异种脐血干细胞移植修复兔全层关节软骨缺损的初步研究

目的 :探讨人脐血干细胞对兔全层关节软骨缺损的修复作用及免疫反应。材料和方法 :取人脐带血中脐血干细胞及幼兔的骨髓基质细胞 ,体外分离培养 ;以聚乳酸 (PLA)为载体 ,将培养的原代细胞植入PLA支架上 ,形成细胞 -PLA复合物。于 2 0只成年新西兰大白兔的股骨滑车关节面上造成直径 4.5mm深 3 .0mm的全层关节软骨缺损 ,将两种细胞 -PLA复合物分别植入关节软骨缺损处。植入异种脐血干细胞 -PLA复合物为实验组 ,植入同种异体骨髓基质细胞 -PLA复合物为阳性对照组 ,缺损不处理为阴性对照组。术后 6周、1 2周观察缺损修复情况、新生组织类型及有无免疫反应。结果 :脐血干细胞组 6周时标本为纤维组织修复 ,内有少量软骨细胞 ;1 2周时 40 %标本为软骨样组织修复 ,较薄 ;60 %标本为纤维组织修复。移植物周围无明显淋巴细胞聚集 ,部分滑膜有炎症反应。骨髓基质细胞组(阳性对照)为软骨样组织修复 ;滑膜无明显炎症反应。阴性对照组为纤维组织修复 ,无软骨形成。结论 :异种脐血干细胞移植修复软骨缺损优于缺损不处理组 (阴性对照) ,但明显差于同种骨髓基质细胞组 (阳性对照 )。脐血干细胞有可能成为软骨修复的新的种子细胞。由于种属差异的影响 ,脐血干细胞组可能存在免疫反应 ,结果需进一步研究     

移植基质诱导的自体软骨细胞修复关节软骨缺损临床研究

 目的 探讨基质诱导的自体软骨细胞移植修复关节软骨缺损的方法与疗效.方法 2004年11月～2006年11月,对7例膝关节软骨炎患者行关节镜取软骨、基质诱导自体软骨细胞移植(Matrix-induced Autologous chondrocyte implantation,MACI)膜植入术.对患者行MRI检查确定损伤位置,并进行IKDC2000评分.术后按照特定的康复计划进行循序渐进的功能锻炼.结果 随访时间6个月到24个月.术后半年多数患者各项症状逐渐消失,IKDC2000评分大部分增高.复查MRI和关节镜,显示原来缺损的关节软骨已基本修复,并伴有软骨下骨的修复.结论 与传统自体软骨细胞移植(Autologous chondrocyte implantation,ACI)技术相比,利用MACI技术修复软骨缺损具有术后恢复时间短、操作简便、创伤小、生成更多透明软骨等优点,具有良好的应用前景.     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对软骨细胞移植修复关节软骨缺损的作用

目的：观察胰岛素样生长因子－Ⅰ（insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)对关节软骨缺损修复的作用。方法：采用组织工程方法制备骨基质明胶（BMG）－软骨细胞移植物。40只4－5个月龄的新西兰兔均分为软骨细胞实验组及软骨细胞对照组,BMG对照组,空白对照组。实验组兔膝关节注射IGF－Ⅰ,各对照组均注射等渗盐水。术后行大体,组织学观察及免疫组化检测。结果：实验组软骨细胞生长较快,术后24周修复的软骨组织Safranin-O染色,Ⅱ型胶原染色与正常关节软骨一致,软骨细胞呈柱状排列,软骨细胞对照组术后24周修复软骨组织Safranin-O染色较淡,部分软骨细胞呈柱状排列,BMG,空白对照组未修复。结论：IGF－Ⅰ能促进关节软骨缺损修复。     

骨形成发生蛋白在兔关节软骨全层缺损修复中的作用

关节软骨的修复能力极为有限 ,目前尚无理想的方法促进其再生或修复。近年来用生长因子加速关节软骨修复或促进关节软骨再生越来越受到重视 ,骨形成发生蛋白 (ＢＭＰ)是个很有希望的生长因子。目前认为 ,成骨细胞与成软骨细胞是同源的[1 ] 。笔者研究发现 ,ＢＭＰ可促进骨髓基质细胞 (ｍａｒｒｏｗｓｅｒｏｍａｌｃｅｌｌ,ＭＳＣ)向骨形成细胞方向分化。据此 ,笔者用ＢＭＰ ＤＢＭ(脱钙骨基质 )修复兔全层关节软骨缺损 ,最长观察 48周 ,以评价ＢＭＰ在关节软骨损伤修复中的作用。一、材料与方法1.ＤＢＭ制备 :选取新鲜牛股骨上端松质骨 ,截…     

促进关节软骨缺损修复的方法

关节软骨损伤在临床上较常见,因软骨细胞缺乏有效的自身分裂增殖、修复缺损的能力,软骨损伤后的修复治疗是临床上一个急需解决的问题。近年对促进软骨缺损的修复及提高修复组织质量方面进行了多方面的探讨。软骨缺损按缺损的深度可分为局限于软骨内的缺损和穿透软骨下骨板的骨软骨缺损。Ｎａｍｂａ等［１］认为,胚胎时软骨有一定程度的自身修复能力,他在胚胎羊股骨髁造成深１００μｍ的软骨缺口,不伤及软骨下骨板,损伤２８天后,缺损修复,恢复了软骨细胞的密度和组织结构。但是,胚胎羊的这种自身修复缺损的能力也是极其有限的,当缺…     

聚乙醇酸负载同种异体软骨细胞移植修复兔关节软骨缺损

目的：应用聚乙醇酸（ＰＧＡ）负载的兔软骨细胞培养移植修复同种异体关节软骨缺损．方法：应用在生物体内可降解吸收、纤维状多孔态的ＰＧＡ作为支架行兔软骨细胞培养．培养１４天后，软骨细胞在ＰＧＡ提供的三维空间中大量分裂、增殖并合成大量软骨基质，形成ＰＧＡ－软骨细胞复合体，然后利用该复合体移植修复同种异体兔膝关节全层软骨缺损，对侧膝关节作对照．术后行大体、组织学、电镜动态观察及修复组织厚度测定．结果：ＰＧＡ在术后８周完全降解吸收，实验侧与对照侧修复组织的厚度有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；术后１６周在实验侧可见典型的软骨组织，电镜下为成熟的软骨细胞，而对照侧为纤维组织修复．结论：应用ＰＧＡ－软骨细胞复合体移植，可修复同种异体的兔关节软骨缺损，为临床治疗关节软骨缺损奠定了基础．     

膝关节软骨全层缺损的手术修复技术进展

<正>膝关节软骨损伤是运动创伤和膝关节外科领域的常见病和多发病,软骨损伤后若得不到有效处理,可能最终会发展为骨性关节炎,导致膝关节功能丧失。随着近些年软骨损伤治疗技术的发展,膝关节软骨全层缺损的手术修复治疗受到越来越多临床医生的重视,但治疗效果却有很大差异。同时,对于关节软骨损伤的评价标准、手术方案以及手术时机的选择,都有很多争论。本文就膝关节软骨全层缺损的几种最主要的手术修复技术、适应症和临床效果做一综述。     

同种异体关节软骨细胞分离体外培养再移植修复关节软骨缺损实 …

关节软骨一旦缺损，其修复能力有限。本实验通过移植同种异体兔软骨细胞，修复关节软骨缺损。方法软骨细胞取自发生后３周雄性新西兰幼兔，体外培养，移植于成年雌性新西兰兔膝关节。股骨内髁缺损区为移植细胞组，左股骨外髁缺损为移植胶原凝胶组，右股骨外缺损为空白对照组。     

自体骨髓间充质干细胞移植修复兔关节软骨损伤

目的用组织工程方法修复软骨损伤。方法兔骨髓间充质干细胞(bone marrowderived mesenchymal stem cells，BMSCs)体外培养扩增诱导分化，用藻酸盐载体材料负载，移植于兔关节软骨损伤区，术后6周和12周进行大体、光镜、电镜等观察。结果实验组移植6周后，软骨损伤区由透明软骨样组织填充，12周后软骨和软骨下骨修复良好，免疫组化和原位杂交证实修复组织内产生了Ⅱ型胶原，透射电镜显示细胞周围有胶原纤维产生。两对照组损伤区由纤维组织修复。结论以藻酸盐载体材料负载BMSCs移植可修复关节软骨损伤。     

兔外周血MSC复合同种异体脱钙皮质骨修复软骨缺损的研究

目的:比较外周血(peripheral blood,PB)与骨髓(bone marrow,BM)来源MSC复合脱钙皮质骨基质(demineralized cortical bone matrix,DCBM)修复兔膝关节软骨缺损的效果,为其进一步的临床应用提供实验参考。方法:获取分离培养的第三代兔PB-MSC和BM-MSC,以2×107/ml的细胞密度接种于DCBM上。20只成年新西兰兔,构建股骨远端滑车关节面中心部大面积全层软骨缺损模型,随机分为4组:I组:PB-MSC/DCBM复合物;II组:BM-MSC/DCBM复合物;III组:单纯DCBM支架组;IV组:空白缺损组。分别于术后24周、48周取材,通过大体观察、组织学评分、组织化学和免疫组织化学染色评价其在体内修复软骨的效果。结果:移植后24周PB-MSC/DCBM组:修复区由半透明组织填充,局部有小的浅的凹陷,表面光整,稍低于周围正常软骨,与周围组织连接连续。BM-MSC/DCBM组的大体观察类似I组。单纯DCBM组:表面光整,与周围组织连续性不如I、II组。空白缺损组:仍有一大的缺损。48周PB-MSC/DCBM组和BM-MSC/DCBM组,缺损区基本不可见,充填好,表面光滑,基本和周围正常组织无界限,与周围软骨连续性好,软骨细胞外基质表达较多。组织学评分显示:在24周和48周两个时间点,PB-MSC/DCBM组和BM-MSC/DCBM组比较组间无差异,均显著高于单纯DCBM组和空白缺损组。结论:PB-MSC具备与BM-MSC相似的修复兔关节软骨缺损的能力。     

Ad-GFP修饰MSCs静脉移植在严重烫伤延迟复苏大鼠体内的定向迁移

目的:观察携带目的基因的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells ,MSCs) 静脉移植在严重烫伤延迟复苏损伤体内的分布.方法:分离培养MSCs,用Ad-GFP转染MSCs,25只Wistar大鼠随机分为延迟复苏组(A组,10只)、即时复苏组(B组,10只)、假伤组(C组,5只).A、B两组大鼠背部造成Ⅲ度30%烫伤,制备A组为延迟复苏模型,B组为即时复苏模型,同时制备C组为假伤模型,经股静脉移植转染Ad-GFP 48 h后的MSCs.24 h,7 d后取小肠、肝脏、肾脏、烫伤皮肤创缘等组织,快速冰冻切片,荧光显微镜下观察在体内的分布.结果:MSCs 体外分离培养扩增5代,细胞数可达(1～2)×1011个,具有多态性和贴壁生长特性,MOI=100时,Ad-GFP转染MSCs效率可达86.4%.经股静脉移植24 h,在延迟复苏组烫伤皮肤组织创缘,小肠黏膜广泛可见绿色荧光,而在肝、肺等器官少见,即时复苏组荧光以烫伤皮肤创缘分布为主,小肠黏膜较少,假伤组中绿色荧光分布以肝脏为主.延迟复苏组小肠荧光强度明显强于即时复苏组和假伤组(P《0.05),而延迟和即时复苏组皮肤创缘荧光强度又强于假伤组(P《0.05).结论:导入目的基因可能不会改变MSCs归巢特性,并将为后续启动基因治疗烧伤延迟复苏后的损伤研究提供参考.     

脐带间充质干细胞治疗儿童移植相关并发症的疗效观察

目的探讨脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs）治疗异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后儿童急性移植物抗宿主病（acute graft versus host disease,aGVHD）和出血性膀胱炎(hemorrhagic cystitis,HC)的疗效及安全性。方法Allo HSCT后发生aGVHD 15例（合并HC 5例）,难治性aGVHD的13例（合并HC 5例）对一线免疫抑制剂及CD25单抗治疗无效,联合静脉滴注UCMSCs治疗。UCMSCs的平均使用剂量为3.6(1.3～6.0)×106/kg,平均使用次数为5（2～21）次,中位随访时间47（36～73）个月。然后观察aGVHD和HC的恢复、再发情况及UCMSCs治疗相关不良反应。结果13例难治性aGVHD联合UCMSCs治疗后8例完全缓解、5例部分缓解;5例HC患儿经水化、碱化治疗后效果欠佳,联合静脉滴注UCMSCs治疗后有效。未观察到UCMSCs治疗相关不良反应。结论Allo-HSCT后联合UCMSCs治疗儿童aGVHD和HC安全有效。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗唐氏综合征临床观察

目的探讨自体骨髓间充质干细胞移植治疗唐氏综合征患儿的有效性。方法海军总医院儿科自2012年11月—2014年11月收治的骨髓间充质干细胞移植的唐氏综合征患儿51例（年龄0.5～7岁）,骨髓动员后进行骨髓采集间充质分选,分别行右侧侧脑室穿刺1次及腰椎穿刺2次骨髓间充质干细胞移植。每次移植的细胞数为1×106/kg。每例患儿进行Gesell发育诊断量表评估,对术前6个月及术后6个月2个相同长度时间内发育速率进行自身对照观察。同时,对移植术后1、3、6个月患儿的发育情况进行追踪随访。结果51例中1例失访,余50例完成观察。其中32例在术后1~6个月逐渐出现不同程度智力、语言、运动进步,术后6个月患儿细动作能、应物能、应人能进步月份值较术前6个月明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞移植安全可靠,能改善唐氏综合征患儿智力和运动发育水平,且主要表现在情绪、细动作能、应人能及应物能的改善。     

携带血管生成素的骨髓基质干细胞双介入治疗股骨头缺血性坏死的实验研究

目的探讨携带血管生成素基因(Ang-1)的骨髓基质干细胞(MSCs)对股骨头缺血性坏死的治疗疗效。方法用激素建立兔股骨头坏死模型47只随机分为对照组(21只)、实验组(26只)。经颈动脉穿刺,行超选择插管至双侧股骨头供血动脉,缓慢注入携带Ang-1的MSCs,然后经皮穿刺于股骨头钻孔,直接注入携带Ang-1的MSCs,术后2、4、6、8周分别处死动物,于处死动物前后观察骨质及血管情况。结果(1)通过DR值对骨密度进行分析,实验组(治疗组)股骨头密度明显高于同期对照组。(2)CT、MRI灌注成像观察微循环,见实验组的血流量高于同期对照组。(3)DSA可见实验组的新生血管及侧枝循环数目多于同期对照组。(4)实验组在荧光显微镜下见转染pEGFP/Ang-1质粒的MSCs分化的细胞出现绿色荧光,股骨头内高表达Ang-1基因,循环血管增多,成骨细胞增多。结论携带Ang-1的MSCs不仅能促进毛细血管的生成,而且能定向进行骨分化,对股骨头有明显的修复作用。     

黄芪总黄酮对人体正常细胞和肿瘤细胞辐射防护作用的差异性研究

目的 研究黄芪总黄酮(total flayonoids of astragalus,TFA)对60°Co γ射线辐射损伤的人体正常骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)和肝癌细胞HepG-2辐射防护作用的差异性.方法 MTT法检测TFA处理组与单纯照射组hMSCs和HepG-2的细胞活性;HepG-2细胞克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性;流式细胞技术分析细胞凋亡率;Western blot技术分析凋亡相关蛋白Fas,Bcl-2,Bax的表达.结果 MTT检测结果显示,当给予6 Gy γ射线一次性照射后,TFA预处理组hMSCs细胞活性分别比单纯照射组提高了1.15～1.95倍;经相同浓度TFA预处理的肝癌细胞HepG-2的细胞活性仅为单纯照射组的53%～23%;TFA的给药浓度与细胞存活率(survival rate)之间显现出良好的量效关系.细胞克隆形成实验结果显示:TFA+照射组能够明显抑制HepG-2细胞增殖,作用强于单纯TFA给药组和单纯照射组.流式细胞分析表明,经6 Gy γ射线一次性照射6、24和48 h后,TFA预处理组hMSCs的细胞凋亡率分别为23.3%,11.2%和2.9%.单纯照射组hMSCs的细胞凋亡率相应为29.3%,24.9%和13.6%;TFA预处理组肝癌细胞HepG-2的细胞凋亡率分别为11.6%,17.3%和20.1%,单纯照射组HepG-2的细胞凋亡率分别为6.9%、9.3%和15.8%.Western blot分析显示,在肝癌细胞HepG-2中,TFA预处理照射组促凋亡蛋白Fas和Bax 的表达量显著高于单纯照射组和对照组(t=11.17～-2.8,-12.35～3.4,P＜0.05);凋亡抑制蛋白Bel-2的表达量,TFA预处理照射组明显低于单纯照射组和对照组(f<6.36～17.61.P<0.05).结论 TFA对人正常骨髓间充质细胞具有明显的放射防护作用,对肝癌细胞不仅没有放射防护作用反而具有凋亡促进作用;TFA对肝癌细胞的促凋亡作用,主要通过上调促凋亡蛋白Fas和Bax的表达与下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,从而大大增强了60 Co γ射线对肝癌细胞的凋亡诱导作用.

Abstract：

Objective To investigate the different radioprotective effects of total flavonoids of Astragalus (TFA) on human normal mesenchymal stem cells(hMSCs) and hepatoma cells injured by 60 Coγ-ray radiation.Methods hMSCs and HepG-2 cells were cultured and randomly divided into TFA-treated and untreated groups.The cells of different groups were irradiated with 60 Co γ-rays at the dose of 6 Gy.MTT method was utilized to detect the survival rates of the hMSCs and HepG-2 cells pretreated or untreated with TFA before irradiation.Cell clone formation test was used to measure the cellular radiosensitivity.The apoptosis rates of different groups were determined by flow cytometer assay.The expression rates of the apoptosis-promoting proteins Fas and Bax and the apoptosis-inhibiting protein Bcl-2 were analyzed by Western blotting.Results MTT showed that the survival rates of hMSCs pretreated by TFA were 1.15-1.95 times higher than that of the pure irradiation group.On the contrary,the survival rates of the TFA pretreated HepG-2 cells were only 0.53-0.23 times that of the pure irradiation group.There was a good dose-effect relationship between the cell survival rate and the TFA concentration.Cell clone formation rate indicated that combined treatment of TFA and radiation inhibited the cell proliferation more effectively than single TFA or pure radiation.Flow cytometry showed that 6,24 and,48 h post-irradiation to 6 Gy,the apoptosis rates of the hMSCs were 23.3% ,11.2% ,and 2.9% ,respectively in the TFA pretreated group and were 29.3% ,24.9% ,and 13.6% in the pure radiation group.However,the apoptosis rates of the HepG-2 cells at 6,24,and 48 h post-irradiation to 6 Gy were 11.6% ,17.3% ,and 20.1% ,respectively in the TFA pretreated group and were 6.9% ,9.3% ,and 15.8% ,respectively in the direct radiation group.Western blotting showed that the expression levels of Fas and Bax proteins in the HepG-2 cells were significantly higher in the TFA pretreated group than in the pure radiation group.On the contrary,the expression level of the apoptosis inhibiting protein Bcl-2 was significantly lower in the TFA pretreated group than in the pure radiation group.Conclusions TFA has obvious effects of radiological protection on human hMSCs and has no effects of radiological protection but effects of apoptosis enhancement on hepatoma cells.The promotion of apoptosis of TFA on hepatoma cells is primarily through increasing the expression of apoptotic proteins such as Fas and Bax and reducing the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2.     

HRCT findings in idiopathic pneumonia syndrome with documentation of the disease course

Objective

To analyze extent and patterns of lung involvement in patients with idiopathic pneumonia syndrome (IPS) following allogeneic stem cell transplantation (SCT), and demonstrate their course during therapy.

Methods

14 consecutive patients (age 29–64 years, mean 46.2 years) who experienced IPS after allogeneic SCT (as defined by current guidelines of NIH) were treated with either steroids (n = 5), or steroids and the TNF-α blocker etanercept in more severe cases (n = 9). CT-scans obtained before, during and after IPS were evaluated retrospectively. Quantification of pulmonary involvement was performed by visual estimation. Surveillance time ranged from 21 to 914 days with a total of 99 CT-scans (2–12 CT-scans per patient) obtained.

Results

IPS was mainly confined to the central lung regions (71%) with a bilateral and symmetric distribution (71%). Ground-glass opacity (93%) was the prominent CT-morphologic correlate, whereas concomitant consolidation of lung areas (noted in 43% of patients at the time of maximum infiltrates) only occurred in severe courses of IPS (p < 0.01). Favourable courses (50%) showed an earlier peak with respect to extent and CT-attenuation of IPS infiltrates (p < 0.01) followed by a rapid decline (median IPS duration 8 days) whereas a significantly more protracted course was observed in severe (unfavorable) cases (median IPS duration 52 days, p = 0.01). The death rate in the first and the latter groups (all of the severe cases receiving TNF blockage) was 0% and 43%, respectively. Pulmonary sequelae were recorded in almost all patients during follow-up with fibrotic residues.

Conclusion

HRCT-features of IPS are non-specific, but predictable. Response monitoring in IPS can be well accomplished via HRCT and the course of pulmonary infiltrates heralds patient's outcome.