HIF-1α和MMP-2在大鼠脑出血灶周脑组织中的表达

目的：通过动态观察脑出血灶周脑组织中缺氧诱导因子(HIF)-1α和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达,探讨HIF-1α和MMP-2表达之间的联系。方法：50只SD大鼠随机分成假手术组和脑出血模型组,分别于术后6 h,24 h,72 h,7 d,21 d处死大鼠。RT-PCR方法检测脑出血灶周组织HIF-1α和MMP-2 mRNA的表达及免疫组织化学方法检测HIF-1α和MMP-2蛋白的表达,并对HIF-1α和MMP-2的表达进行相关分析。结果：模型组术后灶周组织出现HIF-1α, MMP-2 mRNA表达上调和大量黄色的HIF-1α,MMP-2蛋白阳性细胞,于24~72 h达高峰。HIF-1α mRNA及其蛋白表达分别与MMP-2 mRNA及其蛋白表达呈正相关(分别r=0.588, P=0.002; r=0.765, P＜0.001)。结论：脑出血灶周脑组织中HIF-1α和MMP-2的表达上调,且HIF-1α可能调控MMP-2的表达。     

MMP-9促进间充质干细胞穿越血脑屏障的作用研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）开放血脑屏障（BBB）,促进大鼠间充质干细胞（rMSCs）穿越BBB的作用.方法 构建体外BBB模型,运用Transwell细胞迁移率实验明确MMP-9对体外BBB模型的穿透效果.体内实验：4周龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤（HIBD）组、MMP-9处理组及MMP-9抑制剂（TIMP-1）干预组;HE染色观察各实验组不同时间点（0.5、1、3、7、14d）的大脑皮质病理变化和检测其脑含水量,EB值法检测BBB通透性;同时采用Western Blot测定大鼠皮质中MMP-9蛋白表达和免疫组织化学法测定大脑皮质内5-溴-2-脱氧嘧啶（Brdu）标记rMSCs阳性细胞数量.结果 Transwell细胞迁移率实验显示,缺氧状态下各组穿过小室的rMSCs数量均明显高于常氧,差异有统计学意义（P＜0.01）;MMP-9处理组穿过小室的rMSCs数量明显高于阴性对照组和TIMP-1干预组,差异有统计学意义（P＜0.01）.体内实验结果表明：与HIBD组相比,MMP-9处理组脑含水量、BBB通透性增加程度均有所提高;TIMP-1干预组的相应指标均有所降低.大鼠皮质中MMP-9蛋白表达水平具有时间依赖性,MMP-9处理组1～3 d时含量达到最高,明显高于HIBD组和TIMP-1干预组,差异有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）,之后表达开始回落,但仍有稳定表达.MMP-9处理组穿越BBB的Brdu阳性细胞数比HIBD组多,差异有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）.结论 大鼠缺氧缺血后MMP-9表达升高,可介导开放BBB,促进rMSCs穿越BBB.     

低氧抑制猪肺动脉平滑肌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的探讨低氧对猪肺动脉平滑肌细胞（PASMC）分泌基质金属蛋白酶（MMPs）的影响。方法采用酶谱法测定PASMC培养基中MMP-2和MMP-9的酶活性，免疫印迹法检测培养基中MMP-2和MMP-9的蛋白表达，免疫组化法测定细胞原位MMP-2和MMP-9的蛋白表达，RT-PCR法检测mRNA的表达。结果低氧后PASMC分泌的MMP-2酶活性、细胞内外蛋白表达量、mRNA表达量均下降；MMP-9酶活性、细胞外蛋白表达量下降，而细胞内蛋白表达无变化。结论低氧可抑制PASMC分泌MMP-2和MMP-9的酶活性，其机制可能是低氧影响PASMC中MMP-2基因的转录、影响MMP-9蛋白表达后的分泌与活化，导致MMP-2和MMP-9酶活性的改变。     

MMP-9/TIMP-1表达在糖尿病鼠皮肤伤口愈合过程中的变化及意义初探

目的：观察基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达和MMP-9/TIMP-1比值在糖尿病组和正常组大鼠皮肤伤口愈合过程中不同时点表达的动态变化，探讨其可能的作用机制。 方法:糖尿病大鼠形成6周后行皮肤伤口造模，采用HE染色、Masson染色和免疫组织化学方法评估伤口形成后3、7、14 d伤口组织的再上皮化、炎症细胞浸润、肉芽组织厚度、新生血管形成和胶原纤维密度的情况；通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测术后不同时点MMP-9、TIMP-1在伤口组织中的表达情况。结果:糖尿病大鼠伤口愈合明显迟缓。术后第3 d两组间胶原纤维、肉芽组织、新生血管和再上皮化没有差异，术后第7 d糖尿病组以上指标得分均低于正常组，第14 d这种趋势更加明显；而第3 d至14 d，糖尿病组的单核巨噬细胞浸润得分均低于正常组。术后第3 d两组MMP-9表达均达高峰，第7、14 d呈逐渐下降趋势，糖尿病组MMP-9表达水平在各时点均高于正常组；术后第3 d两组TIMP-1表达均达高峰，第7、14 d呈逐渐下降趋势，糖尿病组TIMP-1表达水平在各时点均低于正常组；正常组MMP-9/TIMP-1蛋白水平比值始终维持在一个动态平衡的稳定水平，而糖尿病组却长期处于高水平状态。结论:异常的胶原产生、新生血管重建、炎症反应、再上皮化、肉芽形成可能是糖尿病鼠创面愈合减慢的组织病理学基础；皮肤组织MMP-9/TIMP-1的平衡性改变可能是这种组织病理学异常的重要原因之一。     

骨髓间充质干细胞移植对心衰大鼠心肌组织中MMP-2、MMP-9和TIMP-1的影响

 目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对心衰大鼠心肌组织中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9和金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）的影响及机制。方法：采用异丙肾上腺素(ISO)皮下注射的方法建立大鼠的心力衰竭模型,随机分成3组,每组8只,心肌内分别注射BMSCs（BMSCs组）、BMSCs条件培养液（BMSCs-CM组）及生理盐水（NS组）。RT-PCR检测3组心肌组织MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达,Western blotting检测心肌组织MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白,胞浆和胞核内核因子κB（NF-κB）的p65和p50,以及总蛋白中NF-κB抑制物（I-κB）和磷酸化NF-κB抑制物（p-IκB）蛋白表达水平。结果：和NS组比较,BMSCs组和BMSCs-CM组MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达明显减弱（P<0.05）,TIMP-1 mRNA和蛋白表达明显增强（P<0.05）;而与BMSCs-CM组比较,BMSCs组MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达明显减弱（P<0.05）,TIMP-1 mRNA和蛋白表达明显增强（P<0.05）。胞核中p65和p50蛋白表达,NS组明显多于BMSCs组和BMSCs-CM组(P<0.05);而胞浆中p65和p50蛋白表达,NS组明显少于BMSCs组和BMSCs-CM组(P<0.05)。和BMSCs-CM组比较,BMSCs组胞核中p65和p50蛋白表达明显升高(P<0.05);而胞浆中p65和p50蛋白表达,BMSCs组明显少于BMSCs-CM组(P<0.05)。NS组心肌组织总蛋白中p-IκB/IκB最高,明显多于BMSCs组和BMSCs-CM组(P<0.05),BMSCs组最低(P<0.05)。结论：BMSCs及其在缺氧条件下的培养液均可通过改变NF-κB的抑制蛋白IκB的活性,从而改变心衰心肌细胞胞核中NF-κB含量,影响有关基因的转录,使得MMPs水平升高和TIMPs水平降低。     

高糖与同型半胱氨酸对大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9表达及活性的影响

目的: 观察不同浓度糖及同型半胱氨酸对大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9表达量及活性的影响。方法: 取1 d龄正常SD大鼠背部皮肤分离成纤维细胞,于含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养。2-4代生长状态良好的细胞进行24 h血清剥夺(0.5%FBS)后,分为正常糖浓度组、高糖组、高糖+高同型半胱氨酸组分别培养6 h,之后用RT-PCR、Western blotting和明胶酶谱方法分别检测MMP-9 mRNA、蛋白表达量以及细胞外MMP-9活性。结果: 高糖(22 mmol/L)组MMP-9 mRNA、蛋白表达量及其活性均增高,分别为正常糖浓度组的1.15倍、1.59倍和1.34倍,P<0.05;高糖+高同型半胱氨酸(100 μmol/L)增高组更加明显,依次为正常糖浓度组的1.25倍、2.63倍和2.52倍,P<0.05。结论: 大鼠皮肤成纤维细胞在体外高糖环境下可高表达MMP-9;高同型半胱氨酸在高糖环境下可使MMP-9 表达及酶活性增高更为明显,表明高同型半胱氨酸血症也参与了对MMP-9的调节,可进一步增加高糖环境下成纤维细胞表达MMP-9。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马区脑红蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达及其相关性

目的:探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马CA1区脑红蛋白(Ngb)及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的变化规律及其相关性。方法:选用60只新生7日龄Wistar大鼠,随机分为三组:sham组(n=6),正常对照组(n=6)和HIBD组(n=48)。HIBD组新生大鼠建立HIBD模型,分别于HIBD后3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d、14d取材,应用免疫组织化学染色方法检测各组海马CA1区Ngb及Bcl-2、Bax的表达变化情况。结果:(1)与sham组相比,HIBD组Ngb阳性细胞数于缺氧缺血后3h开始下降,但差异无统计学意义;6h、12h、24h呈逐渐下降趋势,阳性细胞数量已明显低于sham组;到48h时达最低水平;14d时Ngb阳性细胞数量基本恢复至sham组水平。(2)与sham组相比,HIBD组于缺氧缺血3hBcl-2阳性表达细胞开始显著增多,于12h达到高峰,24h时开始逐渐下降,14d时略高于sham组表达,但差异无统计学意义。(3)与sham组相比,HIBD组Bax蛋白免疫反应阳性细胞数目于缺氧缺血后3h时开始增加,12h时明显增多,于48h达高峰,此后逐渐下降,7d时阳性细胞数基本恢复至sham组水平,14d时未见Bax蛋白的阳性表达。(4)新生大鼠海马CA1区内,Ngb阳性细胞数与Bcl-2阳性细胞数无相关;与凋亡相关蛋白Bax阳性细胞数呈负相关(r=-0.697,P0.01)。结论:Bcl-2与Bax基因参与了HIBD后神经细胞凋亡的发生;Ngb可能通过抑制促凋亡蛋白Bax的表达,从而减少神经细胞的凋亡,发挥其神经保护作用。     

实验性大鼠脑出血后脑组织MMP-9的表达及其意义

目的：研究大鼠脑出血后脑组织基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达与脑组织含水量之间的关系.方法：采用立体定向技术制作大鼠脑出血模型,免疫组化法测定脑组织MMP-9的表达及干湿重法测定脑组织含水量.结果：（1）与假手术对照组比较,血肿边缘MMP-9阳性微血管数在脑出血6h组明显升高（P＜0.01）,48h组达高峰,至5d～7d后下降,但仍高于假手术对照组（P＜0.01）,2w组降至零表达;（12～24）h可见中性粒细胞表达MMP-9.（2）与假手术对照组比较,脑出血12h组脑组织含水量明显增加（P＜0.05）,72h组达到高峰,随后逐渐下降,1w组仍高于假手术对照组（P＜0.05）,2w组与假手术对照组无差异（P＞0.05）.（3）脑出血量不同时MMP-9的表达不同,MMP-9的表达随脑出血量的增加而增强（P＜0.01）.（4）脑出血后,MMP-9阳性血管数与脑组织含水量之间呈正相关关系（r=0.8291,P＜0.05）.结论：脑出血后MMP-9表达并激活,随脑出血量增大而表达增多,推测在脑出血急性期MMP-9参与了脑水肿的形成.     

c-myc、MMP-9在受压静脉管壁的表达

目的:研究c-myc蛋白和MMP-9在受压静脉管壁的表达,初步探讨静脉受压后血管重塑的分子机制.方法:42只SD大鼠随机分为对照组(21只)和实验组(每时间点各3只,共21只),用5#注射针头辅助作部分髂静脉结扎造模.分别在0.5、12、24、48、72h、7和14d取材,明胶液包埋后冰冻切片,用免疫组化SP法检测c-myc蛋白和MMP-9的表达,采用计算机图像分析系统测定切片的平均积分光密度(IOD).结果:对照组和正常静脉管壁均未见c-myc蛋白、MMP-9表达,实验组c-myc蛋白从12 h开始表达,MMP-9从24 h开始表达上调,并逐渐增强,IOD逐渐升高,与对照组比较,差异具有显著性(P<0.05).7 d时两者表达同时达到高峰.c-myc蛋白与MMP-9在受压静脉管壁的表达呈正相关(r=0.7532,P<0.05)结论:c-myc基因产物和MMP-9在受压静脉管壁表达增强,两者在受压静脉管壁重塑过程起着重要作用;c-myc基因和MMP-9的表达具有相关性.     

大鼠脑缺血再灌流后基质金属蛋白酶-2和9的表达

目的：探讨大鼠局灶性脑缺血再灌流后基质金属蛋白酶(MMP)-2和-9(MMP-9)表达的变化规律与脑水肿的关系。方法：用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌流模型(MCAO),用免疫组化技术分别观察脑缺血再灌流不同时间点MMP-2和MMP-9的表达。结果：(1)脑缺血再灌流后24h可见MMP-2阳性细胞开始出现,3～7d时阳性细胞数达高峰,显色最深,至14d时仍有表达,略高于假手术组。(2)脑缺血再灌流后6h缺血区内MMP-9阳性细胞开始出现,12h明显增高,至2d达高峰,3d后阳性细胞数开始减少,至14d时恢复到基础水平,各相邻时间点比较差异显著。结论：脑缺血再灌流后,病变区MMP-2和MMP-9表达增加,二者在脑缺血再灌流后脑水肿方面起重要作用。     

脑缺氧缺血后新生大鼠海马CA1区NMDAR的表达

目的 :研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后 ,海马CA1区N甲基D天门冬氨酸受体 (NMDAR)及NMDARmRNA表达的变化。方法 :建立HIBD模型 ,用免疫组化及原位杂交方法 ,检测正常对照 (NORM)组和缺氧缺血 (HI)后不同时间点 ,NMDA受体I型亚单位 (NR1)表达的阳性细胞及NR1mRNA表达的阳性细胞。结果 :HI后 2h时NR1、NR1mR NA的表达稍下降 ,2 4h开始上升 ,72h达高峰 ,与正常对照组相比较有显著意义 (P <0 .0 5 )。结论 :正常新生大鼠海马CA1区有NR1及NR1mRNA的表达 ,HI后NR1及NR1mRNA的表达上调     

抑制基质金属蛋白酶-9对脑出血大鼠双皮质素表达的影响

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)抑制剂-强力霉素对脑出血大鼠神经再生的影响。方法:采用自体血注射法制作大鼠脑出血模型,随机分为对照组、模型组、干预组(脑出血后第1～7 d给予强力霉素30 mg/kg,1次/d,灌胃),第14 d处死动物并取脑,用免疫组化方法测定脑出血后血肿周围侧脑室嘴侧的室下区(SVZ)双皮质素(DCX)及MMP-9的表达。结果:与对照组(灰度值:MMP-9:116.87±5.13;DCX:121.34±2.76)相比,脑出血组大鼠在脑出血后第14 d时MMP9、DCX表达增强(灰度值:MMP-9:102.80±2.42,P<0.05;DCX:110.58±2.29,P<0.05)。干预组较脑出血组MMP-9表达减弱(灰度值:MMP-9:104.24±3.70,P<0.05),DCX表达增强(灰度值:DCX:106.50±3.12,P<0.01)。结论:脑出血急性期给予基质金属蛋白酶-9抑制剂强力霉素可以促进神经再生。     

白细胞介素-34/集落刺激因子-1R在转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-间质转化中的表达

目的探讨白细胞介素-34/集落刺激因子-1受体(IL-34/CSF-1R)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)中的表达。方法体外培养A549细胞;CCK 8法检测不同浓度TGF-β1在不同时间点对A549细胞增殖的影响;选用5μg/L TGF-β1刺激A549细胞(0、12、24、48h),提取细胞蛋白和RNA,Western blotting法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏连蛋白(E-Cad)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白的变化;Real-time PCR法检测IL-34、CSF-1R、MMP-2、MMP-9基因表达的变化。结果 TGF-β1对A549细胞的增殖无明显影响(P0.05)。TGF-β1刺激A549细胞后,间质细胞标志性蛋白α-SMA表达升高,上皮细胞标志性蛋白E-Cad表达下降,纤维化相关的MMP-2蛋白表达升高,MMP-9蛋白表达先升高后下降,TIMP-1蛋白早期出现短暂性增高后,呈持续降低趋势(P0.01)。IL-34mRNA表达逐渐升高,CSF-1R mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达先升高后下降(P0.01)。结论 TGF-β1诱导A549细胞的EMT过程中,存在IL-34/CSF-1R的动态表达。     

Imbalance between matrix metalloproteinase-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in toluene diisocyanate-induced asthma

BACKGROUND: Toluene diisocyanate (TDI)-induced asthma is an inflammatory disease of the airways characterized by airway remodelling due, at least in part, to an excess of extracellular matrix deposition in the airway wall. The ratio of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and its inhibitor, tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) may be a marker of the balance between airway tissue destruction and repair. OBJECTIVE: We determined whether an imbalance of the MMP-9 : TIMP-1 molar ratio is present before and/or after challenge with TDI. METHODS: We used a murine model of TDI-induced asthma to evaluate the MMP-9 and TIMP-1 balance in the lung. RESULTS : The expression of MMP-9 and TIMP-1 mRNAs and proteins in the lungs increased at 7 h after TDI inhalation and continued for up to 72 h. Immunohistochemical and immunocytological analyses in the lungs of TDI-exposed mice revealed increases of immunoreactive MMP-9 and TIMP-1. There were significant correlations between the levels of MMP-9 or TIMP-1 and the number of neutrophils, lymphocytes, or eosinophils. The molar ratio of MMP-9/TIMP-1 significantly decreased at 7 h after TDI inhalation and continued up to 72 h. CONCLUSION: These data suggest that TDI-induced asthma may be associated with an imbalance between MMP-9 and TIMP-1, which could be useful as a marker of airway inflammation and airway remodelling in this disease.     

红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠骨髓基质金属蛋白酶的影响

本研究用免疫组织化学方法和酶谱电泳法观察了红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠骨髓基质金属蛋白酶-2和-9（MMP-2、MMP-9）的影响，并探讨其在造血调控中的可能作用。免疫组化结果显示，各组小鼠骨髓细胞中均检测到MMP-2和MMP-9表达。与对照组相比，模型组及高、中、低剂量红景天苷组骨髓细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达明显增强。在造模后第4d，中剂量红景天苷组中MMP-2和MMP-9表达最强。在8d，分别是低剂量和中剂量红景天苷组中MMP-2和MMP-9表达最强。酶谱电泳结果显示，在对照组骨髓中可检测到66kD（MMP-2的酶原形式，proMMP-2）、62kD（MMP-2的活性形式，MMP-2）、86kD（MMP-9活性形式，MMP-9）和94kD（MMP-9的酶原形式，proMMP-9）4条明胶酶的活性带，其中MMP-9的活性最强。造模后骨髓造血微环境中明胶酶的活性明显降低，不同剂量的红景天苷均能明显促进proMMP-9和MMP-9的活性增强，使proMMP-2的活性减弱。结果表明，红景天苷可能通过促进骨髓细胞中基质金属蛋白酶表达增强、骨髓造血微环境中基质金属蛋白酶活性升高，进而导致ECM中或基质细胞膜上细胞因子的释放、骨髓微血管损伤的修复以及HSCs增殖、迁移和分化能力的增加来促进骨髓造血功能的恢复。     

葛根素对臂丛根性撕脱后脊髓MMP-9蛋白表达的影响

目的　探讨大鼠臂丛根性撕脱后脊髓基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表达变化以及葛根素对其表达的影响。 方法　成年雄性SD大鼠174只，随机分为正常组、模型组、葛根素低、中、高处理组。模型组和葛根素处理组行右侧C5~C7脊神经前根撕脱术，术后腹腔注射给药。Western Blot法检测C5~C7节段脊髓MMP-9蛋白的表达。 结果　与正常组比较，臂丛神经根性撕脱后1 d时MMP-9蛋白表达达高峰，3 d降至接近正常，1周后下降至较低水平。葛根素处理组脊髓组织MMP-9蛋白表达在1 d时比模型组显著降低。 结论　MMP-9可能参与臂丛根性撕脱后早期损伤反应，且葛根素可能有助于减轻该种损伤。     

多器官功能障碍综合征大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1和Ⅳ型胶原的表达

目的:检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)在多器官功能障碍综合征(MODS)大鼠肺组织中表达的变化,探讨MODS肺损伤的发生机制。方法:将40只成年雄性SD大鼠随机分为假手术对照组和盲肠结扎穿孔(CLP)模型组,其中,CLP组又根据造模后不同时点分为MODS 6 h组、MODS 12 h组、MODS 24 h组和MODS 48 h组,每组各8只。采用改良的CLP法构建MODS大鼠模型,于造模后不同时点处死大鼠并收集标本。血液生化检查及血气分析检测各组大鼠肝、肾和肺功能的情况,HE染色观察肺组织形态学改变,ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、MMP-9及TIMP-1含量的变化,RT-PCR和免疫组织化学法检测肺组织MMP-9及TIMP-1表达的变化,免疫荧光和Western blot法检测肺组织Ⅳ-C表达的变化。结果:与对照组比较,MODS各组均出现不同程度的肝、肾和肺功能损伤。光镜下对照组肺组织结构无明显改变,模型组肺组织损伤较重。与对照组比较,各模型组血清中TNF-α、IL-1β、MMP-9及TIMP-1的含量均明显升高(P0.05),于造模后12~24 h达高峰(P0.01)。各模型组肺组织MMP-9和TIMP-1表达明显高于对照组,MMP-9于造模后12 h达高峰(P0.01),TIMP-1于造模后24 h达高峰(P0.01)。与对照组比较,造模后6 h肺组织Ⅳ-C降低不明显,12~48 h显著下降,于24 h降至最低(P0.01)。结论:MMP-9和TIMP-1通过共同调节细胞外基质主要成分Ⅳ-C的合成和分解,在MODS肺损伤中发挥重要作用。     

缺氧缺血新生大鼠脑组织水通道蛋白4的表达变化

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)病理过程中水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP-4)的作用及其意义.方法 120只7日龄新生Wistar大鼠按照完全随机化方法分为4部分,每部分(n=30)再分为对照组、HIBD后6 h、24 h、3 d、5 d和7 d共6组,每组5只.分别测定脑组织含水量;原位杂交和免疫组化检测AQP-4表达;检测脑组织病理变化.结果 HIBD组6 h,24 h,3 d的脑组织含水量较对照组显著增加(P＜0.05);且各组脑组织含水量随时间延长而增加,组间差异有统计学意义(P＜0.05);HIBD 5 d,7 d组脑组织含水量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).对照组AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白少量表达(吸光度A值为0.29±0.07和0.06±0.01).与对照组相比,HIBD后6～24 h,AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白表达显著增加.AQP-4 mRNA的A值由0.42±0.04上升到0.80±0.02(P＜0.05);AQP-4蛋白A值由0.14±0.03上升到0.23±0.05(P＜0.05),同时光镜下可见脑组织轻度水肿;3 d时AQP-4 mRNA和蛋白表达达高峰,AQP-4 mRNA的A值为0.91±0.08,AQP-4蛋白A值为0.41±0.04,此时脑组织严重水肿,神经元、胶质细胞和内皮细胞明显肿胀;第5～7天AQP-4的表达已下降(尤其mRNA明显),但仍显著高于对照组(P＜0.05),此时脑水肿已减轻.在整个HIBD脑水肿形成的过程中,AQP-4 mRNA和蛋白的表达呈正相关(rs＞0.82,Ps＜0.05).结论 AQP-4参与了HIBD的发生发展过程,AQP-4在HIBD脑水肿的形成过程中可能起重要作用.