人骨髓造血基质细胞对HL—60白血病细胞株促分化作用的研究

以骨髓造血基质细胞体外培养体系为基础开展对ＨＬ－６０白血病细胞促分化作用的研究，从而探讨正常人骨髓造血基质细胞对异常实质细胞的调控作用。结果表明，正常人骨髓造血基质细胞对人急性早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０细胞具有逆转作用，表现在促分化和抑制增殖两方面。其机理主要以直接接触而发挥调控作用，分泌因子作用较小。     

骨髓造血基质细胞对HL—60细胞逆转分化作用的超微结构观察

利用透射电镜技术观察正常人骨髓造血基质细胞对HL－60细胞的逆转分化作用，从而探讨基质细胞对异常实质细胞的调控作用。结果表明：正常人骨髓造血基质细胞对人急性早幼粒白血病HL－60细胞株有逆转分化作用，表现在促分化和抑制增殖作用两方面。其机理主要以直接接触而发挥其调控作用。     

骨髓造血基质细胞对HL—60细胞逆转分化作用的超微结构观察

利用透射电镜技术观察正常人骨髓造血基质细胞对ＨＬ－６０细胞的逆转分化作用，从而探讨基质细胞对异常实质细胞的高控作用，结果表明：正常人骨髓造血基质细胞对人急性早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞株有逆转分化作用，表现在促分化和抑制增殖作用两方面，其机理主要以直接接触而发挥其调控作用。     

人骨髓基质细胞株培养上清对造血干细胞增殖作用的研究

应用ＳＶ－４０导入法建立了人骨髓基质细胞株ＳＣ５－７，然后收集其培养上清，测定其中三种造血因子含量，并将这种培养上清添加至造血干细胞的液体培养基内，每周一次取出培养的细胞，进行计数。同时移至甲基纤维素培养基内继续培养，１４日后，在倒置显微镜下观察并计数各种造血干细胞集落形成的数量。结果：１．人骨髓基质细胞株ＳＣ５－７的培养上清中含有较高浓度的Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ和Ｍ－ＣＳＦ。２．添加ＳＣ５－７     

急性白血病骨髓基质细胞对HL-60细胞增殖、分化的影响

目的 为探讨急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的影响。方法 骨髓基质与白血病细胞共培养，采用MTT检测基质对白血病细胞的粘附，流式细胞仪检测粘附的HL-60细胞周期，非特异性酯酶及过氧化物酶染色观察白血病细胞分化及绘制白血病细胞生长曲线。结果 白血病骨髓基质对HL-60细胞的粘附率及粘附的白血病细胞处于G0／G1期比例均明显高于正常骨髓基质；正常骨髓基质对HL-60细胞的生长抑制作用及诱导分化作用均明显强于白血病基质。结论 急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的增殖、分化作用均存在异常。     

骨髓基质细胞与人脐血基质细胞表达造血生长因子的实验研究

目的在分子生物学水平上探讨体外培养的骨髓基质细胞与人脐血基质细胞表达TPO、GM-CSF、SCF的mRNA的能力的差异.方法收集培养28d的骨髓基质细胞与人脐血基质细胞,采用RT-PCR方法在mRNA水平上分析其造血生长因子GM-CSF、SCF、TPO的表达,比较二者表达TPO、GM-CSF、SCF等造血生长因子的mRNA能力的差异.结果体外培养的人脐血基质细胞与骨髓基质细胞均能表达:(1)TPO的mRNA,人脐血基质细胞表达能力强于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为1.57;(2)SCF的mRNA,人脐血基质细胞表达能力弱于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为0.83;(3)GM-CSF的mRNA,人脐血基质细胞表达能力弱于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为0.68.结论人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可以表达造血生长因子TPO、GM-CSF、SCF的mRNA,具有支持调控造血的物质基础.     

急性白血病骨髓基质细胞生物学特点的观察

目的探讨白血病骨髓基质对白血病形成的作用机制.方法白血病患者和正常人的骨髓单个核细胞行基质细胞培养,动态观察贴壁时间、小丛形成时间、集落形成时间、融合形成时间等生长特性,计数CFU-F集落,检测基质细胞VCAM-1、Fn及培养上清液中的IL-6、TNF-α含量.结果急性白血病骨髓基质细胞生长延迟,贴壁形成时间、小丛形成时间、集落形成时间和融合形成时间均明显晚于正常骨髓基质组(P<0.05);CFU-F计数和VCAM-1表达水平均明显低于正常对照组(P<0.05),Fn与正常对照组无显著性差异(P>0.05);骨髓基质细胞培养上清液中IL-6、TNF-α含量明显高于正常对照组(P<0.05).结论急性白血病存在造血微环境异常.     

联苯双酯对HL－60白血病细胞的诱导分化作用

为探讨抗肝炎药物联苯双酯（ＤＤＢ）对人早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０（ＨＬ－６０）的影响。方法应用细胞生物学的方法进行ＨＬ－６０细胞生长曲线、ＮＢＴ还原能力、细胞吞噬活力、酸性磷酸酶活力测定结果ＤＤＢ能抑制ＨＬ－６０细胞增殖。ＨＬ－６０细胞用ＤＤＢ（１０－４ｍｏｌ／Ｌ）处理６天后，近５０％的细胞可获得硝基蓝四氮唑（ＮＢＴ）还原能力，同样浓度的ＤＤＢ处理４天后，其ＨＬ－６０细胞的吞噬能力也明显增强；细胞形态学观察发现ＤＤＢ处理的ＨＬ－６０细胞分化趋向于成熟的中性粒细胞。结论ＤＤＢ能显著提高ＨＬ－６０细胞酸性磷酸酶活力，并具有诱导ＨＬ－６０细胞向中性粒细胞分化的作用。     

骨髓基质细胞对造血调控的研究进展

骨髓基质细胞是造血诱导微环境的重要组成成分,基质细胞通过与造血细胞密切接触以及分泌多种细胞因子调节造血细胞的增殖、分化和发育。本文就BMSCs对造血调控的研究进展作一综述。     

中药安迪对HL-60细胞分化的诱导作用

目的　探讨安迪粉针剂 (Andi)对 HL- 60细胞分化的诱导作用 .方法　采用人早幼粒白血病细胞株 (HL - 60 )为靶细胞 ,分为不加任何药物的对照组 (C组 )、安迪粉针剂 (Andi)组、阳性对照药维甲酸 (RA)组和苦参 (KS)组 ,进行体外培养和诱导分化 ,观测细胞生长曲线、细胞形态、硝基蓝四氮唑(NBT)还原和吞噬能力等指标 .结果　 2 mg· L-1 Andi可显著地抑制 HL - 60细胞增殖 ,使原始细胞分化为中幼以下的成熟细胞 ,分化后的细胞具有 NBT还原能力和吞噬功能 ;Andi为 68.0 % ,RA为 61 .5% ,KS为 59.0 % ,C组还原能力仅6.0 % (P<0 .0 1 vs C) .其形态的改变和吞噬能力与阳性对照药维甲酸 (RA)和苦参 (KS)相似 ,分别为 52 .0 % ,45.5%和56.5% (P>0 .0 5) ;均明显高于空白对照组 .C组吞噬功能仅7.5% (P <0 .0 1 vs C)其 NBT还原能力与 KS相当 (P >0 .0 5) .结论　 Andi对 HL - 60细胞具有显著的诱导分化作用     

醋酸棉酚对白血病HL-60细胞凋亡及分化的影响

目的:通过醋酸棉酚(GAA)对经典白血病细胞系HL-60的研究,探索GAA治疗白血病的可能性. 方法: 用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、细胞形态学、DNA电泳及NBT还原试验等方法观察不同浓度GAA促进HL-60细胞凋亡及诱导分化的作用. 结果: GAA在浓度》6 μmol/L时可显著抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,并表现出剂量效应;在诱导分化浓度下(1, 4 μmol/L),GAA可促进HL-60细胞向成熟粒细胞分化(P《0.05). 结论: GAA对白血病细胞HL-60的选择性促凋亡作用表明其可能是一种理想的高效低毒抗白血病药物.     

激光共聚焦扫瞄显微镜检测急性白血病骨髓基质细胞Cx43表达

目的 观察急性白血病骨髓基质细胞上connexin43蛋白的表达以及GJIC功能.方法 体外培养正常及急性白血病骨髓基质细胞,采用激光共聚焦扫瞄显微镜观察二者Cx43表达的变化;采用荧光漂白恢复技术比较二者之间GJIC功能的差异.结果 正常及急性白血病骨髓基质细胞上Cx43表达的像素密度分别为(81.04±8.84)%和(34.10±17.91)%,两组间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常骨髓基质细胞明显减弱.     

有丝分裂阻滞剂Nocodazole诱导HL-60细胞的凋亡

目的　以细胞有丝分裂阻滞剂 Nocodazole为诱导物 ,诱导白血病细胞系 HL- 6 0细胞凋亡 ,并进行形态学和生物化学指标的检测 .方法　首先 ,观察 1nmol· L- 1 ～ 10μmol· L- 1递增浓度的 Nocodazole对 HL- 6 0细胞的作用 ,然后选取浓度 5 0 0 nm ol· L- 1 诱导凋亡 ,通过 HE染色、荧光染色、DNA片段化 (DNA fragmentation)及流式细胞仪分析研究其凋亡的特征 .结果　 5 nm ol· L- 1～ 10 μm ol· L- 1的Nocodazole都可以诱导 HL - 6 0细胞的凋亡 .在 5 0 0 nmol·L- 1 的 Nocodazole作用下 ,HE染色、荧光染色显示从 6 h开始即出现胞质嗜碱性增强、细胞核固缩断裂、凋亡小体形成等凋亡的形态学特征性改变 .基因组 DNA电泳检测显示从 8h开始出现微弱的梯状 DNA.流式细胞仪检测了不同时间点的细胞周期显示了 G2期阻滞 ,未能检测到亚二倍体峰 .结论　我们用 Nocodazole不仅诱导了典型的白血病细胞凋亡 ,而且在 G2 /M期阻滞与凋亡之间建立了联系 ,可用于凋亡机制或细胞周期调控与凋亡关系的研究     

HL-60细胞端粒酶活性的调控因素

目的 探讨HL－60细胞端粒酶活性的调控因素。方法 用脂质体介导法将LXSN－wt-p53逆转录病毒质粒导入人髓性白血病细胞系HL-60中,用c-myc,bcl-2基因反义脱氧寡核苷酸作用HL－60细胞,用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化后,采用TRAP－ELISA－PAGE法测定端粒酶活性,观察野生型p53基因、c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）对HL－60细胞端粒酶活性的影响。结果 野生型p53基因不影响HL－60细胞的端粒酶活性;bcl-2及c-myc反义寡核苷酸可下调HL－60细胞的端粒酶活性;ATRA在诱导HL－60细胞分化的同时,可使HL－60细胞的端粒酶活性降低。结论 HL－60细胞端粒酶活性受到c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）的调节。     

表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系的建立及其在HL-60细胞分化过程中的作用

目的:建立表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系,并研究Jagged1基因表达在HL-60细胞诱导分化过程中的作用.方法:构建含有人全长Jagged1基因的逆转录病毒载体MSCV-Jagged1/neoR,将其导入包装细胞PT67并收获病毒上清,用病毒上清转染骨髓基质细胞系HFCL,经G418筛选得HFCL-pMSCV-Jagged1细胞,用Western印迹方法检测Jagged1基因的表达;将HL-60细胞与HFCL-pMSCV-Jagged1细胞、HFCL细胞在含有全反式维甲酸(ATRA)的培养液中共培养,流式细胞仪检测不同时间点HL-60细胞CD11b的阳性率.结果:Western印迹方法证明HFCL-pMSCV-Jagged1细胞Jagged1表达水平明显高于HFCL细胞;HL-60细胞与HFCL-pMSCV-Jagged1、HFCL共培养48和72 h后,CD11b阳性率在Jagged1组明显低于HFCL组(P<0.05).结论:Jagged1基因表达可以较为显著地抑制ATRA诱导的HL-60细胞的分化.     

二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。     

伯舒替尼诱导急性髓系白血病细胞分化和细胞凋亡

目的 探讨伯舒替尼对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、THP-1和U937细胞分化和凋亡的影响及其作用机制.方法 伯舒替尼0～20 μmol/L处理HL-60、THP-l和U937细胞48 h,MTT法检测细胞增殖;伯舒替尼0～5 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,流式细胞仪检测细胞CDllb表达;伯舒替尼O～10 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,胱天蛋白酶(caspase)广谱抑制剂benzyloxy-carbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethyl-ketone (Z-VAD-FMK)预处理lh后加入伯舒替尼处理U937细胞48 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;不同浓度伯舒替尼(0～5 μmol/L)分别处理HL-60和U937细胞24 h后,Western印迹法检测细胞分化相关转录因子C/EBPβ、P21和c-Myc以及凋亡相关分子Mcl-1、Bax和Caspase 3蛋白表达的改变.结果 伯舒替尼剂量依赖性抑制AML细胞增殖.与空白对照组相比,不同浓度伯舒替尼处理AML细胞72 h后,细胞CDllb表达和细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05或P＜0.01).伯舒替尼处理HL-60细胞有效上调C/EBPβ和P21的蛋白表达水平,引起U937细胞Mcl-1表达降低和Bax表达增强,并激活caspase 3,而Z-VAD-FMK预处理U937细胞显著抑制伯舒替尼诱导的细胞凋亡.结论 伯舒替尼可有效抑制AML细胞增殖,诱导细胞分化和促进其凋亡,可作为有效治疗AML的潜在药物.