又一种HIV疫苗将进入临床试验

美国加利福尼亚大学旧金山分校的研究人员研制出一种能防止猴免疫缺陷病毒( SIV)阴道传播的疫苗 ,SIV通常在暴露后 1年内引起艾滋病样疾病。目前正计划对该疫苗的 HIV形式进行临床试验。　　为研制 SIV疫苗 ,研究人员用脊髓灰质炎病毒 Sabin 1和 Sabin 2疫苗株构建了新型病毒载体 ,用以产生一系列含有 SIV pol、gag、env、nef和 tat重叠片段的新病毒。对 7只食蟹猴滴鼻接种两种含 2 0种转基因脊髓灰质炎病毒的混合物 ,5个月后加强 1次。由于 Sabin疫苗株太小 ,无法携带大部分 SIV基因组 ,因此 ,为包含多种SIV片段 ,采用多成分混合…     

表达HIV-1 gag和包膜蛋白的有核壳包裹的脊髓灰质炎病毒复制子诱导的免疫应答

作者不久前建立了应用RNA病毒——脊髓灰质炎病毒(PV)作重组疫苗载体的系统。构建的PV基因组中核壳区被人类免疫缺陷症病毒(HIV)gag和env基因片段所取代。由重组痘苗病毒(VV-P1)反式提供核壳蛋白的互补系统使缺损的基因组能被核壳包裹。用这类复制子感染细胞可表达与PV核壳蛋白PV4和PV1融合的重组蛋白。 本研究中,作者采用了表达HIV-1 gag核壳蛋白(p24)以及HIV-11.5kb env基因的有核壳包裹的复制子。这种复制子是在VV-P1存在的情况下经20次连续传代获得的。将这种有核壳包裹的复制子在2型PVLansing株存在的情况下传代(共感染)可使复制子被PV核壳蛋白所包裹。这种类型的复制子至少经三次连续传代后仍然存在。将这种表达HIV-1 gag、被2型PV Lansing株核壳包裹的复制子经肌肉、直肠或胃途径接     

腮腺炎病毒及疫苗研究进展

随着对腮腺炎病毒研究的深入,人们对腮腺炎病毒的基因组结构、病毒蛋白的结构和功能有了更多的认识,病毒表面的两种糖蛋白——血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白和融合(F)蛋白是重要的抗原决定簇,HN蛋白抗体可中和病毒感染,而F蛋白是溶血抗原。现今使用的腮腺炎疫苗为减毒活疫苗,对病毒基因序列分析后发现接种疫苗后出现的脑膜炎病例主要与Urabe株有关,目前正在探索发展新一代腮腺炎疫苗。     

重组牛痘病毒表达HTLV-Ⅲ包膜基因

已知获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病原Ⅲ型人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV-Ⅲ)的包膜(env)基因规定约860个氨基酸的一级多肽,后者经糖基化形成一种分子量为160,000的前体(gp160),并进一步产生成熟的膜相关蛋白gp120和gp41。本文描述了通过牛痘病毒载体的完整env基因的表达,提供了env多肽的合成、糖基化、加工和膜转运的证据。作者将含有HTLV-Ⅲ全部env基因的DNA片段连接于牛痘病毒启动子下游,构成分别含有0和70个碱基对(bp)的env领头顺序的重组牛痘病毒V25和V26。两个重组体皆为胸苷激酶阴性和β-半乳糖苷酶阳性。以纯化的V25和V26感染细胞,24小时后取细胞溶解产物经12烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,     

通过用PIV1的HN和F糖蛋白替换PIV3 cp45疫苗病毒的相应部分来产生PIV1疫苗

作者将 3型副流感病毒 (PIV3) cp45疫苗病毒的血凝素 (HN)和融合 (F)糖蛋白用野型 (wt) PIV1的相应部分置换。该嵌合体包含原 cp45病毒的减毒背景 ,即保留了原 1 5个突变中的 1 2个 ,而位于 HN和 F基因的 3个突变在置换过程中丢失 ,代之以 PIV1的 HN和F。研制出的减毒 PIV1疫苗称为 r PIV3- 1cp45。　　为评估 3个突变的丧失对减毒特性的影响 ,作者又构建了另一个 PIV3cp45的衍生物 ,即将 PIV3cp45的 HN和 F 基因用wt PIV3的 HN 和 F 置换 ,称为 r PIV3cp45 (Fwt HNwt) ,用以下试验以进行比较。　　温敏试验 :各组病毒在 …     

艾滋病病毒结构蛋白与IFNα-2b表达产物的细胞免疫

为观察艾滋病病毒结构蛋白与IFNα-2b表达产物诱导机体产生细胞免疫的变化,将编码艾滋病病毒(HIV-1)外膜蛋白env、核心蛋白gag与编码干扰素(IFNα-2b)基因分别插人pSFJ16与pSFJ38真核表达载体,利用分子克隆技术构建重组质粒,经脂质体转染与野生型痘病毒在Cos-7细胞内同源重组、筛选、纯化,获得重组痘苗病毒vJ16env/IFNα-2b和vJ38gag/IFNα-2b。免疫小鼠后,检测小鼠周围血与脾淋巴细胞对ConA及LPS的反应性,用流式细胞仪测定小鼠脾细胞CD4~+、CD8~+细胞计数。结果表明,周围血与脾淋巴细胞对ConA、LPS的反应性,实验组与对照组比较差异有显著性(P<0.05);CD4~+T细胞与对照组比较差异有显著性(P<0.05);CD8~+T细胞与对照组比较差异无显著性,但呈增高趋势。结论:重组痘苗病毒能诱导小鼠产生较强的细胞免疫。重组痘苗病毒体外与HIV-1gag阳性血清发生特异性反应,具有免疫原性和免疫反应性。     

建立稳定表达腮腺炎病毒糖蛋白的细胞系

为了探讨在副粘病毒属的病毒感染哺乳动物细胞后,诱导的细胞融合机制中腮腺炎病毒融合(F)蛋白及血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白的作用,作者建立了稳定表达这两种糖蛋白的细胞系.作者构建了表达腮腺炎病毒Miyahara株F和HN蛋白的重组质粒pKSF(MI)和pKSHN(MI).将重组质粒转染HeLaS3细胞,经甲杀猪瘟菌素S选择后研究其特性.血细胞吸附结果表明,pKSHN(MI)转染的细胞能吸附豚鼠红细胞,而pKSF(MI)转染的细胞则不吸附;流式细胞测量仪分析表明,这两个细胞系中,几乎所有细胞都可表达各自的腮腺炎病毒糖蛋白.放射免疫沉淀分析进一步表明,转染细胞合成的HN蛋白与病毒感染细胞合成的HN蛋白无法区分;但HeLa-F细胞合成的F蛋白的迁移率比病毒感染细胞合成的F蛋白稍慢.     

研制能有效抵抗3型副流感病毒感染的重组痘苗病毒疫苗

改良的痘菌病毒(VV)Ankara株(MVA)是在鸡胚细胞中传500代以上的疫 苗株(其基因组发生多处缺失,不能在哺乳动物细胞中复制,在实验动物中也无致病性).用表达流感病毒血凝素(HA)核蛋白(NP)基因的重组MVA免疫小鼠后,可保护小鼠抵抗致死剂量流感病毒的攻击.作者用表达3型副流感病毒(PIV3)融合(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)糖蛋白基因的重组MVA肌肉或鼻内接种棉鼠,同样达到了抗PIV3呼吸道攻击的效果.用BamHI分别从质粒pTZ18R和PGEM3Zf-切下PIV3的F、HN基因,用Klenow酶和脱氧核苷三磷酸切去F基因末端,克隆于含有2个VV早期/晚期启动子的质粒pJS-5中的SnaBI位点.将HN基因也插入其Bam HI位点,成为带HN和F基因的质粒pLW-1.含双启动子盒的HN和F基因转移入质粒GO6,GO6含有MVA侧翼序列,可插入MVA delⅢ中,形成的质粒叫pLW-2.     

一种抗呼吸道合胞病毒和3型副流感病毒的原型重组疫苗

呼吸道合胞病毒(RSV)和3型副流感病毒(PIV-3)在婴幼儿中引起严重的呼吸道感染.目前,这两种病毒的灭活或减毒活疫苗均不能提供有效的临床保护作用,所以迫切需要发展新型疫苗.RSV的融合(F)蛋白和PIV-3的血凝素-神经氨酸酶(HN)分别是这两种病毒中可诱生中和抗体的表面糖蛋白.作者选择这两种蛋白抗原,用基因工程方法,将编码F蛋白前526个氨基酸与HN蛋白第54～573个氨基酸片段串联,应用杆状病毒表达系统,在昆虫细胞中获得了含F_(RSV)-HN_(PIV-3)嵌合蛋白的重组病毒株.     

重组体表达的病毒样颗粒准型可作为疫苗研制的新途径

作者用表达逆转录病毒gag蛋白与单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白的痘苗病毒重组体共感染细胞,可产生病毒样颗粒准型(pseudotype)。这种准型颗粒是以非感染性的颗粒状态模拟天然抗原提呈过程来提呈病毒糖蛋白抗原的一种新方法。 先将猿猴免疫缺陷症病毒(SIVmac251)gag-pol区的全部4800个碱基对(bp)插入质粒pAbT4587得pAbT4660,将含2型HSV糖蛋白gD基因完整序列的1400个bp插入     

狂犬病病毒载体稳定表达外源基因

以DNA病毒及正链RNA病毒为载体的研究已取得很大进展,而以负链RNA病毒为载体的研究直到近几年才获得较大突破.在以前的研究中,作者从已克隆的狂犬病病毒(RV)全长.cDNA获得了具有感染性的活RV,这为RV作为基因工程载体铺平了道路.在本研究中,作者以克隆的SAD B19株全长cDNA为基础,在RV基因组的G和(?)基因间插入一段N/P基因边界序列(含转录终止子及新的转录起始信号).然后将氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因克隆在此序列下游,或者用以上序列(N/P基因边界序列及CAT全基因)替换(?)基因,从而获得两株克隆了外源基因的重组RV cDNA pSADXCAT及pSADXCAT.用表达RV N、P及L蛋白的     

减毒HIV-1辅助基因免疫接种盒的构建

基因免疫接种或DNA疫苗接种能诱导抗1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1）结构和酶基因产物的广泛免疫应答,故作者提出可否利用编码gag/pol/rev以及env/rev与辅助基因免疫原的多重基因表达盒来开发一种新型HIV-1疫苗。包括HIV在内的许多慢病毒的调节基因tat与rev以及辅助基因nef、vif、vpr、vpu和vpx均相当保守,其蛋白产物在病毒致病机理中起重要作用。研究证实,这些基因的蛋白产物具有免疫原性。本研究旨在设计一种安全有效的、含有辅助基因编码的基因免疫原的抗HIV疫苗。     

爱滋病疫苗研制的展望

本文提出了研制爱滋病疫苗的途径,以期促进协作研究,加速疫苗研制过程.爱滋病病毒尽管爱滋病在临床上有其独特性,但爱滋病病毒却与其他已经充分研究的逆转录病毒有许多共同特性。它的基因组能编码少数蛋白,包括几种结构蛋白、病毒复制所需的酶及1~2个功能不明的多肤。具体地说,皿型人类嗜T淋巴细胞病毒/琳巴结病相关病毒(HTLV一111/LAv)基因组含有gag、pof和env三种基因。gag基因编码病毒的核心蛋白(其中一种分子量为18,000,另一种为2吐,000(P24)〕,由gag基因编码的第三种蛋白(分子量为15,000)极可能为核糖核蛋白。pof基因编码复制酶逆转录酶。env基因编码的蛋白(可能有两种)构成病毒的外壳或包膜,其中一种主要包膜蛋白,分子似较大,(分子量110,000~120,000,即gp120),且已充分糖基化,另一种分子量为41,000(gp41)的蛋白,可能是膜转移蛋白,使病毒核心与包膜相连。患者血清中的抗体通常可与大多数主要病毒结构蛋白(核心和包膜)起反应。抗体在宿主防御感染中的作用尚不清楚,但一些感染者的血清能在体外中和HTLv一111/LAv,这一证据表明,有些杭体可能具有保护作用。用现有的技术测定这些扰休(至少是高效价抗体)的阳性率似较低,而且,迄今还不能根据抗体的测定鉴别患者是否得到保护。这与猫白血病病毒感染的情况截然不同。后者中和抗体的存在与对严重感染的防御作用密切相关,而HTLv一111/LAv感染     

用重组痘苗病毒表达HCVgp35并鉴定其特性

作者用非甲非乙型肝炎(NANBH)病人血清中的RNA制备了cDNA库,其中C10-E12相应于丙型肝炎病毒(HCV)基因组676～1607位核苷酸,编码HCVp22蛋白羧基末端部分、全部gP35糖蛋白和gP70糖蛋白氨基末端部分。将之酶切并插入痘苗病毒血疑素(HA)基因中P7.5启动子下游,得到质粒P7.5-E12。将其转染感染痘苗病毒Lister株的兔肾(RK13)细胞,通过血凝试验筛选出     

CYP4F3基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建

目的构建细胞色素P450(CYP)4F3基因RNA干扰(RNAi)重组慢病毒载体。方法设计并合成CYP4F3 siRNA序列,与含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的pGCL载体连接产生PscsiCYP4F3慢病毒载体,PCR和测序鉴定。用PscsiCYP4F3、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染人肾上皮细胞系293T细胞,包装产生慢病毒,测定病毒滴度,并以人肺腺癌A549细胞中CYP4F3mRNA表达水平确定该基因干扰的有效靶点。结果成功构建CYP4F3siRNA的慢病毒载体,并筛选出该基因的有效干扰靶点。结论成功构建人CYP4F3基因RNAi慢病毒载体,为后期研究CYP4F3基因功能奠定基础。     

HIV-1DNA疫苗和趋化因子

DNA疫苗已被证实具有在动物模型和人体中诱导体液及细胞免疫应答的能力。同样也证实由质粒表达载体传递的基因能在宿主中表达功能蛋白。另外 ,注射编码细胞因子、趋化因子或共刺激分子的质粒 (也称作免疫调节质粒 )能使该技术进一步扩展至定向免疫。作者研究了趋化因子与 1型人类免疫缺陷症病毒 (HIV- 1 ) DNA疫苗共同免疫的效果以及机体对 DNA免疫产生应答后趋化因子水平的变化。　　分别对小鼠和黑猩猩注射 5 0 μg和 5 0 0 μg表达 HIV- 1 env蛋白和 gag/pol蛋白的重组质粒 ,同时注射表达 IL- 8、VIP- 1 0、MIP- 1 α、MCP- 1…     

酿酒酵母表达的人类免疫缺陷症病毒包膜多肽不同区段的抗原性和免疫原性

人类免疫缺陷症病毒(HIV)SF2株的包膜(env)基因已预测出来。其感染细胞中160千道尔顿(KDa)糖蛋白(gp160)为env糖蛋白的前体,其氨基末端为gp120,羧基末端为gp41。gp120介导HIV与易感的辅助/诱导T细胞表面的病毒受体T4抗原结合。作者用基因工程方法在酵母中表达了HIV-SF2 env基因的不同区段,并研究其多肽的免疫原性。     

艾滋病病毒外膜蛋白与干扰素融合基因表达产物的免疫学研究

为了将艾滋病病毒外膜蛋白(env)与干扰素(IFNα-2b)融合基因表达的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠，观察小鼠的免疫功能状态和细胞免疫应答，将IFNα-2b基因片段插入到env基因的下游，经脂质体转染，筛选重组痘苗病毒，经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。用重组病毒vJ16env／IFNα-2b免疫小鼠，以生理盐水和野生型痘苗病毒作为对照，检测小鼠脾淋巴细胞对ConA、LPS及IgG的反应性；用流式细胞仪测定小鼠脾细胞CD4^+、CD8^+T细胞计数与CTL。结果表明，与对照组比较，实验组脾淋巴细胞对ConA、LPS及IgG的反应性显著增高(P&;lt;0．05)；CD4^T淋巴细胞计数和CTL活性也显著增高(P&;lt;0．05)；CD8^T淋巴细胞计数呈增高趋势，但未达到显著意义的程度。结论：重组病毒vJ16env／IFNα-2b能增强小鼠的免疫功能和诱导细胞免疫。     

HIV疫苗研究现状

最近两项研究强调了研制有效 HIV- 1疫苗这一艰巨任务。美国 Merck研究所的Shiver等在猴中比较了几种疫苗载体送递系统 :3种配方的质粒 DNA载体、修饰的Ankara痘苗病毒和复制缺陷型 5型腺病毒 ( Ad5)载体。所有载体均携带猴免疫缺陷病毒 ( SIV) gag蛋白的编码基因。　　Ad5载体单独应用或在 DNA载体初免后加强接种 ,可激发最有效免疫应答。经致病性 HIV- SIV杂交体攻击后 ,Ad5免疫猴中的病毒血症峰值比未免疫猴低 1 0～50倍。此外 ,Ad5组所有动物的病毒血症控制和 CD4 T细胞恢复情况均比其他组好。　　这项比较研究证实了新型候…     

表达RSV附着蛋白和融合蛋白的bPIV3可保护仓鼠抵抗hPIV3和RSV的攻击

作者用减毒牛3型副流感病毒(bPIV3)作为病毒载本主链，在bPIV3RNA基因组的HN和L基因之间插入呼吸道合胞病毒(RSV)的附着(G)和融合(F)基因，形成的病毒PIV3／RSV(I)含有2900nt的插入片段，它由两个有转译活性的转录单位组成。尽管基因物质增加，但此病毒在Vero细胞中的增殖仍然可达到高滴度，可表达RSV和bPIV3的表面糖蛋白。