辐射损伤所致血虚证小鼠模型及四物汤反证的代谢组学研究

[目的]通过检测辐射损伤所致血虚证及用四物汤干预治疗后小鼠内源性代谢物的变化,确定辐射损伤所致血虚证小鼠的血清及组织相关的生物标记物,基于代谢组学的方法考察血虚证证本质及四物汤的作用机制。[方法]C57小鼠按体质量随机分为正常组、辐射造模组、四物汤反证组。造模7d后于小鼠股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓,并分别提取血清及组织的脂溶性和水溶性代谢物。[结果]主成分分析结果显示正常组、血虚证模型组以及四物汤反证组能够明显的区分。[结论]四物汤治疗血虚证的机制可能与稳定细胞膜,维持细胞内外渗透压平衡;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢以及增强机体抗氧化能力、免疫力有关。     

四物汤对辐射致血虚证小鼠作用的代谢组学研究

目的:基于超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)技术进行辐射损伤致血虚证以及四物汤的方证结合研究,发现辐射致血虚证及用四物汤干预后小鼠内源性代谢物的变化,基于代谢组学的方法考察血虚证的发生及四物汤的作用机制。方法:选用C57小鼠36只,按体重随机分为对照组、模型组及四物汤组。造模方法采用3.5Gy60Coγ射线全身照射制作模型,造模7 d后股动脉取血并摘取脾脏和胸腺,进行处理后用UPLC-ESI-Q-TOF-MS检测,应用Mark-erLynx XS软件对总离子流图进行色谱峰识别,利用主成分分析法对数据进行处理,采用正交偏最小二乘法进行组间数据分析。通过模式识别分析,快速确认标志物。结果:辐射损伤所致的血虚证小鼠血清中溶血磷脂、葡糖苷酸、单酰甘油酯、三羟基丁酸、神经酰胺、天冬氨酸磷酸酯、甘油磷脂等代谢物的含量变化明显;脾脏中变化明显的代谢物有单酰甘油酯、神经酰胺、溶血磷脂、羟基丁酸、棕榈酸、3-羟基硬脂酸、二甲基精氨酸、苯丙氨酸、磷脂酰丝氨酸;胸腺中有甲基腺苷、谷甾醇、肉毒碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、甘油二酯、二甲基精氨酸、神经酰胺、溶血磷脂、羟基丁酸、胆固醇等。结论:通过对这些生物标志物的生理功能分析,推测辐射损伤使小鼠机体的脂类代谢、糖类代谢及部分氨基酸的合成代谢发生紊乱,经典补血方剂四物汤治疗可以使之逆转并调整平衡。     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证治疗后的代谢组学研究

目的:通过分析血虚证模型以及给予四物汤反证后小鼠血清和组织提取物的代谢组学变化,结合模式识别的统计分析方法,探讨环磷酰胺所致血虚证及四物汤治疗后的特征性内源代谢谱的改变,为中药经典复方四物汤的作用机制研究提供科学依据。方法:将C57小鼠按体重随机分为3组:正常对照组、环磷酰胺模型组、四物汤给药组(10 g.kg-1.d-1),每组10只,连续给药7 d后股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓。用600 MHz超导傅立叶变化核磁共振波谱仪检测,对所得到的氢谱按每段0.04进行分段积分并归一化后,用SIMCA-P10.0软件进行主成分分析。结果:正常对照组、环磷酰胺模型组和四物汤给药组的血清代谢物组成、胸腺、脾脏、骨髓提取物的成分明显不同。其中环磷酰胺导致血清中的乳酸、3-羟基丁酸、胆碱、葡萄糖的含量下调,低密度脂蛋白、亮氨酸/异亮氨酸含量上调;胸腺提取物中的牛磺酸,胆碱,F:βRCH2CH2CO,epi-coprostanol,乳酸含量下调;脾脏提取物中的乳酸,3-羟基丁酸,胆碱,F:βRCH2CH2CO,epi-coprostanol,牛磺酸的含量下调;骨髓提取物中的乳酸、3-羟基丁酸、胆碱、葡萄糖的含量下调。给予四物汤后,以上各成分在不同程度上得到有效逆转。结论:环磷酰胺所致血虚证的可能机制是导致机体脂肪酸β氧化功能紊乱、细胞内外渗透压平衡破坏以及糖酵解功能失调。经典补血方剂治疗血虚证的机制可能与改善线粒体功能,纠正脂肪酸β氧化功能紊乱;稳定细胞膜,维持细胞内外正常渗透压;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢有关。     

四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响

目的:观察四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响,为比较四物汤对不同血虚证模型补血作用提供实验依据。方法:每日按75g·kg^-1体重限食,隔日游泳20min及放血0.4mL共15d,建立小鼠血虚证模型。提前7d,四物汤小,中,大剂量组分别按每天5,10,20g·kg^-1给予四物汤至造模结束,通过血细胞计数仪及流式细胞仪等分析手段,检测外周血象、骨髓细胞周期、骨髓细胞凋亡和CD34⁺细胞数。结果:四物汤小,中,大剂量组可以使血虚证小鼠红细胞由第7天最低值4.6×10¹²·L^-1,分别显著升高到6.5,7.1,7.0×10¹²·L^-1;在第15天,使血虚证小鼠S期骨髓细胞数由11.53%,分别显著增加到14.34%,14.03%,13.58%。结论:四物汤可以在一定程度上逆转综合放血致小鼠的造血损伤。     

四君子汤对自然衰老小鼠干预作用的代谢组学研究

目的:研究四君子汤干预自然衰老小鼠内源性代谢物的变化,探索与衰老密切相关的代谢物、代谢通路及其四君子汤调节作用。方法:选取自然衰老小鼠,检测小鼠血清SOD、MDA及NO;利用UPLC-HDMS技术,对自然衰老小鼠血清进行模式识别分析。结果:模型组小鼠血清SOD和NO含量显著下降,MDA含量升高;四君子汤可显著提高血清中SOD含量,显著降低血清中MDA含量。确定25个可能与衰老相关的生物标记物和3条代谢通路。发现四君子汤对一些标记物如亮氨酸、血栓素、花生四烯酸、谷胱甘肽等,具有明显的回调作用。结论:通过代谢组学的研究方法发现四君子汤通过调节亮氨酸、血栓素、花生四烯酸、谷胱甘肽等标记物,对衰老起到了干预作用。     

不同造模方法所致血虚证及四物汤干预的代谢及蛋白质组学研究

四物汤为经典的补血剂,血虚证为临床多见证候,四物汤及血虚证的现代实验研究常用的动物造模方法分为放血法、溶血法、辐射损伤法、化学损伤法和综合造模法。基于系统生物学的研究,总结不同造模方法所致血虚证模型及四物汤干预的代谢及蛋白质组学的研究,对于四物汤的疗效评价及其方证相关性研究具有重要意义。     

逍遥散干预肝损伤小鼠的代谢组学研究

目的通过代谢组学方法研究逍遥散干预肝损伤小鼠血清内源性代谢物的变化,探索与肝损伤密切相关的代谢模式及逍遥散的作用机制。方法以CCl4致小鼠肝损伤模型为研究对象,测定小鼠血清ALT、AST,肝组织匀浆SOD、MDA。检测小鼠血清中内源性代谢物的变化情况,并运用主成分分析方法对这一变化过程进行模式识别。结果与对照组小鼠相比,模型组小鼠血清ALT和AST明显升高(P<0.01),肝组织匀浆SOD显著降低,MDA明显升高(P<0.01);与模型组小鼠相比,给药组小鼠血清ALT和AST显著降低(P<0.01),肝组织匀浆SOD明显升高,MDA显著降低(P<0.01)。模型组、给药组与对照组的血清内源性代谢物均发生了明显变化,模型组血清中甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、氨基丙二酸、苹果酸、谷氨酰胺、天门冬氨酸、赖氨酸、鸟氨酸均明显升高(P<0.01),肌醇升高(P<0.05)。给药组中显示逍遥散对其有调节作用。结论逍遥散干预肝损伤的作用显著,推测其机制是清除自由基,抑制脂质过氧化,恢复部分氨基酸代谢、三羧酸循环、尿素循环等代谢通路。     

金匮肾气丸对12月龄雄性小鼠脾组织代谢组学增龄改变的影响

目的:研究金匮肾气丸对增龄过程中小鼠脾组织代谢物的变化,分析与12月龄雄性小鼠密切相关的生物标记物及其代谢通路,进一步阐释金匮肾气丸调节作用的生物学基础。方法:取3月龄雄性小鼠10只为空白组,12月龄雄性小鼠20只,随机分为模型组和金匮组,金匮组给药金匮肾气丸汤剂,空白组和模型组给予生理盐水,灌胃给药30日后处死小鼠,取脾组织进行实验研究。结果:得到与生长发育相关的内源性代谢差异物26个,如Xanthine、Pyruvic acid、Threonic acid、Glycocholic acid等。其中11个标记物表现为上调,15个标记物表现为下调。主要涉及三条代谢通路。发现金匮肾气丸组对其中9个生物标记物有明显的调节作用。结论:通过代谢组学研究,发现金匮肾气丸通过调节牛磺去氧胆酸、甘氨胆酸、黄嘌呤等标记物,对小鼠的增龄起到了干预作用。     

基于超高效液相色谱-飞行时间质谱的CCl_4诱导肝损伤小鼠血浆代谢组学研究

目的:利用代谢组学的方法研究不同剂量CCl4诱导的小鼠肝损伤模型,确定能够表征CCl4肝损伤模型的血浆代谢物中的生物标记物。方法:采用基于超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS)的代谢组学技术,并结合主成分分析的方法,研究正常小鼠和不同剂量CCl4诱导的肝损伤小鼠血浆代谢物组的变化。结果:初步确定建立小鼠肝损伤血浆代谢物研究模型的CCl4用量,并寻找到10个具有特征性的内源性生物标记物。结论:代谢组学方法成功用于CCl4诱导的小鼠血浆肝损伤模型研究,并为进一步研究中药的保护肝脏作用奠定了基础。     

四物汤对小鼠血清促红细胞生成素及其基因表达影响的实验研究

目的 探讨四物汤对环磷酰胺所致贫血小鼠血清促红细胞生成素(EPO)及肾EPO mRNA表达的影响.方法 用环磷酰胺腹腔注射建立小鼠贫血模型,同时给小鼠灌服四物汤,ELISA方法检测小鼠血清EPO的含量;Trizol试剂提取肾组织总RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾组织EPO mRNA表达情况(β-actin为内对照标准).结果 四物汤能显著升高小鼠血清EPO水平,明显促进肾组织EPO mRNA的表达.结论 四物汤能抑制环磷酰胺所致的小鼠贫血,其作用机制可能是通过促进肾组织EPO mRNA的表达,使肾脏合成EPO增多,从而促进红系细胞生长.     

《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》虚劳病精气神调治原则与方法

从中医精气神辨识角度认识虚劳病,总结虚劳病病因病机。通过观察面容、形态、神色、五官、舌象、脉象等辨识精气神状态,确立虚劳病精气神调治原则。在精气神辨识理论指导下,对《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》相关条文、方药进行解析,总结虚劳病相关治则治法。根据精气神调养原则,为虚劳病临床应用提供指导。     

全蝎配伍蜂房之祛风攻毒作用探析

通过梳理古本草文献中全蝎、蜂房的有关记载和现代临床对该药对的配伍应用,探讨并阐释该药对祛风攻毒增效的作用机制,认为全蝎配蜂房,药力迅捷,内走脏腑,外达肢节,透骨搜风,既可祛风通络止痛,又可攻毒散结消痈.尤其适宜于治疗风湿顽痹、痈疽恶疮、癌肿等.     

谈人参在《伤寒论》中的应用

人参为五加科植物人参的根。最早见于《神农本草经》,列为上品,书云:“人参味甘微寒,主补五脏,安精神,定魂魄,止惊悸,除邪,明目,开心,益智。”其味甘、微苦,性微温。归脾(胃)、肺、心经。具有大补元气,补脾益肺,益气生津,宁心安神之功效。在《伤寒论》中,仲景应用人参共40次,入     

五脏补血法理论及临床应用探讨

血液的生成与五脏关系密切,据此确立五脏补血法:养心补血法、健脾补血法、润肺补血法、滋肝补血法、益肾补血法。     

丹栀逍遥散及其提取物镇静催眠作用研究

目的探讨丹栀逍遥散原方及提取物镇静催眠作用。方法将小鼠分为14组,正常对照组、原方组及各组分低中高剂量组,通过测定小鼠自主活动次数,采用戊巴比妥钠延长睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量镇静催眠协同作用实验观察丹栀逍遥散原方及各提取物镇静催眠作用。结果丹栀逍遥散原方及提取物均无改变小鼠自主活动的功能,表明均无中枢兴奋性作用;丹栀逍遥散石油醚提取液高、中剂量具有显著延长戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的作用(P<0.01或P<0.05),石油醚提取液高剂量能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠睡眠小鼠个数(P<0.01)。结论丹栀逍遥散石油醚提取部位可能为丹栀逍遥散的中枢抑制作用的有效部位。     

阴阳升降理论探析与启迪

通过梳理《内经》及相关医家关于阴阳升降的论述,探讨阴阳升降的内容及阴阳升降的不同内涵。从阐述人体生理变化和脏腑特点、阐述疾病的病机、解释治则治法和方药配伍应用等方面分析阴阳升降对临床的启迪作用。     

小青龙汤因机证治浅析

小青龙汤为温阳宣肺、蠲痰涤饮之剂,凡见哮喘、咳嗽、痰、饱胀、喘息和四肢水肿等因"外感风寒,内有寒饮"所致者,均可辨证应用小青龙汤。临证应用时注意:①寒邪不必拘泥外感;②"三水"的变化要审清;③但见寒饮,有无表证均可用此方;④注意痰饮在临床上的变化;⑤临床见喘未必治喘,要临证辨别。用此方,要抓住以下临床指征:①面色:"三水"之面色--黧黑之色;②脉象:弦脉或浮紧;③舌象:舌苔多水滑;④痰涎:咳痰较爽,痰涎清稀,泡沫状。以上"但见一证便是,不必悉俱",有效之后,应中病即止。     

苦参碱和氧化苦参碱的分离纯化以及山豆根药材的薄层色谱鉴别

 目的 从山豆根中精制苦参碱和氧化苦参碱,并以此为化学对照品对山豆根药材进行薄层色谱鉴别。方法 利用硅胶柱色谱和重结晶的方法分离纯化苦参碱和氧化苦参碱,经理化数据和光谱解析等方法鉴定结构,采用TLC和高效液相色谱的方法检查其纯度,并利用TLC的方法对不同来源的山豆根商品药材进行鉴别研究。结果 从山豆根中分离纯化得到纯度98％以上的苦参碱和氧化苦参碱对照品各1.7 g和2.0 g,并以此为对照品有效地鉴别了正品山豆根药材及其混淆品。结论以苦参碱和氧化苦参碱作为山豆根的定性指标是合理的,采用TLC方法鉴别山豆根是可行的。     

非酒精性脂肪肝诊治的问题及对策

目的探讨非酒精性脂肪肝临床治疗中有效对策。方法结合近代非酒精性脂肪肝治疗研究现状部分问题,运用中医辨证和辨病论治结合现代药理学研究进展方法,防治非酒精性脂肪肝。结果中西医结合防治此病有效。结论中西医结合辨证和辨病结合论治防治此病为有效对策。     

亚健康状态的评估、诊断现状与对策

从量表或问卷评估法、症状组合法、记叙法等方面阐述亚健康状态评估与诊断的现状,归纳总结存在的难点;认为开展亚健康评估、诊断研究,可从健康测量角度出发,运用量表问卷和数据挖掘技术,结合多种手段控制临床质量,构建包括宏观和微观指标在内的综合评价体系。