细菌性阴道病加特纳菌检测的临床价值

目的研究超高倍显微镜观察阴道分泌物查线索细胞、分离培养法、胺试验3种检测方法在细菌性阴道病(BV)加特纳菌检测中的临床价值,并进行阴道加德纳菌的药物敏感试验,以指导临床治疗。方法分别用超高倍显微镜观察阴道分泌物查线索细胞,分离培养法,胺试验3种检测方法对208例下生殖道感染患者行细菌性阴道病加德纳菌检测,并进行阴道加特纳菌的药物敏感试验。结果BV、非细菌性阴道病(NBV)患者均经线索细胞检查,BV试验和GV培养,BV患者组三种方法检测到的GV均高于NBV组(P0.05);加特纳菌对万古霉素、菌必治、痢特灵敏感性较高。结论阴道分泌物直接涂片找加特纳菌和线索细胞、细菌分离培养、BV快速诊断等方法在细菌性阴道病(BV)加特纳菌检测中较PCR、免疫荧光法等简便易行。细菌培养及药物敏感试验,对复发性和久治不愈的BV治疗有重要的指导意义。     

沙门菌invA基因荧光定量PCR检测

沙门菌是引起食源性感染的常见致病菌^[1],常规检测方法有分离培养、生化鉴定、血清学试验等.由于沙门菌有2 000多种血清型,因而监测工作多繁琐、费时、费力.实时荧光定量PCR检测技术是近年来的新方法,已经愈来愈多地用于病原体诊断^[2].研究表明,沙门菌侵袭基因invA高度保守,几乎存在于沙门菌所有血清型中,其编码吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白,决定沙门菌对肠粘膜细胞的侵袭力,与其致病性显著相关^[3].根据这一特点,为探讨快速、敏感、稳定的沙门菌检测方法,本研究应用沙门菌侵袭基因invA设计引物和探针序列,建立沙门菌荧光定量检测方法并研制沙门菌检测试剂盒.     

荧光定量PCR技术检测肠道志贺菌的临床应用

目的:比较荧光定量PCR技术和传统培养方法检测肠道志贺菌的效果。方法:利用中山大学达安基因股份有限公司研制开发的志贺菌核酸检测试剂盒,检测我院诊治的腹泻病人332份大便中的志贺菌核酸,并以传统的沙门志贺菌(SS)培养基进行细菌培养的结果作为对比。结果:332份腹泻病人大便标本,用培养方法检测,志贺菌阳性59例;用志贺菌核酸试剂盒检测有107例阳性。荧光定量PCR检测方法与培养方法对比,敏感度为100.00%,特异性为82.43%。结论:荧光定量PCR技术敏感度高、特异性强、适合于临床大标本量的检测。     

沙门菌实时荧光定量PCR检测试剂盒的研制与应用

[目的]建立一种快速、灵敏、准确的检测方法,预防沙门菌食物中毒。[方法]根据沙门菌保守基因序列fimY基因设计合成了引物和TaqMan探针,建立快速检测沙门菌的实时荧光定量方法,并对反应条件进行了优化,组装成快速检测试剂盒。[结果]其检测灵敏度达到4．5efu,比常规PER高100倍,而且稳定性良好,冷冻至少可以保存9个月。[结论]通过临床样品的检测,该试剂盒具有操作简便快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性强等优点,很适合大量样品的检测。     

脑膜炎奈瑟菌荧光定量PCR法检测

目的 评价新型水解探针(TaqMan-MGB探针)荧光定量PCR法在检测脑膜炎奈瑟菌中的应用价值.方法 分别采用TaqMan-MGB探针荧光定量PCR法、常规PCR法和传统分离培养法检测230例无症状者咽拭子标本,比较3种方法的检出率.结果 3种方法的阳性检出率分别为10.43%,6.52%和3.48%;TaqMan-MGB探针荧光定量PCR法的检出率高于常规PCR法和传统分离培养法(P<0.001).结论 TaqMan-MGB探针荧光定量PCR法检测脑膜炎奈瑟菌具有灵敏、特异、快速方便的特点,可为流脑流行病学调查提供一种快速、方便的病原学诊断手段,具有实用价值.     

应用荧光定量PCR检测环境样品中鼠疫耶尔森菌

目的应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测土壤和动物脏器中鼠疫耶尔森菌，评价并优选环境样品目标核酸的纯化方法。方法应用TaqMan荧光定量PCR技术，以鼠疫耶尔森菌pla、caf1、hms引物、探针为指标，比较不同种从土壤和脏器中纯化鼠疫耶尔森菌核酸的方法。结果应用NaI—Glassmilk方法及荧光定量PCR检测土壤中的鼠疫菌，检出底限为10^4拷贝／g土壤（pla），从染疫动物脾脏、肝脏标本中也能敏感检出鼠疫菌。结论荧光定量PCR方法和Nal裂解Glassmilk制备模板联合应用可灵敏特异地从土壤和动物脏器中检测鼠疫耶尔森菌。     

复合探针荧光定量PCR检测土拉弗朗西斯菌

目的:建立检测土拉弗朗西斯菌复合探针荧光定量PCR方法。方法:对土拉弗朗西斯菌的FopA基因设计引物和探针,用荧光定量PCR检测,并对特异性、灵敏度和重复性进行评价。结果:本方法对所试验的土拉弗朗西斯菌纯培养物的最低检测浓度为100 CFU/ml,定量的检测变异系数小于5%。在模拟的污染血液样品中的检出限为1×103 CFU/ml。结论:本文建立的复合探针荧光定量PCR方法能高效、敏感、特异地检测土拉弗朗西斯菌。     

荧光实时定量PCR检测单核李斯特菌方法学建立及应用

目的 建立检测单核细胞增多性李斯特菌的荧光定量PCR方法，并利用此方法检测人工污染的牛奶中单增李斯特菌菌量。方法 选择单增李斯特菌特异性的基因Listeriolysin O基因为靶目标设计引物，采用煮沸法抽提纯单增李斯特菌株（1／2a）DNA，建立SYBRGREEN实时定量PCR检测体系：结果 定量PCR对李斯特菌可产生特异扩增信号，对其他菌（大肠杆菌）无响应。标准曲线的相关系数为0．9521。最小检菌量约为100个菌落形成单位／反应体系。在人为污染牛奶检测中，与传统细菌计数方法结果相比，相关系数为0．839。结论 实时定量PCR是一种快速、灵敏的定量检测单增李斯特菌的方法，可用于牛奶样品的检测。     

实时荧光定量PCR法与常规PCR法检测沙门菌的比较

目的:比较实时荧光定量PCR法、常规PCR法检测沙门菌的灵敏度与特异性。方法:采用建立的实时荧光定量PCR、常规PCR方法,同时对沙门菌等细菌进行检测。结果:实时荧光定量PCR检测的灵敏度可达33 cfu/m l,且有很高的特异性,对金黄色葡萄球菌等10种相关细菌均无交叉反应,从细菌核酸提取至完成检测仅需3 h左右。结论:实时荧光定量PCR检测由于在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是2种方法中最为快速敏感的方法,适用于临床实验室的快速诊断。     

多重荧光定量PCR检测沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌

目的基于SYBR Green I染料建立沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌的多重荧光定量PCR检测方法。方法针对沙门菌invA基因、志贺菌ipaH基因和virA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因和femA基因片段设计引物,根据Tm值的差异分析确定荧光定量PCR扩增的靶基因和特异性引物,通过优化PCR反应体系,建立了用SYBR GreenⅠ多重荧光定量PCR熔解曲线来检测多种致病菌的方法。结果该方法检测的菌液灵敏度分别是沙门菌168 CFU/ml,志贺菌136CFU/ml,金黄色葡萄球菌1240CFU/ml,特异性强,整个过程只需要2h。结论该方法能快速、灵敏、特异检出沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌。     

泌尿生殖道感染阴道加德纳菌检测及耐药性分析

目的　探讨检测阴道加德纳菌的理想方法 ,并了解泌尿生殖道感染患者阴道加德纳菌的检出率及体外药敏情况。方法　对 6 90例泌尿生殖道感染患者的宫颈分泌物 ,分别用氨试验、直接涂片找线索细胞和分离培养方法检测阴道加德纳菌 ,并对培养出的阴道加德纳菌进行抗生素敏感性测试。结果　 3种方法对阴道加德纳菌的检出情况分别为氨试验阳性率 8 7% ,线索细胞阳性率 2 2 6 % ,分离培养阳性率 2 4 3% ,阴道加德纳菌对各种抗生素有不同的耐药性。结论　对泌尿生殖道感染患者阴道加德纳菌的检测 ,分离培养法是最理想的方法。对阴道加德纳菌引起的感染可选用菌必治、羧苄青霉素和万古霉素等进行治疗。     

阴道加德纳菌感染与男性不育的相关性研究

目的探讨精液中阴道加德纳菌(Gv)感染与男性不育的关系。方法采用套式PCR术进行Gv检测并与精液参数、精液白细胞含量、AsAb进行相关分析;383例男性不育就诊者精液中检出Gv阳性者设为阳性组;精液Gv阴性者设为阴性组。结果就诊者精液中检出Gv阳性者86例,阳性组精子密度、精子活率、a b活力、低渗肿胀率明显低于阴性组(P<0.05);而阳性组精子畸形率、精液pH值,白细胞精液症检出率、AsAb阳性率明显高于阴性组(P<0.05,P<0.01);两组精液量、精液黏度增高率差异无显著性(P>0.05)。结论精液中Gv感染可影响精液质量,是男性不育的重要原因之一。     

阴道加德纳菌对细菌性阴道病的病原学诊断评价

目的探讨阴道加德纳菌对细菌性阴道病(BV)的病原学诊断价值. 方法对237例妇科门诊生殖道感染患者,采集阴道分泌物标本,用直接涂片染色、细菌分离培养、PCR和BV试验等4种方法,检测阴道加德纳菌和细菌性阴道病;BV诊断按照Amsel金标准分组:BV组174例,非BV组63例;另设对照组40例为健康体检妇女. 结果BV组174例直接涂片(线索细胞)、细菌培养、PCR和BV试验等4种方法阳性检出率分别为30.5%、51.1%、78.2%和89.7%;63例非BV组,阳性检出率分别为6.3%、9.5%、11.1%和28.6%,2组比较经统计学分析,P值均<0.05,差异有显著性;40例健康对照组,只有PCR阳性检出率为12.5%,余均为阴性;23株GV药敏试验结果甲硝唑敏感2株,替硝唑敏感3株,罗红霉素敏感3株,阿奇霉素敏感4株,克林霉素敏感1株.结论阴道加德纳菌在细菌性阴道病中占有主导作用,是细菌性阴道病的重要致病菌之一;BV诊断试验快速、敏感,适用于BV筛查;涂片染色检测线索细胞简单、易行,且可同时进行真菌、淋菌等检测;细菌分离培养是阴道加德纳菌鉴定的金标准.     

荧光定量PCR检测戊肝病毒的应用价值探究

摘要:目的　探讨荧光定量PCR检测HEV RNA的应用价值。方法　从110535份血清标本中,随机抽取标本200份,分别进行ELISA检验和荧光定量PCR分析。结果　69例ELISA阳性的标本经荧光定量PCR检测均为阳性,31例ELISA可疑的标本经荧光PCR检测也均为阳性,100例ELISA阴性的标本中有2例经荧光定量PCR检测结果为阳性。经Kappa检验,Kappa值为0.72,可认为2种方法检测结果具有中度一致性。采用Stuart-Maxwell检验,结果显示PCR与ELISA检出3种情况的边际概率不相等（χ2＝33,P＝0.00,P＜0.05）,提示2种方法检测结果存在差异,即荧光PCR的阳性检出率更高。结论　荧光定量PCR检测HEV RNA能客观地反映HEV感染、复制及病程变化,修正或补充对ELISA测定结果的判定和解释,有利于HEV感染的早期诊断。     

应用荧光杂交定量PCR和ELISA法进行产前TORCH筛查比较研究

目的:比较荧光杂交定量PCR和ELISA法进行产前TORCH筛查的差异,探讨病原微生物拷贝数在临床诊治中的作用。方法:分别用荧光杂交定量PCR和ELISA IgM法筛查272例孕期血标本(妊娠早期102例、晚期170例);121例分娩母血及新生儿脐带血标本;222例不明原因流产血标本,其中66例采集了新鲜自然流产脱膜和绒毛。结果:孕期筛查血CMV DNA和TOX DNA的阳性率分别为1.8％(5/272)和0.36％(1/272)。其中妊娠早期CMV DNA的阳性率为2.9％(3/102),晚期为1.2％(2/170)。不明原因流产者,查出血清CMV感染者22例,TOX4例,CMV DNA和TOX DNA的阳性率分别为9.9％(22/222)和1.8％(4/222)。脱膜和绒毛均感染者3例,1例血清、脱膜感染但未采到绒毛标本,2例孕母血清中查到CMV,而流产组织中未查到。查出血清、脱膜和绒毛均感染TOX者1例。妊娠妇女外周血CMV DNA≥10~3有88％发生流产。结论:荧光杂交定量PCR法不但具有较高的灵敏度和特异性,而且可检测病毒负载量—拷贝数/ml,拷贝数越高发生流产的可能性愈高,应推荐作为妊娠初期筛查的首选方法。     

异常妊娠者阴道加德纳菌和解脲脲原体DNA检测结果分析

目的探讨阴道加德纳菌、解脲脲原体与异常妊娠的关系。方法采用套式聚合酶链反应（n-PCR）法对96例异常妊娠者、104例足月正常妊娠者进行加德纳菌和解脲脲原体联合分子检测。结果96例异常妊娠者加德纳菌DNA、解脲脲原体DNA阳性率及总阳性（有任一阳性者）率分别为39．58％，66．67％，81．25％；104例足月正常妊娠者分别为18．27％，18．27％，30．77％，两组比较，差异均有显著性（P〈0．005）。单独加德纳菌阳性或解脲脲原体阳性导致早产和俄胎膜早破的发生率分别为22．22％和60．37％，风险指数（RR）为1．9和9．9；而上述两菌均阳性时，早产和俄胎膜早破的发生率达66．67％，RR为13．0。结论加德纳菌和解脲脲原体感染与不良妊娠结局相关，两者混合感染可协同增加早产和域胎膜早破的危险性。     

3种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA阴性结果的比较

目的：为了解实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）不同试剂间的假阴性差异,分析其原因,寻找消除办法。方法：用深圳匹基基因诊断技术有限公司的FQ-PCR试剂（A方法）检测2 333份血清病毒学标志为HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc阳性病人血清中的HBV-DNA,对HBV-DNA阴性标本,用2种试剂盒进行复核。结果：2 333份HBeAg阳性标本A方法检出48份HBV-DNA阴性标本,阴性率为2.06%,经广州中山大学达安基因股份有限公司试剂（B方法）复核,有28份转为HBV-DNA阳性;上海申友基因技术诊断公司试剂（C方法）复核,有31份转为HBV-DNA阳性。结论：FQ-PCR不同试剂检测HBV-DNA存在假阴性,且假阴性率较高,其原因可能与试剂引物设计保守序列与HBV某些变异造成不相匹配有关,可以采用多种试剂进行复核的方法弥补。当FQ-PCR检测HBV-DNA低于检测值时,应用其他试剂进行复核,以减少假阴性错误的发生,为临床诊断提供可靠的依据。     

女性生殖道感染患者阴道加德纳菌培养方法的建立

目的探讨细菌性阴道病(BV)患者阴道加德纳菌(GVA)感染及实验室检测方法的应用,建立简便的BV检测方法。方法采用自制加德纳菌选择性培养基对A、B、C 3组宫颈、阴道分泌物进行培养及药物敏感试验,与进口的加德纳菌琼脂培养基的试验结果对照,并同时涂片找线索细胞、胺试验、BV试验及白带常规检验。结果自制阴道加德纳菌选择性培养基与进口的加德纳菌琼脂培养基对GVA分离率两者效果相近(P0.05);156例BV患者GVA的总检出率为39.7%,其中100例宫颈炎患者GVA的检出率为41.0%;56例阴道炎患者的GVA检出率为37.5%;健康妇女GVA检出率为8.3%;65株GVA对头孢类、青霉素类抗菌药物敏感;而对喹诺酮类、氨基糖苷类抗菌药物耐药性较高。结论自制加德纳菌培养基更有效抑制了革兰阳性菌和真菌的生长,配制简便;GVA的分离率与阴道分泌物的pH值、白细胞数及取材部位相关。     

实时荧光定量PCR检测人宫颈癌细胞赖氨酰氧化酶样-4基因的表达

目的:利用实时荧光定量PCR检测赖氨酰氧化酶样-4(Lysyloxidase-like 4,LOXL4)基因在Hela、ME180、HCC94人宫颈癌细胞中的表达情况.方法:提取3株体外培养宫颈癌细胞株的总RNA,逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR扩增,结合内参基因GAPDH及标准曲线比较LOXL4 mRNA在Hela、ME180和HCC94 3株体外培养的人宫颈癌细胞中的表达.结果:LOXL4基因在3株人宫颈癌细胞中均有表达,但表达水平存在统计学差异,以Hela的表达为参照(Ratio=LOXL4/GAPDH=1.00),ME180的表达水平为6.80E-3,HCC94细胞株表达丰度最低为5.62E-4.结论:建立了LOXL4基因在宫颈癌细胞表达的检测平台,为宫颈癌早期诊断及预测预后提供可借鉴的观察指标.