全反式维甲酸体外诱导神经母细胞瘤细胞分化的实验研究

目的体外观察全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞系SH-SY5Y(SY5Y)细胞生长及分化的影响及其可能的分子机制。方法用RT-PCR方法检测ATRA作用前后SY5Y细胞TrKA mRNA表达情况;采用台盼蓝拒染法检测ATRA对SY5Y细胞的体外抗增殖作用;用倒置相差显微镜观察细胞形态变化。结果ATRA作用7d后SY5Y细胞TrKA mRNA表达增高;ATRA对SY5Y细胞有抗增殖作用和诱导细胞分化作用,并呈一定时间和剂量依赖关系。结论ATRA对SY5Y细胞有生长抑制及诱导分化作用,该作用与上调SY5Y细胞TrKA mRNA表达水平有关。     

ATRA对NB细胞增殖抑制及诱导分化作用的研究

目的；通过对神经母细胞瘤（NB）细胞系SH－SYT6和SMS－KCNR的体外实验，探讨全反式维甲酸（ATRA）对NB细胞增殖抑制的可能分子机制及脑源性神经营养因子（BDNF）－TrkB信号转导途径在NB细胞分化中的作用。方法：通过台盼蓝拒染计数活细胞，用倒置相差显微镜观察加药处理前后细胞形态学变化。结果：5μmol/L ATRA抑制NB细胞系SMS－KCNR和SH－SY5Y细胞增殖，而5nmol/L ATRA无此作用；ATRA可诱导SMS－KCNR细胞分化成熟，对SH－SY5Y细胞诱导分化作用极弱；BDNF可使经ATRA处理的SY5Y细胞发生显著形态学分化。结论：5μmol/L ATRA对人NB细胞系SMS－KCNR和SH－SY5Y细胞的体外增殖有抑制作用；ATRA能诱导人NB细胞系SMS－KCNR细胞分化成熟，ATRA与BDNF共同作用可使1SH－SY5Y发生显著形态学分化；BDNF－TrkB信号转导途径的激活可能是ATRA体外诱导NB细胞分化逆转的分子生物学机制之一。     

全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖分化的影响

目的:研究全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响.方法:用5 mg/L全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)诱导C6胶质瘤细胞,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验绘制细胞生长曲线以考察ATRA对细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞仪、光镜、透射电镜和免疫组织化学染色鉴定细胞的分化状况.结果:C6胶质瘤细胞经全反式维甲酸诱导后,细胞增殖受到明显抑制,并且密度明显减少(P<0.01).细胞周期受阻,G0/G1期延长,S期细胞比例明显减少(P<0.01).光镜观察到诱导前的C6胶质瘤细胞呈正常的成纤维细胞形态,而诱导后的C6胶质瘤细胞变细长,中间呈圆形或卵圆形,两端形成长尖突起.流式细胞仪的凋亡率检测显示,未见明显的凋亡;透射电镜观察显示,细胞有早期凋亡改变,且胞浆内空泡增多,线粒体和内质网丰富,细胞结构基本趋向正常.C6胶质纤维酸性蛋白表达明显增强.结论:全反式维甲酸能抑制胶质瘤细胞的增殖,并能诱导C6细胞分化.     

维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞增殖的影响

目的 观察全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579诱导分化作用中细胞增殖的影响.方法 以终浓度为10-7、5×10-7、10-6、5×10-6、10-5 mol/L的全反式维甲酸作用SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;采用MTT比色法测定细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期.结果 全反式维甲酸能使细胞趋向良性分化,抑制了肿瘤细胞增殖,使细胞滞留在S期.结论 全反式维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性的增殖抑制作用,并且在低浓度时(10-7、5×10-7、10-6 mol/L)可能对细胞具有诱导分化作用.     

全反式维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579凋亡的影响

目的观察全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)体外诱导甲状腺鳞癌细胞株SW579形态学变化和细胞凋亡。方法分别以终浓度为10-7、10-6、10-5、2×10-5、4×10-5、6×10-5、8×10-5、10-4mol/L的维甲酸作用SW 579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;利用吖啶橙染色,荧光显微镜下观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果ATRA作用后,可见细胞形态改变;经荧光染色后可见凋亡的细胞,染色质浓集,呈致密的斑块状或新月状,并可见凋亡小体及核碎片;流式细胞仪分析,凋亡率随ATRA浓度的升高而升高(P<0.01)。结论不同浓度的ATRA可诱导SW 579细胞形态学变化及细胞凋亡。     

全反式维甲酸对宫颈癌耐药细胞株HeLa/MMC侵袭、转移能力的影响及其分子机制研究

目的观察全反式维甲酸(ATRA)对宫颈癌耐药细胞株HeLa/MMC侵袭、转移能力的影响,并探讨其分子机制。方法分别用不同浓度ATRA(1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L)处理对数生长期HeLa/MMC细胞,以Transwell小室检测细胞侵袭、转移能力的变化;采用CCK-8法检测经1×10-7、5×10-7、1×10-6、5×10-6、1×10-5mol/L ATRA处理后的细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察1×10-6mol/L ATRA处理He La/MMC细胞3、7 d后细胞周期的变化;半定量RT-PCR检测1×10-6 mol/L ATRA处理He La/MMC细胞3、7 d后细胞c-myc mRNA水平变化。结果 1Transwell小室结果显示,1×10-7mol/L ATRA组、1×10-6 mol/L ATRA组、1×10-5 mol/L ATRA组细胞侵袭数、转移数[(40±6)、(73±7)个,(26±4)、(61±4)个,(16±3)、(49±5)个)]均减少,与对照组[(63±9)、(89±9)个]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2CCK-8法检测细胞增殖结果显示,随着全反式维甲酸药物浓度的递增,He La/MMC细胞增殖逐渐被抑制;实验各组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3流式细胞仪检测结果显示,全反式维甲酸使进入S期耐药细胞数减少。1×10-6mol/L ATRA处理3、7 d S期细胞比例分别为(14.90±0.21)%、(6.48±0.18)%;两个实验组与对照组(16.28±0.12)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4RT-PCR结果显示,全反式维甲酸下调癌基因c-myc的转录。1×10-6mol/L ATRA处理3、7 d c-myc m RNA相对表达量分别为(0.5406±0.0011)、(0.4312±0.0009);两个实验组与对照组(0.6804±0.0012)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论全反式维甲酸可抑制宫颈癌耐药细胞株的侵袭、转移,其机制可能通过下调癌基因c-myc转录实现。     

全反式维甲酸诱导对乳腺癌细胞放射敏感性影响的研究

目的 探讨不同浓度全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)分化诱导对乳腺癌细胞的放射敏感性影响.方法 MTT法检测细胞体外增殖能力,电镜形态学的观察,流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 全反式维甲酸分化诱导乳腺癌A431细胞株,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期,放射敏感性增强.结论 全反式维甲酸分化诱导能增强乳腺癌A431细胞株放射治疗敏感性,并与浓度成量效关系.     

全反式维甲酸联合三羟异黄酮对肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)联合三羟异黄酮(Genistein)抑制肺癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用.方法采用不同剂量ATRA、Genistein及两者联合处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549 细胞生长情况并运用MTT法检测其生长抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析及凋亡率检测.结果 A549 肺癌细胞经ATRA、Genistein及两者联合处理后,细胞增殖能力明显下降,更多的细胞被阻滞于G2/M 期,细胞凋亡明显增加,其中以两者联合用药最为显著.结论 ATRA联合Genistein能协同抑制肺癌A549 细胞的恶性增殖并促进其凋亡.     

全反式维甲酸诱导人胆管癌细胞凋亡的作用

目的：研究全反式维甲酸（ATRA）对胆管癌细胞的生长的影响，方法：应用台盼蓝染色，MTT法，光镜，透射电匀流式细胞仪等检测ATRA对体外培养的人胆管癌细胞株QBC939细胞的诱导凋亡作用。结果：不同浓度的ATRA对QBC939细胞的增殖均有抑制作用，且量效关系明显，但大剂量则主要导致细胞坏死，以10μ.mol.L^-1ATRA的作用效是最好。QBC939细胞经10μ.mol.L^-1ATRA处理7d的产殖抑制率可达到60％，光镜及透民镜下可见细胞恶必表型向正常发生逆转，并可观察到凋亡小体，流式细胞仪分析显示，ATRA处理组细胞周期延迟10％，G1期货经例明显升高50．5％，S／G2期比例分别下降39．8％和11．4％，结论：ATRA可抑制胆管癌细胞的增殖，并诱导癌细胞凋亡。     

维甲酸对多种肿瘤细胞生长影响的实验研究

目的 应用全反式维甲酸(ATRA)作用前列腺癌DU—145细胞、早幼粒白血病HL—60细胞和乳腺腺癌MCF—7细胞，观察维甲酸对多种肿瘤细胞生长的影响。方法 应用全反式维甲酸作用HL—60细胞、DU—145细胞和MCF—7细胞，分别以光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态及超微结构的改变，并用流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果 全反式维甲酸作用前列腺癌DU—145细胞、早幼粒白血病HL—60细胞和乳腺腺癌MCF—7细胞后，导致肿瘤细胞生长减缓，肿瘤细胞超微结构出现细胞核固缩、核碎裂、染色质凝集于核膜周边等细胞凋亡的典型形态学改变，流式细胞仪检测肿瘤细胞出现亚二倍体“凋亡小峰”。结论 全反式维甲酸可以诱导多种肿瘤细胞产生凋亡，凋亡的产生与药物的浓度及作用时间密切相关。     

Staurosporine对甲状腺癌SW579细胞的促凋亡作用

【目的】研究星形孢菌素促进人甲状腺癌细胞SW579凋亡的作用,从而为肿瘤治疗寻找新的方向。【方法】MTT法检测ST对SW579细胞增殖的抑制作用。流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡情况。用Hochest33258及MDC染色方法分别检测细胞的凋亡及自噬发生情况。Western blotting用于检测相关蛋白的表达情况。【结果】通过MTT检测发现staurosporine对SW579增殖的抑制呈浓度和时间依赖性。流式细胞术检测发现staurosporine对SW579细胞具有G0~G1期阻滞。【结论】Staurosporine能够诱导对SW579细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的增殖。     

蟾蜍灵对EAhy926细胞增殖、凋亡及Caspase3,Bcl-2表达的影响

[目的]探讨蟾蜍灵对血管内皮细胞EAhy926的增殖抑制作用及其机制.[方法]体外培养血管内皮细胞EAhy926,用不同浓度蟾蜍灵进行干预.通过四甲基偶氮唑盐(MTI)法检测细胞增殖抑制率;用倒置光显微镜观察细胞形态变化;用Hoechst33342/PI双荧光染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化;以流式细胞术检测细胞凋亡的比率;应用半定量逆转录PCR检测EAhy926细胞中Caspase3和Bcl-2的mRNA表达.[结果]蟾蜍灵对EAhy926细胞生长具有抑制作用;且在0.0625-1μmol/L范围内呈时间、剂量依赖性;荧光显微镜下可见0.1μmol/L的蟾蜍灵作用24 h可诱导EAhy926细胞凋亡,作用48h可引起细胞部分坏死;流式细胞术检测出典型的“凋亡峰”,凋亡率8.2％～36.5％,且呈时间依赖性.半定量RT-PCR显示Caspase3 mRNA表达较对照组明显增强,Bcl-2 mRNA表达较对照组明显减弱,且二者均呈剂量依赖性.[结论]蟾蜍灵抑制EAhy926细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase3和下调Bcl-2基因表达有关.     

D-柠檬烯诱导人膀胱癌细胞周期阻滞及凋亡的研究

目的探讨D-柠檬烯对人膀胱癌EJ细胞增殖、细胞周期分布以及凋亡的影响。方法用XTT法、流式细胞技术(碘化丙啶)和流式细胞仪AnnexinV法对D-柠檬烯处理后EJ细胞增殖、周期分布以及凋亡率进行检测。结果经2、4mmol/L浓度D-柠檬烯处理后,EJ细胞增殖活性(OD值)分别为0.801±0.016和0.148±0.008,与对照组(1.218±0.031)比较,生长受到明显抑制,差异有统计学意义(P0.05)。细胞周期分析显示,给药组的合成期(S)细胞百分比为23.05%,而未给药的对照组为38.59%,两组差异有统计学意义(P0.05)。另外,D-柠檬烯作用24h后的EJ细胞出现典型的亚二倍体凋亡峰,药物浓度越高凋亡细胞越多,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论 D-柠檬烯对人膀胱癌EJ细胞具有显著的抑制作用;它还能使EJ细胞停滞于S期,并能诱导细胞凋亡。     

EZH1/2抑制剂UNC1999对肝癌细胞的影响

【目的】探讨EZH1/2抑制剂UNC1999对肝癌细胞SMMC-7721的影响及其作用机制。【方法】实验设2个组：DMSO（对照组）、UNC1999组,分别加入不同浓度的DMSO、UNC1999并作用不同时间,用CCK-8法检测细胞OD值,筛选药物较佳的作用浓度及时间;EdU细胞增殖实验及克隆形成实验分别检测细胞增殖和克隆形成能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭、迁移实验检测细胞侵袭及迁移的能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞术检测的细胞周期。RNA-seq检测UNC1999对细胞转录组的影响;qRT-PCR法检测药物作用相关基因（EZH1、EZH2）以及转录水平显著差异基因（NECTIN4）的相对表达量;Western Blot法检测EZH1、EZH2、H3K27me3表达情况。【结果】与对照组相比,UNC1999组的肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力均降低（P<0.05）;细胞周期发生G0/1阻滞（P<0.05）;细胞凋亡数量无明显改变（P>0.05）。UNC1999可促进包括多个基因转录水平的改变,首位显著上调的基因为NECTIN4（ENSG00000143217）。在基因的转录表达水平上,UNC1999组的EZH1、EZH2无明显降低（P>0.05）;而在蛋白表达水平上,两者表达降低（P<0.05）,同时H3K27me3也表达下降（P<0.05）。【结论】UNC1999能通过在蛋白水平上抑制表观遗传子EZH1、EZH2的表达及其催化组蛋白甲基化的功能,发挥抑制肝癌的作用;表观遗传子EZH1、EZH2与肝癌之间具有密切关系,是肝癌治疗具有潜力的靶标;UNC1999处理后NECTIN4表达显著升高,该基因异构体与抗癌药物治疗反应性相关,提示表观遗传抑制剂联合抗癌药物可能发挥更佳的治疗作用,这为临床肝癌药物治疗提供了新的思路。     

人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞凋亡及Bcl-2/bax基因mRNA表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响及对凋亡相关基因的作用。方法培养人宫颈癌Hela细胞,用不同浓度Rg3进行干预,用Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪方法定量检测细胞的凋亡及细胞周期的变化,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2/bax表达。结果 Rg3对Hela细胞增殖的抑制率随作用时间的延长和药物浓度的增加而增加;Rg3作用后Hela细胞出现了典型的凋亡形态学变化,可见凋亡小体;不同浓度的Rg3处理细胞48 h后,流式细胞术(FCM)显示细胞的凋亡呈剂量依赖性;同时细胞被阻断在G2/M期,细胞周期发生明显改变;Rg3作用后的Hela细胞的凋亡相关基因Bcl-2表达降低,bax基因表达升高。结论 Rg3能抑制Hela细胞增殖,诱导其凋亡,且Rg3诱导Hela细胞凋亡是通过下调Bc1-2表达和上调bax表达,而达到抗肿瘤的作用。     

视黄酸-AP-1信号通路对视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β2的调控机制

【目的】研究上调视黄酸（RA）信号以及抑制活化蛋白-1（AP-1）转录活性对RPE分泌转化生长因子β2（TGF-β2）的影响以及可能的作用途径。【方法】①检测ATRA干预的作用,将ARPE-19细胞分为：正常对照组和6、12、24、48h组,用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、western blot和免疫荧光检测RARβ和c-Fos的表达。②检测RARβ抑制剂LE540对ATRA诱导后细胞表达RARβ和c-Fos的影响,将ARPE-19细胞分为：正常对照组,ATRA组,LE540组和ATRA+LE540组,用RT-qPCR和western blot检测RARβ和c-Fos的表达。③检测AP-1抑制剂T-5224干预的作用,将ARPE-19细胞分为：正常对照组和12、24、48h组,用电泳迁移率变动分析法（EM?SA）检测RPE细胞中AP-1活性。④检测LE540和T-5224对ATRA诱导后细胞表达和分泌TGF-β2的影响,将ARPE-19细胞分为正常对照组,ATRA组,ATRA+LE540组和ATRA+T-5224组,用western blot和酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测TGF-β2的表达和分泌量。【结果】ATRA干预24和48h后,RARβ的表达较对照组明显升高（P＜0.05）,c-Fos的表达先升后降,ATRA干预6和12h后,c-Fos表达明显升高（P＜0.01）,而干预48h后,c-Fos表达下降,与对照组相比无统计学差异（P＞0.05）;T-5224干预24和48h后,AP-1的转录活性明显下降（P＜0.01）。用LE540和T-5224干预48h后,ATRA+LE540组和ATRA+T-5224组TGF-β2的表达较ATRA组明显下降（P＜0.05）。【结论】ATRA通过RARβ影响AP-1的转录活性,进而促进ARPE-19细胞分泌TGF-β2。     

基于AFM对蝙蝠葛碱诱导NB4细胞凋亡的研究

【目的】 探讨蝙蝠葛碱对急性早幼粒细胞白血病(APL) NB4细胞增殖的影响和可能的细胞凋亡机制。【方法】 采用CCK-8法检测NB4细胞的存活率,原子力显微镜(AFM)探测蝙蝠葛碱作用NB4细胞前后细胞形态及超微结构的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位和活性氧的变化。【结果】 蝙蝠葛碱能显著抑制NB4细胞生长增殖,20~80 μmol/L 蝙蝠葛碱处理细胞24 h后,细胞存活率从(86.5±11.7)%下降到(4.1±0.5)%; 以10~40 μmol/L蝙蝠葛碱处理NB4细胞24 h,流式细胞术分析显示,细胞凋亡率和细胞内活性氧含量上升、线粒体膜电位下降。AFM 探测表明,正常NB4细胞呈圆形,细胞饱满,表面较光滑。蝙蝠葛碱处理组细胞皱缩,细胞表面的平均粗糙度增大。【结论】 蝙蝠葛碱能显著抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡。     

无花果浆液对肝癌细胞增殖抑制作用研究

目的探讨无花果浆液（Fig fruit latex,FFL）对肝癌细胞SMMC7721及正常肝细胞L-02增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法采用MTT法、克隆形成试验、Brdu掺入试验,Hoechst33342染色、流式细胞术检测FFL作用后,SMMC7721、L-02细胞增殖、凋亡和细胞周期分布的变化,并通过RT-PCR观察其诱导凋亡的机制。结果用FFL处理后,肝癌细胞增殖活性降低（P〈0.05）,克隆形成下降（P〈0.05）,Brdu标记指数降低（P〈0.05）,Hoechst33342染色凋亡细胞增多（P〈0.05）;细胞周期分布改变,凋亡指数升高（P〈0.01）,G0/G1期细胞数增加（P〈0.01）,S期细胞数减少（P〈0.01）,在一定剂量内对正常细胞无明显影响。RT-PCR检测ADPRTL基因表达增强。结论与正常肝细胞比较,FFL通过上调ADPRTL基因诱导肝癌凋亡,促进肝癌细胞周期阻滞,抑制肝癌细胞DNA合成等作用,抑制肝癌细胞增殖。     

巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对血管内皮细胞增殖、迁移的调控作用

目的明确氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）对血管内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子（MIF）表达的调控作用,检测MIF对血管内皮细胞增殖、迁移的可能调控作用。方法用不同剂量的OX-LDL处理人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）,Western-blot检测MIF蛋白的表达。利用腺病毒介导MIF在HUVECs中的表达,分别通过Trans-well细胞穿膜实验和细胞划痕实验检测MIF对HUVECs迁移的调控作用。分别通过EdU染色、MTr细胞增殖检测和流式细胞术检测细胞周期,分析MIF对HUVECs增殖的影响。用荧光定量PCR检测MIF对HUVECs中MMP2和CXCR4表达的影响。结果Ox-LDL可特异调控HUVECs中MIF的表达。Trans-well细胞穿膜实验和细胞划痕实验表明,利用腺病毒介导MIF高表达可显著抑制I-IUVECs的迁移。EdU染色、M1Tr和细胞周期检测结果显示MIF对HUVECs增殖无明显作用。定量PCR结果显示过表达MIF可显著抑制HUVECs中CXCR4的表达（P〈0．01）。结论MIF通过降低CXCR4表达来抑制血管内皮细胞的迁移,但对血管内皮细胞的增殖没有影响。     

苦参碱对胰腺癌PC-3细胞凋亡及Bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参碱对人胰腺癌PC-3细胞增殖和凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和bax的影响,为苦参碱在抗肿瘤临床应用提供理论基础。方法应用MTT法检测苦参碱对人胰腺癌PC-3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测苦参碱对PC-3细胞凋亡的影响,RT-PCR检测苦参碱对PC-3细胞Bcl-2和bax表达的影响。结果 MTT结果显示苦参碱对PC-3细胞的生长抑制作用呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性（P〈0.01）。苦参碱能诱导PC-3细胞凋亡（P〈0.01）。苦参碱能明显的抑制PC-3细胞Bcl-2基因mRNA的表达;诱导bax基因mRNA的表达（P〈0.01）。结论苦参碱呈现浓度依赖性和时间依赖性抑制PC-3细胞的生长,诱导细胞凋亡,其作用与抑制PC-3细胞Bcl-2和bax基因mRNA的表达密切相关。