临床分离大肠埃希菌整合子介导的耐药机制分析

目的了解临床分离大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药特征及整合子在大肠埃希菌中的分布情况,探讨其与大肠埃希菌耐药性之间的相关性。方法收集温州地区2002年-2010年分离的大肠埃希菌,采用纸片扩散法进行药敏试验;PCR扩增3类整合子整合酶基因和整合子可变区,并测序分析整合子携带的耐药基因盒类型及att C位点。结果共收集524株大肠埃希菌,均为耐药菌,对3类或3类以上抗菌药物不敏感的多重耐药菌(MDR)占60.8%;Ⅰ类整合子的检出率为53.8%(28/524),所检出的整合子可变区分为6种类型,att C位点有16种类型,dfr A17-aad A5基因盒检出率最高(70.2%);Ⅱ类整合子阳性仅有3株;Ⅲ类整合子未检测到。结论大肠埃希菌整体耐药情况严重;Ⅰ类整合子在临床分离大肠埃希菌中分布广泛,并与大肠埃希菌的耐药性关系密切,主要介导对氨基糖苷类、磺胺类等多种抗菌药物的耐药性。     

尿液分离大肠埃希菌Ⅰ类整合子分子特征及其与耐药性的关系

目的 了解尿液分离大肠埃希菌中Ⅰ类整合子及相关基因盒的分布,分析整合子与细菌耐药性的关系.方法 选取108株临床非重复分离自尿液标本中的大肠埃希菌,经全自动细菌分析系统鉴定并检测其对临床常用抗菌药物的耐药性,聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合酶基因,对Ⅰ类整合酶阳性菌株用PCR扩增并测序分析可变区基因盒种类及可变区启动子类型.结果 108株临床非重复分离自尿液大肠埃希菌中有60株占56.0％检测到Ⅰ类整合酶基因;共检测出5种不同长度的可变区片段:8株750 bp片段不含基因盒,2株1500 bp片段为aadA2,34株2200 bp片段为dfrA 17-aadA5,4株2500 bp片段为dfrA 12-orfF-aa dA2,2株2800 bp片段为aacA4-cmlA1,其中1株大肠埃希菌同时扩增出2200、2500 bp的可变区片段,有11株Ⅰ类整合酶基因阳性大肠埃希菌未扩增出可变区;可变区启动子大多为相对较弱的启动子PcH1、PcW;Ⅰ类整合子阳性菌株对多种抗菌药物的耐药率高于Ⅰ类整合子阴性菌株.结论 Ⅰ类整合子及相关基因盒在尿液分离大肠埃希菌中分布广泛,与细菌耐药性关系密切,所携带的整合子具有较强的捕获外源性耐药基因盒的能力.     

尿液分离大肠埃希菌Ⅰ类整合子分子特征与耐药性的关系研究

目的了解社区感染尿液分离大肠埃希菌中Ⅰ类整合子的分布,并分析其与细菌耐药性的关系。方法选取114株临床非重复分离自医院门诊患者尿液标本中的大肠埃希菌,经全自动细菌分析系统鉴定并检测其对临床常用抗菌药物的耐药性,聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合酶基因,对Ⅰ类整合酶阳性菌株用PCR扩增并测序分析可变区基因盒种类。结果 114株临床非重复分离自尿液大肠埃希菌中有50株检测到Ⅰ类整合酶基因;共检测出两种不同长度的可变区片段:1 700bp片段(30株)为dfrA17-aadA5,2 100bp片段(5株)为dfrA12-orfF-aadA2,有两株大肠埃希菌同时扩增出1 700bp和2 100bp的可变区片段,有17株Ⅰ类整合酶基因阳性大肠埃希菌未扩增出可变区;114株大肠埃希菌对氨苄西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和左氧氟沙星的耐药率较高,>50.0%,对头孢替坦、亚胺培南、厄他培南、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因、阿米卡星耐药率较低,<5.0%;Ⅰ类整合子阳性菌株对氨苄西林、庆大霉素、妥布霉素和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率高于Ⅰ类整合子阴性菌株。结论与医院感染相比,社区感染尿液中分离的大肠埃希菌受抗菌药物的选择压力相对较小,其对常用抗菌药物的耐药率、Ⅰ类整合子携带率均较低,同时Ⅰ类整合子中携带的基因盒种类也较单一。     

Ⅰ类整合酶与大肠埃希菌耐药关系的初步研究

目的 了解医院大肠埃希菌临床分离株的耐药性变迁及Ⅰ类整合酶在产与非产ESBLs大肠埃希菌中的分布状况,分析和评估Ⅰ类整合酶在该菌耐药中的作用.方法 按CLSI 2010年标准,用K-B法进行药敏试验,双纸片协同法检测产ESBLs株,PCR法扩增Ⅰ类整合酶基因;数据经x2检验进行统计学分析.结果 2006-2010年大肠埃希菌对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因等耐药性较低,对其他各类的药物表现出较高的耐药率,未检出亚胺培南耐药株;部分菌株对氨基糖苷类药物的耐药性有稍下降的趋势;150株大肠埃希菌中104株Ⅰ类整合酶扩增阳性,产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶的检出率为71.8％,非产ESBLs菌株中检出率为66.6％,差异无统计学意义;Ⅰ类整合酶阳性菌株和阴性株对氨基糖苷类抗菌药物耐药率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院大肠埃希菌5年中耐药性多呈轻度升高趋势,Ⅰ类整合酶与产ESBLs耐药无关,Ⅰ类整合酶阳性株对多种抗菌药物的耐药率大于整合酶阴性菌株,建议临床加强对大肠埃希菌耐药性的监测.     

老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子的研究

目的了解老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子遗传标记携带情况。方法采用微量稀释法做耐药菌株的药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增检测intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60.0%,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率为95.0%,对第三代头孢菌素耐药率为100.0%(均为产ESBLs菌株),且与Ⅰ类整合子的存在密切相关,intⅠ1基因的阳性16株(80.0%),intⅠ2、intⅠ3基因均阴性。结论大肠埃希菌的耐药与耐药基因传递机制-整合子密切相关,Ⅰ类整合子的存在加快了细菌耐药性的传播。     

大肠埃希菌Ⅰ类整合子与多药耐药的相关性探讨

目的探讨临床分离多药耐药大肠埃希菌(ECO)的Ⅰ类整合子流行分布及与多药耐药之间可能存在的关系。方法采用纸片扩散法(K-B法)检测71株大肠埃希菌对3类4种常用抗菌药物的药敏率;PCR方法检测Ⅰ类整合子3个不同部位的基因。结果 71株大肠埃希菌耐庆大霉素47株为66.20%、耐左氧氟沙星45株为63.38%、耐头孢噻肟42株为59.15%、耐头孢他啶13株为18.31%,多药耐药率为32.39%;Ⅰ类整合子的总检出率为88.73%,整合子阳性与阴性株对庆大霉素、左氧氟沙星、头孢噻肟的药敏分布差异有统计学意义(P<0.05),多药耐药菌株中Ⅰ类整合子基因的阳性率为100.0%,耐多药菌株与全敏感菌株差异有统计学意义(P<0.05)。结论大肠埃希菌的Ⅰ类整合子的检出率高,且与其多药耐药性密切相关。     

产志贺样毒素大肠埃希菌Ⅰ类整合子的鉴定和分析

目的阐明各种来源的产志贺样毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing E. coli,STEC)中I类耐药整合子的分布、特征、所含基因盒的状况以及所表达的耐药信息.方法常规分离出大肠埃希菌、血清学分型,PCR法鉴定产stx1-2毒素性菌株;纸片扩散法对17种抗菌药物进行耐药性监测和分析;PCR法鉴定I类整合子阳性株;PCR产物测序并对结果进行分析.结果各种标本中共鉴定出46株产志贺样毒素大肠埃希菌,其中23株为O157:H7;全部STEC对复方新诺明耐药,对链霉素耐药率为28.3%,氨苄西林为30.4%,而且有5株对至少＞4种抗菌药物多重耐药,耐药谱为复方新诺明-链霉素-氨苄西林-庆大霉素;46株分离株中有11株(23.9%)鉴定出I类整合子,PCR产物测序得知9株携带aadA1基因盒,2株携带aadA2基因盒,均来自氨基糖苷类抗菌药物耐药菌株(39.3%),传递对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性.结论I类整合子存在于各种来源的产志贺样毒素大肠埃希菌中,并携带相应的基因盒,决定着对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性.     

临床分离大肠埃希菌耐药性分析及I型整合子研究

目的了解临床分离大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药状况;研究整合子在大肠埃希菌中的分布情况,探讨其与大肠埃希菌耐药性之间的相关性。方法收集广东省3所医院2010-2012年分离的大肠埃希菌,采用K B纸片扩散法进行药敏试验;聚合酶链反应（PCR）法扩增3类整合子整合酶基因和整合子可变区,测序分析整合子所携带的耐药基因盒类型。结果共收集156株大肠埃希菌,其对青霉素类、头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类和磺胺类等的大多数抗菌药物的耐药率＞50%;耐药率＜10%的抗菌药物有头孢哌酮/舒巴坦（0）、亚胺培南（3.85%）、头孢替坦（4.35%）、厄他培南（7.69%）和哌拉西林/他唑巴坦（8.97%）;I类整合子的检出率为57.69%（90/156）,多重耐药菌与非多重耐药菌的整合子检出率分别为66.00%（66/100）和64.71%（22/34）,两组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,但分别与敏感菌组（9.09%,2/22）相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）。所检出的整合子可变区分为9种类型,大部分都含有aadA和dfrA耐药基因盒。结论大肠埃希菌整体耐药情况严重;I类整合子在临床分离大肠埃希菌中分布广泛,并与大肠埃希菌的耐药性关系密切,主要介导对氨基糖苷类、磺胺类、β 内酰胺类等多种抗菌药物的耐药性。     

鸡来源产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌携带整合子基因的研究

目的 分析鸡肠道内共生的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌整合子携带状况以及其与多重耐药性的关系.方法 从甘肃、湖北、北京、四川地区养殖场鸡粪便标本中分离的大肠埃希菌,肉汤稀释法检测菌株的耐药性,WHONET软件进行耐药性分析;筛选出的ESBLs菌株进行整合子的PCR检测和基因测序. 结果 通过药敏试验从鸡粪中分离的224株大肠埃希菌中共检出产ESBLs的菌株54株,分离率为24.1%.产ESBLs的菌株中I类整合子的携带率为63.0%,I类整合子可变区发现的耐药基因有addA1、aadA2、aadA5、aadA22,dfrA12、dfrA17、dfrI,aar-3,分别介导氨基糖苷类、磺胺类抗生素以及利福平的耐药性.aadA22是在国内菌株中首次报道.Ⅱ类整合子携带率为5.6%,携带的耐药基因包括sat、ereA、aadA1.Ⅲ类整合子酶阳性的有3株菌,但其可变区未检出任何耐药基因. 结论 I类整合子主要介导氨基精苷类抗生素和甲氧嘧啶的耐药性,在大肠埃希菌ESBLs菌株的多重耐药性中具有重要的作用,加强养殖动物大肠埃希菌耐药性以及整合子携带状况的监测,对防止耐药菌株的广泛传播,改善临床抗生素的疗效具有重要意义.     

肠出血性大肠埃希菌1类整合子与耐药性关系

目的研究48株(国内28株，美国20株)肠出血性大肠埃希菌(EHEC)的耐药特点以及1类整合子的分布，探讨整合子中耐药基因盒的种类及与细菌耐药性的相互关系。方法琼脂稀释法对18种抗生素进行耐药性监测和分析；PCR法鉴定1类整合子阳性株；PCR产物测序及分析。结果48株肠出血性大肠埃希菌中23株为O157：H7；2个地域的肠出血性大肠埃希菌对抗生素的耐药情况大多无差别，只存在对氨苄西林和红霉素耐药率的差异，前者为国内分离株(60．7％)高于美国分离株(30％)，后者为美国分离株(95％)高于国内分离株(60.7％)。耐3种以上抗生素的肠出血性大肠埃希菌18株(美国3，中国15)。48株分离株中有11株(22．9％)鉴定出1类整合子，PCR产物测序分析可见，9株携带aadA1基因盒，2株携带aadA2基因盒，传递对氨基糖苷类抗生素的耐药性。结论1类整合子及其相关的基因盒广泛存在于肠出血性大肠埃希菌中，而且决定着对氨基糖苷类抗生素的耐药性。     

食品中大肠埃希菌整合子与耐药性的关系研究

目的：研究食品中大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：50株大肠杆菌中19株携带1类整合子，2株携带2类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr和aadA类基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfr17-aadA5。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

菌落杂交法鉴定沙门菌第一类整合子

目的:建立一种快速而经济的鉴定细菌中整合子的新方法,分析整合子介导的细菌耐药性。方法:以第一类整合酶基因intI1为探针,采用地高辛进行标记,菌落杂交的方法来鉴定第一类整合子阳性菌株。结果:发现在23株沙门菌中,四株第一类整合子阳性菌株,与采用第一类整合酶基因intI1 PCR扩增方法所得到的结果相一致。结论:菌落杂交法可以简单快速地鉴定细菌中整合子,这对研究整合子的特性及整合子在细菌耐药性中的介导作用具有重要意义。     

Antimicrobial resistance and class 1 integrons in pathogenic Escherichia coli from dairy farms

The goal of this study was to assess the prevalence of antimicrobial resistance and class 1 integrons, including integron-associated genes, in 24 Escherichia coli isolates from dairy farms. Escherichia coli isolates (n = 14) from dairy cows with mastitis (ECDM), Shiga toxin-producing (STEC) O157:H7 from cull dairy cow fecal samples (n = 9) and bulk tank milk (n = 1) were evaluated for sensitivity to 19 antimicrobial agents used commonly in human and/or veterinary medicine. Multiplex PCR was used to determine presence of genes associated with class 1 integrons (intI1, qacEDelta1, and sulI1). Class 1 integrons were found only in eight of 10 isolates (one STEC O157:H7 and seven ECDM) that demonstrated antimicrobial resistance, and seven of these were resistant to two or more antimicrobial agents. Eight of 10 STEC O157:H7 and six of 14 ECDM were susceptible to all commonly used antibiotics. Five ECDM demonstrated multiple resistances to four or more antibiotics. Most of the 24 isolates examined exhibited resistance against sulfamethoxazole, followed by streptomycin and tetracycline. STEC O157:H7 strains had less prevalence of antibiotic resistance and integron carriage than ECDM. The multiplex PCR method developed for detection of intI1, qacEDelta1, and sulI1 can be used routinely for monitoring presence of these genes. Class 1 integrons were found in eight of 10 E. coli strains that demonstrated antimicrobial resistance; seven of these were resistant to two or more antibiotics. It appears that integrons played a role in the incidence of antimicrobial resistance of the strains used in this study.     

食品中沙门菌整合子与耐药性关系

目的 研究食品中沙门菌的整合子携带情况及整合子与耐药性之间的关系。方法PCR检测细菌总DNA中1，2，3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。整合子阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果69株沙门菌中25株携带1类整合子。集中分布在对4种以上抗生索耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr（甲氧氨嘧啶）和aadA（氨基糖甙类）基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfrl-aadA1。结论细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致。     

健康人肠道大肠埃希菌整合子和耐药基因盒的研究

目的：研究健康人肠道大肠埃希菌的整合子携带情况与整合子携带的基因盒种类及其与耐药性之间关系.方法：PCR检测Ⅰ类整合子,确定细菌携带整合子的情况.整合子阳性菌株进一步检测整合子的可变区,分析插入基因盒的序列.结果：150株大肠埃希菌中有38株携带Ⅰ类整合子,集中分布在对3种以上抗生素耐药的菌株中.插入基因盒集中在甲氧苄氨嘧啶耐药基因（dfr）和氨基糖甙类抗生素耐药基因（aadA）.结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致,但是细菌耐药谱和其整合子无对应关系.     

致病菌耐药因子分布及特征分析

目的 对临床菌株中的整合子分布及其携带耐药基因盒的结构特征进行分析。方法 应用多重PCR方法检测55株临床菌株中的3类整合酶基因intⅠ。并对intⅠ阳性菌株耐药基因盒进行测序及序列分析。结果 55株临床菌株均为第1类整合酶基因阳性（100％）。耐药基因盒特异PCR扩增发现，27株革兰阳性菌株和22株革兰阴性菌株均得到1913bp的扩增产物，携带基因盒为dhfr、orfF和aadA2；6株革兰阴性菌得到1664bp的产物．携带基因盒为aadA5和dfrl7。aadA2和aadA5均为编码对氨基糖苷类抗生素产生耐药的基因盒。dhfr和dfr17均为编码对磺胺类药物甲氧苄氨嘧啶产生耐药的基因盒；orfF为未知功能的开放阅读框。结论 临床致病革兰阳性菌和革兰阴性菌株均广泛存在着整合子结构．应加强对耐药基因在细菌种属间水平转移的监测工作。     

致血液系统感染大肠埃希菌中Ⅰ类整合子参与耐药的研究

目的：探讨致血液系统感染大肠埃希菌中Ⅰ类整合子介导耐药性的分子机制。方法：应用全自动细菌分析仪Microscan WalkAway40和纸片扩散法，对16株大肠埃希菌进行抗生素敏感性测定，PCR扩增细菌总DNA上的Ⅰ类整合子，对扩增产物测序并分析其中的基因盒。结果：8株细菌含有Ⅰ类整合子，整合子大小分别为600bp、1700bp和2500bp，600bp整合子含基因盒dfr2d，1700bp整合子含基因盒dfr17-aadm5。结论：整合子在介导细菌耐药性方面发挥着重要作用。     

食品中沙门菌整合子与耐药性关系研究

目的：研究食品中沙门菌的整合子携带情况及整合子与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。整合子阳性菌档进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：69株大肠菌中25株携带1类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr(甲氧苄氨嘧啶)和aadA(氨基糖甙类)基因盒，各种基因盒组合中最常见的是difrl—aadA1。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

88株肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子的分布和耐药性分析

目的:研究Ⅰ类整合子在肺炎克雷伯菌分布、结构及其在介导耐药中的作用。方法:利用多重聚合酶链反应(PCR)方法检测整合酶基因,对其阳性菌株可变区扩增产物进行测序分析;采用微量稀释法测定14种抗生素对试验菌株的敏感性。结果:在其中38株肺炎克雷伯菌DNA上检测到I类整合,阳性率43.2%。所携带的耐药基因盒绝大多数为aadA2和dfr17,整合子阳性组耐药率明显高于阴性组(P<0.05)。结论:目前临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性强,并广泛存在I类整合子。菌株携带基因盒和耐药表型之间有较好的对应关系,基因盒介导了细菌耐药性。耐药基因盒是整合子阳性菌株对氨基糖苷类耐药的主要原因。     

致泌尿系统感染中大肠埃希菌Ⅰ类整合子的研究

目的：分析泌尿系统感染中大肠埃希菌Ⅰ类整合子的流行情况和分子特征。方法：应用全自动细菌分析仪Microgcan WalkAway40和纸片扩散法，对40株大肠埃希菌进行抗生索敏感性测定，PCR扩增细菌总DNA上的Ⅰ类整合子。对扩增产物进行测序。并分析其中的基因盒。利用脉冲场电泳（PFGE）对菌株进行分子分型。结果：22株细菌含有Ⅰ类整合子，整合子大小为1000、1200、1700和3000bp，22株细菌各含1-2个整合子。1000bp整合子含基因盒aadA1。1200bp整合子含基因盒dfr1—OFRx，1700bp整合予含基因盒dfr17-aadA5，3000bp整合子两端分别含基因盒aadB、cmlA1，40株细菌被分为不同的基因型，在不同基因型菌株中发现了相同的整合子。结论：整合子在泌尿系统感染大肠埃希中广泛存在，整合子是介导细菌耐药性的重要分子机制，基因分型结果提示整合子在细菌种内水平传播。