构建适合骨髓衍生肝千细胞移植的小鼠酒精性肝纤维化模型

目的:建立适合骨髓衍生肝干细胞移植的小鼠酒精性肝纤维化模型,为移植骨髓衍生肝干细胞对酒精性肝损伤修复的研究提供进一步探讨的价值。方法:实验于2006-02/06在南方医科大学实验动物中心完成。取Balb/c雌性小鼠100只,SPF级,5～6周龄,体质量15～18g,随机区组法分为造模组92只,对照组8只。用白酒灌胃法建立小鼠酒精性肝纤维化模型。造模组于灌胃的第4,8,12,16周末分别随机选取6只小鼠,眼球采血后,颈椎脱臼处死,取出肝脏,以100g/L的甲醛固定,石蜡包埋切片,苏木精-伊红染色和苦味酸-酸性复红染色,光镜观察病理变化。血标本用于测定生化及肝纤维化指标。对照组以等量的蒸馏水灌胃,于实验的第16周末处死,处理同造模组。组间比较采用单因素方差分析。结果:纳入Balb/c雌性小鼠100只,实验中造模组共23只小鼠死亡,多为急性和亚急性死亡。对照组全部成活。①灌胃初期,造模组小鼠出现精神萎靡等现象,实验开始4周后上述症状减轻,对照组小鼠则食欲正常,无嗜睡现象。②在实验刚开始1周时小鼠体质量(15.67±0.98)g,与实验开始时(16.38±0.58)g相比呈明显负增长(P<0.05)。第4,8,12,16周称质量时,造模组小鼠体质量[(16.17±0.91),(17.23±1.39),(18.27±0.85),(19.31±0.95)g]均明显低于对照组[(18.31±0.57),(19.52±0.85),(20.56±0.86),(21.41±0.95)g],(P<0.05)。③对照组小鼠肝脏表面光滑细润、色红等。造模组小鼠肝脏色泽较正常肝脏暗淡,表面充血,肝脏呈增大趋势。造模组小鼠的肝重比(肝脏湿重/小鼠体质量×100%)均大于对照组。④造模组4周时可见轻度酒精性脂肪肝病理改变,12周时酒精性肝炎改变加重并出现了纤维组织增生,16周时肝纤维化已明显形成。⑤不同时间点与对照组相比,血清中天冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转氨酶、天冬氨酸氨基转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶、三酰甘油均呈升高的趋势:造模第8周后,天冬氨酸氨基转氨酶和三酰甘油的水平均逐步增高,尤其以天冬氨酸氨基转氨酶升高明显。⑥小鼠血清肝纤维化指标的变化:造模第8周后血清中透明质酸和层粘连蛋白的水平均逐步增高,与对照组相比,差异均有显著性意义。结论:应用酒精灌胃法可成功建立小鼠酒精性肝纤维化模型,为骨髓衍生肝干细胞的移植提供了前期的实验研究。     

剪切波弹性成像评价γ-干扰素对兔肝纤维化治疗效果的实验研究

目的探讨剪切波弹性成像在评价γ-干扰素对兔肝纤维化治疗效果中的应用价值。方法将52只大白兔随机分为肝纤维化造模组46只和正常对照组6只。正常对照组兔皮下注射生理盐水造模;肝纤维化造模组兔皮下注射四氯化碳和橄榄油混合制剂(剂量比1∶1)造模,于第8周从肝纤维化造模组中随机抽取32只兔分为γ-干扰素干预组(24只)和肝纤维化模型组(8只);γ-干扰素干预组又分为大剂量组、中剂量组、小剂量组,每组各8只,分别给实验兔每天皮下注射γ-干扰素15.0万U/kg、5.5万U/kg、2.0万U/kg进行干预治疗,于第12周末对γ-干扰素干预组、肝纤维化模型组和正常对照组兔肝脏行剪切波弹性成像、血清学指标和病理检查,分析肝脏杨氏模量均值(Emean)和肝纤维化四项指标(透明质酸、层粘蛋白、Ⅲ型前胶原氨基端肽、Ⅳ型胶原)与γ-干扰素干预后肝脏纤维化病理分期的相关性,以及两者对肝纤维化分期的诊断效能。结果正常对照组、γ-干扰素干预组、肝纤维化模型组兔肝脏体积、外观颜色、肝下缘锐利程度及被膜厚度均有明显差异。大、中、小剂量γ-干扰素干预组肝脏Emean值[(7.65±1.38)kPa、(12.06±1.64)kPa、(12.77±1.74)kPa]均较肝纤维化模型组[(20.38±1.48)kPa]显著降低,差异均有统计学意义(均P0.05)。γ-干扰素干预后肝脏Emean值与肝纤维化程度呈高度线性相关(r=0.935,P=0.000),其评价肝纤维化病理分期≥S1、≥S2、≥S3、S4的ROC曲线下面积均大于肝纤维化四项指标,敏感性和特异性均88.8%。结论剪切波弹性成像可对γ-干扰素干预后的兔肝纤维化分期予以量化评估,能够客观、敏感地反映γ-干扰素的疗效,具有较好的临床应用价值。     

牡蛎肝宝对乙醇所致小鼠肝损伤的保护作用及其抗脂质过氧化效应

目的:了解牡蛎肝宝对乙醇所致肝病的保护作用及其抗脂质过氧化效果,为酒精性肝病的治疗提供新的途径。方法:实验于2005-08/2006-02在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。选择健康雌性昆明种小鼠60只,分为5组,每组12只。分为牡蛎肝宝(由中国海洋大学提供,批号为Q-02DEK001-2005,从胶州湾优质海洋生物牡蛎、扇贝、蛤蜊等提炼出的有效生物活性成分,剂量为0.4g/粒,推荐量为6粒/d)0.13,0.40,1.20g/kg(相当于人体推荐剂量的3.3,10,30倍)组,用蒸馏水稀释至所需浓度,灌胃量20mL/kg;同时设空白对照组和乙醇肝损伤模型组,乙醇肝损伤模型组用无水乙醇(分析纯),以蒸馏水稀释至50%,灌胃量12mL/kg(4800mg/kg)。空白对照组和乙醇肝损伤模型组给予蒸馏水灌胃,连续35d,1次/d。第35天各剂量牡蛎肝宝组及乙醇肝损伤模型组50%乙醇灌胃(12mL/kg)制备急性肝损伤模型,1h后各剂量牡蛎肝宝组再灌胃给予牡蛎肝宝,空白对照组和乙醇肝损伤模型组给予蒸馏水。观察各组动物体质量变化;牡蛎肝宝对肝组织中丙二醛、还原型谷胱甘肽、三酰甘油的影响;牡蛎肝宝对肝脏病理组织学变化。结果:60只小鼠均进入结果分析。①1.20g/kg牡蛎肝宝组动物实验后体质量及0.13,1.20g/kg牡蛎肝宝组的增重均低于乙醇肝损伤模型组,差异有显著性意义[分别为(27.9±2.1),(29.6±2.0)g;(9.0±2.1),(9.3±1.8),(11.2±1.9)g,P<0.05]。②1.20g/kg牡蛎肝宝组小鼠肝组织中还原型谷胱甘肽高于乙醇肝损伤模型组,差异有显著性意义[分别为(5.1±0.8),(3.7±0.5)μmol/g,P<0.05];1.20g/kg牡蛎肝宝组小鼠肝组织中的丙二醛、三酰甘油低于乙醇肝损伤模型组,差异有显著性意义[分别为(67.2±39.2),(157.2±37.1)nmol/g;(5.40±1.32),(10.20±3.58)mg/g,P<0.05]。③乙醇肝损伤模型组肝脏病理改变的程度高于空白对照组,差异有显著性意义(P<0.01);0.40,1.20g/kg牡蛎肝宝组肝脏病理改变的程度均低于乙醇肝损伤模型组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:牡蛎肝宝对乙醇所致的肝损伤有一定的保护作用。     

益舒软肝丸逆转肝硬化的机制

目的:探讨益舒软肝丸对肝硬化模型的逆转及其作用机制。方法:实验于2004-10/2006-03在三峡大学医学院天然药物实验室完成。①选取雄性Wistar大鼠48只,随机数字表法分为正常对照组8只、模型对照组12只、益舒软肝丸0.4g/kg组10只、益舒软肝丸0.8g/kg组9只、益舒软肝丸1.6g/kg组9只。益舒软肝丸由蛴螬、虻虫、冬虫夏草、水蛭、鳖甲、桃仁等中药组成,宜昌县人民医院药剂科制备,实验中用双蒸水配成混悬液。②除正常对照组外,其余各组均采用CCL4复合因素法建立肝硬化模型。造模后,益舒软肝丸0.4,0.8,1.6g/kg组分别给予对应剂量的益舒软肝丸混悬液灌胃,1次/d,连续灌胃12周;并持续背部皮下注射CCL40.3mL/100g,1次/周,共12周。正常对照组、模型对照组同时间点灌服生理盐水1mL/只。③第12周末禁食12h后,大鼠麻醉后开胸,心脏采血,分离血清,-20℃保存。取左中叶相同部位制作病理石蜡切片,苏木精-伊红染色观察组织形态学变化,苦味酸酸性品红染色观察纤维增生程度,免疫组织化学检测转化生长因子β1和基质金属蛋白酶抑制因子1阳性表达总面积。余下肝脏置于塑料薄膜袋,迅速封口置于-80℃冰箱,制备肝组织匀浆,检测羟脯胺酸、丙二醛含量及超氧化物歧化酶水平。结果:正常对照组8只大鼠无死亡。造模后,模型对照组死亡4只,益舒软肝丸0.4,0.8,1.6g/kg组各死亡3,2,2只。①肝功能检测结果:与模型对照组比较,益舒软肝丸0.4,0.8,1.6g/kg组均可明显降低血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平[(3.66±1.00),(2.72±0.39),(2.98±0.84),(2.82±0.23)nkat/L;(11.00±2.18),(7.80±1.32),(9.56±3.09),(9.92±2.48)nkat/L;P<0.01或0.05],提高胆碱酯酶水平[(16.65±1.88),(16.94±3.37),(18.13±2.68),(20.31±4.11)nkat/L;P<0.05],白蛋白/球蛋白水平无明显变化(P>0.05)。②肝纤维化相关指标检测结果:与模型对照组比较,益舒软肝丸0.4,0.8,1.6g/kg组均可明显降低透明质酸、层粘连蛋白、PⅢNP胶原水平[(132.67±40.31),(99.67±30.79),(96.63±36.04),(92.30±27.95)μg/L;(72.40±13.36),(60.87±12.30),(56.87±17.41),(59.63±6.29)μg/L;(41.34±6.40),(35.87±5.84),(31.57±11.13),(39.01±8.23)μg/L;P均<0.05]。③肝组织生化指标检测结果:与模型对照组比较,益舒软肝丸0.4,0.8,1.6g/kg组均可明显降低羟脯胺酸、丙二醛含量[(205.4±22.98),(162.25±17.37),(161.62±34.32),(152.09±24.60)pg/L;(16.56±3.87),(12.21±3.80),(11.87±3.14),(11.85±1.34)μg/L;P<0.01或0.05],超氧化物歧化酶水平无明显变化(P>0.05)。④肝组织形态学观察结果:正常对照组肝小叶结构清晰完整,未见纤维组织异常增生。模型对照组肝小叶结构破坏,肝细胞索排列紊乱,纤维组织大量异常增生,形成假小叶。益舒软肝丸各剂量组肝小叶结构基本完整,有少量胶原纤维增生,未见假小叶结构。⑤肝组织免疫组化半定量分析结果:与模型对照组比较,益舒软肝丸0.4,0.8,1.6g/kg组转化生长因子β1和基质金属蛋白酶抑制因子1阳性总面积均有不同程度减少[(6.33±1.16),(6.28±0.88),(5.11±0.92),(5.83±0.96)μm2;(624.82±237.11),(282.48±139.28),(80.75±28.28),(246.29±155.65)μm2;P<0.01或0.05]。结论:益舒软肝丸具有明显的抗肝硬化作用,其作用机制可能与以下因素有关:①改善肝功能。②降低丙二醛水平,减轻肝细胞损伤,逆转肝硬化病理形态结构。③下调肝硬化组织转化生长因子β1和基质金属蛋白酶抑制因子1的表达,抑制细胞外基质的合成和胶原增生、沉积。     

肝纤克对实验性肝损伤及肝纤维化的干预作用

目的：观察中药别甲、大贝等复方肝纤克对实验性肝损伤及肝纤维化的保护作用。 方法：①实验于2004-03／2005-01在三峡大学天然药物重点实验室完成。选用昆明系小鼠90只，Wistar大鼠90只。雌雄不拘。肝纤克主要成分为别甲、大贝、玳瑁、蚤休、田七、白花蛇等，由三峡大学医学院药理学教研室自制。②观察肝纤克对硫代乙酰胺致小鼠肝纤维化的影响：取昆明系小鼠30只，随机分为3组：对照组：以生理盐水0．2mL／只，灌胃；肝纤克低和高剂量治疗组：以100s／L肝纤克0．2和0．5mL／只，灌胃，1次／d，共3d。于末次给药后24h，各鼠均腹腔注射硫代乙酰胺50mg／kg。并如上法重复给药1次。再过24h后取小鼠眼眶血，以赖氏法测定血清谷丙转氨酶水平。③观察肝纤克对氢基半乳糖致小鼠肝纤维化的影响：取昆明系小鼠30只，分组及组名同上。然后腹腔内注射D-氨基半乳糖500mg／kg。72h后取小鼠眼眶血，以赖氏法测定谷丙转氨酶水平。④观察肝纤克对四氯化碳致小鼠肝纤维化的影响：取昆明系小鼠30只，分组及组名同上。末次给药后24h，各鼠腹腔注射1s／L四氯化碳石腊油10mL／kg，并如上法再给药1次。24h后取小鼠眼眶血，以赖氏法测定谷丙转氨酶水平。⑤观察肝纤克对四氯化碳致大鼠慢性肝纤维化的影响：取Wistar大鼠90只，随机分为6组：空白对照组（给予正常饮食，不给任何药物）；盐水对照组：造成肝纤维化模型后[以1g／L四氯化碳石蜡油（0．2mL／只）作背部皮下注射，每隔3d1次，共45d，12次进行造模]，以生理盐水进行干预；预防性肝纤克低和高剂量治疗组：造成肝纤维化模型的同时，分别用0．5和1．0s／kg肝纤克，灌胃进行预防性治疗．1次／d；肝纤克低和高剂量治疗组：造模后．分别用0．5和1．0g／kg肝纤克进行治疗。治疗各组均用肝纤克干预60d。于末次注射1g／L四氯化碳石蜡油24h后，从盐水对照组中随机取2只大鼠处死。做肝脏组织切片．以检查成型情况。肝纤克干预60d后，自大鼠尾部取血，检查血清谷丙转氨酶水平，并以对硝基磷酸酚动态法血清碱性磷酸酶水平。统计肝纤维化的发生率。⑥根据组织形态学变化，将肝纤维化分为轻度（汇管区结缔组织增生，并轻度向小叶内伸展，汇管区因而增宽，伴少量慢性炎性细胞浸润），中度（汇管区有明显的纤维结缔组织增生，并较明显地向小叶内伸展，伴较多慢性炎性细胞浸润，肝小叶结构被重新划分，但尚无典型假小叶形成），重度（除上述表现加重外，有典型假小叶形成）。⑦计量和计数资料差异比较分别采用t检验和x^2检验。 结果：小鼠90只和大鼠90只均进入结果分析。①肝纤克低剂量和高剂量治疗组硫代乙酰胺、氨基半乳糖、四氯化碳致肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶水平明显低于对照组（P〈0．05，0．01）。②肝纤克治疗各组及空白对照组四氯化碳致慢性肝纤维化大鼠血清谷丙转氨酶和碱性磷酸酶水平均明显低于盐水对照组（P〈0．05-0．01），肝纤克治疗各组接近空白对照组。硬防性肝纤克低和高剂量治疗组肝纤维化发生率均明显低于盐水对照组（P〈0．01），肝纤维化程度低，多为轻度。肝纤克低和高剂量治疗组与盐水对照组接近。多呈肝纤维化重度表现。 结论：①肝纤克对硫代乙酰胺致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。②当预防性给药时，肝纤克既可保护肝脏的功能叉可抑制肝纤维化的形成，而当肝纤维化形成后治疗性给药时，肝纤克虽能保护肝脏的功能。但却不能消除或缓解已经形成的纤维化变化。     

肝纤克对实验性肝损伤及肝纤维化的干预作用

目的:观察中药别甲、大贝等复方肝纤克对实验性肝损伤及肝纤维化的保护作用。方法:①实验于2004-03/2005-01在三峡大学天然药物重点实验室完成。选用昆明系小鼠90只,Wistar大鼠90只,雌雄不拘。肝纤克主要成分为别甲、大贝、玳瑁、蚤休、田七、白花蛇等,由三峡大学医学院药理学教研室自制。②观察肝纤克对硫代乙酰胺致小鼠肝纤维化的影响:取昆明系小鼠30只,随机分为3组:对照组:以生理盐水0.2mL/只,灌胃;肝纤克低和高剂量治疗组:以100g/L肝纤克0.2和0.5mL/只,灌胃,1次/d,共3d。于末次给药后24h,各鼠均腹腔注射硫代乙酰胺50mg/kg,并如上法重复给药1次。再过24h后取小鼠眼眶血,以赖氏法测定血清谷丙转氨酶水平。③观察肝纤克对氨基半乳糖致小鼠肝纤维化的影响:取昆明系小鼠30只,分组及组名同上。然后腹腔内注射D-氨基半乳糖500mg/kg。72h后取小鼠眼眶血,以赖氏法测定谷丙转氨酶水平。④观察肝纤克对四氯化碳致小鼠肝纤维化的影响:取昆明系小鼠30只,分组及组名同上。末次给药后24h,各鼠腹腔注射1g/L四氯化碳石腊油10mL/kg,并如上法再给药1次。24h后取小鼠眼眶血,以赖氏法测定谷丙转氨酶水平。⑤观察肝纤克对四氯化碳致大鼠慢性肝纤维化的影响:取Wistar大鼠90只,随机分为6组:空白对照组(给予正常饮食,不给任何药物);盐水对照组:造成肝纤维化模型后[以1g/L四氯化碳石蜡油(0.2mL/只)作背部皮下注射,每隔3d1次,共45d,12次进行造模],以生理盐水进行干预;预防性肝纤克低和高剂量治疗组:造成肝纤维化模型的同时,分别用0.5和1.0g/kg肝纤克,灌胃进行预防性治疗,1次/d;肝纤克低和高剂量治疗组:造模后,分别用0.5和1.0g/kg肝纤克进行治疗。治疗各组均用肝纤克干预60d。于末次注射1g/L四氯化碳石蜡油24h后,从盐水对照组中随机取2只大鼠处死,做肝脏组织切片,以检查成型情况。肝纤克干预60d后,自大鼠尾部取血,检查血清谷丙转氨酶水平,并以对硝基磷酸酚动态法血清碱性磷酸酶水平。统计肝纤维化的发生率。⑥根据组织形态学变化,将肝纤维化分为轻度(汇管区结缔组织增生,并轻度向小叶内伸展,汇管区因而增宽,伴少量慢性炎性细胞浸润),中度(汇管区有明显的纤维结缔组织增生,并较明显地向小叶内伸展,伴较多慢性炎性细胞浸润,肝小叶结构被重新划分,但尚无典型假小叶形成),重度(除上述表现加重外,有典型假小叶形成)。⑦计量和计数资料差异比较分别采用t检验和χ2检验。结果:小鼠90只和大鼠90只均进入结果分析。①肝纤克低剂量和高剂量治疗组硫代乙酰胺、氨基半乳糖、四氯化碳致肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶水平明显低于对照组(P<0.05,0.01)。②肝纤克治疗各组及空白对照组四氯化碳致慢性肝纤维化大鼠血清谷丙转氨酶和碱性磷酸酶水平均明显低于盐水对照组(P<0.05～0.01),肝纤克治疗各组接近空白对照组。预防性肝纤克低和高剂量治疗组肝纤维化发生率均明显低于盐水对照组(P<0.01),肝纤维化程度低,多为轻度。肝纤克低和高剂量治疗组与盐水对照组接近,多呈肝纤维化重度表现。结论:①肝纤克对硫代乙酰胺致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。②当预防性给药时,肝纤克既可保护肝脏的功能又可抑制肝纤维化的形成,而当肝纤维化形成后治疗性给药时,肝纤克虽能保护肝脏的功能,但却不能消除或缓解已经形成的纤维化变化。     

Toll样受体3基因缺陷促进四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化损伤

目的:探讨Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)基因缺陷对于四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠模型肝纤维化损伤程度的影响。方法:将20只野生型雄性小鼠和20只TLR3基因缺陷型(TLR3-/-)雄性小鼠分别分为野生型对照组、野生型造模组、TLR3-/-对照组和TLR3-/-造模组,每组各10只。对照组腹腔注射玉米油,造模组腹腔注射四氯化碳。造模8周后采集血液标本,应用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、白蛋白(albumin,ALB)水平;采用马松三色染色法对肝组织胶原沉积程度进行分析;采用α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)免疫组织化学染色法检测肝星状细胞的激活情况;应用试剂盒检测肝组织中的羟脯氨酸含量;采用实时荧光定量PCR法检测肝组织中纤维化标志物Ⅰ型胶原、炎性因子[包括肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(interleukin-6,IL-6)和单核细胞趋化因子1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)]以及促纤维化分子[包括转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)和血小板衍生生长因子受体(platelet-derived growth factor receptor,PDGFR)]的表达。结果:TLR3基因缺陷对于四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠血清中的ALT、AST、TBIL、ALB水平变化无影响。TLR3基因缺陷可加重四氯化碳诱导的肝组织胶原沉积和肝星状细胞激活;促进四氯化碳诱导的小鼠肝组织中羟脯氨酸的升高;使四氯化碳诱导的肝纤维化标志物Ⅰ型胶原增多,也使肝组织中炎性因子TNF-α、IL-6和MCP-1以及促纤维化分子TGF-β、TIMP1和PDGFR表达升高。结论:TLR3基因缺陷可促进四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝组织中的胶原沉积和肝星状细胞激活,促进肝组织炎性因子释放,使肝促纤维化分子上调。以上提示,TLR3是肝纤维化病理过程中的一个保护性基因。     

整合素β1在肝纤维化中的表达

目的:观察黏附分子整合素β1在肝纤维化中的表达情况。方法:实验于2005-03在上海市第十人民医院中心实验室完成。①实验分组:雄性SD大鼠20只,随机分为肝纤维化模型组10只和正常对照组10只。②实验干预:正常对照组不给予任何干预措施正常喂养,肝纤维化模型组给予400g/LCCl47.5mL/kg腹壁皮下注射造模,于造模后12周处死动物,取1cm×1cm×1cm肝组织备用。③指标检测:反转录-聚合酶链反应半定量检测整合素mRNA在肝组织中的表达;常规苏木精-伊红染色了解肝纤维化的程度。结果:20只大鼠均进入结果分析。①整合素在正常肝脏和肝纤维化阶段均有表达;正常对照组整合素β1的表达量低于模型对照组(66.81±4.36,83.39±4.04,P<0.01)。②肝纤维化模型组大鼠肝组织可见肝细胞广泛的变性坏死,正常小叶结构消失。在高倍镜下可见纤维隔形成。结论:整合素β1在正常和病理肝脏均有表达,在肝纤维化过程中表达明显增高。     

TLR3基因缺陷的肝纤维化小鼠血生化指标、肝组织纤维化标志物及炎性因子变化

目的分析Toll样受体3(TLR3)基因缺陷的肝纤维化小鼠血生化指标、肝组织纤维化标志物及炎性因子变化。方法将18只野生型雄性小鼠随机分为空白造模组和空白对照组,两组各9只;将18只TLR3基因缺陷型雄性小鼠随机分为TLR3造模组和TLR3对照组,两组各9只。空白造模组和TLR3造模组均注射四氯化碳,而空白对照组与TLR3对照组均注射玉米油。造模2个月后,采集血液标本,通过全自动生化分析仪对血清白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平进行测定。比较各组小鼠肝组织纤维化标志物(Ⅰ型胶原)表达水平和肝组织炎性因子如白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达水平。结果空白造模组ALB水平较空白对照组明显降低,TBIL、AST及ALT等血生化指标的水平较空白对照组均显著升高(P0.01);TLR3造模组ALB水平较空白对照组明显降低,TBIL、AST及ALT等血生化指标的水平较TLR3对照组均显著升高(P0.01),但与空白造模组比较,均无显著差异(P0.05)。空白造模组肝组织纤维化标志物(Ⅰ型胶原)表达水平较空白对照组显著升高(P0.01);TLR3造模组Ⅰ型胶原表达水平较空白造模组、TLR3对照组均显著升高(P0.01)。空白造模组IL-6、TNF-α及MCP-1等肝组织炎性因子表达水平较空白对照组显著升高(P0.05);TLR3造模组炎性因子水平较空白造模组、TLR3对照组均显著升高(P0.05)。结论 TLR3基因缺陷的肝纤维化小鼠经四氯化碳诱导后,Ⅰ型胶原等肝纤维化标志物的水平明显升高,并且IL-6、TNF-α及MCP-1等肝组织炎性因子表达亦明显上升,提示TLR3可能是一种保护性基因,在肝纤维化疾病发生及发展中起到阻滞肝组织炎性因子等重要作用。     

骨髓源性肝样细胞门静脉移植大鼠肝纤维化模型

背景:研究已证明,骨髓间充质干细胞在体内、体外均可转化为肝细胞样细胞,并具有肝细胞的合成和分泌功能.目的:将骨髓间充质干细胞诱导分化的肝样细胞移植到同种大鼠已纤维化的肝脏,观察其分布、分化情况及对肝功能的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/2008-03在泸州医学院附属医院实验室完成.材料:100 g清洁级雄性SD大鼠10只用于分离培养骨髓间充质干细胞并诱导分化为肝样细胞.200～250 g清洁级雄性SD大鼠75只,随机分为肝样细胞移植组30只,模型对照组30只,正常对照组15只.肝样细胞移植组及模型对照组大鼠腹腔注射四氯化碳制备肝纤维化动物模型.方法:模型对照组和正常对照组大鼠门静脉输注不含血清的低糖DMEM培养基,肝样细胞移植组输入DAPI标记的肝样细胞,移植后第1,2,3,4周处死大鼠,留取肝脏和血清标本.主要观察指标:肝组织Masson三重染色分期评估纤维化程度.肝脏冰冻切片荧光显微镜下观察肝样移植细胞定居情况.以全自动生化分析仪与放射免疫法检测血清肝功能指标和血清肝纤维化指标.结果:肝样移植细胞逐渐从血管进入肝脏实质,最终散布于肝细胞间,移植3周后,荧光衰减明显.移植后第2周,肝组织中的假小叶逐渐吸收或消散,纤维化程度明显轻于模型对照组,胶原染色变浅,分布于纤维间隔和汇管区,肝细胞呈气球样变性.移植后第4周肝细胞排列接近正常,偶见点状坏死,无纤维间隔,血清肝功能指标和肝纤维化指标与正常对照组相比,差异无显著性意义(P0.05).结论:诱导的肝样细胞植入纤维化的肝组织后,细胞可停留于汇管区和肝细胞素,植入细胞最早可见于移植后第7天,血生化检查结果提示植入诱导的肝样细胞能够部分替代肝细胞的功能.     

腹腔镜肝切除治疗原发性肝癌的探讨(附74例报告)

目的探讨腹腔镜肝切除治疗原发性肝癌的适应证和可行性。方法该组74例原发性肝癌患者应用腹腔镜下肝门阻断器阻断第一肝门的血流,使用电刀、超声刀等方法断肝,肝断面采用腔镜下肝针缝合、喷洒生物蛋白胶等方法处理。行腹腔镜左外叶切除(Ⅱ、Ⅲ段)21例;左内叶切除(Ⅳa段)2例;左半肝(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ段)切除10例,其中3例是规则性切除;右前叶(Ⅳ、Ⅴ段)切除7例;右后叶下段切除(Ⅵ段)9例;右叶切除(Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ段)14例;右后叶切除(Ⅵ、Ⅶ段)11例。除左半肝切除有3例是规则性左半肝切除外,其余均为不规则局部或部分切除;合并胆囊切除11例。结果74例患者手术均获得成功,手术时间(165.65±57.95)min;术中出血(402.53±284.94)mL。术后恢复顺利,无严重并发症,患者术后住院时间(6.25±1.46)d。结论腹腔镜肝切除治疗原发性肝癌安全、可行,具有微创优点;随着腹腔镜技术的进一步发展,腹腔镜肝癌切除有望成为原发性肝癌优选治疗方法。     

Difference of hepatic circulation between alcoholic and non-alcoholic hepatic cirrhosis

Comparisons were made of hepatic circulation between alcoholic and non-alcoholic cirrhosis. The wedged hepatic venous pressure and per cent intrahepatic shunt measured by the method of continuous infusion of D-galactose-1-14C were similarly markedly increased. On the other hand, the wedged hepatic venography showed the main portal trunk and extrahepatic collaterals, namely, the tendency of reverse or stagnant portal flow, more frequently in alcoholic cirrhosis than in non-alcoholic cirrhosis. The nodules shown by slow low-pressure hepatic sinusoidography were larger in non-alcoholic cirrhosis than in alcoholic cirrhosis.     

平阳霉素碘化油乳剂选择性肝动脉栓塞治疗肝海绵状血管瘤40例

目的:评价使用平阳霉素碘化油乳剂经肝动脉栓塞治疗肝海绵状血管瘤的临床疗效。方法:对40例肝海绵状血管瘤患者,通过导管超选择插管至肝血管瘤的供血动脉,使用平阳霉素碘化油乳剂经肝动脉进行栓塞治疗。结果:所有病例均成功实施了栓塞治疗,治疗后患者症状缓解,瘤体缩小,无严重并发症,生存质量明显提高。结论:使用平阳霉素碘化油乳剂经肝动脉栓塞治疗肝海绵状血管瘤疗效肯定,安全性好。     

Critical roles of TRAIL in hepatic cell death and hepatic inflammation

The TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) induces apoptosis of tumor cells but not most normal cells. Its role in hepatic cell death and hepatic diseases is not clear. In vitro studies suggest that murine hepatocytes are not sensitive to TRAIL-induced apoptosis, indicating that TRAIL may not mediate hepatic cell death. Using two experimental models of hepatitis, we found that hepatic cell death in vivo was dramatically reduced in TRAIL-deficient mice and mice treated with a blocking TRAIL receptor. Although both TRAIL and its death receptor 5 were constitutively expressed in the liver, TRAIL expression by immune cells alone was sufficient to restore the sensitivity of TRAIL-deficient mice to hepatitis. Thus, TRAIL plays a crucial role in hepatic cell death and hepatic inflammation.     

肝结核误诊肝癌1例

患者男,61岁,间断性右上腹部疼痛2月余,不伴发热.查体未见阳性体征.化验结缔组织全套未见异常,结核菌素实验阴性,血沉29 mm/h.     

肝脏寄生虫病误诊肝癌1例

患者女．65岁．右上腹疼痛40余天。血常规：WBC8．5&#215;10^9／L,中性粒细胞58．2％,嗜酸性粒细胞21．9％,淋巴细胞14．2％。超声检查：肝脏大小形态正常,肝实质回声尚可,于肝右前叶中部、第一肝门部及肝右前叶下段可见3．2cm&#215;2．8cm、2．4cm&#215;1．5cm、3．3cm&#215;1．7cm偏低回声团块（图1）,边界不清,形态不规则,内回声不均,     

Radiology of hepatic transplantation

Hepatic transplantation is now a relatively commonplace procedure, performed at many institutions around the world. Assessment of transplant candidacy and posttransplantation complications relies heavily on radiologic studies. After transplantation, radiographic evaluation is especially important as the clinical presentation and laboratory findings of many complications are nonspecific. Additionally, therapeutic radiologic intervention is often beneficial in the management of posttransplantation complications. This article reviews the role of imaging in hepatic transplantation. It focuses on the capabilities of noninvasive and invasive imaging modalities in the evaluation of potential hepatic transplant candidates and in hepatic recipients, and it also reviews the application of interventional radiologic procedures to posttransplantation complications.     

Pleomorphism of hepatic regeneration

The pleomorphism of hepatic regeneration was studied in acute liver injury and partial hepatectomy of rats. Increases in 3H-thymidine incorporation into the liver DNA fraction and in liver ornithine decarboxylase (ODC) activity were observed similarly in acute liver injury and following a two-thirds partial hepatectomy in normal rats. However, the increase in serum AFP levels was significant only in carbon tetrachloride (CCl4)-treated rats, and the portal-peripheral vein difference in plasma glucagon concentrations was great only in rats that underwent a partial hepatectomy. The weight of the remaining liver increased rapidly following a 67% hepatectomy in normal rats, but not in cirrhotic rats, of which three of five died within 6 days. Increases in liver prostaglandin E levels, 14C-orotate incorporation into the liver RNA fraction and hepatic ODC activity were observed up to 10 h following a partial hepatectomy of normal liver but not after similar removal of cirrhotic liver. Three kinds of hepatic regeneration, i.e., normal and pathologic regeneration following surgical removal of either normal or injured liver and repair of liver damage following chemically induced liver deficiency, were proposed from the observations.