荧光定量PCR技术快速检测食物中副溶血性弧菌

目的 应用荧光定量PCR技术,实现对副溶血性弧菌食物中毒的快速检测.方法 根据副溶血性弧菌的基因保守区设计特异性引物和Taqman探针,建立荧光定量PCR技术,同时验证方法的敏感性和特异性,并与普通PCR、常规培养法进行比较.结果 用荧光定量PCR技术检测副溶血性弧菌,其检测灵敏度为1.5 CFU/ml,其敏感性比普通PCR高10倍,比常规培养法高1000倍.且快速简便,特异性强,从核酸提取至完成检测最快能在2～3h内完成,而常规培养需3～4d.通过对发生的4起食物中毒96件样品的检测,证实该方法可以使阳性检出率从常规法的40.62％提高至47.92％.结论 建立的荧光定量PCR技术特异性强,敏感性高,操作简便快速,适用于副溶血性弧菌食物中毒的快速检测.     

实时荧光定量PCR技术在疫情和食物中毒检测中的应用

实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术是一种日益成熟的生物体核酸检测技术,由于其具有快速、特异、敏感、定量、安全、操作简便等特点,在医学诊断、卫生防疫等领域中得到广泛的应用。目前,针对常见疫情和食物中毒中的病源微生物,已设计和开发了相应的特异性引物及探针,可以对这些微生物进行快速检测,从而提高了政府及相关部门应对和解决突发公共卫生事件的能力。     

荧光定量PCR在病原微生物检测中的应用

<正>常规PCR检测技术是一种特异、敏感的分子检测技术,在病原微生物的快速诊断方面发挥出了重要作用。但是普通PCR技术在实际工作中问题较多,尤其是机械化程度比较低,在PCR后处理方面基本需要依靠人工操作来实现。另外,普通PCR技术还有不能实现定量、PCR扩增产物易受污染等不足。荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上发展起来的核酸定量新技术,其基本原理相同,仅在PCR反应体系中加入荧光基团,利用     

食品中副溶血弧菌荧光定量PCR方法快速检测

目的利用荧光定量PCR技术，建立食品中副溶血弧菌污染的快速、准确的定量检测方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列设计合成副溶血弧菌FQ-PCR诊断试剂盒，研究其灵敏度、特异性，并应用于模拟食品样本检测。结果在31株不同菌株的检测中，8株副溶血弧菌结果均为阳性，而其他23株弧菌科及其他菌属的菌株均为阴性；纯菌条件下定量检测低限10cfu／ml；对模拟样本直接进行，检测低限为10^3cfu／g，经培养增菌后，检测低限则达到2cfu／g。结论该方法特异性强、敏感性高，操作简便快速，检验周期仅需36h，扩增与检测在封闭单管进行，可避免常规PCR方法易污染缺陷，具有很好的推广应用前景。     

应用荧光定量PCR检测阴道加特纳菌

目的:确定荧光定量PCR方法检测细菌性阴道病相关细菌阴道加特纳菌的可行性。方法:采用SYBR Green方法建立了阴道加特纳菌荧光定量PCR方法,评价荧光PCR方法的特异性、灵敏度、重复性;并对568例临床分泌物样本进行检测。结果:本实验所建立的荧光定量PCR方法可准确、特异的检测阴道加特纳菌;该方法的灵敏度可达到1拷贝/μl;194例细菌性阴道病患者分泌物标本中荧光定量PCR法检出116例(59.79%)阴道加特纳菌;而在374例非细菌性阴道病患者分泌物标本中荧光定量PCR法检出35例(9.36%)阴道加特纳菌;荧光定量PCR法检出率明显高于细菌培养方法,差异具有显著性,χ2=24.89,P<0.01。结论:荧光定量PCR方法能够应该用于临床分泌物标本中的阴道加特纳菌的检测。     

实时荧光定量PCR在流感病毒检测中的应用进展

流行性感冒病毒简称为流感病毒,属于一种RNA的病毒,呈现出丝状或者球形的状态.流感病毒可以分为甲型、乙型以及丙型流感病毒,主要是由凝血素以及神经氨酸酶共同组成,该病毒具有一定的抗原性,极易发生变异.目前感染人类的主要是甲型和乙型两种,甲型流感病毒则主要包含H以及N的变异,H有16个亚型,而N有9个亚型.乙型流感病毒则存...     

荧光定量PCR在孕妇HCMV感染检测中的应用研究

目的使用荧光定量PCR检测孕妇尿液中HCMV-DNA,提高该人群中病毒检出率。方法对广西南宁和桂林两地共600名孕妇进行尿液HCMV-DNA检测,同时进行血清HCMV-IgG和HCMV-IgM检测,对比以上两种方法在产前诊断中的应用价值。结果尿液HCMV-DNA阳性率为8.50%(51/600),血清HCMV-IgG阳性率为98.8%(593/600),HCMV-IgM阳性率为1.83%(11/600)。结论相对于传统的酶联免疫检测法,荧光定量PCR可明显提高孕妇病毒检出率,并且提供定量数据,同时使用荧光定量PCR和ELISA将为临床提供更加准确的实验室诊断结果。     

实时荧光定量PCR技术在群体感染性腹泻病原体快速筛查中的应用

目的:建立快速筛查感染性腹泻标本的实时荧光定量PCR法,考察其在群体感染性腹泻病原体快速筛查中的应用.方法:采用国家标准的细菌培养法(或传统ELISA法)对2006年丽水地区发生的总计14起共487例群体感染性腹泻标本进行病原体筛查,同时采用实时荧光定量PCR方法对该487例标本进行检测,比较两者的实验结果,并考察实时荧光定量PCR方法的特异性和灵敏度.结果:实时荧光定量PCR检测结果与传统检测方法的符合率为97.54%,除完全符合的278例标本之外,另有7例采用传统方法检测为阴性的标本用实时荧光定量PCR检测显示为阳性.表明实时荧光定量PCR方法具有更高的灵敏度;特异性和灵敏度实验表明实时荧光定量PCR方法的特异性达100%,灵敏度为102拷贝/ml.结论:实时荧光定量PCR法具有准确性好、灵敏度高、检测快速等优点.是一种理想的群体感染性腹泻病原体快速筛查的方法.     

实时荧光定量PCR技术在食品检验中的应用

实时荧光定量PCR(real-time quantitativepolymerase chain reaction,RQ-PCR)又称荧光定量PCR,1994年由日本科学家Higuchi提出。当时因为想实时地看到PCR反应的整个过程,就在普通PCR仪的基础上配备了一个激发和检测的装置,在PCR反应的退火或延伸阶段检测掺入到双链核酸中EB的含     

实时荧光PCR在食源性疾病中的应用

目的:探讨实时荧光PCR快速检测在食物中毒中病原学基因诊断的应用。方法:采用实时荧光PCR检测技术对一起副溶血性弧菌引起的食物中毒患者的粪便和肛拭增菌液进行快速检测,同时采用传统的分离方法和细菌生化鉴定仪的生化鉴定,及日本生研株式会社生产的肠炎溶血性弧菌型别免疫血清(K型别)分型。结果:在这一起食物中毒的患者中,实时荧光PCR检测6份粪便和肛拭增菌液,其中,4份阳性,并从PCR阳性的增菌液中分离到4株副溶血性弧菌K6型。结论:实时荧光定量PCR技术特异性强,灵敏度高,能在采样后数小时内检测到病原菌的DNA,达到快速诊断的目的,在食物中毒的快速诊断上起重要作用。     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌肠毒素基因ctx的应用研究

〔目的〕建立霍乱病原菌快速检测的检验技术。〔方法〕运用单次和巢式聚合酶反应检测霍乱弧菌肠毒素基因ctx。〔结果〕本技术检测霍乱病原菌特异性强 ,检测下限达 4cfu/ml( 10 0 cfu/ml级水平 )。〔结论〕本技术检定霍乱病原菌简便、快速、敏感度高且准确性好。     

凝结芽孢杆菌PCR快速检测方法研究

目的:建立一种特异、灵敏的凝结芽孢杆菌快速检测方法。方法:根据凝结芽孢杆菌寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因设计一对PCR引物,进行了引物的特异性和灵敏度试验。结果:PCR得到了较好的特异性扩增,其它干扰菌都无扩增,灵敏度达5×103cfu/ml。结论:该方法能够实现凝结芽孢杆菌的快速检测,具有灵敏度高、特异性好的特点。     

2009-2010年内蒙古通辽市食品污染状况分析

目的 了解内蒙古通辽市大众消费量大、流通广的食品中主要食源性致病菌的污染情况,进行食品风险评估、确立风险管理决策,降低人群食源性疾病的发病率.方法 卫生部2009、2010年国家食源性致病菌监测工作手册.结果 采集397份样品检测8种致病菌,2009年采集80份样品检出致病菌17株,检出率为21.25%;2010年采集...     

秦皇岛市北戴河区引起食源性腹泻的病原菌

目的 分析秦皇岛市北戴河区引起食源性腹泻的常见病原菌,为有效预防控制食源性腹泻提供有针对性的措施.方法 对散装熟肉制品、熟肉类凉拌菜、水产品类凉拌菜、生食水产品类等样品进行沙门菌、志贺菌、大肠埃希菌O157∶H7/NM、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特菌等病原菌的监测.结果 共检测700份样品,检出致病细菌209株,检出率为29.86％.其中检出金黄色葡萄球菌145株,检出率20.71％;志贺菌和大肠埃希菌O157∶H7/NM没有检出.各种致病菌污染食品情况存在明显差异,其中水产品凉拌菜检出率最高,为42.86％;生食水产品类检出率最低,为6.86％.4类食品致病菌检出率差异有统计学意义(x2=62.995,P＜0.01).结论 经过加工和处理后的食品其细菌的检出株数明显高于未加工样品细菌检出的株数.对食品在制作、灌装、储存及售卖过程中由于操作不当,温度波动,卫生状况不良等原因导致微生物污染和大量繁殖,食用这些食品引起食源性腹泻的风险就会增加.提示在食品安全监管过程中,加强食品生产销售过程的监管,能有效控制食品安全事件的发生.     

实时荧光PCR快速同时检测从业人员沙门菌和志贺菌结果分析

目的 了解双重实时荧光PCR快速同时检测从业人员沙门菌和志贺菌的效果.方法 采集从业人员肛拭子样本,用双重实时荧光PCR法检测沙门菌和志贺菌,检出的疑似阳性样本按国标法进行培养鉴定.结果 采用双重实时荧光PCR反应体系共检测从业人员39 974人次,荧光PCR检测出沙门菌阳性41份,阳性率1.22‰,培养法检测出31份,阳性率为0.78‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100％,特异性为99.95％.荧光PCR检测出志贺菌10份,阳性率为0.25‰,培养法检测出3份,阳性率为0.08‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100％,特异性为99.98％.从样品处理到检测结果仅需要时间2h～ld.结论 双重实时荧光PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于从业人员体检的快速诊断和肠道传染病的初筛,为肠道传染病的分子流行病学调查提供新的检测手段.     

核酸检测及相关技术在食源性致病菌快速检测中的研究

传统的细菌分离、培养与鉴定由于需时较长,难以适应食源性疾病预防控制的需要。近年来,伴随着核酸检测技术的迅猛发展,各种能够快速检测食源性致病菌的方法相继诞生。本文就聚合酶链式反应及其衍生技术、核酸恒温扩增技术、寡核苷酸微阵列技术、免疫磁性细胞分离技术及DNA生物传感器技术在沙门菌、金黄色葡萄球菌、肠出血性大肠埃希菌等食源性致病菌快速检测中的应用研究进行综述。     

2017年内蒙古自治区食源性致病菌监测结果分析

目的 了解内蒙古自治区食源性致病菌的污染状况,提高食源性疾病预警和控制能力。方法 按照《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》要求,对市售的8类食品样本进行单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、沙门菌、致泻大肠埃希氏菌、副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、大肠埃希氏菌O157∶H7和弯曲菌等9项食源性致病菌进行监测。结果 自2027份样品中共计检出阳性样品39份,检出率1.92%。其中,蜡样芽胞杆菌检出率最高,达3.64%,此后依次为弯曲菌（1.50%）,致泻大肠埃希氏菌（1.20%）、单核细胞增生李斯特氏菌（0.62%）、沙门菌（0.43%）和金黄色葡萄球菌（0.37%）,未检出大肠埃希氏菌O157∶H7和副溶血性弧菌。结论 内蒙古自治区食品存在食源性致病菌污染,应有针对性地加强食品监督管理,以减少食源性疾病发生。     

溶藻弧菌TaqMan实时PCR快速检测体系的建立

目的:建立溶藻弧菌TaqMan实时PCR快速检测体系。方法:根据溶藻弧菌胶原酶基因colH的保守序列设计一对引物和一条TaqMan探针,优化反应体系中的引物浓度和探针浓度,评价此反应体系的特异度,并确定其检测下限。结果:优化的反应体系中,引物浓度为200 nmol/L,探针浓度为200 nmol/L,检测下限为1.0×102拷贝/μl,较普通PCR提高了100倍。特异度为100%。结论:本研究所建立的检测体系能够灵敏和特异地检测溶藻弧菌,可以作为溶藻弧菌的快速检测方法。     

PCR快速检测沙门菌试剂盒的研制与应用

目的 在优化聚合酶链反应(PCR)检测沙门菌程序的基础上,研制沙门菌PCR检测试剂盒。方法 通过样品检测，确定试剂盒的组成及各种组分对保存期的影响，对PCR和ELISA2种快速检测试剂盒进行比较。结果 该试剂盒能检测出20Pg的沙门菌DNA；在含有Taq酶、未冻干、-20℃的条件下，试剂盒保存期为12个月；以国标法做参照，ELISA试剂盒的敏感性和特异性分别为100％，97.2％．PCR试剂盒的敏感性和特异性均为100％；ELISA和PCR试剂盒的符合率为97．2％；PCR试剂盒检测临床粪便样品150份，检测结果与国标法相符。结论 沙门菌PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速等优点，适用于沙门菌快速检测。