MOLECULAR CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF THE IMMUNOGLOBULIN LIGHT CHAIN VARIABLE REGION GENE OF A MURINE ANTI-HUMAN C1-INH IgG

获得抗体的可变区基因是由鼠源性ＭｃＡｂ制备重组抗体的前提，本实验合成与轻链可变区（ＶＬ）ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出Ｆ７ＶＬ的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，从两端进行双脱氧核苷酸随机终止法的ＤＮＡ序列测定。结果显示：ＶＬｃＤＮＡ是由３０３个碱基组成，编码１０１个氨基酸残基。由国际联机检索进行ＥＭＢＬ和Ｋａｂａｔ基因库扫描发现：Ｆ７ＶＬ仅与Ｉｇ同源，符合小鼠Ｉｇ的ＶＬ基因特征，同源性为６０％～８０％。根据Ｋａｂａｔ分类方法，Ｆ７ＶＬ基因推导的氨基酸序列应归属于小鼠Ｉｇ的ＶＬ基因ＩＶ亚组，是由Ｖｋ－Ｊｋ１重排产生。ＣＤＲ３含有９个氨基酸残基，其中含３个不相同氨基酸残基，ＶＬ大多数的氨基酸变化集中在ＦＲ１和ＣＤＲ１区，Ｆ７ＶＬ符合ＩｇＶＬ氨基酸残基变化的基本特征。Ｃｙｓ２３和Ｃｙｓ８８残基位于Ｆ７ＶＬＣＤＲ１和ＣＤＲ３的起始点，与二硫键形成有关。成功获得Ｆ７ＶＬ基因为进一步构建和表达单链Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体打下了良好的基础。     

丙型肝炎病毒在人T淋巴细胞中的体外感染

用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ阳性的血清感染人类Ｔ淋巴细胞（Ｍｏｌｔ－４），１２小时后继续孵化１～２８天，将感染后的产物用聚合酶链反应（ＰＣＲ）测定，于第１、２、３天和第８天发现ＨＣＶ－ＲＮＡ的正链，第２和第８天发现ＨＣＶ－ＲＮＡ的负链。     

轮状病毒1,2血清型VP7蛋白基因的扩增及其克隆

用聚合酶链反应扩增了轮状病毒Ｗａ株（第１血清型）和ＤＳ－１株（第２血清型）的全长ＶＰ７蛋白基因，利用两引物５＇末端的多接头位点，以ｐＵＣ１８质粒为载体构建了含两株ＲＶＶＰ７基因ｃＤＮＡ拷贝的重组体。经ＰＣＲ扩增制备得１～４血清型ＲＶＶＰ７基因高变区（５１－３９２核苷酸）￣（３２）Ｐ标记核酸探针，对重组质粒型别进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和斑点杂交鉴定，结果Ｗａ株ＶＰ７基因重组体只与１型探针呈强杂交信号，ＤＳ－１株重组体只与２型探针呈强杂交信号。     

541例呼吸道病毒和病毒抗体检测分析

本文应用ＡＰＡＡＰ方法对５４１例患者的流感病毒Ａ（ＦｌｕＡ）、流感病毒Ｂ（ＦｌｕＢ）、副流感病毒２（ＰＩＶ２）、副流感病毒１．３（ＰＩＶ１．３）、腺病毒３．７（ＡＤＶ３．７）以及合胞病毒（ＲＳＶ）进行了检测,用ＥＬＩＳＡ法检测了７１例患者血清中的抗ＡＤＶ和ＲＳＶ抗体。结果显示呼吸道感染阳性率为４６．６％（２０８／４４６）,非感染性疾病组阳性率为１３．７％（１３／９５）。ＡＤＶ和ＲＳＶ抗原与抗体检测     

成人腹泻轮状病毒抗体在人体内维持时间的研究

目的 观察成人腹泻轮状病毒（ＡＤＲＶ）抗体在人体内维持时间。方法 采用特异性的ＡＤＲＶ－ＥＬＩＳＡ阻断试验检测ＡＤＲＶ抗体,对河南义马地区１９９２、１９８７、１９８３年患成人腹泻的病人恢复１年、６年、１０年后的血清进行ＡＤＲＶ抗体的检测。结果 ２６０例ＡＤＲＶ病人恢复１年、６年、１０年后其血清中ＡＤＲＶ抗体阳性率分别为２２．７％（３４／１５０）、３６．３％（２９／８０）、２３．３％（７／３０）;对９２例ＡＤＲＶ抗体阳性者进行了抗体维持时间的观察,ＡＤＲＶ抗体在人体内可维持１～６年。结论 成人腹泻轮状病毒感染人后一旦产生了抗体,可维持１６年。     

人类疱疹病毒7型DNA断裂包装位点序列分析

目的测定分析人类疱疹病毒７型（ＨＨＶ７）ＤＮＡ末端、断裂位点及包装信号的基因序列。方法ＨＨＶ７感染Ｓｕｐ－Ｔ１细胞后提取ＤＮＡ，ＰＣＲ扩增待测ＤＮＡ片断，与质粒载体连接后筛选目的基因克隆，双脱氧末端终止法测定目的基因序列。结果经测序后得到了ＨＨＶ７ＤＮＡ末端及其断裂位点和包装信号的基因序列。分析比较后发现在靠近ＨＨＶ７ＤＮＡ末端的基因序列中存在与人类端粒重复序列相同的基元序列ＧＧＧＴＴＡ。ＨＨＶ７断裂位点具有ｐａｃ２·Ｘ·ｐａｃｌ的排列，ＨＨＶ７的断裂位点位于包装信号ｐａｃ１及ｐａｃ２之间，只有当三者同时存在时才能构成一个完整的断裂包装位点。并且只有当复制型ＨＨＶ７ＤＮＡ环化时才能形成完整的断裂包装位点。结论ＨＨＶ７ｐａｃ１的基因序列与ＨＨＶ６ｐａｃ１的基因序列具有较高同源性。ＨＨＶ７与ＨＨＶ６具有相似的ＤＮＡ末端基因结构。     

人乳头瘤病毒16型转换基因的序列分析

为了解中国地区宫颈癌病人中人乳头瘤病毒１６型Ｅ６Ｅ７基因结构特点,从中国山东地区宫颈癌活检组织中提取组织ＤＮＡ,经ＨＰＶ多重引物ＰＣＲ法鉴定标本中感染ＨＰＶ型别,选单纯感染ＨＰＶ１６两例标本ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增,获得ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７基因后,重组入ｐＡＬＴＥＲ－１载体,进行双向测序、分析。ＤＮＡ序列分析表明：两例标本的ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７序列全长均为７７６ｂｐ,与已发表的德国标准株长度相等,两     

世界范围内A组轮状病毒G1型毒株VP7基因及VP4基因高变区…

Ａ组轮状病毒的ＶＰ４和ＶＰ７多肽是刺激机体产生中的抗体的主要保护性抗原。我们总结了世界多个地区和国家Ｇ１型轮状病毒流行株ＶＰ４和ＶＰ７基因的分子流行病学调查结果，并根据ＶＰ７多肽序列绘制了分子系统分类树。结果表明，所有流行株ＶＰ４基因的高变区具有相似的氨基酸组成，而ＶＰ７多肽疏水区，特别是已知的抗原决定簇ＶＲ３，ＶＲ４及ＶＲ６的氨基酸组成有规律性变异，提示这些毒株间在抗原性上有微小差异。分子系数分     

岳阳地区孕妇TORCH感染的监测分析

目的：监测岳阳地区育龄孕妇ＴＯＲＣＨ感染现状。方法：应用ＥＬＩＳＡ法对１１１２３例孕妇作ＴＯＲＣＨ感染的血清学检测。结果：ＣＭＶ，ＲＶ，ＴＯ的感染阳性率分别为１．３８％，１．８８％，１．１６％，平均１．４７％，各县市区的感染阳性率明显不一，存在显著性差异。结论：岳阳地区ＴＯＲＣＨ感染有自己的特点，并认为应加强ＴＯＲＣＨ感染血清学检测的质控。     

二重逆转录—聚合酶链反应及微孔板反向杂交法检？…

目的 为适应临床上需同时检测庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染情况，建立了二重逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及微孔板反向杂交法。方法 根据ＨＣＶ与ＨＧＶ基因与ＨＧＶ特异探针微孔板反向杂交检测ＣＰＲ产物。结果 ＰＣＲ产物经测序，ＨＣＶ与Ｔａｋａｍｉｚａｗａ等及Ｃｈｏｏ等报道的核苷酸同源性分别为９３．１％￣９４．１％与９２．５％￣９３．７％，ＨＧＶ与Ｓｉｍｏｎｓ等、Ｌｉｎｎｅｎ等     

EB病毒潜伏感染在不同部位T细胞淋巴瘤中的表达

目的：探讨不同部位Ｔ细胞淋巴瘤（ＴＭＬ）与ＥＢ病毒（ＥＢＶ）感染的关系。方法：对１００例不同部位的ＴＭＬ（结内４０例、结外６０例），采用原位杂交法检测肿瘤细胞ＥＢＶ编码的ＲＮＡ（ＥＢＥＲ１／２）。结果：（１）１００例中ＥＢＥＲ１／２检出率４８％（４８／１００），结内ＴＭＬ检出率３０％（１２／４０），结外ＴＭＬ检出率６０％（３６／６０），结内、结外ＥＢＶ检出率差异有非常显著意义（Ｐ＜０．０１）。（２）结外呼吸道ＴＭＬＥＢＥＲ１／２检出率鼻腔、鼻咽、口咽和肺分别是８８．９％（１６／１８）、７１．４％（５／７）、４７．６％（１０／２１）、３３．３％（１／３）。（３）胃肠道、软组织ＴＭＬＥＢＥＲ１／２检出率分别是１６．７％（１／６）、３３．３％（１／３）。结论：ＥＢＶ感染在不同部位ＴＭＬ中的表达具有明显部位限制性，特别是鼻腔、鼻咽的ＴＭＬ与ＥＢＶ关系最密切，其ＥＢＥＲ１／２检出率明显高于身体其它部位Ｔ细胞淋巴瘤     

EB病毒编码的RNA及EB病毒潜在膜蛋白在中线T淋巴瘤中的表达

应用免疫组化和原位杂交技术及抗ＥＢ病毒潜在膜蛋白（ＬＭＰ－１）单克隆抗体和ＥＢ病毒编码的ＲＮＡ（ＥＢＥＲ－１）探针对９例中线Ｔ淋巴瘤（ＭＴＬ）进行了ＥＢ病毒（ＥＢＶ）检测。结果显示：８例肿瘤细胞核ＥＢＥＲ－１阳性；７例肿瘤细胞膜和胞浆ＬＭＰ－１阳性。结果表明：（１）ＥＢＶ与我国的ＭＴＬ存在密切关系，很可能在其发病中起着重要作用；（２）ＥＢＶ在ＭＴＬ的检出率高于全身其它部位和其它类型的周围型Ｔ淋巴瘤；（３）ＥＢＥＲ－１原位杂交和ＬＭＰ－１免疫组化在检测ＭＴＬ中ＥＢＶ方面都很敏感、可靠，而后者更经济简便。     

大细胞间变型T细胞淋巴瘤与EBV关系

目的：研究大细胞间变形Ｔ细胞淋巴瘤（ＡＬＣ－ＴＣＬ）与ＥＢＶ之间的关系，方法：应用免疫组织化学，聚合酶锭反应和ＲＮＡ原位杂交方法检测ＥＢＶ－ＤＮＡ的序列和ＥＢＶ编码ＲＮＡ。结果：检测的７例ＡＬＣ－ＴＣＬ，其中４例显示ＥＢＶ－ＤＮＡ和Ｅ－ＢＥＲ１／２阳性，两种检测方法的阳性率均为５７．１％（４／７），结论：ＡＬＣ－ＴＣＬ的发病与ＥＢＶ的感染的关系较密切。     

套式PCR检测HBV与HCV垂直传播的比较研究

用套式ＰＣＲ法检测了２７例ＨＢｓＡｇ阳性母亲的新生儿脐带血ＨＢＶ ＤＮＡ，阳性３例（１１．１％），同时检测了７例抗－ＨＣＶ阳性母亲的新生儿脐带血ＨＣＶ ＲＮＡ及抗－ＨＣＶ，结果ＨＣＶ ＲＮＡ无１例阳性，抗－ＨＣＶ全部阳性，因此认为婴儿体内抗－ＨＣＶ是一种由母体被动获得的抗体，不能作为ＨＣＶ感染的客观指标。     

合肥地区输血后慢性肝炎HCV基因分型研究

目的：探讨合肥地区输血后慢性肝炎ＨＣＶ感染的基因型。方法：用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ,对ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用型特异引物ＰＣＲ进行ＨＣＶ分型。结果：６３ 例患者中检出ＨＣＶ　ＲＮＡ５４ 例,阳性率为８５．７％ ;其中Ⅱ型４６ 例（８５．２％）,Ⅲ型６ 例（１１．１％）,Ⅱ／Ⅲ型２ 例（３．７％）。结论：提示合肥地区ＨＣＶ感染大多数属Ⅱ型。     

人可溶性IL-6R基因在COS7细胞中的表达及活性分析

目的在ＣＯＳ７细胞中表达具有生物学功能的人可溶性ＩＬ－６Ｒ（ｓＩＬ－６Ｒ），作为研究ｓＩＬ－６Ｒ结构与功能关系的基础。方法首先利用ＰＣＲ技术扩增出人可溶性ＩＬ－６Ｒ（ｈｓＩＬ－６Ｒ）编码基因片段，并重组入克隆载体ｐＡＬＴＥＲ－１。通过基因序列分析确定了目的基因的核苷酸序列，并进一步构建了由ＳＶ４０晚期启动子和ＨＣＭＶ早期启动子控制的表达质粒ｐＳＶＬ６Ｒ和ｐＣＭＶ６Ｒ。用脂质体介导的方法将表达质粒转染ＣＯＳ７细胞，并分别在ｍＲＮＡ水平（斑点杂交）和蛋白水平（ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ）检测ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的表达。在７ＴＤ１，ＬＴ１２两种ＩＬ－６反应细胞系上检测转染细胞上清（含ｓＩＬ－６Ｒ）的生物学活性。结果在ｍＲＮＡ水平和蛋白水平分别检测到ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的表达，表达产物分子量约为５００００。表达产物在７ＴＤ１，ＬＴ１２细胞系上检测到明显的生物学活性。结论天然ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的成功表达为进一步制备ｓＩＬ－６Ｒ突变体及其结构与功能关系的研究奠定了基础     

乌鲁木齐地区孕妇上感和流产史与TORCH感染相关性研究

ＥＬＩＳＡ检测１５２９例孕妇血清特异性ＩｇＭ抗体，以了解本地区孕妇ＴＯＲＣＨ感染情况，同时根据门诊记录病历进行统计整理，分析了上呼吸道感染与流产分别与ＴＯＲＣＨ感染间的关系。结果显示ＴＯ、ＲＶ、ＣＭＶ和ＨＳＶ－２的ＩｇＭ阳性检出率分别为１．１８％、１．７６％、２．６２％和１．６０％，有上呼吸道感染史孕妇各顶ＩｇＭ阳性检出率则分别为１．６５％、３．０７％、３．０７％和２．８０％有流产史孕妇给出率分别为１．８７％、２．８０％、２．９９％和２．８０％。经过分析说明上呼吸道感染与ＲＶ感染率显著相关，流产史与ＲＶ、ＨＳＶ－２感染率显著相关，ＯＲ值均〉２．３０。     

世界范围内A组轮状病毒G1型毒株VP7基因及VP4基因高变区的分析

Ａ组轮状病毒的ＶＰ４和ＶＰ７多肽是刺激机体产生中和抗体的主要保护性抗原。我们总结了世界多个地区和国家Ｇ１型轮状病毒流行株ＶＰ４和ＶＰ７基因的分子流行病学调查结果，并根据ＶＰ７多肽序列绘制了分子系统分类树。结果表明，所有流行株ＶＰ４基因的高变区具有相似的氨基酸组成，而ＶＰ７多肽疏水区，特别是已知的抗原决定簇ＶＲ３，ＶＲ４及ＶＲ６的氨基酸组成有规律性变异，提示这些毒株间在抗原性上有微小差异。分子系统分类树将所有毒株分为三个与氨基酸组成相对应的亚组，各个亚组的成员构成反映出了世界范围内轮状病毒流行株的分布具有较明显的地域性。     

宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7蛋白致癌机理初探

目的 研究宫颈癌组织中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６－Ｅ７蛋白对视网膜母细胞瘤基因（Ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ）Ｒｂ蛋白及Ｅ２Ｆ－１的作用的机制,探讨ＨＰＶ１６－Ｅ７蛋白与宫颈癌发生的关系。方法 采用聚合酶链反应检测宫颈癌及正常宫颈组织中ＨＰＶ１６感染等,用蛋白印迹技术对ＨＰＶ１６ ＤＮＡ阳性的宫颈癌组织中是否存在ＨＰＶ１６－Ｅ７蛋白和Ｒ６蛋白－Ｅ２Ｆ－１形成的复合物进行检测。正常宫颈组织作为对照,     

CLONING AND SEQUENCE CHARACTERIZATION OF THE RE-ARRANDED VH GENE FROM HYBRIDOMA CELLS SECRETING ANTI-HUMAN C1-INHIBITOR McAb

由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，合成与ＶＨ基因ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，以ＲＮＡ反转录合成的第一链ｃＤＮＡ为模板，ＰＣＲ法克隆出Ｆ７ＶＨ基因的ＤＮＡ片段。将分离获得的目的ＤＮＡ片段亚克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，从两头进行双脱氧核苷酸随机终止法的ＤＮＡ序列测定。结果显示：ＶＨ基因是由３３３个碱基组成，编码１１１个氨基酸残基。通过国际联机检索进行ＥＭＢＬ和Ｋａｂａｔ基因库扫描发现，Ｆ７ＶＨＤＮＡ仅与Ｉｇ同源，符合小鼠Ｉｇ的ＶＨ基因特征；同源性为６０％～８５％，应归属于Ｉｇ的ＶＨ基因。根据Ｋａｂａｔ分类方法，Ｆ７ＶＨ基因推导的氨基酸顺序属于小鼠Ｉｇ的ＶＨ基因的Ⅱ（Ａ）亚组，是由ＶＨ－Ｄ－ＪＨ３重排产生；其框架区的９和６７位点为脯氨酸（Ｐｒｏ）和赖氨酸（Ｌｙｓ）（非芳香族氨氨酸），符合Ⅱ（Ａ）亚组框架残基结构模式；其ＣＤＲ３区含有７个氨氨酸残基，表明Ｃ１－ＩＮＨ抗原表面结构并不复杂；ＦＲ２和ＦＲ３的２２和８９位点为半胱氨酸残基（Ｃｙｓ），与ＶＨ片段二硫键形成有关。成功获得Ｆ７ＶＨ基因为进一步构建和表达单链Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体打下良好的基础。