MTA3在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨肝细胞癌组织及肝癌细胞中MTA3的表达情况及其对肝癌细胞增殖的影响。方法采集临床肝细胞癌样本,应用定量PCR和免疫组织化学方法,检测MTA3的表达,同时在多种人肝癌细胞株中应用定量PCR检测MTA3的表达;使用MTA3的干扰siRNA转染人肝癌细胞株HepG2和Huh7,分别采用CCK-8实验和克隆形成实验检测下调MTA3表达对人肝癌细胞增殖的影响。结果 MTA3在肝细胞癌组织中表达水平显著升高(P<0.05),在肝细胞癌组织中其阳性表达率显著高于癌旁非癌组织(P<0.01),人肝癌细胞株HepG2和Huh7中的MTA3表达水平显著高于正常肝细胞株L02(P<0.01),构建两个MTA3的si RNA干扰效率均在50%左右,转染siRNA-MTA3后,人肝癌细胞株HepG2和Huh7的增殖受到显著抑制(P<0.05)。结论 MTA3作为促癌基因参与了肝细胞癌的发生,成功构建了MTA3的干扰siRNA,干扰MTA3能有效抑制肝癌细胞的增殖,MTA3有望成为肝细胞癌靶向治疗的新靶点。     

NCX1在肝癌中的表达、调控Ca2+浓度及其对肝癌细胞增殖和迁移的影响

背景与目的：钠钙交换体亚型1(Na+-Ca2+ exchanger isoform 1,NCX1)可通过对细胞Ca2+平衡的调节参与癌症的发生,但是否参与肝癌的发生、发展及其作用机制的研究鲜见报道。该研究旨在探讨NCX1在肝癌中的表达变化,对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移能力的影响及其可能的机制。方法：运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测NCX1 mRNA及蛋白在人正常肝细胞株LO2、肝癌细胞株HepG2、人正常肝组织和原发性肝细胞癌患者癌组织中的表达。采用共聚焦显微镜技术观察NCX1在细胞外无钠溶液刺激活化后,对正常肝细胞LO2及肝癌细胞HepG2中钙离子浓度的调控。采用MTT法、细胞划痕实验检测NCXl特异性的阻断剂KB-R7943对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移的影响。结果：在肝癌细胞株HepG2和肝细胞癌组织中,NCX1 mRNA和蛋白质的表达均高于正常肝细胞株LO2和正常肝组织(P<0.05)。共聚焦显微镜实验发现,细胞外无钠溶液可以激活细胞内钙升高,正常肝细胞LO2及肝癌细胞HepG2细胞内钙离子浓度均增高,但肝癌细胞HepG2细胞内钙离子增高的幅值明显高于LO2细胞(P<0.05),NCXl特异性阻断剂KB-R7943可以显著阻断胞外无钠诱导的细胞内钙离子升高(P<0.05)。KB-R7943可以显著抑制肝癌细胞HepG2的增殖及迁移(P<0.05)。结论：原发性肝癌中NCX1的表达量上调,NCX1的活化可以调节细胞内钙变化,抑制NCX1的活性可以进一步抑制肝癌细胞的增殖和迁移。这提示NCX1可能在原发性肝癌的发生、发展中起了重要的作用。     

肝细胞增生异常的形态学研究

在人的肝癌发生过程中,何种细胞是恶性前期细胞,尚不清楚。Anthony 等将肝细胞的一种可能的恶性前期病变称为肝细胞增生异常dysplasia,其特征是肝细胞增大,核多形性伴染色质增多及多核。本文作者用显微测量方法,研究了400例正常、慢性活动性肝炎、肝硬变和肝细胞癌的活检或尸检标本,将增生异常的肝细胞分为两型,即大增生异常细     

肝、胆（050906～050948）

重组可溶性PD-1免疫抑制性受体增强抗小鼠H22肝癌的免疫效应；人肝癌原发性耐药细胞亚系的建立及耐药机制的初步探讨；反义寡核苷酸抑制survivin基因表达及肝癌细胞生长的研究；人肝癌及癌旁组织中Smad4、Smad7、mRNA和蛋白表达研究；erbB家族在肝细胞癌中的表达及临床意义；板蓝根组酸对耐药人肝癌原位移植瘤的耐药逆转研究；     

GPC3蛋白在肝细胞肝癌及肝内胆管细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨GPC3蛋白在肝细胞肝癌、肝内胆管细胞癌及结节性肝硬化组织中的表达差异及临床意义。方法对50例原发性肝细胞肝癌、20例肝内胆管细胞癌及22例结节性肝硬化组织采用免疫组织化学法进行GPC3蛋白表达情况检测,比较分析其在三者中的表达差异。结果 GPC3蛋白特异性表达于肝细胞肝癌,与其在肝内胆管细胞癌及结节样肝硬化组织中的表达相比,差异有统计学意义(均P0.05)。GPC3蛋白的在肝细胞肝癌中表达与患者的性别、年龄、肝功能分级、是否合并肝硬化、肿瘤直径、肿瘤个数、血管侵犯、TNM分期、HBs Ag阳性等方面的差异均无统计学意义(均P0.05)。结论 GPC3高表达于肝细胞肝癌组织中,可能参与肝癌的发生发展。     

Pokemon基因在肝癌细胞中的表达及意义

目的探讨Pokemon在肝癌细胞中的表达及意义,进一步阐明肝细胞癌发生发展过程中的分子机制。方法选择肝癌细胞HepG2、SMMC7721和人胚胎肝细胞LO2细胞株,应用Western blot法检测Pokemon在不同细胞中的表达;应用基因沉默方法抑制Pokemon在肝癌细胞中的表达,应用流式细胞仪观察肝癌细胞的凋亡情况。结果Pokemon在肝癌细胞HepG2、SMMC7721中的表达明显高于人胚胎肝细胞LO2;siRNA抑制Pokemon的表达后,肝癌细胞凋亡明显增加。结论原癌基因Pokemon在肝癌细胞中表达明显增高,Pokemon可能在肝癌的发生、发展过程中起重要作用。     

肝细胞癌中Hep Par 1、p53、HBsAg表达差异与细胞形态计量学变化的关系

目的 探讨原发性肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中肝细胞抗原（Hep Par1)，p53，乙型肝炎表面抗原（HBsAg)的表达差异及与细胞形态学变化的相关性。方法 用免疫组织化学方法（两步法－EnVision System-HRP)检测10对肝癌和癌旁组织，3例正常肝组织中Hep Par1,p53,HBsAg等蛋白的表达差异；用HPIAS－1000图像分析系统测量实质细胞的总面积（以细胞直径代替）和核质比。结果 1）Hep Par 1:正常肝组织中肝细胞中度表达，癌旁肝组织中肝细胞为弥漫性高表达，肝癌细胞中阳性率为24．53％（13／53）；2）p53：正常肝组织和癌旁肝组织中均呈阴性；肝癌组织，在被检的10例样品中肝癌细胞均为阳性；3）HBsAg:正常肝组织中肝细胞呈阴性，癌旁肝组织中肝细胞为片状弥漫性或散在性高表达，肝癌组织，在被检的10例样品中肝癌细胞仅有1例呈阳性；4）各种组织中实质细胞的平均直径为癌旁肝细胞＞正常肝细胞＞肝细胞癌细胞；5）正常肝细胞和癌旁肝细胞的核质比无差别（P＞0．05），但均明显＜肝细胞癌细胞（P＜0．01和P＜0．01）。结论 肝细胞抗原（Hep Par 1)在分化较高的肝细胞癌细胞中有不同程度的表达，可作为鉴别原发性肝细胞癌细胞来源的标志；原发性肝细胞癌细胞核质比明显＞正常肝细胞和癌旁肝细胞（P＜0.01和P＜0.01)。     

PTEN在肝癌中表达缺失的意义及其体外转染对人肝癌细胞系的作用

目的探讨PTEN表达与肝细胞癌发生、发展的关系,观察体外转染外源性PTEN对肝癌细胞的生长、细胞周期和超微结构的影响。方法检测PTEN在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达缺失情况,以观察该基因与肝癌病理分级、转移和预后的关系。将含PTEN的反转录病毒载体及空载体转入人肝癌细胞系HHCC,观察转染前后细胞的生长、超微结构、细胞周期及裸鼠致瘤能力改变情况。结果肝癌中PTEN表达缺失率为30.16%(19/63),显著高于正常肝组织0(0/8)和肝硬化组织7.15%(1/14)。随着恶性程度的增高,PTEN表达缺失率随之增加。PTEN表达缺失与转移及预后显著相关。PTEN在人肝癌细胞系hHCC中也不表达。将抑癌基因PTEN转入后,hH-CC细胞生长明显受到抑制,细胞超微结构失去部分恶性表型特征,细胞周期由G1→S0期受抑制,并出现凋亡峰,体外成瘤能力下降。结论抑癌基因PTEN失表达多见于肝细胞肝癌进展期,并与肝细胞肝癌分化程度、是否转移以及临床预后相关;体外PTEN的转入可以明显地抑制HHCC生长、体外成瘤能力。     

肝细胞癌易患人群的性别差异与MyD88依赖的IL-6产生有关

肝细胞癌是最为常见的原发性肝癌,一般是由一些慢性肝病发展而来,如乙肝(HBV)、丙肝(HCV)的感染,酒精性肝病,血色素沉着病,脂肪肝等,HCV的感染可能使肝细胞癌高发,但在患者中也不过占到7%。而肝细胞癌主要发生于男性,男性发病是女性的3~5倍。利用化学致癌物二乙基亚硝氨(diethylnitrosamine,DEN)诱导小鼠肝细胞癌模型,发现也存在性别相关的发病规律,即在雄性小鼠中肝细胞癌多发。给予雄性小鼠雌性激素,能够有效地抑制DEN诱导的小鼠肝细胞癌的发生。但是这种肝细胞癌的发生与性别之间关系的机制尚未知。炎症是肝细胞癌发生的一个重要因…     

肝癌微环境中CD4~+CD25~+调节性T细胞与T细胞免疫的关系

目的:探讨肝细胞癌组织中CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 regulartory Tcell,Treg)与肿瘤微环境T细胞免疫的关系。方法:对52例肝细胞癌组织和癌旁组织用CD4、CD25双重酶标免疫组化染色和用CD8 EnVision法染色,对癌组织中Treg细胞和CD4 T、CD8 T、CD4 T/CD8 T比值进行相关性分析。结果:正常肝脏组织中未发现Treg细胞,肝癌和癌旁组织中Treg细胞单个高倍视野平均数分别为(7.6±2.84)、(5.2±1.67),两组比较有显著差异(P<0.01);肝癌及癌旁组织中CD4 T细胞单个高倍视野平均数分别为(18.2±3.57)、(25.9±3.36),两组比较有显著差异(P<0.01);肝癌及癌旁组织中CD8 T细胞单个高倍视野平均数分别为(49.9±6.61)、(49.5±6.43),两组比较无明显差异;肝癌及癌旁组织中CD4 T/CD8 T比值分别为(0.37±0.08)、(0.53±0.09),两组比较有显著差异(P<0.01);肝癌组织中Treg细胞的数量与其浸润性CD4 T淋巴细胞的数量及CD4 T/CD8 T比值呈显著负相关(P<0.01),而与浸润性CD8 T淋巴细胞的数量分布无明显相关性。结论∶Treg细胞在肝癌微环境中可能通过抑制CD4 T淋巴细胞的增殖来抑制肿瘤局部免疫。     

FTEN在肝癌中表达缺失的意义及其体外转染对人肝癌细胞系的作用

目的探讨PTEN表达与肝细胞癌发生、发展的关系,观察体外转染外源性PTEN对肝癌细胞的生长、细胞周期和超微结构的影响.方法检测PTEN在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达缺失情况,以观察该基因与肝癌病理分级、转移和预后的关系.将含PTEN的反转录病毒载体及空载体转入人肝癌细胞系HHCC,观察转染前后细胞的生长、超微结构、细胞周期及裸鼠致瘤能力改变情况.结果肝癌中PTEN表达缺失率为30.16%(19/63),显著高于正常肝组织0(0/8)和肝硬化组织7.15%(1/14).随着恶性程度的增高,PTEN表达缺失率随之增加.PTEN表达缺失与转移及预后显著相关.PTEN在人肝癌细胞系hHCC中也不表达.将抑癌基因PTEN转入后,hH-CC细胞生长明显受到抑制,细胞超微结构失去部分恶性表型特征,细胞周期由G1→S0期受抑制,并出现凋亡峰,体外成瘤能力下降.结论抑癌基因PTEN失表达多见于肝细胞肝癌进展期,并与肝细胞肝癌分化程度、是否转移以及临床预后相关;体外PTEN的转入可以明显地抑制HHCC生长、体外成瘤能力.     

肝、胆

腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞囊苗对HepG2．5肝癌细胞的免疫效应,装载mIFN-Y基因的溶囊腺病毒CNHK200的抗肝癌活性,NET-1蛋白在肝癌中的表达友意义,骨桥蛋白与MMP-9在肝细胞癌中的表达及其临床意义,肝细胞癌组织中β-Catenin的表达与第三外显子突变的关系     

肝癌组织中Raf激酶抑制蛋白和磷酸化Raf 激酶抑制蛋白的表达及其意义

 目的探讨Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitor protein,RKIP）和磷酸化Raf激酶抑制蛋白（Phosphorylated raf kinase inhibitor protein,P-RKIP）在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法应用组织芯片和免疫组织化学方法检测RKIP蛋白和磷酸化的RKIP蛋白在72例肝细胞癌组织、50例癌旁肝组织及16例正常肝组织中的表达,并分析RKIP的表达与肝细胞癌临床病理学特征的关系。采用Western blot方法检测36例肝细胞癌、36例癌旁组织及12例正常肝组织中RKIP蛋白和磷酸化的RKIP蛋白的表达。结果免疫组化结果显示肝细胞癌、癌旁及正常肝组织中RKIP的阳性率分别为22.2％、86％、93.8％,P-RKIP为29.2％、84％、93.8％;肝癌组织中RKIP和P-RKIP的表达显著低于癌旁及正常肝组织,差异有统计学意义（P<0.05）,而且肝癌组织和癌旁肝组织中两者蛋白的表达均呈显著正相关（P=0.000,P=0.005）;RKIP和P-RKIP的表达均与肝癌有无肝内或淋巴结转移及分化程度有关（P<0.05）。Western blot结果显示肝癌组织中RKIP和P-RKIP的表达显著低于癌旁及正常肝组织。结论RKIP和 P-RKIP表达的减少或缺失与肝癌的发生发展、侵袭转移密切相关。     

TC21/R-Ras 2在肝癌中的表达、亚细胞定位及意义

目的:探讨TC21基因在肝癌细胞、肝癌及癌旁组织中的表达、亚细胞定位及意义。方法:用RT-PCR检测TC 21在肝癌细胞系及人肝癌及癌旁组织中mRNA水平的表达,用免疫组化及Western印迹检测TC21蛋白在肝癌相关组织中的表达差异,用组织芯片技术结合免疫组化检测TC21蛋白的亚细胞定位。结果:RT-PCR检测结果表明TC21 mRNA在SMMC-7721、BEL-7402、Huh-7、Hep3B、HepG2、MHCC-97L、MHCC-LM3 7个肝癌细胞系及L-02和Chang liver 2株永生化人肝细胞系、7对肝癌及对应癌旁肝组织中均有较高表达;Western印迹结果表明上述细胞系中TC21蛋白表达与mRNA表达一致,TC21在4对肝癌及癌旁组织中均呈较高水平的表达;免疫组化检测结果表明TC21在人原发性肝癌、癌旁组织、硬化肝组织与正常肝组织中的表达阳性率分别为84.2%、77.2%、41.7%、0%,肝癌与肝硬化、正常肝相比显著高表达(P<0.05,P<0.01),与癌旁组织比无统计学意义(P>0.05);统计学分析结果表明TC21蛋白表达与肿瘤大小呈正相关(P<0.05),与是否肝硬化呈负相关(P<0.05);肝癌组织中TC21主要定位于肝癌细胞核,部分定位于胞质,膜定位不明显,TC21蛋白在肝癌细胞中的核定位显著高于癌旁肝细胞(P<0.001)。结论:本研究首次揭示TC21蛋白在肝癌组织中的高表达及核定位预示其在肝细胞恶性转化及肝癌发生发展中发挥重要作用。     

CD37基因在不同肿瘤细胞中的表达

目的了解CD37基因在正常组织、肝细胞、肝癌组织和各种肿瘤细胞中的表达情况。方法运用RT-PCR方法检测睾丸组织、肝癌组织、癌旁组织和11种肿瘤细胞株和正常肝细胞中CD37的表达。结果CD37在MCF-7、HeLa、MEL-ED1、Huh7、HLE、NCI-H446、BGC-823、SK-N-SH、LS-174-T、CNE、Eca-109和L-02细胞株中均不表达;而在睾丸组织、肝癌组织、癌旁组织、Burkitt's淋巴瘤细胞Naml-wa和肝癌细胞HepG2中均表达。结论CD37的表达可能与某些肿瘤如Burkitt's淋巴瘤和肝细胞癌的发生有关。     

肝癌组织SOD、PCNA免疫组化定位观察

目的：探讨肝细胞癌与超氧化物歧化酶（SOD）及增殖细胞核抗原（PCNA）的关系。方法：对23例发性肝细胞性肝癌组织进行SOD及PCNA免疫组织化学研究（SP法）。结果：肝癌细胞的SOD标记阳性率和阳性程度高于癌旁肝组织及正常肝组织（P＜0．05）；PCNA标记阳性率和阳性程度明显高于癌旁肝组织及正常肝组织（P＜0．01），并且随癌细胞分化程度的降低而增强（P＜0．05）。结论 降低肝癌细胞中SOD的活性是抑制肝癌细胞生长的有效方法。     

CYP1A1、β-catenin基因多态性及HBx与肝癌的关系

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是我国及亚非地区较常见的恶性肿瘤。目前对导致肝癌发生的具体病因还不是很清楚，致癌物的大量接触是肝癌发生的一个重要原因，但是在同样的条件下有的人患病，有的人不患病，这提示遗传易感性在其中起着重要的作用。分子流行病学研究表明乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是高发地区肝细胞癌发生的基本病因。HBV长期感染，经常发生病毒基因整合到肝细胞的DNA中。HBV4个基因中的X基因被认为是潜在的致癌基因。此外，CYP1A1（cytochrome P4501A1，CYP1A1）在化学物诱导人类癌症过程中扮演着重要角色嘲。β-catenin基因在肝癌组织中有较高表达。因此近年来人们把目光转向了用分子生物学技术研究肿瘤易感基因与肝癌的关系。本文对近年来有关CYP1A1、β-catenin基因多态性及HBx与肝癌关系的研究作一综述。     

肝癌组织中人白细胞共同抗原和凋亡相关基因Fas、bcl-2及bax的表达及意义

目的:探讨人白细胞抗原(HLADR抗原)和凋亡相关基因Fas、bcl2及bax在肝癌中表达的意义。方法:应用免疫组化方法研究40例肝癌组织中HLADR、Fas、bcl2及bax的表达。结果:40例肝细胞癌中18例HLADR阳性,阳性率45%,癌旁肝细胞阴性。6例癌细胞Fas阳性,阳性率为15%,癌旁细胞20例阳性,阳性率500%。癌细胞bcl2阳性6例,阳性率为15%,8例癌旁细胞阳性,阳性率为20%。癌细胞bax阳性8例,阳性率为20%,癌旁细胞25例阳性,阳性率为625%。结论:提示HLADR异常表达与肝细胞癌变有关;Fas可能不是引起肝癌细胞凋亡的主要途径;bcl2和bax的变化可能影响肝细胞的凋亡状态,在肝癌发生中可能起一定作用。     

肠道微生物稳态与肝癌关系的研究进展

[摘要] 肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是全球发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一。菌群平衡对于维持肠道和全身态的代谢与免疫非常重要,肠道微生物与肝细胞癌的形成密切相关。肠漏、菌群失衡、微生物代谢物及免疫抑制是导致肝细胞癌形成的主要机制。肠漏及微生物相关模式分子-Toll样受体促进肝细胞癌的发生发展;菌群失衡及菌群移位除了能引起晚期肝病的感染性并发症之外,还能使肝脏中产生慢性炎症;肠道菌群及代谢物还可影响细胞的分化;肠道菌群及代谢产物介导的免疫抑制也可促进肝细胞癌的发生。可通过靶向肠道菌群,如使用抗生素杀灭有害菌群,使用益生菌调节菌群平衡,使用药物改善肠漏,使用药物拮抗TLR等策略来抑制肝细胞癌的发生。肠道微生物稳态与肝癌的研究进展为有效预防和治疗肝癌提出了新的策略。     

人体肝癌和癌周宿主肝甲种胎儿蛋白免疫酶标记定位及其形态学的观察

近年来,国内外一些学者为了探索甲胎蛋白的细胞来源,及其与肝癌发生发展的关系,采用各种免疫标记技术对甲胎蛋白在动物引癌过程、胚胎肝和人体肝癌细胞中的分布、标记细胞的形态进行了光镜和电镜的观察。本工作使用间接免疫酶标抗体方法,对22例人体原发性肝细胞癌手术切除的标本,进行了有关甲胎蛋白在癌组织,尤其是在癌周宿主肝组织中的分布及其在光学显微镜下的形态学观察。