体外培养观察人牙囊细胞中细胞程序性死亡及其在不同流体静压力下的变化

目的 研究体外培养的人牙囊细胞的特征,以及在不同流体静压力作用下细胞程序性死亡（PCD）的改变,探讨PCD在牙齿萌出过程中的作用。方法 取12岁男孩埋伏阻生牙齿的牙囊进行人牙囊细胞培养,将传代的培养细胞应用TUNEL的方法标记PCD细胞,分别在50 kPa和100 kPa流体静压力作用1 h后观察PCD变化,以不加压的人牙囊细胞作为对照。结果 体外培养的人牙囊细胞呈梭形、纺锤形或多角形,具有成纤维细胞特征。在50 kPa流体静压力下人牙囊细胞PCD阳性细胞率与对照组无统计学差异（P>0.05）,而100 kPa流体静压力下PCD阳性细胞率较对照组增加了31.65％,有统计学差异（P<0.01）。结论 流体静压力可以影响体外培养的人牙囊细胞的程序性死亡。     

流体静压力作用下人牙囊细胞CSF-1的表达

目的：研究体外培养的人牙囊细胞在不同流体静压力作用下对细胞分泌CSF-1的影响，探讨CSF-1在牙齿萌出过程中的作用。方法：取12岁男孩埋藏阻生牙齿的牙囊进行人牙囊细胞培养，将传代的培养细胞分别在50、100、150、200kPa流体静压力作用1h后再分别培养24、48、72h，使用ELISA方法观察细胞培养液中CSF-1的浓度。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形，主要为成纤维样细胞，细胞免疫组化染色显示人牙囊细胞中CSF-1的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，随流体静压力的增大染色增强，随压力的增大而增强。ELISA检测的CSF-1浓度随流体静压力的增大而增加，在一定的时间段内也随培养时间的延长而增加，具有时间性。结论：培养的人牙囊细胞具有合成与分泌CSF-1的能力，流体静压力可以促进体外培养的人牙囊细胞CSF-1的分泌。     

TNF-α对体外培养人牙囊细胞OPG mRNA的影响

目的：肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）对体外培养的人牙囊细胞（dental follicle cells,DFC）表达骨保护素（osteoprotegerin,OPG）的影响,探讨TNF-α在牙齿萌出过程中的作用。方法：原代培养人牙囊细胞;取3-6代细胞,培养基中加入TNF-α,在不同浓度和时间点,MTT检测细胞增殖,RT-PCR检测OPG mRNA的表达。结果：TNF-α在10-50 ng/mL促进人牙囊细胞的增殖,TNF-α与牙囊细胞共孵育,轻度降低OPG的mRNA的表达。结论：TNF-α在体外培养的牙囊细胞有降低OPG表达的作用。     

集落刺激因子在人牙囊细胞中的表达

目的：研究体外培养的人牙囊细胞中集落刺激因子（CSF-1）表达及定位，以及不同浓度的IL-1α对牙囊细胞分泌CSF-1的影响，探讨CSF-1在牙齿萌出中的作用，方法：取12岁患者因正畸需要拔除的埋藏阻生牙齿的牙囊进行人牙囊细胞培养，用免疫组织化学染色技术，观察CSF-1在细胞中的表达及定位。使用ELSIA方法观察0-100ng/ml的五个不同浓度的IL-1α对培养的牙囊细胞分泌CSF-1的影响。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形，主要为成纤维样细胞，在牙囊细胞中CSF-1的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性，细胞外未见阳性表达。培养细胞加入IL-1α后，CSF-1的浓度明显增加并随IL-1α浓度的增加而增加。结论：培养的人牙囊成纤维细胞具有合成与分泌CSF-1的能力，IL-1α可以促进体外培养的人牙囊细胞CSF-1的分泌。     

体外培养人牙囊细胞Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白的表达

目的：通过体外培养人牙囊细胞，研究Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白在细胞中的表达，探讨其在牙齿萌出过程中转化为牙周膜细胞的机制。方法：取12岁患者因正畸需要拔除埋藏阻生牙齿的牙囊，组织块法进行人牙囊细胞的培养，通过免疫组织化学染色技术观察Ⅰ型胶原及纤维粘连蛋白在牙囊细胞中的表达及定位。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形、卵圆形及多角形，形似成纤维细胞。在牙囊细胞中Ⅰ型胶原和纤维粘连蛋白的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性。结论：体外培养人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性，具有合成与分泌Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白的能力。     

IL-1α对体外培养人牙囊细胞TNF-α表达的影响

目的：研究白细胞介素-α（interleukin—1α,IL—1α）对体外培养的人牙囊细胞（dental follicle cells,DFC）分泌肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF—α）的影响,探讨TNF-α在牙齿萌出过程中的作用。方法：原代培养人牙囊细胞;取3-6代细胞,培养基中加入IL-1α,在不同浓度和时间点,MTT检测细胞增殖,免疫组化法检测细胞中TNF—α的表达,Sandwich ELISA测定培养上清中TNF-α的含量。结果：IL-1α在25ng／ml,促进人牙囊细胞的增殖,IL-1α与牙囊细胞共孵育,可使TNF-α表达和分泌增强。结论：IL-1α有增强人牙囊细胞TNF-α表达的作用。     

持续静压力对大鼠成纤维样滑膜细胞PRG4表达的影响

目的:探讨大鼠滑膜细胞在持续静压力作用下PRG4蛋白和mRNA的表达变化。方法:原代培养大鼠颞颌关节滑膜细胞,对传代细胞施加持续静水压力12h,压力值为:0kPa,50kPa,100kPa,150kPa和200kPa,应用Westernblot和实时荧光定量RT-PCR检测压力状态下PRG4蛋白和mRNA表达的改变。结果:经单因素方差分析,压力施加后细胞合成PRG4蛋白和mRNA水平均有差异。PRG4蛋白在50kPa和100kPa组表达虽有增高,但与对照组无统计学差异(P>0.05),150kPa和200kPa组表达比对照组显著升高,有统计学差异(P<0.05)。PRG4mRNA的表达与蛋白表达同步。结论:适当的压力负荷可刺激滑膜细胞转录、合成PRG4,压力传递机制与关节润滑机制有密切关联。     

白细胞介素-10对体外培养人牙囊细胞集落刺激因子-1表达的影响

目的:研究白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)对体外培养人牙囊细胞集落刺激因子-1(colony stimulating factor-1,CSF-1)表达的影响.方法:体外培养人牙囊细胞,取第5代细胞加入25 ng/ml IL-0作用0、1、3、6、9、12 h,用RT-PCR法检测CSF-1 mRNA表达的变化.然后取第5代细胞,加入25 ng/ml IL-10作用0、2、4、6、8 h,用ELISA法检测上清液中CSF-1蛋白的含量.结果:牙囊细胞经IL-10作用后,CSF-1 mRNA表达在3～12 h降低,蛋白分泌在6～8 h减少.结论:IL-10通过降低CSF-1的表达,间接地对单核细胞进入牙囊并在其中聚集发挥抑制作用,从而抑制破骨细胞吸收牙槽骨和牙齿萌出通道的形成.     

bFGF对体外培养人牙囊细胞VEGF表达的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养人牙囊细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：选取生长状态良好的人牙囊细胞,与10ng／mlbFGF孵育不同时间后,采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测人牙囊细胞VEGFmRNA表达及上清液中VEGF蛋白分泌变化。结果：bFGF作用1、3、6、12h后人牙囊细胞VEGFmRNA表达均较0h组显著增强（p〈0．01）,其中bFGF作用6h后VEGFmRNA表达最强;细胞培养上清液中VEGF蛋白分泌量随时间延长逐渐增加,但bFGF处理组VEGF蛋白分泌量高于对照组（p〈0．01）。结论：bFGF能够促进体外培养人牙囊细胞VEGF的表达。     

CSF-1和PTHrP对人牙囊细胞OPG表达的影响

目的:研究集落刺激因子(colony-stimulating factor-1,CSF-1)和甲状旁腺相关蛋白(parathyroid hor-mone-related protein,PTHrP)对体外培养的人牙囊细胞(dental follicle cells,DFC)表达骨保护素(osteo prote gerin,OPG)的影响。方法:原代培养人牙囊细胞,选第3~6代细胞,培养基中分别加入不同浓度的CSF-1和PTHrP与牙囊细胞共同孵育,MTT法检测人牙囊细胞的增殖活性;Sandwich ELISA测定培养上清液中OPG的含量。结果:25ng/ml的CSF-1和10ng/ml的PTHrP可以促进DFC增殖,并且此浓度两种因子分别与DFC共培养OPG表达均降低(P<0.05)。结论:在牙齿萌出的某时期牙囊自分泌和旁分泌的CSF-1和PTHrP有降低人牙囊细胞OPG表达的作用。