槲皮素对BGC-823胃癌细胞caspase-3、Bcl-2表达影响与抑癌作用研究

目的:研究槲皮素(quercetin,QUE)抑制人胃癌BGC-823细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:采用四甲基噻唑氮蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测不同终浓度的QUE对BGC-823细胞增殖的影响及其细胞毒活性,流式细胞术(FCM)对不同浓度的QUE作用24 h的BGC-823细胞进行凋亡检测及其周期分析,用免疫组化法测定Bcl-2、caspase-3的表达率。结果:QUE对体外培养的BGC-823细胞具有明显的增殖抑制作用,在30~120μmol/L范围内可显著抑制BGC-823细胞增殖,且呈剂量-时间依赖性。FCM检测后,BGC-823细胞周期阻滞于S期,药物浓度呈正相关。经QUE处理后BGC-823细胞株caspase-3蛋白表达明显增加,Bcl-2蛋白表达降低。免疫组化检测表明,用药组Bcl-2蛋白的表达下降,caspase-3蛋白的表达率增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:QUE诱导BGC-823细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于S期,抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调Bcl-2、上调caspase-3蛋白的表达有关。     

槲皮素与顺铂对人膀胱癌裸鼠移植瘤抑瘤作用的研究

目的 观察槲皮素（Quercetin）与顺铂(Cisplatin, DDP)联用对膀胱癌 BIU-87 细胞的BALB/ c 裸鼠移植瘤生长的抑制作用,检测移植瘤中 Bcl-2, Caspase-3 和 PCNA 的表达水平及肿瘤细胞凋亡指数,探讨其作用机制。方法 建立膀胱癌细胞株BIU-87裸鼠移植瘤模型并随机分成4组：对照组（A组）、顺铂组（B组）、槲皮素组（C组）、槲皮素+ 顺铂组（D组）。治疗间观察移植瘤体积和裸鼠体重的变化,第15天后将移植瘤完整取出,称瘤重,计算抑瘤率,并用免疫组织化学技术检测各组移植瘤组织中Bcl-2, Caspase-3 和 PCNA 的表达,原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果 B 、C、 D各用药组肿瘤的生长受到明显抑制,瘤体质量明显低于A组,其抑瘤率分别为46.10 %、 39.17 %、 64.09 %, 联合用药组抗瘤作用进一步增强。Bcl-2和PCNA的表达在A组高于 B、C、D 组,Caspase-3 表达在A组明显低于 B、 C、 D 组,各用药组与对照组相比差异均有统计学意义( P < 0. 05);肿瘤细胞的凋亡指数在各用药组都比对照组明显提高,差异有统计学意义( P < 0. 05)。结论 槲皮素和顺铂均可明显抑制膀胱癌细胞在小鼠体内的生长作用,两药联合应用的抑瘤效果优于两药单用。其作用机制可能是通过调控肿瘤中 Bcl-2和 Caspase-3 的表达,也可能通过调节 PCNA 的表达,从而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。     

槲皮素止泻机制研究

目的研究番石榴叶提取物槲皮素止泻的作用机制。方法观察槲皮素对豚鼠离体回肠收缩活动的影响和对小鼠小肠推进功能的影响,记录其收缩力和推进距离;观察槲皮素对腹腔毛细血管通透性的抑制作用。结果槲皮素抑制离体回肠的收缩,抑制小肠的推进功能,抑制毛细血管的通透性。结论槲皮素能通过抑制肠道的蠕动、抑制肠道毛细血管的通透性来发挥其止泻作用,这也是番石榴叶止泻机制之一。     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的影响

[目的]观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的作用,初步探讨其可能的机制。[方法]采用体外细胞培养技术,用MTT法观察三叶青提取物RKO细胞的影响;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bid,Bax,Bcl-2和Bcl-XL的表达改变。[结果]三叶青提取物能显著地抑制人结肠癌细胞系RKO细胞的生长,并且具有浓度依赖性,且细胞有明显的凋亡特征性改变,并能下调Bcl-XL、上调Bid来诱导凋亡。[结论]三叶青提取物具有对人结肠癌细胞系RKO细胞抗增殖和诱导凋亡的作用,且呈剂量依赖性。     

索拉非尼对人RKO结肠癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的 研究索拉非尼对人RKO肠癌细胞增殖、周期及凋亡的影响.方法 将人肠癌RKO细胞给予不同浓度(0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L)的索拉非尼处理,MTT法检测索拉非尼对RKO细胞增殖的抑制作用,确定半数抑制浓度(IC50),设为实验组.对照组为二甲基亚砜处理.针对两组细胞,通过细胞克隆...     

槲皮素止泻机制研究

目的 研究番石榴叶提取物槲皮素止泻的作用机制。方法 观察槲皮素对豚鼠离体回肠收缩活动的影响和对小鼠小肠推进功能的影响，记录其收缩力和推进距离；观察槲皮素对腹腔毛细血管通透性的抑制作用。结果擗皮素抑制离体回肠的收缩，抑制小肠的推进功能，抑制毛细血管的通透性。结论 槲皮素能通过抑制肠道的蠕动、抑制肠道毛细血管的通透性来发挥其止泻作用，这也是番石榴叶止泻机制之一。     

槲皮素对糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:探究槲皮素对糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤的作用及机制.方法:将SD大鼠随机分为4组,即对照组、糖尿病组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组,每组8只.除对照组外,其他3组大鼠予高脂饲料喂养以及一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,剂量为40 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型.比较各组葡萄糖耐量试验的血糖水平.将INS-1细胞分...     

槲皮素和8-Br-cAMP对Eca-109细胞抑癌基因表达的影响

目的 :探讨槲皮素和 8 Br cAMP对Eca 1 0 9细胞抑癌基因表达的影响。方法 :将培养的Eca 1 0 9细胞随机分成 3组 :①Br组 ,加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 1 0 -5mol/L ;②Q组 ,加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;③C组 ,不加任何药物 ,只加入新培养液培养。 3组细胞同时培养 4 8h后 ,分别提取mRNA。将野生型 (wt)p5 3、p1 6和p2 1WAF1cDNA分别制备成生物素标记的探针 ,以mRNA斑点印迹阵列显示Eca 1 0 9细胞wtp5 3、p1 6和p2 1WAF1基因的表达。将 3组细胞分别滴片 ,同时进行分化染色 ,记数分化和增殖细胞比率。结果 :与C组相比 ,Br组和Q组wtp5 3、p1 6和p2 1WAF1mRNA信号增强 ,P <0 .0 1 ;Br组和Q组分化细胞比率显著提高 ,P <0 .0 1。结论 :槲皮素和 8 Br cAMP皆可通过上调wtp5 3、p1 6和p2 1WAF1基因的表达 ,抑制Eca 1 0 9细胞增殖 ,诱导Eca 1 0 9细胞分化     

槲皮素对结肠癌细胞SW480体外侵袭的影响

目的观察槲皮素处理后人结肠癌SW480细胞细胞形态和结构的变化;观察槲皮素对体外培养的人结肠癌SW480细胞的生长的作用;观测槲皮素对细胞体外侵袭、黏附和运动能力的影响。方法应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态结构的变化;观测不同剂量和时间情况下槲皮素对SW480细胞的作用。采用人工重组基底膜技术观察药物对细胞侵袭、运动和黏附的影响。结果经槲皮素处理后SW480细胞的数量减少。部分细胞的体积缩小,形状不规则,细胞浆空泡形成,细胞核浓缩,染色质凝集。透射电镜观察SW480细胞超微结构的变化显示：内质网高度肿胀,核糖体减少,染色质边集,细胞核固缩,还可见凋亡小体。槲皮素处理SW480细胞后细胞数量减少并呈时间和剂量依赖性。槲皮素处理后SW480细胞的侵袭、运动及黏附能力下降,并呈时间和剂量依赖性。结论槲皮素对人结肠癌SW480细胞的生长有抑制作用,并能诱导其凋亡;槲皮素抑制SW480细胞的侵袭、运动和黏附,是在多个层面抑制肿瘤的侵袭和转移。     

槲皮素精氨酸复合物的制备研究

目的：制备水溶性槲皮素精氨酸复合物（QAC），拓宽槲皮素的给药途径。方法：取一定量槲皮素（QUE）和L－精氨酸在乙醇中回流制备QAC，通过胶束纸色谱，紫外吸收光谱、红外吸收光谱和X射线衍射图谱对QAC进行结构鉴定。结果：摩尔比为1：1的QUE和L－精氨酸形成了QAC，并且QAC常温下稳定存在。与QUE比较，QAC的水溶性明显增大，仍然对抑制细胞生长具有较强的活性。结论：该制备方法简捷实用，有助于提高QUE的生物利用度。     

p53和Gadd45a蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床病理学意义

目的探讨胰腺浸润性导管癌(IDC)组织中p53和Gadd45a蛋白表达及临床病理学意义.方法采用免疫组织化学方法检测59例胰腺IDC标本中p53和Gadd45a蛋白的表达情况,分析其与临床病理学参数之间的关系.结果p53蛋白表达阳性率为67.8%(40/59),Gadd45a蛋白为42.4%(25/59).＜65岁胰腺IDC患者的p53蛋白表达阳性率明显高于≥65岁者(x2=4.711,P=0.030),Gadd45a蛋白表达则与患者年龄无关.不同组织学分化程度和不同TNM分期癌组织中p53蛋白表达差异无显著性;不同TNM分期癌组织中Gadd45a蛋白表达差异无显著性,但不同组织学分化程度癌组织中则差异有显著性(x2=10.052,P=0.007).p53( )组和Gadd45a( )组中位生存时间分别短于p53(-)组和Gadd45a(-)组(x2=0.09,P=0.764;x2=0.14,P=0.704).结论p53和Gadd45a在胰腺癌组织中均有较高表达.p53和Gadd45a蛋白的过表达可能与胰腺癌的恶性生物学行为有关.两者单独或联合表达与胰腺癌患者的预后无关.     

Gadd45a和p53在乳腺癌中的表达及临床病理意义

目的:探讨Gadd45a和p53在乳腺癌中的表达情况及其与临床病理参数和预后的关系?方法:采用免疫组化法检测78例乳腺癌组织及其癌旁正常组织中Gadd45a和p53的表达?结果:Gadd45a在乳腺癌组织中的阳性表达率为38.4%,明显低于正常乳腺组织,p53在乳腺癌组织中的阳性表达率为65.4%,明显高于正常乳腺组织,差异均具有统计意义 (P < 0.05);Gadd45a在乳腺癌组织学Ⅰ级组?Ⅱ级组?Ⅲ级组的阳性表达率依次下降,差异均有统计学意义(P < 0.05);p53在伴有淋巴结转移组中的阳性表达率高于无淋巴结转移组,差异均有统计意义(P < 0.05);p53表达与Gadd45a表达呈负相关(P < 0.05);Gadd45a阳性组的生存期长于阴性组,生存率高于阴性组,存在统计学差异;p53阳性组的生存期短于阴性组,生存率低于阴性组,存在统计学差异(P < 0.05);p53(+)Gadd45a(-)组(即阳性组)中位生存时间短于阴性组,生存率低于阴性组?结论:Gadd45a和p53蛋白的检测可作为乳腺癌恶性程度的检测指标;p53的表达与乳腺癌的转移相关,Gadd45a的表达与乳腺癌的分化分级相关;p53高表达及Gadd45a低表达与乳腺癌的不良预后相关;p53(+)Gadd45a(-)表型与乳腺癌的不良预后相关;Gadd45a蛋白有望成为乳腺癌治疗的新的靶点?     

Gadd45a表达质粒的构建及在人类T细胞中的表达

目的:构建Gadd45a表达质粒,并诱导该质粒在人类T细胞中的表达.方法:采用反转录PCR法从人胚胎干细胞中扩增Gadd45a的蛋白质编码框,将之克隆至pcDNA3.1载体后,利用电穿孔方法将构建好的表达质粒pcDNA3.1-Gadd45a和空白质粒pcDNA3.1分别转染至Jurkat细胞或正常人CD4+T细胞,分别...     

儿童睾丸肿瘤P53、端粒酶的表达与凋亡的相关研究

目的:探讨儿童睾丸肿瘤P53、端粒酶的表达及其与凋亡之间的关系.方法:通过免疫组化以及TUNEL法分别对35例儿童睾丸肿瘤组织进行P53、hTERT及凋亡细胞的检测.结果:在畸胎瘤、卵黄囊瘤、胚胎癌中,P53的表达指数(P53-LI)、hTERT阳性信号面密度(Sv)随着临床分型和恶性度的升高而增大,而凋亡指数(AI)同样随之增高,统计分析结果提示P53、hTERT以及AI与临床分型密切相关(P值均＜0.01).而P53、hTERT与AI呈正相关(P＜0.01).结论:儿童睾丸生殖细胞肿瘤的凋亡是一个多基因参与的复杂过程,P53、端粒酶的表达与肿瘤病理恶性程度及凋亡指数呈正比.     

双氢青蒿素对MRL/lprSLE小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响研究

目的探讨双氢青蒿素对MRL/lpr系统性红斑狼疮（SLE）小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响。方法从MRL/lprSLE小鼠脾脏获取CD4+T细胞,进行体外细胞双氢青蒿素干预培养。通过CCK-8实验检测双氢青蒿素的细胞毒性,高效液相色谱技术检测CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平,RT-PCR和Westernblot检测CD4+T细胞DNA甲基化转移酶1（DNMT1）、生长阻滞和DNA损伤基因a（Gadd45a）mRNA和蛋白表达水平。结果双氢青蒿素对SLE小鼠CD4+T的半抑制浓度（IC50）为62滋mol/L。双氢青蒿素可抑制CD4+T细胞增殖,且随着浓度的增加,对CD4+T细胞增殖的抑制作用增强。双氢青蒿素干预后,CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平显著升高;且双氢青蒿素浓度越高,基因组DNA甲基化水平越高。双氢青蒿素干预培养后,SLE小鼠CD4+T细胞DNMT1mRNA和蛋白水平均明显上调,而Gadd45amRNA和蛋白水平均明显下调,其作用与浓度有关。结论双氢青蒿素可能通过DNA甲基化调控机制发挥治疗SLE的作用。     

Gadd45a基因对小鼠造血干细胞功能的影响

目的 Gadd45a基因对小鼠造血干细胞功能的影响.方法 流式细胞仪分选小鼠骨髓造血干细胞、体外单克隆培养,竞争性骨髓移植,放射线照射观察生存曲线.结果 Gadd45a基因缺失的小鼠造血干细胞克隆形成能力增强,短期造血重建能力无差异,8.5Gy放射线照射后生存情况无差异.结论 Gadd45a基因对小鼠造血干细胞功能起重要作用.     

野生型P53抑制肺癌细胞生长的研究

目的：观察外源性野生型P53对有P53基因突变的肺癌细胞系的生长抑制作用，研究P53调控细胞生长分化的作用。方法：以PCR、免疫组化、SSCP方法筛选P53突变型细胞系，在脂质体介导下转染野生型：P53质粒pC53-SN3，并以空质粒pCMV-neo做对照。用G418筛选稳定表达的细胞克隆，以生长曲线和集落形成实验观察所转染的野生型P53质粒对细胞生长分化的影响。结果：经筛选发现Calu-6细胞系为P53第六外显子突变株，204处密码由谷氨酸突变为天冬氨酸，经野生型P53质粒pC53-SN3转染后，发现细胞生长明显减慢，而转染空质粒的Calu-6细胞与未转染的细胞生长无差异，同时发现pC53-SN3转染后集落形成抑制率达90．6％。结论：表明野生型：P53基因可对肿瘤细胞细胞周期进行负调控，抑制细胞生长。     

microRNA-34a与非小细胞肺癌的关系及其可能调节机制

目的探讨miRNA-34a在非小细胞肺癌发生中的作用及其可能机制。方法选取56例经病理诊断确诊为非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁组织,RT-PCR法测定miRNA-34a及c-myc mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织的P53蛋白及c-myc蛋白的表达水平。结果癌组织的miRNA-34a的表达水平低于癌旁组织,c-myc mRNA表达及c-myc、P53蛋白表达阳性率高于癌旁组织（P〈0.05）。miRNA-34a与c-myc mRNA表达水平呈负相关关系（P〈0.05）。结论 miRNA-34a对非小细胞肺癌的发生具有一定的调节作用,可能是非小细胞肺癌发生的重要环节,miRNA-34a主要是通过与c-myc的结合而发挥其调节作用。     

食管癌和癌旁组织 P16 和 P53 的变化

采用免疫组织化学方法分析食管癌组织和癌旁组织中肿瘤抑制基因Ｐ１６的变化，并与肿瘤抑制基因Ｐ５３蛋白聚集的变化进行比较研究。结果：２２例食管鳞癌组织中，３例出现Ｐ１６蛋白的免疫阳性反应（１４％），此３例均为高分化鳞癌。在３例Ｐ１６免疫阳性组织中，２例同时出现Ｐ５３蛋白聚集的改变。２２例手术切除癌标本中的各级癌前病变均未出现Ｐ１６阳性反应。癌组织和癌旁上皮各级病变均出现较高的Ｐ５３蛋白改变。提示：肿瘤抑制基因Ｐ１６的变化可能主要发生在食管癌变的终末阶段，Ｐ１６与Ｐ５３有较高的一致性改变。     

槲皮素的癌化学预防作用研究进展

化学预防是指用化学药物抑制肿瘤的发生或使肿瘤细胞分化逆转,对近5年来槲皮素的癌化学预防作用及其机制作简要综述。