支气管哮喘患者T淋巴细胞的细胞周期分布及周期调节蛋白表达的意义

目的通过检测T淋巴细胞的细胞周期分布及其细胞周期调节蛋白(CCRP)的表达,探讨发作期支气管哮喘(简称哮喘)患者T淋巴细胞过度活化、增殖的调控机制.方法采用碘化丙啶DNA染色法应用流式细胞仪分析30例发作期哮喘患者(哮喘组)及20名正常人(正常组)外周血T淋巴细胞的细胞周期分布;采用间接免疫荧光法,应用流式细胞仪同步测定相应T淋巴细胞内CCRP、依赖激酶抑制蛋白(P27kipl)、细胞周期蛋白E(cyclin E)、cyclin A、cyclin B的表达水平.比较哮喘患者和正常人上述指标的差异.结果哮喘组S期、S+G2/M期的T淋巴细胞百分率分别为(18±9)%和(25±10)%,对照组分别为(5±4)%、(11±6)%, 两组比较差异有显著性(P均<0.01);哮喘组G0/G1期的T淋巴细胞百分率为(76±10)%,对照组为(90±6)%,两组比较差异有显著性(P<0.01).哮喘组T淋巴细胞内P27kipl的表达水平为 (4.0±2.4)%,对照组为(6.7±4.8)%,两组比较差异有显著性(P<0.05);哮喘组cyclin E、cyclin A、cyclin B的表达水平分别为(25±24)%、(9±7)%、(6.4±5.9)%,对照组分别为(6±5)%、(4±4)%、(3.4±1.6)%,两组比较差异均有显著性(P均<0.01).结论 T淋巴细胞内CCRP异常表达与发作期哮喘患者T淋巴细胞过度活化、增殖有关,将CCRP作为调控靶点,可望成为治疗哮喘的新途径.     

肺表面活性物质对哮喘T细胞亚群细胞周期及其调节蛋白的影响

目的观察肺表面活性物质（PS）对发作期哮喘患者T细胞亚群细胞周期及其调节蛋白的影响,揭示PS对CD4＋、CD8＋T细胞增殖周期的具体作用机制及其在哮喘治疗中的意义。方法利用细胞培养技术,通过体外PS干预,流式细胞仪测定经PS干预和未经PS干预的CD4＋、CD8＋T细胞的细胞周期分布和CD4＋、CD8＋T细胞内细胞周期调节蛋白p27kip1、cyclinE、cyclinA、cyclinB的表达水平。结果哮喘患者CD4＋、CD8＋T细胞分别与PS体外共同培养后,加PS组的S期、G2/M期的CD4＋T比例显著低于对照组（P〈0.01）;G0/G1期的CD4＋T细胞比例显著高于对照组（P〈0.01）。加PS组的S期CD8＋T比例显著低于对照组（P〈0.01）;G2期的CD8＋T细胞比例略低于对照组,但差异无统计学意义（P〉0.05）;G0/G1期的CD8＋T细胞比例高于对照组（P〈0.05）。CD4＋T细胞内p27kip1的表达水平高于对照组（P〈0.05）;CD4＋T细胞内cyclinE表达水平显著低于对照组（P〈0.01）;CD4＋T细胞内cyclinA、cyclinB的表达水平低于对照组（P〈0.05）。CD8＋T细胞内p27kip1的表达水平高于对照组（P〈0.05）;CD8＋T细胞内cyclinE、cyclinA表达水平低于对照组（P〈0.01）;CD8＋T细胞内cyclinB的表达水平与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 PS通过抑制CD4＋T细胞的正性细胞周期调节蛋白cyclinE、cyclinA、cyclinB的表达和上调其负性细胞周期调节蛋白p27kip1的表达,抑制CD4＋T细胞的DNA合成和细胞分裂,进而抑制CD4＋T细胞增殖;通过下调CD8＋T细胞内cyclinE、cyclinA的表达,上调p27kip1的表达,抑制CD8＋T细胞DNA合成。     

肺表面活性物质对哮喘T细胞亚群细胞周期及其调节蛋白的影响

目的 观察肺表面活性物质(PS)对发作期哮喘患者T细胞亚群细胞周期及其调节蛋白的影响,揭示PS对CD4+、CD8+T细胞增殖周期的具体作用机制及其在哮喘治疗中的意义.方法 利用细胞培养技术,通过体外PS干预,流式细胞仪测定经PS干预和未经PS干预的CD4+、CD8+T细胞的细胞周期分布和CD4+、CD8+T细胞内细胞周期调节蛋白p27kipl、cyclinE、cyclinA、cyclinB的表达水平.结果 哮喘患者CD4+、CD8+T细胞分别与PS体外共同培养后,加PS组的S期、G2/M期的CD4+T比例显著低于对照组(P＜0.01);G0/G1期的CD4+T细胞比例显著高于对照组(P＜0.01).加PS组的S期CD8+T比例显著低于对照组(P＜0.01);G2期的CD8+T细胞比例略低于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05);G0/G1期的CD8+T细胞比例高于对照组(P＜0.05).CD4+T细胞内p27kipl的表达水平高于对照组(P＜0.05);CD4+T细胞内cyclinE表达水平显著低于对照组(P＜0.01);CD4+T细胞内cyclinA、cyclinB的表达水平低于对照组(P＜0.05).CD8+T细胞内p27kipl的表达水平高于对照组(P＜0.05);CD8+T细胞内cyclinE、cyclinA表达水平低于对照组(P＜0.01);CD8T细胞内cyclinB的表达水平与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PS通过抑制CD4+T细胞的正性细胞周期调节蛋白cyclinE、cyclinA、cyclinB的表达和上调其负性细胞周期调节蛋白p27kipl的表达,抑制CD4+T细胞的DNA合成和细胞分裂,进而抑制CD4+T细胞增殖;通过下调CD8+T细胞内cyclinE、cyclinA的表达,上调p27kippl的表达,抑制CD8+T细胞DNA合成.

Abstract：

Objective The aim of this study was to observe the effect of pulmonary surfactant (PS)on the cell cycle distribution and expression of cell cycle regulatory proteins in T lymphocyte subsets in patients with asthma attack and evaluate the molecular regulatory mechanism of PS on T lymphocyte subsets cell proliferation cycle during asthma attack and its therapy significance. Methods The CD4+、CD8+ T lymphocytes obtained from peripheral blood of 30 patients with asthma attack were incubated with PS,the cell cycle and the expression of p27kipl , CyclinE, CyclinA, CyclinB in CD4+ , CD8+ T lymphocytes with PS and without PS were anasyzed by flow cytometry. Results CD4 + T lymphocytes with PS progressed into S phase and G2/M phase were significantly lower than those without PS( P ＜0.01). But remained in G0/G1 phase were significantly higher than those without PS (P ＜ 0.01). CD8+ T lymphocytes with PS progressed into S phase were significantly lower than those without PS( P ＜0.01),G2/M phase were little lower than those without PS( P ＞ 0.05), Go/G1 phase were higher than those without PS( P ＜0.05). The expression of p27kipl in CD4+T lymphocytes with PS was higher than that without PS( P ＜0.05). The expression of cyclinE in CD4+ T lymphocytes with PS was significantly lower than that without PS( P ＜0.01 ). The expression of cyclinA,cyclinB in CD4+ T lymphocytes with PS were lower than those without PS( P ＜0.05). The expression of p27kipl in CD8+ T lymphocytes with PS was higher than that without PS( P ＜0.05). The expression of cyclinE and cyclinA in CD8+ T lymphocytes with PS were significantly lower than that without PS( P ＜0. 01). The expression of cyclinB in CD8+ T lymphocytes with PS was little lower than that without PS( P ＞0.05). Conclusions During asthma attack,PS can inhibit the DNA synthesis, cell division and proliferation of CD4+T lymphocytes by inhibiting positive cell cycle regulatory proteins cyclinE, cyclinA, cyclinB expression and increasing negative cell cycle regulatory protein p27kipl expression in CD4+ T lymphocytes. PS can inhibit the DNA synthesis of CD8+ T lymphocytes by inhibiting positive cell cycle regulatory proteins cyclinE, cyclinA,expression and increasing negative cell cycle regulatory protein p27kipl expression in CD8+ T lymphocytes.     

支气管哮喘大鼠CD4^＋CD25^＋T细胞的变化及地塞米松干预作用的研究

目的研究支气管哮喘（简称哮喘）大鼠模型支气管肺泡灌洗液（BALF）、血液、脾脏CD4^＋CD25^＋T细胞的变化,及地塞米松对CD4^＋CD25^＋T细胞的影响。方法50只SD大鼠随机分为5组,空白对照（A）组,哮喘（B）组,地塞米松1（C）组、地塞米松2（D）组,地塞米松3（E）组。A组第1天给予腹腔注射生理盐水1ml,第15～21天每天给予生理盐水雾化。B、C、D、E组用卵蛋白建立哮喘大鼠模型,第1天,每只大鼠腹腔注射抗原1ml（卵蛋白1mg＋灭活百日咳杆菌9×10。个＋氢氧化铝干粉100mg）混悬液,第15～21天给予1％的卵蛋白雾化30min,C、D、E组于雾化后分别给予腹腔注射地塞米松0．2mg／kg、1mg／kg、2mg／kg。采用流式细胞仪检测的方法,观察大鼠体内BALF、外周血、脾脏CD4^＋CD25^＋T细胞的变化及使用不同剂量地塞米松后对其的影响。结果B组BALF、外周血、脾脏CD4^＋CD25^＋T细胞表达占CD4^＋T细胞的百分比分别是（42．21±5．62）％、（12．69±2．70）％、（11．15±1．05）％,A组结果分别是（18．76±5．85）％、（6．21±1．73）％、（7．85±2．13）％。B组与A组比较,差异均具有统计学意义（P〈0．01,P〈0．01,P〈0．05）;C组、D组、E组BALF中CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4^＋T细胞的百分比表达分别是（10．49±4．03）oA、（13．28±5．12）％、（7．51±5．39）％,显著低于A组和B组,（P〈0．05,P〈0．01）;外周血中,C组（6．03±1．43）％、D组（4．88±0．95）％与A组（6．21±1．73）％比较,差异无统计学意义,E组（3．49士0．62）％与C组、A组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。脾脏中,c组（7．25±1．82）%、D组（8．63±3．18）％与A组（7．85±2．13）％比较,差异无统计学意义,E组（3．38±1．37）％与C组、D组、A组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CD4^＋CD25^＋T细胞在哮喘大鼠体内有明显的优势表达,可能是哮喘发病的机制之一。地塞米松可以抑制CD4^＋CD25^＋T细胞的表达。BALF内CD4^＋CD25^＋T细胞的变化与外周血和脾脏的变化具有一致性,监测外周血或脾脏CD4^＋CD25^＋T细胞变化可了解肺部情况。     

抗CD137单克隆抗体对哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞死亡方式的影响

目的探讨抗CD啪单克隆抗体对哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞的影响。方法采用密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离16例健康志愿者（对照组）及12例哮喘患者（哮喘组）外周血T淋巴细胞,磁性细胞分离器（MACS）分离得到CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞,分别利用电镜及流式细胞仪观察、检测抗CD137单克隆抗体干预72h的细胞自噬率、凋亡率、胀亡率及FOXp3的表达。结果抗CD137单克隆抗体干预后两组外周血CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞自噬率及凋亡率均增加,但哮喘组均低于对照组。结论抗CD137单克隆抗体可促进CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞凋亡和自噬。     

2型糖尿病外周血内皮祖细胞增殖、分化及细胞周期变化

目的观察2型糖尿病（T2DM）患者外周血内皮祖细胞（EPC）增殖、分化能力及细胞周期分布。方法T2DM患者（DM组）和非T2DM患者（Con组）各20例，离心法获取外周血单个核细胞，培养7天后，鉴定EPC，检测EPC增殖能力、EPC分化及细胞周期分布。结果DM组外周血EPC数量及增殖能力明显降低；EPC数量、增殖能力与HbA1c水平和DM病程呈负相关；EPC表达CD14^＋、CD64^＋明显高于Con组，而表达vWF^＋明显低于Con组；EPC在S期的比例明显减少，在G0／G1期的比例增高。结论T2DM患者外周血EPC数量减少、增殖能力受损、向内皮细胞系分化减少。     

依那普利对急性冠脉综合征患者树突状细胞功能的影响

目的 探讨急性冠脉综合征（ACS）患者树突状细胞（DC）功能状态以及依那普利（Enapril）对DC功能的影响.方法 将42例ACS随机分为常规治疗组（21例）和常规治疗加依那普利治疗组（21例）,分别于治疗前及治疗后1个月取血分离外周血T淋巴细胞,用流式细胞仪检测各组DC细胞表面共刺激分子CD86表达（以CD86^＋CD11c^＋细胞比例表示）;混合淋巴细胞反应（MLR）检测DC细胞对正常献血者T淋巴细胞刺激作用;分析依那普利治疗后CD86^＋CD11c^＋细胞比例,MLR的变化及其与血清C-反应蛋白（CRP）的相关性.结果 与正常人比较,ACS患者DC细胞中CD86^＋CD11c^＋细胞比例明显增加（P＜0.001）;对T淋巴细胞增殖刺激作用明显增强（P＜0.001）;与治疗前比较依那普利治疗后CD86^＋CD11c^＋细胞比例和MLR明显下降（P＜0.01）;CD86^＋CD11c^＋细胞比例、MLR均与CRP呈正相关.结论 ACS患者DC细胞功能明显增强;依那普利可能通过抑制DC细胞功能,负向调节患者的特异性免疫而抑制斑块的炎症反应.     

rhG-CSF未经动员与动员后供者外周血淋巴细胞与干细胞采集物的细胞构成及功能比较

目的比较重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员后供者外周血干细胞（PBSC）采集物与未经动员供者外周血淋巴细胞采集物的细胞构成及功能。方法取异基因造血干细胞移植供者的rhG-CSF动员后PBSC采集物（A组）和未经动员的淋巴细胞采集物（B组）,以流式细胞术测定采集物组分、T细胞亚群、树突细胞（DC）及其亚群、CD14^＋细胞和CD19^＋细胞B7分子的表达、CD4^＋T细胞IL-4和IFNγ等细胞因子的分泌情况,四甲基偶氮唑盐法测定T淋巴细胞增殖能力。结果两组采集物的CD3^＋、CD4^＋、CD34^＋、CD14^＋细胞比例有明显差异,A组DC细胞及其亚群的比例明显高于B组,尤以DC2升高为著（P=0．000）,CD14^＋细胞上B7分子的表达A组明显低于B组,CD19^＋细胞上B7分子的表达无明显差异,分析两组CD4细胞内因子的分泌情况,A组的Ⅱ类细胞因子IL-4及IL-4／IFNγ均明显高于B组（P值分别为0．044,0．012）,经rhG—CSF动员后采集物的T淋巴细胞增殖能力明显下降。结论动员后的PBSC采集物较未经动员的淋巴细胞采集物富集了更多的CD34^＋、CD14^＋细胞,同时rhG—CSF动员后DC2比例的明显升高使得CD4细胞向Th2分化,PBSC含有更多的Ⅱ类细胞因子和其T细胞增殖能力的下降、共刺激分子的下调均提示PBSC较供者淋巴细胞输注更少地引起急性移植物抗宿主病的发生。     

肝硬化患者外周血及腹水T淋巴细胞亚群的变化及意义

目的研究肝硬化患者外周血及腹水T淋巴细胞亚群的变化及意义。方法流式细胞仪测定31例肝炎后肝硬化患者外周血及腹水T淋巴细胞亚群，同时检测15例正常人的外周血T淋巴细胞亚群。结果肝硬化患者外周血T淋巴细胞（CD3^＋）、T辅助／诱导细胞亚群（CD4^＋）、T辅助淋巴细胞／T抑制淋巴细胞亚群（CD4^＋／CD8^＋）较正常对照明显降低（p＜0．01），腹水CD3^＋、CIM^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋较外周血显著降低（P＜0．001）。结论肝硬化患者外周血及腹水T淋巴细胞亚群存在明显异常，表现为全身及腹膜腔局部的免疫力低下。     

小儿重型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的变化与临床意义

目的了解小儿与成人重型肝炎外周血CD3^＋、CD3^＋CD4^＋及CD3^＋CD8^＋T淋巴细胞数量变化的差别,探讨小儿重型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群数量变化与临床意义。方法对35例小儿及30例成人重型肝炎进行外周血CD3^＋、CD3^＋CD4^＋及CD3^＋CD8^＋T淋巴细胞数量检测。结果小儿重型肝炎成活的患儿外周血CD3^＋、CD3^＋CD4^＋及CD3^＋CD8^＋T淋巴细胞数量明显高于死亡组（P〈0．01）：小儿重型肝炎中1岁以内患儿外周血CD3^＋、CD3^＋CD4^＋及CD3^＋CD8^＋T淋巴细胞数量明显高于2～6岁组（P〈0．01）;小儿重型肝炎组CD3^＋、CD3^＋CD4^＋及CD3^＋CD8^＋T淋巴细胞数量明显高于成人重型肝炎组（P〈0．01）;1岁以内的患儿病死率最高（P〈0．05）。结论／JxJL与成人重型肝炎外周血CD3^＋、CD3^＋CD4^＋及CD3^＋CD8^＋T淋巴细胞数量有明显差异,年龄越小,CD3^＋、CD3^＋CD4＋及CD3^＋CD8^＋T淋巴细胞数量越高;dxJL细胞免疫与成人明显不同,年龄越小,病情越重;病死率越高。     

Th1/Th2在支气管哮喘大鼠气道炎症过程中的变化

目的 通过观察支气管哮喘(简称哮喘)气道炎症模型大鼠外周血T淋巴细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)及白细胞介素4(IL-4)的变化,探讨INF-γ及IL-4在哮喘气道炎症过程中的作用,同时观察地塞米松对IFN-γ及IL-4的影响。方法 24只SD大鼠按随机数字表法分为实验组(A组,16只)和对照组(B组,8只),根据实验需要又将实验组16只大鼠分为卵清蛋白致敏激发组(A1组)、激发前激素预处理组(A2组),每组8只。建立哮喘气道炎症大鼠模型采用流式细胞胞内染色技术,测定A1组、A2组[给予地塞米松腹腔注射(10 mg/kg)]和B组大鼠外周血分泌IFN-γ的CD4 、分泌IL-4的CD4 和分泌IFN-γ的CD4 细胞在激发后不同时间点的数值。结果 A1组大鼠外周血中IFN-γ 的CD4 细胞、IFN-γ 的CD4 细胞及IL-4 的CD4 细胞在雾化2 h时分别为(5.7±1.6)％、(11.5±5.1)％、(1.66±0.95)％,A2组分别为(2.6±1.3)％、(3.9±1.5)％、(0.77±0.37)％,B组分别为(1.8±0.7)％、(6.1±1_8)％、(0.65±0.12)％。A1组与A2组比较及A1组与B组比较,差异有显著性(P均<0.05)。A1组大鼠外周血中IFN-γ 的CD4 细胞及IFN-γ 的CD8 细胞在雾化10 h时出现高峰,分别为(9.9±4.4)％、(38.7±6.3)％、A2组分别为(4.9±1.7)％、(15.7±8.7)％,B组分别为(1.5±0.5)％、(6.4±1.5)％,A1组     

CD+4CD+25 T淋巴细胞对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响及作用机制

目的探讨CD+4 CD+25 T淋巴细胞(Treg细胞)对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎症的影响及作用机制.方法 60只小鼠按随机数字表法分为3组,每组20只.哮喘组(A组)小鼠于第1、13天以鸡卵白蛋白(OVA)0.1 ml腹腔注射致敏,第21～29天雾化吸入2% OVA生理盐水溶液10 ml激发 30 min后建立小鼠哮喘模型.生理盐水对照组(B组)以生理盐水10 ml替代OVA处理.去除T淋巴细胞哮喘组(C组)去除小鼠体内CD+25 T淋巴细胞后再按A组方法复制小鼠哮喘模型(用药剂量和方法同A组).分离A、B、C 3组小鼠脾脏淋巴细胞,用流式细胞仪(FACS)检测Treg细胞数量,计算其占CD+4 T淋巴细胞的百分比;分离CD+4 T淋巴细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞毒性T淋巴细胞抗原4 mRNA(CTLA-4 mRNA)的表达;同时对肺组织行苏木精-伊红 (HE)染色,观察小鼠肺组织的炎症改变. 结果经过OVA反复激发,A组小鼠脾脏Treg细胞占CD+4 T淋巴细胞的百分比为(3.10±0.03)%,B组为(9.60±0.04)%,A、B两组间及C组分别与A、B组比较差异均有统计学意义(P均<0.01); IL-10、TGF-β1和CTLA-4 mRNA的表达A组分别为0.250±0.040、0.29±0.03、0.28±0.06, B组分别为0.480±0.080、0.47±0.05、0.50±0.03、C组分别为0.080±0.020、0.11±0.04、0.12±0.05,A、B两组及C组分别与A、B组比较差异均有统计学意义(P均<0.01).与B组比较,A组肺部以嗜酸粒细胞浸润为主要表现的炎症改变明显增强,C组则较A、B组显著增强.结论 Treg细胞的数量减少和(或)功能障碍可能是哮喘气道炎症发生发展的重要机制.     

外周血CD+4CD+25T细胞表达在系统性红斑狼疮患者中的意义

目的了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4 CD2 5T细胞表达及其临床意义。方法用流式细胞仪检测53例SLE患者外周血CD4 CD2 5T细胞表达,根据CD25表达荧光强度>100者为CD4 CD25brightT细胞,并与SLE活动指数评分(SLEDAI)、血清补体C3水平、抗双链DNA抗体、抗核抗体滴度进行相关分析。结果SLE患者外周血CD4 CD2 5T细胞表达率为(7·84±1·85)%,显著低于对照组(9·18±2·01)%(P<0·05),且活动期组[(6·72±1·16)%]较稳定期组更低[(8·57±1·91)%,P<0·01]。外周血CD4 CD25brightT细胞表达率在活动期组[(0·85±0·24)%]和稳定期组[(0·91±0·25)%]之间相比差异无统计学意义(P=0·686),但均低于对照组[(1·43±1·08)%,P<0·01]。随治疗后SLEDAI评分的下降,活动期组SLE患者外周血CD4 CD25brightT细胞表达率无明显变化。进一步分析外周血CD4 CD25brightT细胞表达率与SLEDAI评分、抗核抗体、抗双链DNA抗体滴度和血清C3水平的相关性,分别为ρ=-0·188,P=0·178;ρ=-0·216,P=0·121;ρ=0·082,P=0·560;ρ=0·010,P=0·944,差异均无统计学意义(P>0·05)。结论外周血CD4 CD2 5T细胞的减少可能与SLE的发病有关。     

霉酚酸对外周血T淋巴细胞活化抗原表达和增殖的影响

目的　探讨免疫抑制剂霉酚酸酯的活性代谢产物霉酚酸 (MPA)对外周血T淋巴细胞活化、增殖的影响。方法　分离外周血单个核细胞 ,以植物血凝素 (PHA)作为刺激剂 ,加或不加免疫抑制剂MPA和环孢素A(CSA) ,分组体外培养。以流式细胞仪检测 :T淋巴细胞表面标志CD3 ;T细胞活化抗原CD69/CD3 、CD2 5/CD3 、溴尿嘧啶脱氧核糖核苷 (BrdU)掺入率及细胞周期。结果　 (1)MPA、CSA均能显著抑制T淋巴细胞表面标志抗原CD3 的表达 ,96h时 ,MPA浓度 1组、CSA浓度 1组分别为(37 6 0± 7 89) %、(5 5 85± 13 6 4 ) % ,与对照组 (74 2 0± 7 5 1) %比较 ,差异有显著性 (P值分别为0 0 0 0、0 0 0 4 ) ;(2 )对预先活化 72h的T淋巴细胞 ,MPA能显著抑制CD3 的表达 ,继续培养 96h时 ,MPA组、CSA组分别为 (5 2 90± 7 35 ) %、(6 5 0 5± 10 82 ) % ,与对照组 (78 80± 5 0 9) %比较 ,差异有显著性(P值分别为 0 0 4 9、0 188) ;(3)MPA、CSA均不影响 2 4h时T淋巴细胞CD69的表达 ,MPA组、CSA组分别为 (5 5 0 3± 13 98) %、(38 30± 17 38) % ,与对照组 (5 0 11± 19 2 8) %比较 ,差异无显著性 (P >0 0 0 5 ) ;(4)MPA、CSA均能抑制T细胞表面CD2 5的表达 ,72h时 ,MPA浓度 1组、CSA浓度 1组分别为(37 15± 7 15 ) %、(6 2     

人类免疫缺陷病毒感染者不同疾病阶段中自然杀伤细胞和γδT细胞的改变

目的 了解NK细胞和.γδT细胞在HIV/AIDS患者不同疾病阶段中的改变特点,探讨其在AIDS发病机制中的作用.方法 以311例未接受过抗HIV治疗的HIV/AIDS患者为研究对象,经流式细胞仪检测患者外周血CD4+T淋巴细胞、NK细胞和γδT细胞比例及计数,根据CD4+T淋巴细胞<0.20×109L、(0.20～0.35)×109L及>0.35×109/L.将病例分为低、中、高CD4+T淋巴细胞组,进行组间比较.Mann-WhitneyU检验和Kruskal-Wallis检验进行两组和多组独立样本秩和检验,Spearman和Pearson检验进行相关性分析.结果 HIV/AIDS患者外周血NK细胞比例及计数的中位数分别为8.4%和103×106L,γδT细胞比例及计数中位数分别为3.4%和41×106L,均明显低于健康对照组(Z=-5.029,Z=-7.723,Z=-2.437,Z=-6.063;均P<0.01).低、中、高CD4+T淋巴细胞组CD4+T淋巴细胞计数中位数分别为0.062×109L、0.276×109L、0.482×109L,NK细胞计数分别为89×106L、97×106L、146×106L,低、中CD4+T淋巴细胞组间的NK细胞计数差异无统计学意义,但均显著低于高CD4+T淋巴细胞组(Z=-3.392,P=0.001;Z=-4.849,P<0.01).低、中、高CD4+T淋巴细胞组γδT细胞计数中位数分别为29×106L、43×106L、59×106L,两两之间比较均差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIV感染后外周血NK细胞和γδT细胞数量降低程度存在差异.     

来氟米特对狼疮患者树突状细胞作用机制的初探

目的　探讨来氟米特(LEF)处理前后系统性红斑狼疮(SLE)患者树突状细胞(DC)表面标志及功能的改变,揭示LEF治疗SLE的作用机制,为开展“抑制性DCs”治疗SLE奠定实验基础。方法　(1)分离SLE患者外周血单核细胞,用细胞因子诱导DC成熟, LEF组再加入A7717262(来氟米特的活性代谢产物)培养。第9天收集DC细胞,流式细胞仪检测CD80、CD83、CD86和HLA DR的表达。(2)分别将A771726处理或不处理的第9天DC和T细胞进行培养, 72h后用MTT法检测DC刺激淋巴细胞增殖的能力,FACS检测T细胞亚群和ELISA检测培养上清中IL 10和IFNγ水平。结果A771726处理后虽DC形态无改变,但DC表达CD83、CD86和HLA DR百分数较对照组均明显降低(72 70±1 77vs 79 36±4 80, 63 50±14 06vs. 83 91±9 81, 80 44±12 56vs. 90 51±8 63,P值均<0 01)。A771726处理后的DC,其刺激T细胞增殖相应的吸光度值明显降低,混合培养的上清液中IL 10水平较无A771726处理的DC与T细胞的混合培养上清液明显降低,而IFNγ两者间无显著差异;但见CD 4 CD 25CTLA 4 T细胞百分比增高。结论　LEF在体外可抑制SLE患者外周血DC的成熟;未成熟DC能抑制T细胞增殖及T细胞向Th2 细胞转化,诱导CD 4 CD 25CTLA 4 T细胞产生,从而纠正SLE患者的部分免疫紊乱。     

tBHQ对无机砷致HaCaT细胞细胞周期调节失控的拮抗作用

目的探讨叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)对亚砷酸钠(sodium arsenite,NaAsO2)致人皮肤角质细胞系HaCaT细胞周期阻滞及其调控蛋白异常改变的拮抗作用。方法流式细胞仪法测定细胞周期;Western Blot检测细胞内Cyclin D1和CDK4的蛋白表达情况。结果 NaAsO2单独作用HaCaT细胞,G0/G1期细胞比例明显下降(P<0.01),S期和G2/M期细胞比例较对照组明显增加(P<0.01);tBHQ预处理后,tBHQ(50μmol/L)预处理的NaAsO2(25、50μmol/L)组细胞G0/G1期细胞比例有所上升(P<0.01);tBHQ(50μmol/L)预处理的NaAsO2(50μmol/L)组S期细胞比例明显下降(P<0.01);G2/M期细胞比例整体呈下降趋势。NaAsO2单独作用于HaCaT细胞,细胞周期相关蛋白Cyclin D1和CDK4的蛋白表达随NaAsO2染毒浓度的增加而明显下降(P<0.01);tBHQ预处理后,Cyclin D1和CDK4蛋白表达均明显高于相同浓度NaAsO2单独作用组(P<0.01)。结论 tBHQ对无机砷致人皮肤角质细胞细胞周期异常变化具有一定的拮抗作用。