量为３３００００的刷状缘抗原。ＭｃＡｂＣ３－６诱导的被动型ＨＮ大鼠免疫组化和免疫电镜表明该ＭｃＡｂＣ３－６在体内识别肾小球基底膜上皮足突表面抗原，并与之结合形成免疫沉积，其识别的抗原分布与文献报导ｇｐ３３０抗原分布相似。结论证明ＭｃＡｂＣ３－６是针对致病原ｇｐ３３０的自身ＭｃＡｂ。     

用抗人CD3、CD4、CD8单抗识别精液中的T淋巴细胞

用鼠抗人ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８单克隆抗体（ＭＣＡｂ）识别精液中的淋巴细胞，用羊抗氧荧光抗体（ＦＩＴＣ）作为第２抗体染色镜检，细胞膜呈草绿色荧光为阳性。结果表明，生育男性与精索静脉曲张及附睾结核的男性精液中Ｔ淋巴细胞检出率差异显著（Ｐ＜０．０１）。