复方鳖甲软肝片抗肝纤维化机制的实验研究

目的　研究复方鳖甲软肝片 (FFBJRGP)抗肝纤维化作用机制 ,为FFBJRGP的临床应用及抗肝纤维化药物的研发提供参考。方法　应用Chevallier半定量计分系统、酶图法、免疫组织化学、核酸原位杂交及图像分析等技术方法 ,系统观测高、中、低剂量FFB JRGP治疗CCl4诱导肝纤维化模型后各时间段肝组织内关键性纤维化指标的变化 ,包括主要细胞外基质 (ECM)蛋白、基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs)表达量及酶活性 ,肝星状细胞 (HSC)的活化与增殖状况 ,以及MMP和膜型MMP(MT MMP)mRNA的表达等。结果　与对照组比较 ,不同剂量FFBJRGP治疗 3个月、6个月结束时及停药后 3个月和 6个月肝组织Chevallier纤维化评分均明显减少(P <0 0 1或P <0 0 5 )。各观察时间段肝组织内TIMP 1和TIMP 2表达量不同程度减少 ,其中高、中治疗剂量组于治疗 3个月结束时降至最低 ,而MMP 2、MMP 13酶降解活性达高峰 ,并维持较高水平至停药后 3个月 ,MMPs和MT MMPs酶蛋白及mRNA表达明显上调 ,肝组织内TGF β1及其mRNA表达、α SMA阳性HSC数量显著减少 ;Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原降解幅度与MMPs及MT MMPs表达量及酶活性大致呈平行关系。结论　FFBJRGP可能通过多靶位影响肝纤维化逆转及形成环节产生抗肝纤维化疗效     

肝星状细胞在非酒精性脂肪性肝炎患者肝组织中的表达

探讨肝星状细胞（HSC）在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）患者肝穿组织中的活化情况，并研究HSC的活化与炎症活动度以及纤维化的关系。将40例NASH患者的肝穿刺标本按炎症活动度分为G1和G2组，按照纤维化分级分为S0，S1和S2组，用多克隆抗－突触素标记HSC，采用免疫组织化学检测HSC的表达情况，HSCs主要分布在小叶中央区的窦壁上，HSCs的表达量与炎症活动度平行（G2＞G1，P＜0．05），HSC的活化虽然与纤维化的程度有关，但并不完全匹配，NASH患者的肝穿刺标本中有HSC的活化，NASH的肝纤维化与HSC的活化有密切关系，并且与小叶内和汇管区的炎症活动度呈正比。     

复方鳖甲软肝片对酒精性肝纤维化狄氏间隙胶原沉积的影响

目的　研究复方鳖甲软肝片 (FFBJRGP)对酒精性肝纤维化大鼠肝血窦周围胶原沉积的影响。方法　采用“白酒 -植物油-吡唑”混合液灌胃配合饲喂高脂饲料法复制大鼠酒精性肝纤维化模型。采用高、中、低 3个剂量的FFBJRGP对肝纤维化大鼠进行治疗。取材后 ,采用肝组织样本前处理水解法检测各组大鼠肝组织羟脯氨酸含量 ;用放免分析法检测各组大鼠血清中Ⅳ型胶原 (CⅣ)和层黏连蛋白 (LN)含量 ;大鼠肝组织石蜡切片 ,Mallory、天狼星红染色 ,图像分析 ,显示胶原分布及含量。结果　酒精性肝纤维化大鼠肝组织内羟脯氨酸含量 ,血清中CⅣ和LN水平均显著升高 (P<0 0 1) ;中、低剂量FFBJRGP治疗后 ,羟脯氨酸含量、血清中CⅣ和LN水平呈下降趋势 (P <0 0 5或P<0 0 1) ;酒精性肝纤维化大鼠肝窦Disse间隙胶原大量沉积 ,中央静脉周围及肝小叶Ⅲ区的肝窦内以Ⅰ型胶原为主 ;FFBJRGP治疗后 ,肝窦内、中央静脉周围胶原明显减少 ,肝窦内胶原类型由Ⅰ型向Ⅲ型转化。结论　FFBJRGP可有效抑制肝血窦基底膜胶原的合成和沉积 ,促进胶原由幼稚向成熟型转化 ,从而有效阻滞肝纤维化的进程     

自身免疫性肝炎患者肝组织纤维化机制的研究

目的 探讨自身免疫性肝炎(AIH)肝纤维化的机制。方法 以突触素(SYN)标记36例AIH患者肝穿刺标本的肝星状细胞(HSC),采用免疫组化方法检测HSC、Ⅰ型胶原(ColD、Ⅳ型胶原(ColⅣ)及膜型基质金属蛋白酶1(MT-MMP-1)的表达,原位分子杂交方法(ISH)检测MT-MMP-1 mRNA及组织型金属蛋白酶1(TIMP-1)mRNA的表达。结果 36例AIH肝组织内SYN阳性HSC主要分布于汇管区、细胞纤维间隔及肝小叶炎症活动部位,尤其活动性界面炎部位往往呈聚集性分布,周围易见胶原纤维沉积,SYN阳性HSC数量与AIH肝组织活动指数(HAl,Knodell)呈正相关关系。ColⅠ、ColⅣ的表达量随AIH肝纤维化程度的增加而增加。ColⅣ主要分布于活动性炎症区域并随塌陷窦壁呈聚集性分布,ColⅠ主要见于纤维间隔及汇管区内,为S5～6期(Knodell)AIH肝组织内主要的细胞外基质(ECM)成分。MT-MMP-1及其mRNA阳性细胞主要见于汇管区周围界面炎及细胞纤维间隔边缘部位间质细胞内,周围少部分肝细胞亦呈阳性表达。MT-MMP-1及其mRNA表达与AIH肝组织HAI密切相关,且随AIH肝纤维化分期而增强,于S4～5期(Knodell)表达量最高,其后有所下降。AIH肝组织内TIMP-1的表达随肝纤维化的进展大致呈递增趋势。结论 AIH免疫损伤致反复持续性活动性炎症引起HSC的大量活化、增殖,进而引起ECM的沉积可能是AIH肝纤维化发生和进展的重要原因之一;MT-MMP-1引起ColⅣ的降解,改变HSC周围的微环境而诱导HSC的激活可能是HSC活化、增殖的机制之一;AIHECM的降解水平相对低下可能是AIH肝纤维化进展的另一重要机制。此外,本实验结果显示,SYN是研究肝纤维化组织内HSC的一个较好的标志物。     

胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织中PTEN表达与肝星状细胞凋亡的关系研究

目的 探讨胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织中磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)的动态表达与在体肝星状细胞(HSC)凋亡的关系.方法 健康雄性SD大鼠50只,随机分为模型组(n=40)及假手术组(n=10).模型组采用胆总管结扎法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型,并分别于结扎后1、2、3、4周(每个时间点取10只)麻醉后留取肝组织.假手术组大鼠亦于相应时间麻醉后留取肝组织.采用免疫组化法测定大鼠肝组织中PTEN蛋白的表达;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)及α-SMA免疫组化双染法检测在体活化HSC的凋亡情况.结果 正常大鼠肝组织未见凋亡的HSC.随着肝纤维化程度加重,肝组织中PTEN蛋白的表达量逐渐减少(P<0.01),而活化HSC增多,凋亡HSC也增多.造模1、2、3、4周,大鼠肝组织的HSC凋亡指数(分别为4.57%±0.41%、4.02%±0.48%、3.45%±0.37%、2.88%±0.50%)逐渐减少(P<0.01).大鼠肝纤维化组织中PTEN的蛋白表达量与在体HSC的凋亡呈显著正相关(r=0.76,P＜0.01).结论 胆汁淤积性大鼠肝纤维化组织中PTEN的蛋白表达下调与在体活化HSC的凋亡减少相一致.     

中药八味抗纤方抗大鼠肝纤维化的实验研究

 目的 观察中药八味抗纤方对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠的治疗作用.方法 采用四氯化碳橄榄油溶液腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型,同时予不同剂量中药八味抗纤方灌胃,观察八味抗纤方对慢性肝损伤大鼠肝功能的影响, 采用Ishak肝病组织病变计分修正方案,结合HE染色、Masson染色和免疫组化染色研究八味抗纤方对大鼠肝组织病理改变的影响,以活化HSC特异性标记α-SMA标记显示活化肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),探讨八味抗纤方抗肝纤维化的可能的作用机制.结果 低剂量组和高剂量组大鼠血清AST均显著低于模型组;肝纤维化程度轻于模型组;α-SMA阳性细胞数少于模型组.结论 八味抗纤方能够抑制四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化,减轻纤维结缔组织增生,抑制HSC的活化.     

复方鳖甲软肝方对肝星状细胞细胞周期的影响

目的：探讨复方鳖甲软肝方(FFBJRGF)药物血清对离体肝星状细胞(HSC)细胞周期及凋亡的干预作用。方法：运用流式细胞仪技术检测外源性TGF--β1对HSC细胞周期及凋亡率的影响,进而观察FFBJRGF高、中、低剂量药物血清对HSC细胞周期及凋亡的干预作用,并以IFN-γ药物血清及正常对照大鼠血清组作对照。结果：FFBJRGF各剂量药物血清组、TGF--β1及IFN-γ血清均不同程度增加G0、G1期HSC细胞数量,其中FFBJRGF各剂量药物血清组作用尤为明显;与正常对照组比较,FFBJRGF各剂量药物血清组对HSCG2、M、S期有一定的干预作用;TGF-β1组能显著上调HSC凋亡率,但FFBJRGF各剂量药物血清组及IFN-γ血清组作用不明显。结论：FFBJRGF药物血清具有显著抑制HSC细胞增殖周期作用,可能为其抗肝纤维化的机制之一,但对体外HSC细胞凋亡影响作用不明显。     

苦参素和甘利欣联用抗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床研究

目的探讨苦参素和甘利欣联合治疗慢性乙型肝炎,在抗肝纤维化方面的疗效。方法将80例慢性乙型肝炎患者随机分为对照组、治疗组,对照组给予常规保肝治疗,治疗组在此基础上加用苦参素和甘利欣,治疗2个月,观察治疗前后两组患者的肝功能和血清肝纤维化指标的变化。结果两组患者治疗后肝功均明显改善,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);治疗组肝纤维化指标明显下降,前后比较差异有统计学意义(P<0.05),而对照组治疗前后差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组的总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论两药联合治疗慢性乙型肝炎,可明显降低患者的血清肝纤维化指标,具有良好的抗肝纤维化作用。     

非酒精性脂肪性肝炎肝组织TNF-α、TGF-β1和Leptin的表达及意义

目的探讨细胞因子TNF-α、TGF-β1和Leptin在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）患者肝组织中的表达状况及在发病机制中的意义。方法应用免疫组化方法检测59例不同病变程度NASH穿刺肝组织中TNF-α、TGF-β1和Leptin的表达,分析其与NASH病变以及肝星状细胞（HSC）、库普弗细胞（KC）活化程度之间的关系。结果NASH肝组织中,TNF-α表达于肝脂肪变区及炎症活动区的肝窦壁细胞及炎细胞中,其阳性表达随肝脏炎症损伤程度的加重而增加（P〈0．05）;TGF-β1主要表达于纤维化较明显区域的肝窦壁细胞,其阳性表达与炎症及纤维化程度均密切相关（P〈0．05）,分布及表达量与HSC的免疫组化改变大致平行;Leptin主要于NASH肝组织脂肪变区及纤维化区的单个核细胞、KC和HSC内表达,与NASH肝脂肪变及纤维化程度呈正相关（P〈0．05）;Leptin表达纤维化程度加重而呈递增趋势,与TGF-β1的变化呈大致平行关系。结论TNF-α可能是NASH炎症过程中的关键性炎症因子,而TGF-β1和Leptin可能与NASH纤维化的启动及进展关系密切,上两者间可能存在着协同作用。     

对比分析柔肝化纤颗粒抗肝纤维化前后的指标变化

目的：探讨柔肝化纤颗粒抗肝纤维化前后的指标变化情况。方法对2011年3月～2012年3月收治的40例慢性乙型肝炎患者采用柔肝化纤颗粒治疗,对比分析治疗前后患者临床症状和体征、肝功能指标、肝纤维化指标变化。结果治疗后总有效率为87.5％,在Tbil、ALT、AST、Alb以及PT等各项指标上和治疗前相比均改善明显（ P＜0.05）,在HA、LN、PCIII、IV-C各项指标均低于治疗前（ P＜0.05）,具有统计学意义。结论柔肝化纤颗粒具有较为突出的抗肝纤维化作用,治疗效果好。     

基于NASH-CRN方案的130例非酒精性脂肪性肝病病理研究

目的 参照2005年NASH临床研究网络病理学会(NASH-CRN)评估方案,研究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的病理特点.方法 对130例NAFLD的肝穿组织进行常规HE、网状纤维和Masson三色染色,观察分析NAFLD的病理改变.采用免疫组织化学染色排除其他非NAFLD肝病.结果 脂肪变性、肝细胞气球样变、小叶内炎症和纤维化发生普遍,脂肪变性以大泡型为主,肝腺泡3带为著,肝细胞气球样变发生率为94.6%,小叶内炎症多为轻度炎症.统计学分析示,脂肪变性与小叶内炎症、纤维化、肝细胞气球样变程度间呈正相关(r值分别为0.587、0.374、0.488,P均＜0.01).随脂肪变性、小叶内炎症、纤维化程度的加重,微肉芽肿、脂性肉芽肿和凋亡小体出现频率呈增加趋势.随气球样变程度加重,巨大线粒体和糖原核发生率明显增高(P均＜0.01).结论 在NAFLD的评估中,除脂肪变性、肝细胞气球样变、小叶内炎症和纤维化外,汇管区炎症也应予以重视.微肉芽肿、脂性肉芽肿和凋亡小体是否可作为NAFLD病情进展的组织学指标尚需进一步验证.     

过氧化脂质、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性在实验性肝癌中变化规律的探讨

本文对实验性大鼠肝癌不同阶段血和组织中过氧化脂质(LPO)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性进行动态观察。LPO含量在肝癌形成前增高,以后随着肝癌的形成与生长逐渐降低。瘤组织中LPO含量显著低于癌旁组织和正常肝组织(P<0.01)。GSH-Px活性在诱癌6周后下降,CAT活性诱癌开始后即降低。癌组织中GSH-Px和CAT活性显著低于癌旁组织和正常肝组织(P<0.01)。提示诱癌过程中机体抗氧化系统严重受损;自由基、脂质过氧化损伤可能是肝癌发生的重要机理之一。     

Wnt信号途径在胃癌组织和细胞系中的活化

目的研究Wnt通路在胃癌组织中的活化状态及其与胃癌发生发展的关系。方法应用免疫组化、免疫荧光、RT-PCR和Western蛋白印迹等方法,在胃癌组织和细胞系中检测Wnt信号途径的活化状态。结果Wnt 2、β-catenin和TCF4在胃癌组织中的表达明显高于癌前病变组织(P<0.01);Wnt组与Wnt-组中癌前组织和胃癌组织的分布具有显著统计学差异(P<0.001)。结论Wnt信号通路在胃癌组织中呈活化状态,并与胃癌发生发展密切相关。     

银杏叶片治疗燃煤型砷中毒肝纤维化的临床研究

目的　研究银杏叶片抗燃煤型砷中毒肝纤维化作用。方法　选择燃煤型砷中毒高发区 84例慢性砷中毒患者 ,银杏叶片治疗 3月 ,对照组用安慰片。检查治疗前后患者血清PAF及四项肝纤维化指标 ,部分患者作治疗前后的病理学检查。结果　治疗组血清PAF及四项肝纤维化指标治疗后较治疗前有明显降低 (P <0 .0 1)。治疗组的显效率和总有效率分别为 4 5 .5 %和 79.5 % ,而对照组的显效率和总有效率分别是 17.5 %和 4 2 .5 % ,两者比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。治疗组治疗后的肝脏病理有一定的改善。结论　银杏叶片有抗燃煤型砷中毒肝纤维化的作用     

苦参素联合α-干扰素对慢性乙型肝炎血清肝纤维化指标的影响

目的　探讨苦参素与α-干扰素联合应用对慢性乙型肝炎血清肝纤维化指标的影响。方法　将78例慢性乙型肝炎患者随机分为对照组、干扰素组、联合治疗组。三组均常规给予甘利欣、门冬氨酸钾镁等基础护肝治疗。干扰素组在基础护肝治疗同时,肌注重组α-2b干扰素,疗程6个月。联合治疗组在干扰素组基础上,肌注苦参素,疗程6个月。治疗前及治疗后定期检测肝功、血清HBV标志物,治疗前后各检测1次血清肝纤维化指标,包括透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ前胶原(PCⅢ)、IV型胶原(IV-CL)。结果　肝功复常率三组间比较无显著差异(P>0.05);干扰素组、联合治疗组HBeAg,HBV　DNA阴转率与对照组比较差异非常显著(P<0.01,P<0.001);对照组血清肝纤维化指标治疗前后比较无显著差异(P>0.05),干扰素组HA、PCⅢ治疗前后比较差异非常显著(P<0.001),联合治疗组HA,LN治疗后与干扰素组比较差异显著(P<0.05),联合治疗组PCⅢ治疗后与干扰素组比较差异非常显著(P<0.01)。结论　苦参素与α.干扰素两者合同,能起到互补和协同作用,提高抗病毒、抗纤维化效果。     

MAPK反义寡核苷酸对乙醛活化HSC增殖和JNK信号通路的影响

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)反义寡核苷酸(ASO)对乙醛活化肝星状细胞(HSC)增殖和MAPK中的c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法:用脂质体转染法将MAPKASO导入乙醛活化HSC中,通过MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测MAPK-JNK表达。结果:MAPK ASO可明显抑制细胞增殖及抑制JNK信号通路的表达,其抑制率分别为40.81%、60.6%。与对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论:MAPKASO能够抑制HSC的增殖,阻断JNK信号通路,这可能成为治疗肝纤维化的一个有效途径。     

当归对兔VX2肝癌放疗联合介入治疗后肝纤维化的影响

目的 观察当归对兔VX2肝癌放疗(RT)联合动脉化疗栓塞(TACE)术后肝纤维化的预防作用,并探讨其预防肝纤维化的作用机制。方法 将50只新西兰白兔随机表法分为对照组(n=10)、模型组(n=10)和预防组(n=30)。模型组:兔VX2肝癌种植2周后经胃十二指肠动脉注入平阳霉素1 mg+碘油0.2 ml, 1周后单次行左肝照射20 Gy;预防组:荷VX2肝癌兔在行RT联合TACE(剂量同模型组)术时经耳静脉注射当归注射液,根据当归注射液量的不同进一步分为小剂量组(4 ml/kg)、中剂量组(6 ml/kg)和大剂量组(8 ml/kg),每周2次,共4周;对照组:不进行VX2肝癌种植,经胃十二指肠动脉注入生理盐水2 ml。于RT联合TACE术后第6周末检测HA、LN、PCⅢ和CIV,并进行肝组织HE、VG和TGF-β1免疫组织化学染色。结果 模型组的肝纤维化病理分期主要处于肝纤维化Ⅱ期和Ⅲ期,预防组的肝纤维化分期主要处于肝纤维化Ⅰ期,各组之间分期差异有统计学意义,肝纤维化分期与当归治疗相关(r=0.7631,P<0.01);模型组血清HA、LN、PCⅢ和CIV明显高于对照组(P<0.01),预防组与模型组相比明显降低(P<0.05);模型组肝组织TGF-β1表达增强,预防组TGF-β1表达较模型组明显减少,且不同剂量当归预防组之间存在量效关系(r=0.4427,P<0.01)。结论 当归对兔VX2肝癌RT联合TACE术后肝纤维化有预防作用,TGF-β1参与其调控机制。     

急诊PTCA及支架术前后血清GMP-140的变化及临床意义

目的 :通过测定急性心肌梗死 (AMI)病人在急诊经皮冠状动脉腔内成形术 (PTCA)及支架术前后血浆α -颗粒膜蛋白 (GMP -14 0 )的含量 ,探讨急性心肌梗死病人在急诊PTCA及支架术后血小板的活化状态及内皮损伤情况。方法 :选取在发病 12h内行PTCA及支架置入术治疗的急性心肌梗死病人 15例 ,分别在术前、术后即刻、术后 1h及术后 2 4h采静脉血 ,用酶联免疫法 (ELISA)测GMP -14 0的含量。结果 :PTCA及支架术前GMP -14 0的含量明显高于正常对照组 (P <0 .0 1)。GMP -14 0在术后即刻和术前相比明显增高 (P <0 .0 1) ,术后 1h和术前相比下降 (P <0 .0 1) ,术后 2 4h较术前及术后 1h明显降低 (P <0 .0 1) ,但仍高于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论 :急性心肌梗死病人在PTCA及支架术前存在内皮损伤和血小板的活化 ,在PTCA及支架术后血小板的活化呈现下降趋势 ,损伤的内皮逐渐修复 ,血栓再形成能力下降