重组HIV-2金丝雀痘(ALVAC)疫苗在食蟹猴中的免疫原性和保护力

作者在26只食蟹猴中对其组建的两种携带2型人类免疫缺陷症病毒(HIV-2)基因的重组金丝雀痘病毒的免疫效果进行了研究.一种是vCP188,表达全部HIV-2env基因产物;另一种是vCP206,表达HIV-2gag和pcl基因产物以及HIV-2env基因产物gp120(TM).用纯化的天然HIV-2gp125或     

重组HIV-1_(SF-2)gp120可增强表达HIV-1基因的重组金丝雀痘病毒活疫苗免疫诱导的细胞因子应答

作者对 72名未感染 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 )者注射不同疫苗后产生的 Th1和 Th2型细胞因子应答水平进行了比较。其中 2 0人为对照 ,52人用重组金丝雀痘病毒HIV- 1活疫苗 v CP2 0 5或重组 HIV- 1 SF- 2gp1 2 0疫苗单独免疫 ,或用以上两种疫苗联合免疫。分别在免疫前以及第 2 8、84、1 6 8、2 73和 36 4天免疫后 1 4天采血分离外周血单个核细胞 ( PBMC)培养 ,同时分别用 rp2 4、rgp1 6 0和 SF- 2 rgp1 2 0抗原刺激细胞 ,用ELISA检测培养上清中的细胞因子 :即 Th1细胞分泌的γ干扰素 ( IFN-γ)、白细胞介素 2( IL- 2 ) ,T…     

用重组禽痘病毒表达HIV-1包膜基因

1型人免疫缺陷症病毒(HIV-1)env基因编码糖基化蛋白前体,其在细胞中被蛋白酶水解成精蛋白(gp)120及gp41.已在gp41氨基末端发现高度免疫显性表位,后者能使健康的血清阳性个体产生体液免疫,在体外能特异性地抑制淋巴细胞增生.此区与Ⅰ型和Ⅱ型人嗜T淋巴细胞病毒的gp21E跨膜蛋白和多种逆转录病毒的免疫抑制(IS)区具有同源序列.作者通过基因重组获得了表达HIV-1SF2株包膜基因的重组金丝雀痘(CP)病毒和禽痘(FP)病毒,并将它的表达情况在鸡胚成纤维细胞(CEF)、猴肾细胞(Vero)及     

共同接种感染性或加热灭活金丝雀痘病毒制剂调节对HIV包膜亚单位的抗体应答

用源于金丝雀痘疫苗株 Kanapox的痘病毒 AL VAC构建编码荧光素酶的重组体ALVAC- Luc(v CP2 97) ,肌肉接种雄性 OF1小鼠后取接种处肌肉切片 ,用特异性兔抗体和 ABC染色试剂盒检测显示荧光素酶主要位于肌束膜和肌内模 ,接种后 6～ 8小时是表达高峰期。　　已知某些痘病毒能活化多形核白细胞(PMN) ,进而发挥免疫调节作用。作者首先检测了 v CP2 97诱导的炎症反应 ,将其肌肉接种雄性 OF1小鼠后取接种处肌肉切片 ,光学显微镜放大 1 0 0～ 40 0倍观察形态及间接免疫荧光染色均显示接种后 6小时内 PMN浸润 ,48～ 72小时巨噬细胞浸润。…     

金丝雀痘-狂犬病重组病毒的效力研究

作者在金丝雀痘病毒中插入狂犬病病毒糖蛋白基因,从而研制出安全有效的vCP16重组疫苗。本文报道该疫苗与其他两种痘-狂犬病重组疫苗的效力比较试验结果。将狂犬病病毒Era株糖蛋白cDNA插到经PvuⅡ酶切的,长度为3.3千碱基对(Kbp)的金丝雀痘病毒DNA亚基因组片段内独特的EcoR1位点上,糖蛋白基因表达受一个早/晚痘苗病毒启动子转录控制。用标准方法分离和蚀斑纯化重组金丝雀痘病毒vCP16,然     

抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性,为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备。方法将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达载体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白。表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆。重组免疫印迹分析(RIBA)和Western blot检测抗体特异性。结果构建的重组质粒的外源基因片段经测序与预期HIV-1 gp120抗原基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE可见1条相对分子质量(Mr)32 000的表达蛋白条带。获得6株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清效价为10-3,小鼠腹水效价为10-5,抗体亚型均为IgG1。RIBA结果显示6株单抗皆只与HIV-1 gp120抗原反应。Western blot结果显示在Mr32 000处可见1条单一目的条带。结论获得6株稳定分泌抗HIV-1 gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研制抗HIV治疗性抗体奠定了基础。     

HIV-1 Gag-gp120嵌合基因在重组杆状病毒系统中的嵌合表达

将中国株HIV-1B亚型gag基因序列克隆到杆状病毒表达载体pFASTBAC1中,将gp120基因以相同的读框克隆到gag基因的3／端下游,构建了重组表达质粒pFge,利用大肠杆菌埃希菌杆状病毒表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞sf9中表达了HIV-1的Gag-gp120嵌合蛋白。     

分散在MF59中的微粒——一种有效的抗HIV-1重组蛋白质疫苗的佐剂结合物

作者对包裹重组抗原的丙交酯乙交酯共聚物 ( PL G)微粒分散于 MF5 9乳剂佐剂中的新佐剂配方进行了评价。使用的重组蛋白抗原为 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 SF2 )rgp1 2 0 (中国仓鼠卵巢细胞表达 )和 HIV- 1 SF22 4gag(酶母细胞表达 )。 PLG/gp1 2 0、PL G/p2 4分别表示包裹有上述抗原的 PLG微粒 ,平均大小为 1μm,约有 2 0 %的抗原于第 1天释放 ,余下的则可持续释放 5 0～ 6 0天。将上述微粒再分散于佐剂 MF5 9中 ( PL G/gp1 2 0+ MF5 9和 PLG/p2 4+ MF5 9) ,给小鼠和狒狒肌肉注射进行免疫学试验。　　结果表明 ,小鼠中 ,…     

重组HIV-金丝雀痘疫苗在乌干达HIV血清阴性志愿者中的免疫原性

作者在人类免疫缺陷病毒( HIV)流行的重灾区乌干达进行了重组HIV-金丝雀痘疫苗的 期临床研究,旨在评价B亚型疫苗在乌干达未感染人群中的安全性和亚型间交叉免疫原性。　　该项研究为随机双盲安慰剂对照的现场试验。选择4 0名血清阴性的乌干达志愿者,其中2 0名受试者接受含B亚型HIV- 1 env和gag- pro抗原的金丝雀痘病毒载体,1 0名受试者接种含狂犬病病毒糖蛋白G基因的对照载体,其他1 0名受试者接种盐水对照。按照标准的艾滋病疫苗评价工作组的方案测定HIV特异性细胞毒性T细胞( CTL )数目,以标准铬释放测定法评价细胞毒活性,以改良的…     

狂犬病病毒用作HIV疫苗的载体

美国 Jefferson医学院的研究人员运用减毒的狂犬病病毒作为表达人类免疫缺陷症病毒 (HIV)包膜蛋白的载体 ,研制 HIV疫苗。这是一种新方法 ,因为狂犬病病毒或不分节段的负链 RNA病毒用于 HIV疫苗尚属首次。　　研究人员将 HIV- 1 gp1 6 0基因插入减毒的狂犬病病毒产生重组病毒。然后将其注射小鼠 ,并加强注射一次 HIV gp1 2 0蛋白以致敏免疫系统。结果该病毒成功地表达出 gp1 6 0糖蛋白 ,并诱导强的抗 HIV- 1包膜蛋白的体液免疫应答。另外 ,在小鼠血清中检出滴度高达 1 :80 0的抗 HIV中和抗体。而一些广泛使用的重组病毒载体 (表达…     

含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒的构建及鉴定

目的 构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒疫苗,并初步评价其免疫效果.方法 将HIV-1gp120基因抗原决定簇插入到脊髓灰质炎病毒表达载体PSVA14中,构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒,通过脂质体介导法将重组脊髓灰质炎病毒转染入Hela细胞,通过PCR,酶切鉴定等方法对重组脊髓灰质炎病毒载体进行了表达鉴定,并通过氯仿-PEG/NaCl-氯仿三步法纯化重组脊髓灰质炎病毒,利用免疫酶法,Western blot方法对重组脊髓灰质炎病毒作了初步的免疫效果的研究.结果 构建的重组脊髓灰质炎病毒在Hela细胞内可以正确的表达gp120基因,并能感染293细胞而不产生细胞病变,并能随293细胞的传代被复制克隆.结论 重组脊髓灰质炎病毒能正确的表达gp120基因,并能感染人正常细胞,初步证实了其生物安全性.     

以禽痘病毒为载体的乙型脑炎疫苗与纯化的亚单位免疫原联合免疫的效果

ALVAC是金丝雀痘病毒减毒株的蚀斑纯化分离株,本文作者用基因工程技术构建了该病毒与乙型脑炎病毒(JEV)的重组体,并研究了重组体与一种含prM/M和E蛋白的细胞外亚病毒颗粒(EP)联合免疫的效果.作者将在供体质粒pSPJEVL14VC和pJEV27上产生vP555和vP829的JEV核酸序列通过多点侧链连接插入ALVAC供体质粒中,构建成CP1-20和CP5质粒,分别含有编码prM/M、E、NS1和NS2A的序列,以及编码prM/M和E的序列.这两种质粒被     

增强口服DNA疫苗和表达HIV包膜糖蛋白病毒载体免疫效果的策略

作者研究了先口服编码 HIV gp1 6 0的DNA疫苗进行初免 ,然后用表达 gp1 6 0的重组痘苗病毒 ( r VV)载体 ( v PE1 6 )进行加强的免疫方法的效果 ,分析了香菇多糖和 IL - 2 / Ig佐剂对免疫应答的作用。　　作者采用水包油包水的方法制备编码HIV gp1 6 0 DNA和 IL - 2 / Ig DNA的聚丙交酯 -乙交酯 ( PL G)微粒 ,并制备了与 v PE1 6或香菇多糖结合的阳离子脂质体。试验动物是 6周龄的 BALB/ c小鼠 ,小鼠饲养在无特定病原体的隔离环境中。在设立相应的对照组后 ,对实验组在 0、7、1 4天进行口服免疫 ,1周后用表达 HIV- 1 B gp1 …     

HIV-1 gp120真核表达载体的构建及表达

目的模拟HIV-1包膜糖蛋白天然构象,在真核细胞中高效表达三聚体包膜糖蛋白。方法本研究以原代HIV-1分离株06044包膜为研究对象,将不含信号肽序列的包膜gp120基因克隆至含有人类组织型纤溶酶原激活物（tPA）的信号肽序列的真核表达载体上,构建单体形式gp120蛋白表达载体;或将其克隆至含有tPA信号肽序列和蛋白质三聚化模序MTQ的真核细胞表达载体上,构建三聚体形式gp120蛋白表达载体。gp120重组表达载体体外瞬时转染293T细胞,westernblot检测表达情况。结果获得gp120蛋白单体和三聚体的真核细胞表达载体peT．06044gp120m／co和pcT-06044gp120T／co;重组质粒瞬时转染293T细胞后westernblot分析,在变性条件下,两组细胞培养上清均检测到单体形式gp120蛋白;非还原条件下,peT．06044gp120T／co转染组的细胞培养上清中检测到三聚体、二聚体和单体三种形式gp120蛋白,其百分比分别为76％、14％和10％。结论本研究成功构建了HIV-1原代06044株包膜gp120单体和三聚体表达载体,并在哺乳细胞中成功表达了gp120单体和三聚体蛋白。     

完全糖基化的重组HIV-1gp160疫苗在感染危险性较低者中的安全性与免疫原性

本文作者应用完全糖基化的重组1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)(?)gp160疫苗免疫人体,对这种疫苗的安全性与免疫原性进行了评价.研究对象为60名18～60岁的健康志愿者,采用双盲法进行试验,受试者随机接受疫苗或安慰剂.疫苗系痘菌病毒表达系统在哺乳动物组织培养细胞中产生的重组HIV-1(?)gp160(rgp160-mam).两个免疫组分别于0、     

通过去除V3 N306聚糖改变N端糖基化信号效应提高HIV-1 env DNA疫苗的免疫原性

编码 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 )包膜 env的 DNA不是有效的 B细胞免疫原 ,可能是大量 gp1 2 0 N端连接的聚糖干扰了 B细胞表位的提呈 ,gp1 2 0中的 N30 6聚糖可保护 HIV- 1免受中和抗体的攻击。　　为了确定聚糖是否影响免疫应答 ,作者构建了缺乏 N30 6糖基化信号 ( T30 8A)的DNA免疫原 ,方法是在表达质粒 p Ci的基础上构建 DNA载体。采用核苷酸定点突变的方法将 30 8位的苏氨酸转变为丙氨酸 ,从而消除位于 gp1 6 0 N端 30 6位的连接糖基化信号。另外构建含有从 BRU株获得的未经突变的完整 HIV- 1 env基因 gp1 6 0及 rev的…     

金丝雀症病毒狂犬病病毒糖蛋白重组疫苗对人的安全性和免疫原性

重组禽痘病毒在非禽类细胞中仅能发生流产性复制,但能有效地表达外源基因的产物.作者在健康的成人志愿者中评估了表达狂犬病病毒糖蛋白的重组金丝雀痘病毒疫苗(ALVAC-RG)的安全性和免疫原性.在0、28和180天分别对三组志愿者(每组5人)肌肉注射1.0ml 10~(3.5),10~(4.5)和10~(5.5)的50%组织培养感染量(TCID_(50))的ALVAC-RG,每组另设两名志愿者按相同的免疫程序接种1.0ml人二倍体细胞狂犬病疫苗(HDCV).     

重组痘苗-HIV包膜和HIV包膜蛋白诱导的免疫应答

12名人类免疫缺陷症病毒(HIV)血清阴性的男性受试者经三角肌区划痕接种2剂编码gp160HIV-1包膜蛋白的重组痘苗(vac-env),11～14个月后肌注加强免疫2剂杆状病毒表达的HIV-1LAI株的重组糖蛋白(rgp)160μg,12～20个月后加强第3剂     

疫苗诱导的抗天然及重组HIV-1包膜糖蛋白抗体

作者采用多中心、随机、双盲法,对以1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)LAV株gp160重组痘苗活病毒初免、再用杆状病毒表达的HIV-ILAV重组gp16O候选疫苗加强免疫所诱生的能识别感染细胞表面表达的天然外膜糖蛋白的抗体进行了测定.     

用HIV-1MN株重组gp120免疫血清阴性志愿者诱导的抗HIV-1中和抗体

人类免疫缺陷症病毒(HIV)MN、SF-2和Ⅲ B株是广泛用于制备疫苗的三株病毒株.1型HIV(HIV-1)糖蛋白(gP)120和gp41在病毒感染过程中起重要作用,是HIV 疫苗的首选组份.本文报道了美国圣路易斯大学艾滋病疫苗评价中心进行的HIV-1重组gp120疫苗的安全性与免疫原性的临床试验结果.