固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定贝类产品中麻痹性贝类毒素

目的建立了贝类产品中石房蛤毒素(STX)、新石房蛤毒素(neo STX)、膝沟澡毒素(GTX14)、脱氨甲酰基类毒素(包括dc STX、dcneo STX和dc GTX23)8种麻痹性贝类毒素的固相萃取-高效液相色谱-串联质谱测定方法。方法匀浆贝组织以0.1 mol/L乙酸提取,HLB固相萃取小柱净化,10 000 MW超滤离心管离心纯化。采用TSK gel Amide-80柱分离,以乙腈-2 mmol/L乙酸铵溶液(均含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,以正离子多反应监测模式检测,基质标准校正外标法定量。结果 8种麻痹性贝类毒素的定量限为10μg/kg~50μg/kg;在各自相应浓度范围内线性关系良好,相关系数0.990;2种添加水平的平均加标回收率为75.5%~103.0%;相对标准偏差为4.3%~13.2%。应用建立的方法对多份贝类样品进行分析,均未检出目标组分。结论方法选择性高、灵敏、准确,适用于贝类产品中麻痹性贝类毒素的确证及定量分析。     

麻痹性贝毒在广州市售经济贝类中污染状况分析

目的通过对广州市黄沙海产品批发市场7种经济贝类为期一年的麻痹性贝毒(PSP)污染状况的调查分析,了解海产品食用的安全性。方法毒性测定按照AOAC小白鼠法进行,成份分析利用高效液相色谱(HPLC),安全性评价采用联合国粮农组织(FAO)及我国渔政渔港监督管理局制定的贝类安全食用标准(4MUg肉)。结果在调查的84份贝样中,染毒贝整体毒力(消化腺与肉的加权平均毒力)低于4MUg肉,毒素最高含量仅为184MUg肉,所有贝类均在安全食用范围之内。染毒贝类主要为栉孔扇贝(ChlamysMimachlamysnobilis)和嵌条扇贝(Pectenalbicans)。毒素在2个种9份样品的消化腺中检出,某些样品肌肉组织出现小白鼠毒性反应。一份样品消化腺中毒素含量高达1452MUg,高效液相色谱(HPLC)分析表明,该样品毒素成份主要为B1、GTX23、GTX14及C类。结论广州市市售鲜贝PSP含量和检出率整体水平均较低;贝中消化腺毒素含量及检出率明显高于肌肉,个别腺体毒素含量超出标准。毒素分布存在季节性差异,春季毒素比较强,夏秋季检出率高。因此有针对性的加强贝毒监测非常必要。     

麻痹性贝类毒素中毒的流行病学特征

目的 :探讨麻痹性贝类毒素中毒的流行病学特征。方法 :依据“GB14 938- 94食物中毒诊断标准及技术原则”分析流行特征 ,应用小白鼠生物测定法检测麻痹性贝类毒素。结果 :1991年以来连云港市及国内福建等省市发生的麻痹性贝类毒素中毒 ,其毒贝除连云港市一起由时螺引起 ,其他均为半褶织纹螺。宁夏银川的有毒织纹螺则来自于千里之外的连云港市。结论 :为保障海贝的食用安全 ,应对贝类进行安全监测。     

柱前衍生HPLC-FLD法测定水产品中3种麻痹性贝类毒素

目的建立水产品中3种麻痹性贝类毒素成分(GTX2,3、dcSTX和STX)的柱前荧光衍生高效液相色谱(HPLC-FLD)检测方法。方法样品用1%乙酸提取,C18固相萃取柱净化,2%H2O2荧光衍生,以Symmetry?C18柱(4.6mm×150mm,5μm)为色谱柱分离,以乙腈和0.1mol/L甲酸铵(595)作为流动相,流速1.0mL/min,荧光检测器激发波长340nm,发射波长395nm。结果该法在10~500μg/L范围内线性关系良好,平均加标回收率为72.5%~88.6%,RSD为2.8%~4.7%。方法的检出限分别为dcSTX 3μg/kg、STX 10μg/kg和GTX2,34μg/kg。结论本方法灵敏度高、结果可靠,为检测水产品贝类麻痹性毒素的含量提供了一种高效便捷的方法。     

麻痹性贝类毒素细胞检测法的建立

目的:麻痹性贝类毒素的N-2a细胞检测方法的建立并确定可能的检测限值。方法:使用不同浓度毒素标准品结合藜芦定和乌本苷共同作用对数生长期的N-2a细胞,通过cck-8试剂盒检测细胞毒性,确立细胞检测方法的检出限及比较各毒素作用大小,并同步利用小鼠生物法进行验证,通过精确记录小鼠死亡时间,比较各毒素的毒作用大小。结果:麻痹性贝类毒素能明显降低藜芦定和乌本苷的细胞毒性,且具有剂量-反应关系,通过比较得出毒素各成分毒性大小为:neoSTX>STX>dcSTX>GTX1,4>GTX2,3>dcGTX2,3;小鼠生物法的毒作用平均死亡时间为:neoSTX组(6.5 min),GTX1,4组(8.0 min),STX组(9.0 min),dcSTX组(15 min);GTX2,3组和dcGTX2,3组未见动物死亡。结论:细胞检测与小鼠生物法具有较好的一致性,表明所建立的细胞检测法可行,且细胞毒性试验检测方法具有较高的灵敏度,最低检出限值可达到10-9mol/L剂量水平,其中浓度在10-6~10-8mol/L间具有较好的线性。     

2017-2019年宁波市海产品中海洋生物毒素污染状况及膳食暴露评估

目的 了解宁波市海产品中17种海洋生物毒素的污染状况.方法 应用液相色谱-串联质谱法检测海产品中17种海洋生物毒素污染水平,采用点评估模型进行人群膳食暴露评估.结果 河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)、麻痹性和腹泻性贝类毒素都有检出.其中河豚毒素、膝沟藻毒素5(gonyautoxin5,GTX5)及homo-...     

电压敏感荧光染料在鱼贝类毒素检测中的应用初探

目的建立快速、简便、能反映样品整体毒性的鱼贝类毒素筛查方法。方法以神经母细胞瘤细胞为实验材料,采用电压敏感荧光染料bis-oxonol,根据膝沟藻毒素2,3(GTX2,3)、短裸甲藻毒素(BTX)和河豚鱼毒(TTX)的毒理特点,观察不同浓度毒素作用下细胞荧光的变化。结果 GTX2,3的浓度在2～200ng/ml范围内,TTX的浓度在20～600ng/ml范围内,BTX的浓度在15～400ng/ml范围内,培养体系荧光强度与毒素的浓度之间存在很好的线性关系。结论利用电压敏感荧光染料法可实现对GTX2,3、TTX和BTX的快速检测。     

亲水作用液相色谱-串联质谱联用法测定海产品中麻痹性贝类毒素

[目的]建立利用亲水作用液相色谱-电喷雾串联质谱法(HILIC-MS/MS)同时测定海产品11种麻痹性贝类毒素的确证方法。[方法]采用0.1mol/LHAc提取海洋贝类或鱼类中的麻痹性贝类毒素,经OASISHLB固相萃取小柱净化后,以乙腈-乙酸铵溶液作为流动相,亲水作用色谱柱分离,梯度改变乙腈在流动相中的比例和流速,采用HPLC/MS/MS电喷雾电离(ESI),阳离子模式,多反应监测(MRM)方式检测,外标法定量。一次进样同时定性及定量检测待测试样中的上述全部11种麻痹性贝类毒素。[结果]11种PSP线性相关系数均大于0.9982,不同浓度水平下各PSP的平均加标回收率为90.7%～96.2%,相对标准偏差(RSD)均小于9.3%,定量检出限在0.12～0.24ng/g。[结论]该法简便快速,精密度较高,重现性较好,对贝壳类和鱼类中痕量麻痹性贝类毒素具有良好的分析鉴定效果。     

不同生长期的塔玛亚历山大藻破壁条件和产毒的初步研究

目的 研究塔玛亚历山大藻（Alexandrium tamarens）的生长曲线及其在不同生长期分泌的麻痹性贝毒素（paralytic shelfish poisoning,PSP）的毒性大小,定量分析和比较冻融和超声波两种方法的破壁率及其优劣,为麻痹性贝毒提取方法的选择提供理论依据。方法 应用抽滤方法收集细胞,冻融和超声波两种方法进行破壁,对处于不同生长期的塔玛亚历山大藻进行细胞毒性检测和对比研究。结果 塔玛亚力山大藻的生长经历了延滞期（0～9d）、指数期（10～18d）和稳定期（19～22d）3个生长阶段。指数期细胞生长速度最快,然而,毒力最强的细胞是在培养时间为21d的稳定期,即9.43×10-6鼠单位/细胞（MU/cell）。经两种不同方法破碎后,延滞期细胞的毒性有很大差异,冻融后的细胞毒力比超声波破碎后的毒力大。此外,采用过滤方法收集细胞的回收率并不高（平均为69.0％）。结论 （1）在同一时期内,超声波破碎具有明显的优越性,但同时也具有降低细胞毒性的缺点;在相同生长条件和破壁条件下,延滞期细胞最容易破碎。（2）随着细胞培养时间的延长,细胞毒性逐渐增大,延滞期细胞的毒性己很高,随后的指数期和稳定期细胞的毒性只有少量增加。     

宁波地区织纹螺毒性特征探索研究

目的了解宁波地区有毒织纹螺毒素的类型、分布、消长及毒素来源。方法小鼠生物法测定织纹螺毒性;ELISA法及HPLC等检测织纹螺石房蛤毒素(STX)、膝沟藻毒素(GTX)、河豚鱼毒素(TTX)。结果从长期监测点采集的127份织纹螺样品中检出毒螺63份,检出率49.6%,样品的毒性高峰和低谷分别出现在1991年和1988年。不同栖息地毒螺检出率差异有统计学意义(P0.01)。3类不同来源样品毒螺检出率及毒性差异也有统计学意义(P0.05)。半褶织纹螺、红带织纹螺、正织纹螺带毒机率较高,且毒性强。检出织纹螺STX、GTX和TTX毒素。结论宁波地区织纹螺毒素由TTX或贝类麻痹性毒素(PSP)中的STX和GTX组成,部分样品TTX和STX两种毒素共存。查清了宁波市织纹螺带毒情况、地域分布及织纹螺品种与毒性相关性。监测结果提示长期以来宁波市织纹螺总体保持一定的毒性,食用易引起中毒事件的发生。     

Risk to human health associated with marine toxic algae

Among the about 5000 of marine algal species, some 75 produce algal toxins. These latter mainly belong to the taxa first of dynoflagellates and then diatomes. The so far known human intoxications have been associated with mollusc consumption. The main poisoning syndromes have been termed, on the basis of the observed symptoms, as paralytic, diarrhetic, neurotoxic and amnesic and shorthened as: PSP (paralytic shellfish poisoning), DSP (diarrhetic shellfish poisoning), NSP (neurotoxic shellfish poisoning), ASP (amnesic shellfish poisoning), respectively. This paper is a review of the problem of human health implications associated with marine toxic algae, with particular reference to the situation of the Mediterranean and the Italian coastal areas.     

麻痹性和腹泻性贝类毒素的检测方法研究进展

该文综述了目前国内外关于麻痹性贝类毒素和腹泻性贝类毒素的主要检测方法,如小鼠生物法、高效液相色谱法及相关联用技术和免疫测定法等,分别阐述各类检测方法的原理及存在的优缺点。该文还对新兴检测技术的发展进行了概述,并在此基础上阐述了麻痹性贝类毒素和腹泻性贝类毒素检测技术的发展趋势,为我国水产品安全检测提供参考。     

一起赤潮后海产品麻痹性贝类毒素衰减结果分析

目的 以2017年漳州沿海一起赤潮引起的麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoning,PSP)中毒事件为研究起点,研究贝类海产品中的PSP在自然条件下的衰减情况。方法 在漳浦佛昙和龙海港尾海域采集牡蛎和贻贝进行PSP检测。结果 2017年6月8日相关海域海产品最大毒素总毒力为21 056.7 μg/kg,2017年6月26日海产品PSP总毒力值衰减86%以上,2017年7月20日海产品PSP总毒力值衰减97%以上,2018年12月所有海产品中PSP均未检出。结论 本次赤潮发生后,漳浦佛昙和龙海港尾两个海域贝类海产品约需45天净化周期方可食用,相关海域约需18个月净化至贝类毒素完全消失。     

宁波市有毒织纹螺地域分布分析

目的了解宁波市有毒织纹螺的分布。分析各栖息地有毒织纹螺的毒性变化，为控制织纹螺中毒提供依据。方法采用美国分析化学家学会（AOAC）和中国进出口检验检疫（CIQ）的小鼠生物测试法，以美国食品药物管理局（FDA）的贝类麻痹性毒素（PSP）标准，判定本地织纹螺毒性的强弱，按年观察结果。结果1986～2003年，宁波市127份被检织纹螺中毒素平均含量最高的年份为1991年，达11900MU／100g螺肉，最低年份为1988年，其毒素含量也达403MU／100gN肉，其他年份的毒性波动在一定范围内。不同栖息地毒螺检出率镇海区为31．43％，北仑区为39．29％，宁海县为73．08％，奉化市为25．00％，经统计学处理差异有统计学意义（P〈0．01）；除宁海外，其余3个县（市、区）毒螺检出率差异无统计学意义（P〉0．05）。从新增织纹螺栖息地象山采集的30份织纹螺样品，毒素测定值均≤400MU／100g肉，未检出毒螺。结论宁波市各栖息地的织纹螺带毒严重，是一种引起织纹螺中毒的原因食物。各栖息地织纹螺毒性存在差异，以宁海县的织纹螺带毒最普遍。毒螺的分布和毒性的强弱与地域相关。织纹螺毒素的毒性可消长，但无规律性。     

Paralytic shellfish poisoning --- southeast Alaska, May--June 2011

On June 6, 2011, the Section of Epidemiology (SOE) of the Alaska Division of Public Health was notified of a case of paralytic shellfish poisoning (PSP) in southeast Alaska. In collaboration with local partners, SOE investigated and identified a total of eight confirmed and 13 probable PSP cases that occurred during May--June 2011. Warnings to avoid noncommercially harvested shellfish were broadcast on local radio and television and displayed at beaches and in post offices, government offices, and businesses throughout the region. Commercially harvested shellfish, which are tested for the presence of PSP-causing toxins, were safe. Because the risk for PSP is unpredictable, persons who consume noncommercially harvested Alaskan shellfish should know that they are at risk for PSP, and suspected cases should be reported promptly to SOE to initiate control measures in the affected area.     

从暴发腹泻的贻贝中同时检出腹泻性贝类毒素和扇贝毒素

目的:2011年5月25日-5月27日,我市苍南县暴发了57例因食用贻贝引起的腹泻性贝类毒素(DSP)中毒事件,采集了19份样品进行检测。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱方法对贻贝中5种脂溶性贝类毒素进行检测,根据欧盟贝类毒素的限量值进行评价。结果:15份样品检出大田软海绵酸(OA)、鳍藻毒素-1(DTX-1)和7-epi-pectenotoxin-2 seco acid(7-epi-PTX-2sa),16份检出pectenotoxin-2seco acid(PTX-2sa),7份检出pectenotoxin-2(PTX-2)。其中4份样品中游离OA和DTX-1含量超出欧盟限量值3倍多,它们的总OA约超出9倍。其余均低于欧盟限量值。首次在我国贝类中检出了PTX-2sa和7-epi-PTX-2sa。结论:鉴于部分贻贝样品DSP超标,今后应加强贝类上市前的监测工作。     

Saxitoxin puffer fish poisoning in the United States, with the first report of Pyrodinium bahamense as the putative toxin source

BACKGROUND: From January 2002 to May 2004, 28 puffer fish poisoning (PFP) cases in Florida, New Jersey, Virginia, and New York were linked to the Indian River Lagoon (IRL) in Florida. Saxitoxins (STXs) of unknown source were first identified in fillet remnants from a New Jersey PFP case in 2002. METHODS:We used the standard mouse bioassay (MBA), receptor binding assay (RBA), mouse neuroblastoma cytotoxicity assay (MNCA), Ridascreen ELISA, MIST Alert assay, HPLC, and liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) to determine the presence of STX, decarbamoyl STX (dc-STX), and N-sulfocarbamoyl (B1) toxin in puffer fish tissues, clonal cultures, and natural bloom samples of Pyrodinium bahamense from the IRL. RESULTS: We found STXs in 516 IRL southern (Sphoeroides nephelus), checkered (Sphoeroides testudineus), and bandtail (Sphoeroides spengleri) puffer fish. During 36 months of monitoring, we detected STXs in skin, muscle, and viscera, with concentrations up to 22,104 microg STX equivalents (eq)/100 g tissue (action level, 80 microg STX eq/100 g tissue) in ovaries. Puffer fish tissues, clonal cultures, and natural bloom samples of P. bahamense from the IRL tested toxic in the MBA, RBA, MNCA, Ridascreen ELISA, and MIST Alert assay and positive for STX, dc-STX, and B1 toxin by HPLC and LC-MS. Skin mucus of IRL southern puffer fish captive for 1-year was highly toxic compared to Florida Gulf coast puffer fish. Therefore, we confirm puffer fish to be a hazardous reservoir of STXs in Florida's marine waters and implicate the dinoflagellate P. bahamense as the putative toxin source. CONCLUSIONS:Associated with fatal paralytic shellfish poisoning (PSP) in the Pacific but not known to be toxic in the western Atlantic, P. bahamense is an emerging public health threat. We propose characterizing this food poisoning syndrome as saxitoxin puffer fish poisoning (SPFP) to distinguish it from PFP, which is traditionally associated with tetrodotoxin, and from PSP caused by STXs in shellfish.