一种新的柱前衍生法测定血浆同型半胱氨酸

目的建立一种新的高效液相柱前衍生法,准确、快速测定血浆同型半胱氨酸(HCY)浓度.方法血中结合态的HCY经三丁基膦还原为游离HCY后,与衍生试剂7-氟苯唑-2-氧-1,3-二唑-4-磺酸胺(ABD-F)进行柱前衍生反应,衍生物经反相C18色谱柱,用0.15mol/L磷酸盐缓冲液(pH=4.2)与甲醇按85∶15配制的混合液洗脱.荧光检测激发λ=385nm,发射λ=515nm.结果在3.125～100.00μmol/L范围内,HCY浓度与荧光强度的线性关系良好,γ=0.9998,测定的批内、批间变异系数分别为3.13%和5.10%,高低2种浓度的回收率分别为98.5%和92.7%,健康人血浆HCY的参考值为8.12±2.72μmol/L.结论本法测定血浆HCY准确快速、特异性高、分离效果好,适用于临床血浆HCY测定的常规需要.     

高效液相色谱柱后衍生法测定豚鼠鼻粘膜中组胺

通过比较各种分析柱的分离效果,建立用离子交换柱分离,邻苯二甲苯柱后衍生荧光检测并分析豚鼠鼻粘膜组织中组胺的液相色谱法。并对流动相的离子强度和ＰＨ进行了优化,确定以４０ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１ＰＨ５．５０的柠檬酸钠缓冲液作为流动相为最侍者     

柱前衍生RP-HPLC法测定16种氨基酸

氨基酸是自然界中一种重要的生命物质,作为蛋白质的基本组成单元,在动植物体内蛋白质和多肽的合成过程中起关键作用。有研究表明,某些氨基酸对动物体内多种生命活动起到调节作用,如营养物质的代谢、调控细胞的基因表达和信号转导等[1-2]。因此,氨基酸的分离、分析方法及应用逐渐引起人们的关注[3]。     

柱前衍生HPLC法测定五谷虫中脂肪酸含量

目的 建立HPLC法测定五谷虫中脂肪酸含量的方法.方法 采用2-溴代苯乙酮作为衍生化试剂,三乙醇胺作为催化剂对脂肪酸进行衍生化使其产生紫外吸收,利用HPLC法进行含量测定.色谱条件为Agilent-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);检测波长254 nm;流动相为水∶甲醇=10∶90;柱温为20 ℃;体积流量为1 mL/min,进样量为20 μL,内标为十七烷酸.结果 在上述色谱条件下,各脂肪酸衍生物均达到基线分离.亚油酸的含量为131.0 mg/L,软脂酸的含量为194.8 mg/L,油酸的含量为100.6 mg/L,硬脂酸含量为36.6 mg/L.结论 该方法稳定,重现性好,可用于五谷虫脂肪酸含量测定.     

柱前衍生RP-HPLC法测定胸腺五肽的氨基酸组成

胸腺五肽(thymopentin,TP5)是人工合成的五肽,对应胸腺生成素Ⅱ的32-36位氨基酸,基本序列为NH2-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-COOH,它保留了胸腺生成素的有效生物活性。TP5是一种免疫调节剂,对机体免疫功能具有双向调节作用,在临床上主要用于治疗原发性和继发性免疫缺陷,也可用作各种恶性肿瘤的辅助用药[1-3]。     

柱前衍生化HPLC法测定复方甘油注射液中甘油的含量

目的建立一种测定复方甘油注射液中甘油含量的方法。方法采用Diamonsil C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相:缓冲液(0.01mol/L磷酸二氢钾,磷酸调pH至2.5)-乙腈(65∶35,v/v),流速1mL/min,柱温25℃,检测波长227nm,以对甲苯磺酰异氰酸酯(TSIC)为衍生化试剂,将甘油衍生化后进行含量测定。结果在该色谱条件下,甘油线性方程为y=327.74x+18.64(r=0.999 7,n=7)。加样回收率为97%~103%(n=3),RSD<3%(n=3)。衍生化样品在12h内稳定。测得样品中甘油为97%~103%。结论该方法简便,快速,结果准确,重现性好。     

柱前衍生化HPLC测定中药材氨基酸的含量

目的:建立中药材有效成份氨基酸柱前衍生HPLC分析测定方法。方法:从常见中药材党参和山楂中提取氨基酸,邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生,反相高效液相色谱分离测定,以保留时间定性,面积外标法定量。结果:水解温度108℃,提取24 h,可有效提取药材中的氨基酸;梯度洗脱程序为(t,C%):(t:保留时间C:甲醇):(0,0);(9,30);(16,45);(25,60);(28,65);(32,80),二种药材中的十六种氨基酸得到较好分离和定性定量结果,其中天冬氨酸和胱氨酸的平均加样回收率分别为101.0%和94.4%。结论:采用HPLC柱前衍生分离分析党参和山楂中十六种氨基酸的方法灵敏、简便、快捷、高效,适于推广应用,可为解决中药材氨基酸分离测定难题提供参考。     

柱前衍生化HPLC法测定注射用氨磷汀的含量

 目的 建立一种测定注射用氨磷汀含量的HPLC法。方法 氨磷汀经氯甲酸芴甲酯(9 fluorenylmethyl chloroformate,FMOC Cl)衍生化后用HPLC法分析。采用Agilent C18 柱(150 mm×4.6 mm,5 μm) 色谱柱,流动相A:乙腈,B:水。0~4 min,A∶B=30∶70;4.1~10 min,A∶B=98∶2,每次进样前再平衡7 min;柱温25℃,流速1 mL/min,检测波长265 nm。外标法计算含量。结果 在该色谱条件下,氨磷汀在5~100 μg/mL 浓度范围内有良好的线性关系(r>0.999,n= 6),回收率为97%～103%(n=5),RSD<2.0% (n=5)。最低检测质量浓度为100 ng/mL。样品在6 h 内稳定。测得样品含量合格,在90%～110%之间。结论 经方法学实验验证,该方法简便、快速、结果准确、可靠、重现性好。     

柱前衍生HPLC测定阿胶中17种水解氨基酸含量

目的 建立柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)同时测定阿胶中17种水解氨基酸含量的方法.方法 用6 mol/L盐酸溶液水解阿胶中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂;用Hypersil BDS C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254nm,柱温为30℃.结果 17种氨基酸在60 min内均可得到很好的分离,回收率为97.4％～1 00.1％,RSD为1.6％～3.4％.结论 建立的方法可靠,可用于阿胶中17种水解氨基酸的含量测定.     

HPLC法测定盐酸非索非那定片的有关物质

目的 用HPLC法测定盐酸非索非那定中的有关物质。方法 C18柱,φ(0．01mol／L磷酸二氢钾：甲醇)=75：25为流动相,10％磷酸调pH值至3．5,检测波长为220nm。结果 盐酸非索非那定与有关物质能有效分离,有关物质的最低检测限(S／N=3)为2ng。结论 本法快捷、简便、准确,适用于盐酸非索非那定片的质量控制。     

2,4-二硝基氟苯柱前衍生化HPLC法测定阿仑膦酸钠片的含量

目的建立2,4-二硝基氟苯柱前衍生化HPLC法测定阿仑膦酸钠片的含量。方法碱性条件下供试品与2,4-二硝基氟苯进行衍生化反应,采用Ultimate XB-C18柱,流动相为乙腈-0.01mol·L^-1 KH2PO4溶液（用三乙胺调节pH值至7.0）,梯度洗脱,流速为1.0mL.min^-1,检测波长为365nm。结果阿仑膦酸钠质量浓度在0.05～1.00mg·mL^-1范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.9996）,平均回收率为99.8%（n=9）。结论该方法专属性好,准确、灵敏,适合用于阿仑膦酸钠片的含量测定。     

HPLC法测定地氯雷他定中的有关物质

通过实验设计建立地氯雷他定原料有关物质检测方法。确定最优色谱条件为:ODS柱(4.6 mm×250 mm,4 μm);检测器:UV检测器;检测波长:280 nm;柱温:35 ℃;流动相流速:1.5 mL/min;进样体积:40 μL;流动相:乙醇-0.003 mol/L十二烷基硫酸钠水溶液(47∶53),建立了地氯雷他定有关物质检测方法,可同时对工艺杂质及降解杂质进行检测。本方法简单、可靠,可准确检测地氯雷他定中有关物质含量,为地氯雷他定的质量控制提供理论依据。     

HPLC测定普罗雌醚原料药及其有关物质的含量

目的:用HPLC法测定普罗雌醚原料药的含量及其有关物质,为普罗雌醚原料药及其有关物质测定提供检测方法。方法:采用Waters Nova-Pak C18柱,磷酸盐缓冲液(含0.01mol/L的磷酸氢二铵和0.01mol/L氢氧化四甲基铵,pH3.0)-甲醇(2:98)为流动相;检测波长为280nm;柱温30℃;流速1.0mL/min。结果:主峰能与相邻杂质峰较好分离,普罗雌醚的浓度在2.0～200g/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.9999。结论:该法简便、准确、专属性好,可以用于普罗雌醚原料药的含量及其有关物质的测定。     

HPLC法测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质

目的：建立测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质的高效液相色谱法。方法：采用ODSC18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,以0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（用磷酸溶液调节pH至3.0）-甲醇（90∶10）为流动相,流速1.0ml/min,于225nm波长处测定。结果：在本色谱条件下,2种有关物质均能得到较好的分离,且在测定范围内有较好的线性及精密度。结论：采用HPLC法测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质的方法简便、准确、灵敏度高,方法可靠,可用于甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质的测定。     

HPLC法测定塞来昔布胶囊中有关物质

目的 建立一种有效测定塞来昔布胶囊中有关物质的高效液相色谱法,并进行质量方法学研究。方法 采用Phenyl-2 Hypersil柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为甲醇–0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）（45∶55）;柱温为40 ℃;检测波长为215 nm;体积流量为1.3 mL/min;进样量为80 μL。结果 4-[5-(2-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺的质量浓度在1.0～3.0 μg/mL具有良好的线性关系（r=0.999 6）;检测限（S/N=3）为0.4 ng。结论 本方法简便准确、重现性好,精密度高,可有效地检测塞来昔布胶囊中有关物质,并为塞来昔布的检查和方法学研究提供了依据。     

高效液相色谱法测定佐匹克隆的有关物质

目的建立高效液相色谱法测定佐匹克隆的有关物质。方法高效液相色谱法采用Apollo C18（250mm×4.6mm,5μm）柱分离,流动相以8.1g/L十二烷基硫酸钠,1.6g/L磷酸二氢钠水溶液（用10%磷酸调pH3.5）-乙腈（60：40）,流速1.2ml.min-1,检测波长303nm,柱温30℃。结果高效液相色谱测定佐匹克隆在2.0~79.0ng（Y=2280977.80X＋784.96r,=0.9999）及2-氨基-5-氯吡啶在2.0~79.0ng（Y=1757411.68X-60.63r,=1.0000）范围内线性关系良好。佐匹克隆的最低检出量为0.05ng,2-氨基-5-氯吡啶的最低检出量为0.10ng;2-氨基-5-氯吡啶、各破坏性分解产物能和主峰分离;高、中、低3种浓度的加样回收率分别为101.25%（RSD=0.42%）、101.24%（RSD=0.62%）和101.11%（RSD=0.19%）;稳定性试验表明样品不稳定,需要新鲜配制。结论建立高效液相色谱法测定佐匹克隆显示准确、灵敏、可靠、专属性强,可用于佐匹克隆的质量控制。     

HPLC测定盐酸阿奇霉素及其有关物质

阿奇霉素为15元环新型大环内酯类抗生素,结构上与红霉素类似,不同的是内酯环的9α位上有甲基氮。阿奇霉素的作用机理与红霉素相似,通过抑制细菌蛋白质的合成而起作用,且具有抗菌谱广、不良反应小等优点。在传统生产工艺中,将阿奇霉素直接与强酸溶液反应生成阿奇霉素盐。而阿奇霉素在强酸（如浓HCl,浓H2SO4）条件下不稳定,因此易使阿奇霉素遭到破坏,而相关物质增加。     

HPLC法测定复方左氧氟沙星喷雾剂相关物质

目的用高效液相色谱梯度洗脱的方法有效的控制复方左氧氟沙星喷雾剂杂质。方法色谱柱BonChromC18,流动相为0.025 mol/L磷酸（三乙胺调pH 3.0±0.1）和乙睛两相不同比例梯度洗脱,检测波长为278 nm,流速1 ml/min,柱温30℃。结果有效地控制了该喷雾剂杂质的含量。结论方法可靠稳定、无干扰,专属性强。     

HPLC法测定巴特芬搽剂的有关物质

目的：建立测定巴特芬搽剂有关物质的高效液相色谱法。方法：采用Purospher C18柱，以流动相Φ[A（乙腈）：流动相B（含0.025mol/L枸橼酸、0.0025mol/L乙二胺四乙酸二钠，pH6.5)]=35:65的混合液作为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为303nm，进样量为20μL，柱温为30℃。结果：有关物质Ⅰ及有关物质Ⅱ的浓度在0.05-3.0μg/mL范围内均与峰面积呈良好的线性关系，r分别为0.9994、0.9992。平均回收率分别为100.2%、100.4%，RSD分别为0.54%、0.74%(n=9)。最低检测限量有关物质Ⅰ为0.1ng，有关物质Ⅱ为0.3ng。结论：本方法简便，快速，结果准确，重现性好，可用于该药有关物质的检查。     

柱前手性衍生化-HPLC法测定普瑞巴林的光学纯度

目的:建立柱前手性衍生化-HPLC法测定普瑞巴林的光学纯度。方法:以N2-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙氨酰胺为手性衍生化试剂,对普瑞巴林S/R对映体进行衍生化,生成具有紫外吸收的一对非对映体衍生化产物(λmax=339nm),经C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),0.5%三乙胺溶液(用磷酸调节pH至3.0)-乙腈(55∶45)为流动相进行分离,测定普瑞巴林的光学纯度。结果:所形成的普瑞巴林非对映体衍生化产物稳定且分离良好,R-异构体浓度在0.20~2.02μg/mL范围内与其衍生化产物峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 6),加样回收率为96.3%,最低检测浓度为0.02μg/mL。结论:所建立方法快速、灵敏、重复性好,可用于普瑞马林光学纯度的检查。