纤维支气管镜刷检细胞H－ras基因检测对肺癌的诊断价值

为探讨纤维支气管镜直视下毛刷脱落细胞中Ｈ－ｒａｓ基因突变在肺癌中的诊断价值，采用在纤维支气管镜毛刷脱落细胞中应用ＰＣＲ－ＲＦＩＰ方法（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ）检测Ｈ－ｒａｓ基因，人突变。对５０例肺癌及２０例肺部炎症患者支气管上皮脱落细胞进行了检测，结果肺癌中Ｎ－ｒａｓ基因突变为５４％（２７／５０）．鳞癌为５９．１％（１３／２２）．腺癌为５３．８％（７／１３），小细胞肺癌为３３．３％（２／６），肺透明细胞癌１００％（２／２），未能分型的肺癌４２．９％（３／７），肺炎组１０％（２／２０）。肺癌组的Ｈ－ｒａｓ基因突变明显高于肺炎组，二者有明显的差异（Ｐ＜０．０１）。研究肺癌Ｈ－ｒａｓ基因突变有较高的阳性，在肺癌与非肺癌组中有明显的差别，有希望成为肺癌诊断标记物。     

端粒酶活性检测的临床应用

本研究采用改良的ＴＲＡＰ—银染法，检测了临床外科切除肝癌组织１５例，端粒酶阳性率为８６．６％（１３／１５）；邻近肝组织１５例，２例阳性（２／１５）；５例肺癌肺纤维支气管镜刷落细胞肺癌５例，阳性４例，肺炎７例均为阴性；肿瘤细胞株２例则为阳性。结果表明，肿瘤细胞的端粒酶活性明显高于正常细胞。在极少量脱落细胞中检测端粒酶活性也同样得到较满意的结果，提示我们的实验方法敏感、可靠、简便易行。     

多聚酶链反应－单链构象多态分析检测骨髓增生异常综合征N－ras癌基因突变

为探讨Ｎ－ｒａｓ基因突变在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）病变过程中的意义，采用多聚酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析法检测２０例ＭＤＳ患者Ｎ－ｒａｓ癌基因，其中５例出现Ｎ－ｒａｓ基因突变，占２５％，其中３例随访半年内转变为急性髓细胞白血病（ＡＭＬ），且对化疗不敏感。提示Ｎ－ｒａｓ基因突变可促进ＭＤＳ恶性克隆过度增生。初步表明Ｎ－ｒａｓ基因突变的检测可作为一种分子生物学标志，用于监测ＭＤＳ向ＡＭＬ转化     

尿脱落细胞ras癌基因突变的检测

目的 评价尿脱落细胞ｒａｓ癌基因突变作为肿瘤标记物诊断膀胱移行上皮细胞癌（ＴＣＣ）的临床价值。方法 用聚合酶链反应－单链构象多态性分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色法检测４８例ＴＣＣ患者晨尿脱落细胞中ｒａｓ癌基因外显子１突变,同时对其做尿脱落细胞学检查。对所有泳动变位的ＤＮＡ片段进行Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测序。结果 发现健康者尿脱落细胞和非恶性肿瘤泌尿系统其他疾病患者的尿脱落细胞均无ｒａｓ癌基因突变这个指标,对Ⅰ（３２份）,Ⅱ（９份）,Ⅲ（７份）级ＴＣＣ的检出分别为１６份,４份,３份,均约占１／２。测序结果证实,所有泳动变位的ＤＮＡ片段均存在基因点突变,突变的位点：２２例位于第１２密码子上（Ｇ→Ｔ）、１例位于第１３例密码子上（Ｇ→Ｔ）。结合临床和病理资料分析,发现该基因突变与临床分期呈明显正相关,而且复发组     

纤维支气管镜检查在提高肺结核诊断率中的意义

１５年内共进行纤维支气管镜检查６０１８例，确诊为肺结核１３２例占２．１９％。此１３２例患者纤维支气管镜检查前临床诊断肺结核１８例占１３．６％。纤维支气管镜肉眼诊断仅２２例占１６．７％，但最后均通过纤支镜刷片找到抗酸菌及活检病理证实，刷检（５７／１３２）占４３％，活检占（６６／１３２）５０％，提示刷检与活检同时进行可提高阳性率。该组胸部Ｘ线表现下叶病变占（３８／１３２）３４．７％，空洞占（１７／１３２）１３％，肺不张占（３３／１３２）２５％，均属不典型Ｘ线表现，常被误诊为肺炎、肺脓肿、或肿瘤，对临床可疑肺结核或与肺结核、肺癌难以鉴别时纤维支气管镜有重要价值。     

聚合酶链反应检测携带N－ras癌基因点突变的急性髓细胞白血病残留细胞的观察

我们建立了用于检测以Ｎ－ｒａｓ癌基因点突变为克隆标志的急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者骨髓内微量残留白血病细胞（ＭＲＬＣ）的聚合酶链反应和寡核苷酸探针杂交法。它可扩增出１０ｐｇ的微量ＤＮＡ，检测ＭＲＬＣ的敏感性是０．５％～０．１％，特异性强。临床筛选检测了１０例ＡＭＬ患者证实其中３例出现Ｎ－ｒａｓ基因第１３位点突变，随访其中２例，初步表明Ｎ－ｒａｓ点突变可作为白血病克隆标志，可用于检测ＭＲＬＣ。     

抗组蛋白 Ｈ２ Ａ 抗体间接 ＥＬＩＳＡ 法的建立和临床初步 应用

目的 建立检测血清抗 Ｈ２Ａ 抗体的间接 ＥＬＩＳＡ 技术，探讨抗 Ｈ２Ａ 抗体对类风湿关节炎（ ＲＡ） 的临床意义。 方法 ＲＴ?ＰＣＲ扩增 Ｈ２Ａ 基因，将其克隆到原核表达载体 ｐＥＴ２８ａ，对重组质粒 Ｈ２Ａ ／ ｐＥＴ２８ａ 进行原核表达，经 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测后，利 用 Ｈ２Ａ 重组蛋白建立检测人血清中抗 Ｈ２Ａ 抗体的间接 ＥＬＩＳＡ 方法。 用建立的间接 ＥＬＩＳＡ 方法检测 ５０ 例 ＲＡ 患者和 ５０ 例健 康人对照组血清抗 Ｈ２Ａ 抗体水平。 结果 表达的 Ｈ２Ａ 蛋白相对分子量约为 １５ ０００，与预期大小相符，ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果表明组 蛋白 Ｈ２Ａ 与抗 Ｈ２Ａ 抗体阳性血清具有良好的反应原性。 经方法学评估，建立的 ＥＬＩＳＡ 法在特异性、可重复性方面均达到检 测要求。 ＲＡ 组抗 Ｈ２Ａ 抗体水平高于健康人对照组（Ｐ＜０．０１）。 当 ｃｕｔ?ｏｆｆ 值设为 ０．４９４ 时，ＲＡ 患者血清抗 Ｈ２Ａ 抗体的阳性率 为 ８４％（４２ ／ ５０），明显高于健康人对照组 ２０％（１０ ／ ５０），差异具有统计学意义（χ２ ＝ ４１．０２６， Ｐ＜０．０１）。 结论 成功建立了检测 血清抗 Ｈ２Ａ 抗体的间接 ＥＬＩＳＡ 技术。 ＲＡ 患者血清中抗 Ｈ２Ａ 抗体水平明显高于健康人对照组。 抗 Ｈ２Ａ 抗体在 ＲＡ 患者血清 中出现可能具有重要的致病意义。     

五种癌基因蛋白在人胆管癌细胞中共同表达的研究

本文应用免疫组化方法，研究了１６例胆管癌和６例癌旁胆管壁组织的ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ－２，ＥＧＦＲ、ｃ－ｍｙｃ与ｐ５３五种癌基因蛋白的共同表达。结果：１６例胆管癌中，ｐ２１阳性率为８７．５％，ｃ－ｅｒｂＢ－２ ５６．３％，ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３均为５０％，ＥＧＦＲ３１．３％，２种以上癌基因蛋白共同表达者１４例（８７．５％）其中ｐ２１＋ｃ－ｅｒｂＢ－２共同表达率最高（５０％），３种癌基因蛋白共同表达的病例     

荧光信号引物PCR定量测定血清HCV—RNA的实验室评价

目的对Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ荧光标记ＨＣＶ定量ＰＣＲ方法进行实验室考核。方法２８例抗ＨＣＶ（＋）、定性ＰＣＲ（＋）的血清标本，用于重复性测定；２０例健康人血清用于正常值测定；５例定性ＰＣＲ（＋）和５例定性ＰＣＲ（－）标本用于Ａｍｐｌｉｓｅｍｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法的比较。结果孔间变异系数（ＣＶ）为 ２０．６％，操作者间ＣＶ为 ４３．８％，批内 ＣＶ为 ６１．９％，批间ＣＶ为８５．１％。２０例健康人血清测定值均小于最小检测浓度，即１０２拷贝／ｍｌ。用Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法对５ 例定性ＰＣＲ（－）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ均为阴性；对５ Ｎ定性ＰＣＲ（＋）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ均为阳性，ＨＣＶ－ＲＮＡ的浓度为 ２． ５ × １０５拷贝 ／ｍｌ～ １． ７ ×１０６拷贝 ／ｍｌ， ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ方法有 ２例未能检出。结论 Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ ＨＣＶ定量 ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均好，可用于临床疾病的研究和抗病毒药物疗效的评估。由于批内、批间变异系数较大，试验与操作均应严格规范。     

PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较

本文对目前部分市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂进行了灵敏度和检测率的测定，并在检测ＨＢＶ低水平感染中，用ＰＣＲ和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度从０．１ｆｇ到１ｐｇ不等，同一公司不同批号的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度也从１００ｆｇ到１００ａｇ不同，差达１０３～１０４倍。ＰＣＲ和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（－）组：ＰＣＲ７０％，斑点杂交４６．４％；ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｓ（＋）组：ＰＣＲ３５．７％，斑点杂交２．９％；ＨＢｓＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）抗ＨＢｓ（＋）／ＨＢｃ（＋）组：ＰＣＲ１６．６％，斑点杂交３．３％。三组检测率均Ｐ＜０．０１。因此，目前市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂必须标化，ＰＣＲ更适合于检测ＨＢＶ低水平的感染     

聚合酶链反应检测纤维支气管镜毛刷标本在肺结核诊断中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对１１０例纤维支气管镜（纤支镜）毛刷标本进行结核菌脱氧核糖核酸（ＴＢ－ＤＮＡ）检测，以评价ＰＣＲ－ＴＢ－ＤＮＡ在肺结核诊断中的应用价值。１对象和方法１．１标本来源所有毛刷标本均来自住院患者，共１１０例，其中肺结核患者５...     

肾综合征出血热患者尿液中融合细胞的检测

病毒可以诱导细胞融合，是其细胞病变效应之一。检测尿融合细胞（ＦＣ）对肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）的早期快速诊断具有一定意义（中华传染病杂志，１９９６，１４（２）：８９）。本文介绍尿ＦＣ检测方法，井用ＥＬＩＳＡ法测定患者血清中ＨＦＲＳ－ＩｇＭ抗体对ＦＣ结果进行对比评价。一、材料和方法１．材料（１）对象本院门诊ＨＦＲＳ患者１４２例，各取尿液５０～１００ｍｌ检测ＦＣ，同时取血２ｍｌ测定血清ＨＦＲＳ－ＩｇＭ抗体。２．方法（１）ＦＣ涂片染色法　取新鲜混匀尿液１０ｍｌ于离心管中，离心２０００ｒ／ｍｉｎ、１０ｍ…     

妊娠滋养细胞疾病中ras基因突变及其P^21蛋白表达的研究

目的了解妊娠滋养细胞疾病分子生物学发病机制中ｒａｓ基因的作用。方法应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ（聚合酶链反应－限制性片段长度多态分析）检测绒毛膜细胞株ＪＡＲ和ＢｅＷｏ、和３６例标本（６例新鲜组织及３０例石蜡标本）中Ｈ－ｒａｓ、Ｋ－ｒａｓ的第１２位点点突变情况；应用免疫组织化学方法检测石蜡标本野生型Ｐ２１和３种突变型Ｐ２１蛋白的表达情况。结果所有被测标本均未见Ｈ－ｒａｓ、Ｋ－ｒａｓ第１２位点的点突变。而野生型Ｐ２１蛋白在妊娠滋养细胞疾病中存在着不同程度的表达，其表达强度依ＧＴＤ恶性程度增加而递减。结论Ｒａｓ基因并不以第１２位点点突变的方式在ＧＴＤ中发挥作用。野生型Ｐ２１参与正常滋养细胞的增殖、分化过程；而其作用随ＧＴＤ恶性程度增加而减弱     

乙型肝炎患者血清抗HBs独特型抗体免疫复合物的检测

用聚乙二醇沉淀，胰蛋白酶处理乙型肝炎（乙肝）患者血清后，再用酶联免疫吸附法检测检样中的含抗ＨＢｓ独特型抗体免疫复合物（抗ＨＢｓ－Ａｂ２－ＩＣ）。结果发现，乙肝患者血清中ＩｇＧ，ＩｇＭ类抗ＨＢｓ－Ａｂ２－ＩＣ检出总阳性率分别为：急性乙型肝炎１４．５％（９／６２），慢性活动性肝炎２１．９％（２８／１２８），慢性迁延性肝炎１２．５％（２／１６）。抗ＨＢｓ－Ａｂ２－ＩＣ阳性者的抗ＨＢｓ独特型抗体检出率８４     

纤维支气管镜对老龄人咯血病因的诊断

该文回顾性地总结了自１９８５～１９９５年１１年间收治的６０岁以上老龄咯血患者１４７例，年龄（７３±１３）岁（平均年龄６７．６岁），男１０２例，女４５例。其中８０例胸片正常，６７例异常。全部病人均行了纤维支气管镜检查并取活体获得病理结果。证实为支气管粘膜炎症８６例（５８．５％），支气管肺癌５６例（３８．１０％），肺结核４例（２．７２％）．肺结节病１例（０．６８９６）。在支气管肺癌的病例中，鳞癌３２例（５７．１４％），腺癌９例（１６．０７％），小细胞肺癌１４例（２５．００％），大细胞癌１例（１．７９％）。特别指出，胸片正常的８０例中，有５例是肺癌（６．２５％）．２８例做了手术切除，术后病理与纤维支气管镜病理结果完全一致，显示了纤维支气管镜在肺癌诊断中的价值。同时阐述了为老龄人行纤维支气管镜检查时应注意的问题，指出纤维支气管镜对咯血患者病因诊断是简便、安全、有效和值得推广的方法。     

196例老年人肺癌纤维支气管镜检查分析

目的 探讨老年肺癌纤维支气管镜下的特点，评价老年肺癌患者纤维支气管镜检查的诊断价值及安全性。方法回顾性分析196例60岁以上老年肺癌临床特点和纤维支气管镜下改变。结果该组老年肺癌病理组织学明确者129例中鳞癌居首位（73．6％）．其次为小细胞癌（8．5％）和腺癌（5．4％）：纤维支气管镜下以直接征象为主（87．2％），间接征象占12．2％．病变部位右肺多于左肺。双上叶最常见；刷检细胞学诊断阳性率77．0％（151／196），病理组织学诊断阳性率为83．2％（129／155）。X线表现以肺部团块影为主，占69．9％（137／196）。结论纤维支气管镜检查是诊断老年肺癌安全而可靠的重要手段。     

肺癌呼吸道合胞病毒感染与K-ras基因突变的研究

近年肺癌的发生率呈上升趋势 ,有专家认为人乳头瘤病毒感染与肺癌有关〔1,2〕。我们在临床检测中发现肺癌患者上呼吸道分泌物中的呼吸道合胞病毒 (ＲＳＶ)阳性检出率较呼吸道感染患者高。本研究应用反转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)结合单链构象多态性分析 (ＳＳＣＰ)、免疫组化分析检测39例肺癌手术标本的ＲＳＶ和Ｋ ｒａｓ基因。探讨肺癌与ＲＳＶ感染和Ｋ ｒａｓ基因突变的关系。1　材料与方法　　选择 1996年 5月～ 1997年 12月住院手术的肺癌患者39例。对照组为同期住院的呼吸道感染患者 37例。手术切除的新鲜肺癌组织、纤维支气管镜活…     

聚合酶链反应检测再生障碍性贫血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＡＨＨ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ ＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶ ＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶ ＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶ ＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８     

用流式细胞仪测定小儿急性白血病细胞DNA及其临床意义研究

应用流式细胞仪（ＦＣＭ）对９４例急性白血病（ＡＬ）骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）进行了ＤＮＡ含量测定。在４７例初诊／复发ＡＬ中，５０％（１７／３４）的急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）及３８．５％（５／１３）的急性非淋巴细胞白血病（ＡＶＬＬ）检出ＤＮＡ异倍体；４７例ＡＬ完全缓解（ＣＲ）期患儿异倍体检出率为１０．６％。１４例非白血病患儿无异倍体检出。ＡＬ初诊病例的Ｃ＿０／Ｇ＿１％高于ＣＲ及对照组，Ｓ％及（Ｓ＋Ｇ＿２）／Ｍ％低于ＣＲ及对照组；复发病例（Ｓ＋Ｇ＿２）／Ｍ％高于初诊组；在ＡＬ－ＣＲ组，Ｓ％和（Ｓ＋Ｇ＿２）／Ｍ％均与对照组无显著性差异。２０例ＡＬ的自身对照发现，１１例初诊、复发时的异倍体在ＣＲ期消失。     

乙型肝炎患者血清抗HBs独特型抗体免疫复合物的检测

用聚乙二醇沉淀，胰蛋白酶处理乙型肝炎（乙肝）患者血清后，再用酶联免疫吸附法检测检样中的含抗ＨＢｓ独特型抗体免疫复合物（抗ＨＢｓ－Ａｂ＿２－ＩＣ）。结果发现，乙肝患者血清中ＩｇＧ、ＩｇＭ类抗ＨＢｓ－Ａｂ，－ＩＣ检出总阳性率分别为：急性乙型肝炎１４．５％（９／６２），慢性活动性肝炎２１９％（２８／１２８），慢性迁延性肝炎１２．５％（２／１６）。抗ＨＢｓ－Ａｂ＿２－ＩＣ阳性者的抗ＨＢｓ独特型抗体检出率８４．１％（３３／３９），且乙型肝炎病毒的血清学标志阳性率显著高于抗ＨＢｓ－Ａｂ＿２－ＩＣ阴性者。表明，乙肝患者体内存在抗ＨＢｓ－Ａｂ＿２－ＩＣ，抗ＨＢｓ独特型抗体（抗ＨＢｓ－Ａｂ＿２）可能通过与抗ＨＢｓ结合，削弱和影响抗ＨＢｓ中和、清除乙肝病毒抗原的作用。