阿霉素可通过MAPK信号转导通路促进成骨肉瘤细胞凋亡

目的: 探讨阿霉素在适宜的加药浓度、作用时间下诱导成骨肉瘤细胞凋亡的分子机制.方法: 首先通过FCM,MTT等方法探讨引起成骨肉瘤细胞凋亡的最佳药物作用浓度及时间;在此条件下应用不同信号转导通路的抑制剂观察导致细胞凋亡的可能通路;最后应用Western-Blotting来检测在成骨肉瘤细胞凋亡过程中相关信号分子的表达水平及磷酸化水平的变化.结果: 0.4 mg/L阿霉素作用成骨肉瘤细胞12 h即可引起细胞凋亡,并呈时间依赖性;用p38的抑制剂SB203580和MEK4/7的抑制剂U0126可明显抑制细胞的凋亡;Western Blotting检测发现阿霉素作用于细胞后,MAPK家族成员JNK、ERK和p38等各激酶的表达水平未发生明显变化,但JNK,p38的磷酸化水平提高了ERK的磷酸化水平有所下降;用Western Blotting检测到阿霉素作用后p53蛋白的表达水平有提高.结论: 阿霉素可导致成骨肉瘤细胞凋亡,而且此凋亡过程与MAPK通路有关.     

桔梗皂甙D对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用和机制研究

[目的]探讨桔梗皂甙D(platycodin D,PD)对人胃癌细胞株SGC7901增殖的抑制作用及作用机制。[方法]体外培养人胃癌细胞株SGC7901,加入终浓度分别为5~20μm·L-1的PD。采用MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡率,JC-1检测线粒体膜电位的变化,Western blot检测PD对凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP、bcl-2、bax和对MAPK信号通路蛋白ERK、JNK、p38及其磷酸化蛋白p-ERK、p-JNK、p-p38表达的影响。[结果]MTT结果显示,PD作用24h和48h后,PD对SGC7901细胞增殖的抑制随浓度的增加而增强;PD作用SGC7901后,细胞凋亡率明显增加,线粒体膜电位降低。Western blot检测结果显示cleaved PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、bax蛋白表达量随着药物浓度的增加而升高,bcl-2蛋白表达下降,同时p-JNK、p-p38水平明显升高,p-ERK蛋白水平下降,ERK、JNK、p38蛋白的表达无明显变化。[结论]PD对胃癌细胞SGC7901有抑制增殖和诱导凋亡的作用。PD通过抑制ERK信号通路从而抑制细胞增殖,通过激活JNK和p38信号途径调控bax和bcl-2表达,导致线粒体膜电位下降,进而激活caspase,诱导癌细胞凋亡的发生。     

雷公藤诱导皮肤T细胞淋巴瘤Hut102的凋亡及机制

目的探讨雷公藤内酯醇（TP）诱导皮肤T细胞淋巴瘤Hut102细胞株的凋亡及机制。方法采用MTT法检测Hut102细胞的增殖抑制率,Annexin v-FITC/PI双染流式细胞术检测Hut102细胞的凋亡率,Western印迹法检测Hut102细胞中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、caspase-3、热休克蛋白27（Hsp27）的表达。结果雷公藤内酯醇可诱导Hut102细胞凋亡（P〈0.01）,磷酸化p38MAPK、caspase-3被激活,同时抑制Hsp27的表达。用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后,雷公藤内酯醇诱导Hut102细胞凋亡率下降,磷酸化p38的表达降低,caspase-3激活被抑制,Hsp27的表达增加。结论雷公藤内酯醇可诱导Hut102细胞凋亡,该作用可被p38MAPK特异性抑制剂SB203580显著抑制,提示雷公藤内酯醇可能通过激活p38MAPK信号通路使部分Hut102细胞产生凋亡。     

MAPK信号转导通路在人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡中的作用

目的 探讨人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡的机制。方法 将对数生长期K562细胞分成对照组和人参多糖组,对照组细胞常规培养,人参多糖组细胞培养体系中加入人参多糖0.4 g/L。各组细胞培养48 h后,流式细胞术和Hoechst 33258染色法检测K562细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞p38、JNK基因表达;采用免疫荧光实验检测细胞中p-p38、p-JNK蛋白表达,测定Caspase-3的活性;Western blotting检测细胞中p38、JNK、p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3蛋白的变化。结果 与对照组比较,人参多糖组K562细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,出现明显的细胞核固缩现象,K562细胞p38 mRNA与JNK mRNA明显增多。免疫荧光检测显示,p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3表达明显增强且向胞核转移;Western blotting检测显示,人参多糖组K562细胞p38、JNK总蛋白无明显变化（P＞0.05）;p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3有增加的趋势（P＜0.05）。结论 人参多糖能促进K562细胞凋亡,其作用可能是通过影响MAPK信号传导通路实现的。     

黄芩苷通过激活JNK/p38 MAPK通路诱导ALL Reh细胞凋亡

目的探究黄芩苷对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞株Reh增殖和凋亡的影响及c-Jun氨基蛋白激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路在其机制中的作用。 方法黄芩苷处理或联合活性氧(ROS)清除剂NAC共处理Reh细胞；流式细胞术检测细胞凋亡、胞内ROS水平和线粒体膜功能(MMP)；免疫荧光实验观察凋亡细胞的数目及其形态变化。Western blotting免疫印迹检测Reh细胞内凋亡蛋白和信号通路蛋白的表达水平。 结果与对照组比较,黄芩苷组Reh细胞增殖被抑制,细胞凋亡率、促凋亡蛋白、ROS、JNK和p38磷酸化水平显著上升,抗凋亡蛋白表达下调,MMP明显受损(P＜0.01)。NAC清除ROS后明显恢复细胞增殖,JNK和p38磷酸化水平明显下降,Survivin表达恢复(P＜0.01)。 结论黄芩苷经激活JNK/p38 MAPK通路活化Caspase3/7,诱导Reh细胞凋亡。     

扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3

目的 从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38 MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chfamys farreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制.方法 实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68 mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69 mmol·L-1 PCF组、UVA+2.84 mmol·L-1 PCF组、UVA+1.42 mmol·L-1 PCF组.以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38 MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性.结果 PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42～5.69 mmol·L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化.结论 PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38 MAPK通路和caspase-3活性有关.     

芦荟苷通过调控MAPKs信号通路诱导胃癌细胞凋亡

目的探讨芦荟苷对人胃癌MKN-28和HGC-27细胞凋亡的诱导作用及可能的分子机制。方法胃癌MKN-28和HGC-27 细胞用含10%胎牛血清和NEAA（HGC-27细胞）的1640完全培养基常规培养,不同浓度的芦荟苷处理胃癌MKN-28和HGC-27 细胞特定的时间,CCK-8 实验检测芦荟苷对MKN-28 和HGC-27 细胞活力的影响;DAPI染色观察凋亡细胞核的形态改变; AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关蛋白PARP和procaspase-3的表达及MAPKs信号通 路p38,ERK及JNK的磷酸化水平;p38,ERK及JNK的特异性抑制剂处理细胞,WB检测抑制剂的对p38,ERK及JNK激活的抑 制效果,DAPI染色观察抑制剂对胃癌细胞凋亡的影响。结果芦荟苷浓度依赖性地抑制胃癌MKN-28和HGC-27细胞的活力, 诱导胃癌细胞凋亡;芦荟苷处理胃癌细胞后,胞内JNK和p38的磷酸化水平明显增加,而ERK的磷酸化水平下降。特异性抑制 剂阻断ERK活化,能够增强芦荟苷诱导的细胞凋亡,阻断p38和JNK的激活,能够部分逆转芦荟苷诱发的胃癌细胞凋亡。结论 芦荟苷通过激活JNK和p38信号途径,抑制ERK信号途径诱导胃癌细胞凋亡。     

腰椎损伤疝出型椎间盘组织JNK信号通路激活情况的研究

目的:探究c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在腰椎损伤疝出型椎间盘组织中激活情况。方法:随机选择24例行手术治疗的腰椎间盘突出症(LDH)患者,其中12例损伤疝出型和12例退变突出型,分别为损伤疝出组和退变突出组。收集术中摘除的椎间盘组织,HE染色观察髓核组织病理变化;TUNEL染色分析髓核细胞凋亡情况;免疫蛋白印迹技术检测MKK4、JNK、p JNK、Jun D蛋白表达水平。结果:损伤疝出组出现炎性细胞浸润的比例、髓核细胞凋亡计数以及MKK4、JNK、p JNK、Jun D蛋白表达水平高于退变突出组(P<0.05)。结论:损伤疝出型髓核组织炎症反应更明显;JNK信号通路异常激活与髓核细胞凋亡增加可能是损伤疝出型LDH病理机制之一;JNK信号通路激活可能是LDH病理分型的标志之一。     

小白菊内酯通过阻断Akt,NF-κ B信号通路诱导SK-N-SH细胞凋亡

目的探讨小白菊内酯(parthenolide,PTL)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 MTT法检测不同浓度小白菊内酯对SK-N-SH细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察不同浓度(10、15μmol/L)的PTL作用48 h后SK-N-SH细胞的形态学变化;流式细胞术检测PTL处理后SK-N-SH细胞凋亡率;Western Blot检测PTL作用48 h后SK-N-SH细胞p-Akt和NF-κB p65蛋白表达的改变。结果①PTL抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长,并呈浓度依赖关系;②PTL作用SK-N-SH细胞48 h后,细胞数量减少,细胞固缩变圆,细胞内结构消失,细胞溶解;③PTL处理SK-N-SH细胞后,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.01);④PTL作用SK-N-SH细胞后,与对照组比较,p-Akt和NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.05)。结论 PTL能抑制SK-N-SH细胞的增殖,诱导其凋亡,PTL的抗瘤机制可能与抑制Akt,NF-κB传导通路有关。     

JNK/SAPK和p38信号转导通路在高渗透压介导的兔髓核细胞凋亡中的作用

 目的 观察高渗透压对兔髓核细胞活性的影响及JNK/SAPK(c-Jun N-terminal kinases/stress-activated protein kinases)和p38信号转导通路在此过程中的作用。方法 根据不同渗透压及时间段处理髓核细胞将实验分为对照组、刺激组和阻断组后采用流式细胞仪检测各组髓核细胞凋亡情况,同时利用免疫荧光和Western blot技术检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen-activated protein kinases,P-p38 MAPK)、磷酸化JNK/SAPK激酶(phospho-JNK/SAPK, P-JNK/SAPK)的亚细胞定位及表达水平,观察其对髓核细胞凋亡的影响。结果 高渗透压［600 mOsm/kg H2O(mOsm)］可导致髓核细胞显著凋亡及P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK蛋白表达水平改变。600 mOsm时各刺激组凋亡细胞与对照组相比,差异均有显著统计学意义(P<0.01),而阻断组凋亡细胞明显减少;而400 mOsm时各刺激组和阻断组凋亡细胞与对照组相比差异均无统计学意义;免疫荧光结果显示P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK在髓核细胞质和细胞核中均有表达;经高渗透压(600 mOsm)刺激后P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK表达均显著高于对照组(P<0.01),而相应阻断组P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK表达均显著降低。结论 高渗透压通过激活JNK/SAPK和p38信号转导通路导致体外培养的兔髓核细胞凋亡,同时髓核细胞对轻度的渗透压升高具有一定的适应性。     

大肠杆菌胞外囊泡对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的研究大肠杆菌胞外囊泡（E.coli-OMVs）对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法采用差速 离心法提取大肠杆菌胞外囊泡,观察囊泡形态并测定囊泡粒径范围。随机分为4组：正常对照组、胞外囊泡低剂量组（100 μg/mL E.coli-OMVs）、胞外囊泡中剂量组（500 μg/mL E.coli-OMVs）和胞外囊泡高剂量组（1000 μg/mL E.coli-OMVs）。MTT检测各组 细胞增殖能力;TUNEL和Western blot分别检测各组细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白caspase3的表达;Transwell检测各组细胞迁 移能力。结果透射电镜下E.coli-OMVs呈双层膜、中空、圆形或椭圆形,其内含低密度或高密度物质,具有明显的异质性,粒径 分析结果表明其直径分布在30~450 nm。与对照组相比,经E.coli-OMVs干预后,SK-N-SH细胞增殖能力显著降低;细胞凋亡 增加,caspase3蛋白表达水平明显上调;而迁移能力显著降低（P<0.05）。结论E.coli-OMVs对SK-N-SH细胞具有直接杀伤作 用,有望成为难治性神经母细胞瘤的治疗药物。     

6-OHDA诱导过表达nurr1基因的SK-N-SH细胞凋亡

目的比较自身不表达核相关受体因子(nuclear receptor related factor1,Nurr1)基因的人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH和过表达外源性nurr1基因的SK-N-SH/Nurr1细胞对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)的损伤反应,探讨nurr1基因在6-OHDA致细胞损害(死亡或凋亡)中的作用。方法用免疫细胞化学方法和RT-PCR检测基因转染细胞SK-N-SH/NURR1的nurr1蛋白及NURR1 mRNA的表达。细胞经不同浓度6-OHDA(50～100μmol/L)作用不同时间(6、12 h),经AnnexinV/PI双染后流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定早期细胞凋亡比例。细胞经75μmol/L 6-OHDA作用12 h,通过透射电镜(transmission electronmicroscopy,TEM)观察细胞超微结构变化。用Western blotting方法检测75μmol/L6-OHDA作用6、12 h,细胞凋亡因子Caspase-3活性前体蛋白的表达水平。结果免疫细胞化学染色结果显示,基因转染细胞SK-N-SH/Nurr1表达NURR1蛋白;经RT-PCR检测,基因转染细胞表达NURR1 mRNA,说明外源性nurr1基因在转染细胞内过表达。FCM检测结果显示,75μmol/L 6-OHDA作用12 h,SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡比例明显高于SK-N-SH细胞(P=0.000),而100μmol/L6-OHDA作用6、12 h后,2株细胞均表现为毒性损伤。TEM显示,75μmol/L6-OHDA作用12 h后,部分SK-N-SH/Nurr1细胞出现了典型凋亡改变,而SK-N-SH细胞主要表现为毒性损伤。4.75μmol/L6-OHDA作用6、12 h,SK-N-SH/Nurr1细胞Caspase-3活性前体蛋白表达显著下降(P=0.000),而SK-N-SH细胞Caspase-3活性前体蛋白表达变化不明显。结论外源性nurr1基因过表达促进6-OHDA诱导的SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡,在低剂量(≤75μmol/L)时,凋亡比例与剂量呈正相关,高剂量时6-OHDA主要诱导细胞毒性损伤。     

α-突触核蛋白对N-甲基-D-天门冬氨酸所致细胞毒性作用的影响

目的研究α-突触核蛋白(α-Syn)对N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)引起的多巴胺能神经细胞毒性作用的影响。方法在MES23.5多巴胺能神经细胞建立NMDA细胞毒模型,MTS法检测细胞活力,AO/PI荧光标记以及免疫印记测定caspase-3表达检测细胞凋亡,细胞外添加α-Syn蛋白,观察α-Syn对NMDA所致细胞毒性作用的影响。结果 NMDA(5mmol/L)引起明显的细胞内Ca2+升高以及细胞毒性作用,表现为细胞活力下降、凋亡细胞增加以及caspase-3表达升高。NMDA的细胞毒性作用可被NMDA受体特异性阻断剂MK801阻断。预先用α-Syn(2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L)处理细胞明显抑制NMDA引起的细胞内Ca2+升高以及细胞毒性作用,其作用随α-Syn浓度增高而增强。结论α-Syn对NMDA所致多巴胺能神经元的细胞毒性作用具有抑制作用,其机制可能与其抑制与NMDA引起的Ca2+内流以及caspase-3激活有关。     

薯蓣皂苷元对人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞生物学行为的影响

目的: 观察薯蓣皂苷元对人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡过程的影响并探讨其机制。方法: 采用薯蓣皂苷元处理体外培养的BGC-823和SGC-7901细胞,用MTT法、Transwell 实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力。用免疫印迹法检测BGC-823和SGC-7901细胞中凋亡相关蛋白BAX、凋亡抑制基因Bcl-2和MAPK信号通路的Erk1/2、JNK、p38三个通路中相关蛋白的表达。结果： 经薯蓣皂苷元处理后,BGC-823和SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低,凋亡相关蛋白BAX明显升高,Bcl-2的表达明显降低;p-p38表达水平明显降低,但JNK、p-JNK、Erk1/2、p-Erk1/2和p38的表达无明显变化。结论： 薯蓣皂苷元可能通过MAPK通路中的p-p38通路影响人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞的生物学行为。     

格尔霉素降低Raf-1和AKt水平诱导神经母细胞瘤凋亡的研究

目的：探讨格尔霉素(GA)是否会改变对神经细胞的存活起关键作用的信号传导蛋白Raf-1和AKT的表达，诱导神经母细胞瘤细胞凋亡。方法：在不同时间内用GA处理人神经母细胞瘤细胞(SH-gy5y，SK-N-SH，LAN-1)，MTT分析细胞存活率，DNA碎片ELISH流动细胞计数Western Blot分析凋亡情况。结果：GA能降低Raf-1和AKT的活性，激活Caspase-9和Caspase-3，线粒体释放细胞色素C继之切割PARP，诱导细胞凋亡。结论：GA可能是一种有效治疗神经母细胞瘤的药物。     

Neuroprotective Effects of Raloxifene on Aβ25-35-induced Damages in PC12 Cells via Mitogen-activated Protein Kinase Signaling Pathway

Objective To investigate the neuroprotective effects and the mechanism of this protection of raloxifene (RLX), a selective estrogen receptor modulator. Methods MTT assay and flow cytometry with annexin V-FITC/PI staining were performed to evaluate the neuroprotective effects of RLX on Ab25-35 -induced toxicity. The potential mechanisms were studied by Western blotting in cultured rat pheochromocytoma cells (PC12 cells). Results RLX(1 000 nmol/L), in combination with Ab25-35 (30 mmol/L), increased the cell viability (P<0.001), and reduced the number of apoptotic cells (P<0.05). RLX attenuated Ab25-35-induced loss of Dym (P<0.01). The changing of Dym was similar to the variation of apoptosis. PD98059 (inhibitor of ERK1/2) inhibited the effects of RLX on cell viability and phosphorylation of cleaved caspase-9. No significant difference of cell viability or phosphorylation of cleaved caspase-9 had been found when PC12 cells were incubated with SB203580 (inhibitor of p38MAPK) or SP600125 (inhibitor of JNK). Ab25-35 induced a time-dependent phosphorylation of p38MAPK and JNK. In PC12 cells treated solely with RLX, ERK1/2 was activated (P<0.01). In PC12 cells treated with Ab25-35 and RLX, Ab25-35-induced phosphorylation of p38MAPK and JNK were inhibited (P<0.01 and P<0.001, respectively). Conclusion RLX inhibited Ab25-35-induced cell apoptosis by activating the ERK1/2 pathway in PC12 cells. RLX also attenuated Ab25-35-induced activation of p38MAPK and JNK. The mitochondria pathway was involved in this inhibitory effect.