血清肌红蛋白光激化学发光免疫测定法的建立

目的采用光激化学发光免疫测定技术(LIC I)建立定量检测肌红蛋白(Mb)的方法。方法使用针对Mb不同表位的2株单克隆抗体,一株包被发光微粒,另一株进行生物素化,与包被有链霉亲合素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能。结果该方法的灵敏度为1.36 ng/m l,在33.8~1 521.0ng/m l的范围内线性良好。批内和日间变异系数分别为3.05%~4.41%和5.80%~6.56%。在血红蛋白浓度<2.6 g/L,总胆红素浓度<342μmol/L、三酰甘油浓度<11.3 mmol/L时的干扰率无临床意义。与Roche E lecsys电化学发光法有较好的相关性(r=0.997 1)。结论血清Mb LIC I的建立有助于进一步对检测试剂盒的研制。     

可溶性人细胞分化抗原28分子酶联免疫试剂盒的研制及应用

目的研制灵敏、特异和稳定的可溶性人细胞分化抗原28（sCD28）酶联检测试剂盒，并探讨其临床应用意义。方法取识别不同抗原位点的单抗8G8和2D5分别作为包被单抗和检测单抗，建立双单抗夹心-sCD28酶联免疫检测法（sCD28-ELISA），并绘制标准工作曲线。同时，测定36名健康人、23例系统性红斑狼疮（SLE）、38例类风湿性关节炎（RA）和62例Grave病患者血清中sCD28含量。结果研制的sCD28试剂盒最低检测下限为0．3ng／ml，具有良好线性关系的检测范围是0．5～16．0ng／ml；8G8单抗包被测定板后置4℃冰箱保存180d，加入可溶性CD28-Ig重组蛋白的回收率在93％～109％之间。SLE、RA和Grave病患者血清中sCD28含量分别为0．9～7．3ng／ml、0．3～6．8ng／ml、0．2～3．5ng／ml，明显高于健康人（0～1．1ng／ml，P〈0．01）。结论自制的sCD28试剂盒，能准确测定样本中sCD28含量，可为sCD28分子基础研究和临床疾病辅助诊断、疗效评估及预后判断提供有价值的生物学参数，具有良好应用前景。     

临床化学发光免疫法检测AFP的分析性能验证与实验方法

目的建立临床化学发光免疫检验方法学性能验证方案和实验方法。方法参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）系列文件和相关文献，结合工作实际，设计验证方案，并对Bayer Centaur 240化学发光免疫检测系统测定血清AFP的精密度、准确度、分析灵敏度、分析测量范围、临床可报告范围和生物参考区间6大分析性能进行验证和评价，并将实验结果与厂家（德国拜尔公司）提供的分析性能或公认的质量指标进行比较。结果AFP含量在77．4、168．0ng／ml时，日间不精密度分别为5．70％和4．84％，与厂商日间不精密度（4．9％和5．0％）基本一致；4个浓度校准品检测结果与靶值的相对偏倚均〈5％，5份室间质评控制品检测结果与靶值的相对偏倚在-3．4％-11．9％之间；检测低限为1．04ng／ml，略低于厂商的检测低限（1．30ng／ml），生物检测限在2．65—3．53ng／ml之间，功能灵敏度为3．53ng／ml；分析测量范围为3．53—912．00ng／ml（厂商线性范围1．3—1000．0ng／ml），临床可报告范围为3．53—182400．00ng／ml；生物参考区间验证结果为0．6—7．7ng／ml（厂商参考区间〈8．1ng／ml）。结论Bayer Centaur 240化学发光免疫检测系统检测AFP的分析性能符合临床要求，验证方案和实验方法简便易行。本研究对规范医学实验室建设和实验室认可，提高化学发光免疫检验质量有重要意义。     

血清心肌肌钙蛋白Ⅰ光激化学发光免疫测定法的建立

目的采用光激化学发光免疫测定法（LICLIA）建立血清心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）的定量检测方法。方法使用2株特异性的cTnI单克隆抗体,一株包被发光微粒,另一株进行生物素化,与包被有链霉亲合素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能。结果方法的分析灵敏度为0.05 ng/mL,在1.10～29.36 ng/mL范围内线性良好。批内和日间变异系数（CV）分别为4.89%～5.93%和6.76%～8.96%。cTnI浓度为161 ng/mL时方法无Hook效应。与Biocheck cTnI酶联免疫吸附试验（ELISA）具有较好的相关性（r=0.964）。结论血清cTnI的LICLIA定量检测方法的建立有助于急性心肌梗死诊断试剂盒的研制。     

时间分辨荧光免疫法和电化学发光法检测AFP的比较

目的对时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA法）国产试剂盒与电化学发光免疫分析法（ECLIA法）检测血清AFP作比较分析。了解两种方法特点。方法分别采用国产TRFIA法试剂盒与ECLIA法检测正常人50例、肝癌患者40例血清AFP的含量;用高、中、低3种浓度AFP标准品采用两种方法进行批内测定,n=10,观察重复性,所得结果计算CV值：将高值标准品血清（250ng／ml）按1：1比例加入每份正常对照组血清中,肝癌组病人血清与生理盐水按1：1稀释后再按1：1比例加入高值标准品血清（250ng／ml）,每份检测2次（TRFIA法）取平均值,计算回收率。结果肝癌组AFP值（TRFIA法：558±319．10ng／ml;ECLIA法：552．31±302．67ng／ml）明显高于正常组（TRFIA法：6．51±5．42ng／ml;ECLIA法：6．32±5．14ng／m）（P〈0．05）,两种方法结果无显著差异（P〉0．05）,其相关系数为0．9150,测定结果呈正相关。高、中、低3种浓度标准品的重复性试验TRFIA法与ECLIA批内变异系数分别低于7．9％和3．1％,后者优于前者,两种方法略有不同,无明显差异（P〉0．05）。回收试验结果,TRFIA法回收率在92．3％～103．9％。结论国产TRFIA法试剂盒和ECLIA法检测AFP相比较具有良好的相关性。灵敏度和稳定性也较好．可应用于临床血清AFP检测。     

除草剂2,4-D丁酯的GC/MS检测及其在中毒患者诊治中的应用

目的建立除草剂2,4-D丁酯的气相色谱-质谱（GC／MS）检测方法,用于临床中毒患者的检测。方法以乙酸乙酯提取血液中2,4D丁酯,采用GC／MS检测。定性采用全扫描法（SCAN）,定量采用选择离子法（SIM）,离子选择m／z175、185、276。结果2,4-D丁酯在10～1500ng／ml成线性,方程为Y=10．565X-1203．5,R=0．9941,标加1000ng／ml浓度的2,4-D丁酯于血液,平均回收率为94．6％,RSD=7．1％;2,4-D丁酯最低检出浓度为3ng／ml（S1M）,信噪比S／N=3;日内精密度RSD为4．1％,日间精密度RSD为5．8％。结论所建方法灵敏、快速、线性范围好,可用于2,4-D丁酯中毒患者的检测。     

体检人员中甲胎蛋白水平升高的结果分析

[目的]探讨甲胎蛋白（AFP）水平升高在体检人员中的分布以及建立本实验室的正常值范围。[方法]2004～2005年来本院体检中心体检人员3161例和正常组200例，采用电化学发光法，瑞士罗氏2010免疫分析仪及配套试剂检测。[结果]本实验室AFP正常值范围确定为〈6．28ng／ml。41～60岁年龄段AFP升高比例最高。AFP升高率男性显著高于女性（P〈0．05）。AFP低水平的升高（6．28～20ng／ml）占到AFP升高91．49％。其他各种原因致AFP升高所占的比例为66．66％，乙肝患者占的比例为18．44％，脂肪肝患者所占比例10．64％。[结论]在3161例体检人群中，除了慢性乙型肝炎、脂肪肝外，尚有许多原因可以引起AFP水平的升高。     

重组链激酶对急性心肌梗死患者血浆内皮素和一氧化氮的影响

目的探讨重组链激酶对急性心肌梗死（AMI）患者血浆内皮素1和一氧化氮的影响及临床意义。方法选择60名健康人为对照组,90例AMI患者为观察组,采用重组链激酶溶栓,测定溶栓前,溶栓后1、2、3、24、48h血清中内皮素1和一氧化氮的变化。结果观察组溶栓前内皮素1浓度（82．1±11．4）ng／L显著高于对照组（12．8±5．2）ng／L（t=73．0169,P〈0．01）;溶栓后24h内皮素1浓度（64．2±10．5）ng／L、48h内皮素1浓度（32．6±11．5）ng／L显著低于溶栓前（P均〈0．05）。观察组溶栓前一氧化氮浓度（3．8±O．8）μmol／L显著低于对照组（6．5±1．0）μmol／L（t=6．9757,P〈0．01）;溶栓后24h一氧化氮浓度（4．5±0．9）μmol／L、48h一氧化氮浓度（4．9±0．7）μmol／L显著高于溶栓前（P均〈0．05）。结论采用重组链激酶溶栓1～3h,内皮素1、一氧化氮参与心肌再灌注早期血管内皮损伤。     

泰莱-Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析仪检测肿瘤标记物的方法学评价

目的 对广州丰华公司泰莱（TALENT）-Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析仪定量检测肿瘤标记物的方法学予以评价。方法 参照NCCLS EP10-T2文件，对泰莱Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析仪检测人血清中的甲胎蛋白（hAFP）、癌胚抗原（CEA）进行评价，内容主要为线性、偏差、不精密度等指标。结果 高、中、低三种浓度CEA的绝对偏差分别是0．33、9．15、7．54ng／ml，低于允许偏差的2．15、32．16、107．46ng／ml；三种浓度hAFP的绝对偏差分别是6．06、57．02、66．81U／ml，低于允许偏差的6．54、107．73、247．98U／ml；三种浓度CEA的总不精密度分别是26．65％、3．30％和0．94％；hAFP的总不精密度分别是21.44％、0．86％和0．35％，除低浓度外均小于NCCLS文件规定的15％。与电化学发光法有良好的相关性，两个项目的相关系数分别为0．9993、0．9946。结论 TALENT-Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析仪检测CEA和hAFP线性好，准确度高，精密度好，与电化学发光定量分析法高度相关，仪器稳定性好，性能可靠。     

TIMP-1 ELISA检测方法的建立及临床初步应用

目的建立一种检测人血清中基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的酶联免疫吸附方法（ELISA），用于血清学诊断人肝纤维化病程进展。方法以抗人TIMP-1单克隆抗体（McAb）为包被抗体，15％小牛血清为封闭液，和辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗TIMP-1 McAb作为标记抗体建立检测人血清TIMP-1 ELISA法。并用于临床初步检测408例肝病患者血清。结果实验理想的包被抗体浓度为1μg／ml，血清稀释倍数1：100，HRP标抗体的最佳工作浓度1：400。该法具有良好的重复性，灵敏度达3ng／ml，中和抑制率在85％以上，稳定性能好，与国外TIMP-1 ELISA试剂盒进行对比试验，表明两种检测方法有良好的相关性（Y=0．0085＋0．9892X，r=0．988）。临床检测表明TIMP-1随着病损纤维化程度加重而升高，与正常人血清TIMP-1水平相比差异显著（P〈0．01）。结论该法可用于肝纤维化进展定量血清学诊断。同时对影响因素的判定进行了初步的摸索研究，结果可靠。为国内TIMPs诊断试剂盒的研制和开发提供了科学实验依据。