脊髓神经干细胞的研究进展及应用前景

上世纪末,Reynolds等[1]从成年小鼠纹状体中分离出能够在体外不断分裂增殖的具有多分化潜能的细胞群,提出了神经干细胞(neuralstemcell,NSC)的概念。1997年Mckay[2]在Science上指出神经干细胞是指能自我更新、具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞能力的细胞,它具有多分化潜能、自我更新能力和干细胞基本生物学特性。Gage[3]也提出神经干细胞是被用来描述那些能产生神经组织或来源于神经系统、有一定的自我更新能力、能通过不对称分裂产生除它本身以外的细胞。神经干细胞的出现彻底改变了中枢神经系统(CNS)神经元不能再生…     

神经干细胞的生物学特性及应用潜能研究进展

干细胞是存在于动物体内一生的具有多方向分化潜能和自我更新能力的细胞。神经干细胞具有干细胞的共有特征,能够自我更新,具有分化为神经元细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,在中枢神经系统疾病的治疗及生命科学的研究中具有重要意义。现就神经干细胞的一般生物学特性和应用潜能介绍如下。     

Lentivirus介导分泌神经营养因子-3的基因工程神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究

神经干细胞（NSC）是中枢神经系统中具有自我更新能力和多种分化潜能的细胞，是脊髓损伤（SCI）后再生修复的理想材料和基因载体。我们探讨了Lentivirus介导分泌神经营养因子-3（NT-3）的基因工程NSC移植治疗SCI的可行性，以期为SCI后功能恢复的实验研究以及进一步临床研究提供基础资料。     

神经干细胞的研究及其应用

神经干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的一类细胞,在适当条件下可以分化为神经元细胞、星形胶质细胞及少突胶质细胞,开拓了中枢神经系统疾病治疗的新视野,在生命科学研究领域中倍受重视,本文就神经干细胞的概念、生物学特性、来源和分布、增殖分化的影响因素及临床应用等方面进行综述。     

神经干细胞的自发永生化

目的 观察培养达24个月的神经干细胞(NSC)是否会发生永生化和恶变.方法 培养流产胎儿皮层来源的NSC.对培养超过24个月的NSC,分析其核型,检测其自我更新、增殖、衰老以及移植后的致瘤性等.检测其Bmi-1-p16INK4a/p14ARF基因通路的改变.结果 体外培养超过24个月的NSC自我更新旺盛,克隆形成率(14.89±4.75)%,显著高于正常培养8周NSC的(8.04±2.07)%;生长速度快,表现为传代1周后的新生神经球的直径为(85.98±30.24)μm,显著高于体外培养8周NSC的(15.97±9.97)μm.此外,培养超过24个月的NSC衰老细胞为(5.96±2.81)%,远低于正常培养8周NSC的(78.14±8.99)%;而且染色体数目异常,这些结果可以确定其发生了永生化.裸鼠移植未发现致瘤性,所以该细胞未发生恶变.此2株细胞中Bmi-1、p16INK4a、p14ARF基因均缺失.结论 体外长期培养的人类皮层神经干细胞能够自发永生化,表现为不进入衰老状态并不断增殖.其增殖不依赖于Bmi-1基因,而其不衰老状态可能和p16INK4a、p14ARF基因缺失有关.     

神经干细胞转染胶质细胞源性神经营养因子基因后的分化表现

目的观察转基因神经干细胞(NSC)体外外源基因的表达及转基因后的分化。方法体外转基因筛选得到稳定表达胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的脊髓源神经干细胞系(SP-NSC),通过流式分选(FACS),比较转基因前、后及血清对NSC分化为神经元及神经胶质细胞比例的变化;并采用Westernblot法检测传代后目的基因的表达。结果转基因后GDNF表达至少能稳定到转基因后6周;转基因后NSC分化为神经元的比例由转基因前(53.9±3.5)%提高到转基因后的(67.5±1.2)%,而血清组胶质细胞分化明显。结论SP-NSC转染GDNF后能稳定表达目的基因,转基因能显著增加后裔细胞中神经元比例,为转基因治疗中枢神经系统疾病研究奠定了基础。     

神经干细胞移植在神经系统疾病治疗中的应用

神经干细胞(NSC)来源于胚胎或者成体,能自我更新,可以分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞等,具有低免疫原性.NSC在体外能大量增殖,移植后在神经系统长期存活,并能分化整合到宿主中枢神经系统中.     

胶质瘤干细胞趋化神经干细胞迁移及其机制研究

目的 观察神经干细胞( NSC)向胶质瘤干细胞(GSC)及其分化细胞的迁移能力,探讨其趋化机制。方法 干细胞条件培养U251和3例原代胶质瘤干细胞,以流式细胞术和Western blot对其鉴定;Transwell小室法检测GSC和其分化细胞条件培养液(CM)对NSC迁移的趋化能力;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测CM中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的分泌水平,并以表皮生长因子(EGF)、bFGF为对照分析CM对NSC的化学趋化作用;进一步以Dio和Dil分别标记NSC和GSC,体外混合培养观察NSC向GSC的迁移、以及对肿瘤干细胞球生长的影响。结果 干细胞培养条件下的胶质瘤干细胞球,高表达干细胞标志物Nestin和/或CD133( 11.02％～ 33.55％);分化后干细胞标志物表达下降,分化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达增加(P＜0.05);GSC与其分化细胞比较,分泌高水平的趋化因子VEGF和bFGF(P ＜0.05),并对NSC有高度趋化能力;体外混合接触培养也显示NSC向肿瘤干细胞球的迁移和包绕,并且能够显著抑制肿瘤干细胞球的生长(P＜0.05)。结论 GSC体外可趋化NSC向其迁移,其趋化作用较分化的肿瘤细胞更为显著,并且与其分泌高水平的生长因子有关;向肿瘤干细胞球迁移的NSC可抑制其体外生长。     

神经干细胞和施万细胞共移植治疗大鼠脊髓损伤

目的 观察神经干细胞和和施万细胞共移植治疗脊髓损伤的可行性。方法 体外培养胚胎脊髓源神经干细胞和施万细胞，将两种细胞共同移植到大鼠脊髓损伤部位，免疫组织化学染色鉴定神经干细胞在脊髓内的分化情况并观察记录大鼠行为学功能的恢复程度。结果 神经干细胞体外培养血清诱导分化可见大量具有少突胶质细胞特征的分化细胞，与施万细胞共培养则可促进神经干细胞向神经元方向分化。两种细胞共移植至脊髓损伤部位后，施万细胞可以促进神经干细胞的分化和成熟；共移植可以促进脊髓功能的恢复。结论 神经干细胞在体内和体外都具有多向分化能力，且其分化方向和成熟程度可以被多种环境因子所调控。神经干细胞和施万细胞共移植可以促进脊髓功能恢复。     

神经干细胞的分离培养及体外分化

目前 ,脊髓损伤的修复和治疗 ,仍然是一个难以解决的世界性难题。虽然在动物实验中已取得了一些令人鼓舞的进展 ,但至今未找到一种能用于临床的有效方法。神经干细胞(neuralstemcells ,NSCs)的发现为中枢神经系统 (centralner voussystem ,CNS)损伤修复及某些疾病的治疗带来了新的希望。因其具有很强的分裂、增殖和自我更新能力 ,人们把它视为中枢神经系统移植和替代治疗的理想材料。近年来神经干细胞的研究作为生命科学界的热点受到广泛关注。本文就神经干细胞的分离、培养及其体外分化作一综述 ,重点在于人神经干细胞的研究。1　啮齿动…     

神经干细胞向神经元分化过程中EphrinB2基因的表达

神经干细胞(NSC)的分化调控使其向神经元分化,是将神经干细胞应用于中枢神经系统移植和替代治疗的关键。EphrinB2基因主要在神经细胞间相互作用、神经轴突导向和神经发育等方面具有重要的作用[1] 。本实验旨在研究EphrinB2基因在全反式维甲酸(ATRA)诱导人胚胎神经干细胞向神经元分化过程中的表达和所起的作用。一、材料和方法Hoechst3 3 3 42、ATRA、DMEM、F12细胞培养基和N2添加剂、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF ,美国Sigma公司)。表皮生长因子(EGF ,美国Invitrogen公司) ,小鼠抗人Nestin抗体(美国Bdbio science公司) ,小鼠抗…     

大鼠神经干细胞与小鼠雪旺细胞混合培养的研究

外培目的观察小鼠雪旺细胞体养时对大鼠神经干细胞存活及分化的影响。方法获取Wistar鼠坐骨神经并采用组织块法分离和纯化雪旺细胞；体外分离新生乳鼠脑神经干细胞，将雪旺细胞和神经干细胞分别培养扩增后进行共培养。共分5组进行：实验组1（NSC悬浮＋SC悬浮＋DMEM／F12）；实验组2（NSC悬浮＋SC贴壁＋DMEM／F12）；试验对照组1（SC培养基＋NSC＋DMEM／F12）；试验对照组2（EGF／bFGF＋NSC＋DMEM／F12）；试验对照组3（NSC＋DMEM／F12）。倒置相差显微镜对各组培养细胞每天观察形态和计数，免疫组织化学检测混合培养细胞特异性标记物的表达：SC采用P0和S100，NS采用nestin标记，神经干细胞分化神经元分别采用GFAP、GalC、Tubulin-β染色。结果共培养组NF染色阳性神经元样细胞的百分率明显高干其他各组；实验组1克隆球直径明显高于其他各组，其平均直径为8μm；实验组神经元样细胞突起的长度比对照组的长，3周长度差为26．5-67．3μm。结论大鼠神经干细胞与小鼠雪旺细胞共培养使两者不仅能够共生，而且雪旺细胞能显著促进体神经干细胞分化为神经元样细胞；神经干细胞分化神经元突起增长并且有序排列成轴索样结构。     

骨髓间充质干细胞移植修复脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤的治疗目前仍然是世界性难题,至今未能有理想的方法.随着对中枢神经再生研究的深入,尤其是1992年Revnolds等从成年鼠脑中首先分离出神经干细胞（NSC）,1998年Eriksson等证实成人脑部存在NSC后.人们对神经再生和神经疾病的治疗有了新的认识.然而内源性NSC在神经受损时因量少且缺乏正向信号的激活,无法进行组织修复;外源性NSC又不易获取,从活体组织中获得NSC具有危险性,而从胚胎中获得NSC又涉及伦理问题,不能满足大量的临床及实验需要,寻找一种新的神经干细胞或神经细胞的来源对于中枢神经系统移植治疗至关重要.     

神经干细胞在脊髓损伤中的应用前景

近年来,神经干细胞治疗脊髓损伤成为一大热点。在认识了干细胞“自我复制和更新、永分化、多向分化”的特点后,科学家们采用先进的实验手段发现,脊髓损伤后具有干细胞特征的室管膜细胞的增殖、表达及移行呈一定的变化规律,并在此基础上探讨了神经干细胞体外培养、增殖后移植,利用基因工程修饰体外培养的干细胞,以及分化诱导自体干细胞修复中枢神经病损,均取得了可喜的结果。本文综述了这方面的内容,以期对脊髓损伤后的治疗在基础和临床上提供一点借鉴。     

精原干细胞自我更新与分化的调控

精原干细胞(SSCs)是精子发生过程的起源,有独特的复制方式:一次分裂可形成两个分化细胞,也可形成一个分化细胞和一个干细胞,这种自我更新和分化受到严密的调控,包括微环境、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、多种信号通路等。本文综述SSCs的自我更新与分化及其调节机制,对于深入了解精子发生及男性精子发生障碍性不育、探讨睾丸肿瘤发生和寻找新的潜在治疗靶点等诸多方面有理论意义。     

人脂肪干细胞(ADSCs)体外培养的研究及应用进展

干细胞是一类具有自我更新与增殖能力的细胞,按其分化阶段不同分为胚胎干细胞与成体干细胞,目前对成体干细胞的研究较为广泛。人的脂肪干细胞(adipase derived stem cells,ADSCs)是来源于脂肪组织的干细胞,具有自我更新及多向分化的能力,在适宜诱导条件下可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。自从2001年ZUK[1]首次通过吸     

缺氧诱导小鼠神经干细胞诱导型一氧化氮合酶的表达

目的　探讨缺氧对小鼠神经干细胞 (NSC)中诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)表达的诱导作用。方法　用含表皮生长因子的培养基原代培养NSC ;用免疫组织化学法检测在急性缺氧诱导下iNOS的表达 ;在每张免疫组织化学图像中随机选取 10个细胞 ,用图像分析系统分析经不同缺氧时间处理后平均灰度级变化 ,其灰度级均数间接反映酶表达强度的改变。结果　原代培养的细胞能连续增殖并分化为神经元及神经胶质细胞样细胞 ;行免疫组织化学检测 ,在一般培养条件下 ,NSC及分化细胞中iNOS呈阴性表达 ;经缺氧处理后呈阳性表达。图像分析缺氧诱导 10、3 0min与非缺氧组灰度级均数分别为 :15 8.7± 5 .95、12 8.4± 5 .73、2 0 0 .3± 5 .5 5。结论　用缺氧方法能诱导NSC表达iNOS ,其表达强度与缺氧时间呈正相关。第四军医大学西京医院全军神经外科研究所     

精原干细胞龛境研究进展

精原干细胞是一群能够自我更新并具有多向分化潜能的永生细胞。＂干细胞龛＂理论最初是在造血系统中提出来的,龛同样也存在于睾丸组织中。精原干细胞龛在睾丸中是半开放的隔离体系,具有特定的数量调控及随年龄变化的特征。两种内源性因子nanos2和Plzf调控精原干细胞自我更新。龛细胞分泌因子胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）也调节精原细胞的更新。     

精原干细胞龛境研究进展

精原干细胞是一群能够自我更新并具有多向分化潜能的永生细胞。"干细胞龛"理论最初是在造血系统中提出来的,龛同样也存在于睾丸组织中。精原干细胞龛在睾丸中是半开放的隔离体系,具有特定的数量调控及随年龄变化的特征。两种内源性因子nanos2和Plzf调控精原干细胞自我更新。龛细胞分泌因子胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)也调节精原细胞的更新。     

成年大鼠神经干细胞的体外培养和鉴定

1992年Reynolds和Weiss发现,在胚胎及成年中枢神经系统(central nervous system,CNS)室管膜下区,存在一群具有多向分化潜能和自我更新及克隆性扩增的细胞.近年来的研究发现,神经再生是成年哺乳动物大脑中普遍存在的现象,由成年神经干细胞进行的神经再生,对于生理状态下的多种神经活动和病理状态下大脑功能的修复有着重要意义.笔者从成年大鼠大脑海马中分离培养了具有干细胞特征的细胞,对成年神经干细胞进行了初步的研究.