细胞转录调节因子YY1及其对人乳头瘤病毒16型早期启动子P97抑制效应广泛存在于人上皮细胞

目的为了检测ＹＹ１在不同宫颈癌细胞及人乳头瘤病毒易感细胞中的表达、功能状态和ＹＹ１位点破坏所诱导的Ｐ９７活性增强效应。方法提取了４种宫颈癌细胞和２种人角源细胞胞核蛋白，检测其内源性ＹＹ１蛋白。同时将带有ＨＰＶ１６标准ＬＣＲ和ＹＹ１位点突变ＬＣＲ序列的荧光素酶质粒短暂转染上述细胞以检测Ｐ９７活性。结果所有被检细胞均含有良好生物学活性的ＹＹ１蛋白，其蛋白含量在各细胞系间无明显差别。ＨＰＶ１６ＬＣＲ上ＹＹ１位点的破坏可在多种细胞，包括人类原代角源细胞中诱导Ｐ９７活性增强。结论表明ＹＹ１蛋白调节系统广泛存于ＨＰＶ易感细胞系内。同时我们还发现转录激活因子ＮＦ１在Ｃ３３ａ细胞中的含量明显高于ＨＴ３细胞，并影响ＹＹ１位点改变所致的Ｐ９７活性增强效应。这提示在不同的细胞系中活性蛋白的表达和含量可能不同     

人乳头瘤病毒16型长控制区域上YY1位点的缺失可增强病毒？…

目的 人乳头瘤病毒１６型早期启动子Ｐ９７控制着病毒癌基因的表达。为了观测长控制区结合位点的破坏对病毒转化能力的影响。方法 构建了带有自然发生突变ＬＣＲ序列的ＨＰＶ１６全基因质粒，利用ＥＭＳＡ和荧光素酶实验检测小鼠纤维细胞胞核内源性ＹＹ１蛋白存在和功能状态；将标准及突变的ＨＰＶ１毒株转染至Ｃ１２７细胞进行软琼脂糖培养基生长实验。结果 与上皮类细胞相似，在Ｃ１２７胞核提取物中可检出ＹＹ１蛋白，并且具有     

人乳头瘤病毒16型E6E7反义RNA抑制宫颈癌细胞恶性？…

目的 研究癌基因的特异性反义ＲＮＡ对癌细胞生长繁殖和恶性程度的影响。方法 用逆转录病毒载体将人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）－６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ导入ＨＰＶ－１６ＤＮＡ阳性的宫颈癌细胞株ＣａＳｋｉ中，观察该细胞在导入反义ＲＮＡ后其表型特征和在裸鼠体内致癌能力的变化。结果 ＨＰＶ－１６ Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ能降低宫颈癌细胞ＣａＳｋｉ的生长速率，抑制其在软琼脂上的集落形成能力，并能明显地抑制其在裸鼠体内的致癌能力     

YYI蛋白对HPV16启动子P97的抑制效应依赖于上游？…

目的 观测位于ＨＰＶ１６ＬＣＲ序列ＹＹ１结合位点上游的组织特异性增强子序列对ＹＹ１蛋白的启动子Ｐ９７抑制作用的影响。方法 构建带有不同长度的ＨＰＶ１６野生株、启动子远端ＹＹ１位点突变株、启动子近端ＹＹ１位点突变株的５’端ＬＣＲ缺损序列的荧光素酶报导质粒，以及不同长度的近端ＹＹ１／ＳＰ１重叠结合位点基因工程突变ＬＣＲ的荧光素酶报导质粒；将各种质粒转染到人类子宫颈癌细胞系Ｃ３３Ａ中，检测在不同ＬＣＲ序     

人乳头瘤病毒16型长控制区域上YY1位点的缺失可增强病毒对小鼠纤维细胞的转化能力

目的人乳头瘤病毒（Ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｏｍａｖｉｒｕｓ，ＨＰＶ）１６型早期启动子Ｐ９７控制着病毒癌基因的表达。为了观测长控制区（Ｌｏｎｇｃｏｎｔｒｏｌｒｅｇｉｏｎ，ＬＣＲ）上ＹＹ１结合位点的破坏对病毒转化能力的影响。方法构建了带有自然发生突变ＬＣＲ序列的ＨＰＶ１６全基因质粒，利用ＥＭＳＡ和荧光素酶实验检测小鼠纤维细胞胞核内源性ＹＹ１蛋白存在和功能状态；将标准及突变的ＨＰＶ１６毒株转染至Ｃ１２７细胞进行软琼脂糖培养基生长实验。结果与上皮类细胞相似，在Ｃ１２７胞核提取物中可检出ＹＹ１蛋白，并且具有良好的ＤＮＡ结合功能和Ｐ９７活性抑制作用。转化实验显示ＹＹ１位点突变ＨＰＶ１６毒株可在软琼脂糖培养基上形成２～１０倍量多的生长集落。结论细胞转录调节因子ＹＹ１存在于啮齿类动物纤维细胞胞核中；ＬＣＲ上ＹＹ１结合位点的破坏可在完整基因组范围内明显增强病毒对小鼠纤维细胞的转化能力。     

人乳头瘤病毒16型E6E7基因反义质粒对人宫颈癌细胞恶性的逆转…

构建可为地塞米松诱导表达的人乳头瘤病毒１６型Ｅ６Ｅ７，基因反义质粒，利用磷酸钙沉淀法将其分别转染到ＨＰＶ－１６阳性的人宫颈癌株Ｃａｓｋｉ和ＨＰＶ阴性的人宫颈癌细胞株Ｃ－３３Ａ中。地塞米松诱导反义质粒表达后，ＣａｓＫｉ细胞失去其恶性表型，而Ｃ－３３１细胞的生长特性及恶性行为未发生变化。     

人乳头瘤病毒感染与人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌的发生密切相关,是宫颈癌发生的最主要诱发因素.预防性HPV疫苗是一种预防宫颈癌的新方法,其效果得到了多项临床试验的肯定.治疗性HPV疫苗的研发同样备受关注,目前治疗性疫苗的类型很多,但因其机制较复杂,大多仍处在实验阶段.     

含人乳头瘤病毒16型E6E7反意基因的假型逆转录病毒对人乳头瘤病毒16型转化细胞生长的抑制作用

构建了一个含人乳头瘤病毒１６型Ｅ６Ｅ７反意基因片断的逆转录病毒载体ｐＨ１９。用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将ｐＨ１９导入病毒包装细胞ｐＡ３１７，使之产生假型逆转录病毒Ｈ１９。Ｈ１９病毒感染人乳头瘤病毒１６型转化的细胞后，使转化细胞的生长速率和裸鼠体内形成肿瘤的能力均明显下降。     

人乳头瘤病毒16型对细胞增殖、分化及凋亡的影响

人乳头瘤病毒是目前已知的三大致癌DNA病毒之一，可引起上皮细胞肿瘤，其中高危16型与宫颈癌的发病密切相关，与头颈部肿瘤发病的关系也日前受到重视。细胞的生物学特性包括增殖、分化及凋亡。近年来研究发现，人乳头瘤病毒16型可改变体外细胞的增殖、分化及凋亡状态。本文对其研究现状作一综述。     

人乳头瘤病毒18型L2表位的定位

人乳头瘤病毒１８例的晚期开放读码框架２编码的蛋白具有型特异性。质粒Ｐ１８Ｌ２００１含有ＰＨＶ１８２ＯＲＦ的全序列，经诱导表达产生的融合蛋白能与ＨＰＶ１８感染的患者血清呈阳性免疫反应。采用Ｈｅｎｉｋｏｆｆ改良的单方向缺失核酸链方法，制备了一组从３＇端至５＇端逐步缩小目的ＤＮＡ分子量的质粒，然后表达一系列从Ｃ端至Ｎ端逐步缩小的融合蛋白。用这一系列融合蛋白与相应血清作Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验，最小的阳     

HPV 16 YY1位点突变株诱导的永生化细胞系具有部分转化细胞特征

目的 检测ＨＰＶ １６ ＹＹ１位点突变株诱导的包皮角原细胞永生化细胞系的生物学特性。方法 提取永生化细胞株蛋白,以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测细胞内源性ｐ５３蛋白含量;以ＴＲＡＰ法检测细胞中端粒体酶活性;将永生化细胞系接种于含有１０％ＦＣＳ的软琼脂培养基,观测细胞的软琼脂生长能力。结果 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果显示４株永生化细胞系中ｐ５３均为阴性;端粒体酶活性均为阳性,并且随着细胞传代活性     

Transcriptional control of human papillomavirus type 18 oncogene expression in different cell lines: Role of transcription factor YY1

Binding of YY1 to the proximal fragment of the human papillomavirus type 18 (HPV-18) upstream regulatory region (URR) activates the oncogene expression of HPV-18 in HeLa cells, whereas in HepG2 cells this expression is repressed by YY1. In the present transient transfection study, we analyze the regulation of the HPV-18 URR by YY1 in an extended number of cell lines. Except for HeLa cells, YY1 represses or does not influence oncogene expression in all cell lines tested. In HeLa cells the activation of viral oncogene expression by YY1 is caused by the functional interplay between YY1 and a factor binding to the newly identified “switch region” of the HPV-18 URR. In this work we show that in HeLa cells, a 22 bp region located between the “switch region” and the promoter proximal fragment contributes to the modulation of the activity of YY1 and, in addition, regulates HPV-18 promoter activity independently of YY1.     

干扰LncRNA PVT1对LPS所致人支气管上皮细胞16HBE损伤的影响

目的探讨干扰LncRNA PVT1对脂多糖(LPS)所致人支气管上皮细胞16HBE炎症、氧化应激、凋亡的影响及其可能作用机制。方法采用LPS诱导16HBE细胞建立细胞损伤模型,将16HBE细胞分为对照组Control组、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-PVT1组、LPS+si-PVT1+anti-miR-NC组、LPS+si-PVT1+anti-miR-1301-3p组;采用qRT-PCR检测PVT1、miR-1301-3p的表达量;采用ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素13(IL-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测PVT1与miR-1301-3p的靶向关系。结果与Control组比较,LPS组PVT1的表达水平升高(P<0.05),miR-1301-3p的表达水平降低(P<0.05),IL-6、IL-13、TNF-α的水平与MDA、LDH的含量及凋亡率升高(P<0.05),SOD的含量降...     

P16 overexpression and human papillomavirus infection in small cell carcinoma of the uterine cervix

Carcinogenesis of cervical cancer has been investigated, and p16(INK4a) overexpression in squamous cell carcinoma of the cervix has been reported as a result of infection by human papillomavirus (HPV) (eg, HPV 16), and the consequence of the retinoblastoma (Rb) protein inactivation by HPV E7 protein. However, to our knowledge, there have been no studies on the relation between p16(INK4a) overexpression associated with HPV and small cell carcinoma of the cervix, which behaves more aggressively clinically than squamous cell carcinoma. The purpose of this study was to determine whether p16(INK4a) is overexpressed in small cell carcinoma, and if p16(INK4a) is overexpressed, the types of HPV that are related to this cancer. We reviewed 10 cases of small cell carcinoma and examined them for p16(INK4a) overexpression by immunohistochemistry. We also performed HPV typing with polymerase chain reaction (PCR)-sequencing analysis and in situ hybridization and found that p16(INK4a) was overexpressed in every case. PCR-sequencing analyses revealed that all cases were HPV-positive and that 9 cases were positive for HPV 18. Five of the 9 cases positive for HPV 18 were also positive by in situ hybridization and yielded a punctate signal, considered to represent the integrated form. In conclusion, p16(INK4a) was overexpressed and HPV 18 was frequently detected in an integrated form in small cell carcinoma. Therefore, inactivation of Rb protein by HPV 18 E7 protein may be associated with carcinogenesis of small cell carcinoma the same as inactivation of Rb protein by HPV 16 E7 protein is associated with carcinogenesis of squamous cell carcinoma.     

人NKX3.1基因启动子的克隆及在不同肿瘤细胞系中启动子活性的测定(英)

目的：克隆NKX3.1基因启动子并检测其启动子活性，为研究NKX3.1 基因转录调控的基本机制奠定基础。 方法： 采用PCR方法从人基因组中扩增NKX3.1基因上游 1.04 kb 启动子片段并分别克隆到报道基因载体pGL3-basic和 pEGFP-1中，通过转染细胞、荧光素酶活性测定及荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达，检测其启动子活性。 结果： DNA测序结果证实克隆的 1.04 kb 启动子片段序列正确；pGL3-1.04 kb 启动子转染LNCaP细胞后，双荧光素酶活性测定M1/M2=2.7, 为pGL3-control 活性的1.5倍，为pGL3-basic活性的50倍。表明克隆的人NKX3.1基因上游 1.04 kb 片段具有较强的启动子活性。为检测此 1.04 kb 启动子在不同组织细胞中的活性，分别将pGL3-1.04 kb 启动子和pEGFP-1.04 kb启动子转染入不同的肿瘤细胞系，检测荧光素酶和绿色荧光蛋白的表达。结果显示 1.04 kb 启动子在前列腺癌细胞LNCaP中活性最高。采用TRANSFAC数据库分析，发现在 1 040 bp 片段内含有多种顺式作用元件，它们的功能性将需要进一步实验证明。 结论： 克隆的人NKX3.1基因上游 1.04 kb 片段具有较强的启动子活性，并且在前列腺癌细胞LNCaP中活性最高。