左归降糖舒心方对高脂饮食MKR小鼠糖脂代谢及炎症反应的影响

目的 探讨左归降糖舒心方对高脂饮食转基因2型糖尿病MKR小鼠糖脂代谢及炎症反应的影响。方法 用左归降糖舒心方干预治疗高脂饮食转基因2型糖尿病MKR小鼠,采用电化学法测定空腹血糖浓度,采用全自动生化分析仪检测血脂和炎症因子超敏C反应蛋白（hs-CRP）,采用ELISA法检测血清胰岛素与肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果 高脂饲料喂养的MKR小鼠空腹血糖高于MKR组,但无统计学意义（P＞0.05）;血清胰岛素、血脂（TC、LDL-C、HDL-C）、血清hs-CRP和TNF-α水平高于MKR组（P＜0.01）,而三酰甘油（TG）下降,低于MKR组（P＜0.01）。经左归降糖舒心方或文迪雅干预治疗后,除左归降糖舒心方低剂量组血糖和hs-CRP下降不显著（P＞0.05）,其他各组MKR小鼠血糖、血清胰岛素、TG、血清hs-CRP和TNF-α水平显著下降（P＜0.05、0.01）,TC和LDL-C下降无统计学意义（P＞0.05）;左归降糖舒心方高剂量组HDL-C显著上升（P＜0.01）,而文迪雅组升高不显著（P＞0.05）。左归降糖舒心方作用呈剂量依赖性。结论 左归降糖舒心方能调节高脂饮食MKR小鼠糖脂代谢、减少炎症因子的产生、保护血管、降低糖尿病并发血管病变的风险。     

降糖益肾方干预胰岛素信号通路改善转基因2型糖尿病MKR鼠肾损伤的研究

目的观察降糖益肾方对高脂饮食转基因2型糖尿病MKR鼠血糖、血胰岛素及肾皮质中胰岛素受体、磷脂酰肌醇-3-激酶蛋白表达的影响。方法选取MKR鼠40只经鉴定后,随机分为MKR鼠组、MKR鼠高脂组、降糖益肾方组和糖适贝那组。MKR鼠组用基础饲料喂养,MKR鼠高脂组、降糖益肾方组和糖适贝那组用高脂饲料喂养,连续喂养8周后,降糖益肾方组给予降糖益肾方,糖适贝那组给予糖适平加贝那普利,同时MKR鼠组和MKR鼠高脂组分别给予蒸馏水灌胃4周。4周后处死小鼠收集标本,免疫组织化学SABC法检测肾小球中胰岛素受体1(IRS-1)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI-3K)的蛋白表达。结果降糖益肾方明显降低高脂饮食MKR鼠肾小球中IRS-1和PI-3K的蛋白表达水平,与MKR鼠高脂组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论降糖益肾方改善糖尿病肾病系膜细胞增殖的机制可能与干预胰岛素信号通路有关。     

降糖益肾方对高脂饲养MKR鼠糖代谢、肾功能的影响

目的 观察降糖益肾方干预MKR转基因2型糖尿病小鼠的血糖代谢、尿微量白蛋白(UmAlb)、β2微球蛋白(β2-MG)及血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)的变化.方法 取MKR小鼠(12周龄)40只经鉴定后,随机分为MKR鼠组、MKR鼠高脂组、降糖益肾方组、糖适平合用贝那普利对照组(简称西药组),每组10只,另设10只同周龄C57小鼠为空白对照组.MKR鼠组、空白组予以基础饲料喂饲,MKR鼠高脂组、降糖益肾方组、西药组予以高脂饲料喂饲.降糖益肾方组以62.4 g/kg浓度,西药组给以糖适平9.09 mg/kg、贝那普利3.04 mg/kg浓度灌胃,连续给药30 d,MKR鼠组、MKR鼠高脂组和空白组以等容量的蒸馏水灌胃.采用电化学法检测血糖,生化法检测血清BUN及Cr,双抗体夹心ELISA法分别检测血胰岛素、尿UmAlb及β2-MG含量.结果 MKR高脂组小鼠具有高空腹血糖,显著增高的胰岛素、血清BUN、Cr及尿UmAlb、β2-MG水平,与MKR鼠组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01).给药30 d后,与MKR高脂组比较,降糖益肾方组小鼠的血糖水平、血清BUN、Cr及尿UmAlb、β2-MG的含量均显著下降,高胰岛素血症得到改善,差异具有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);且降糖益肾方优于或与西药组作用相当.结论 降糖益肾方能显著改善高脂喂饲的MKR鼠空腹血糖,改善高胰岛素血症,降低其血清BUN、Cr及尿UmAlb、β2-MG的含量,改善高脂喂饲的MKR鼠的早期肾损伤,从而延缓高脂喂饲的MKR鼠肾脏病变的进一步发展.     

左归降糖舒心方对转基因2型糖尿病MKR鼠心肌损伤的保护作用

目的 研究左归降糖舒心方对转基因2型糖尿病MKR鼠心肌损伤的保护作用。方法 以MKR鼠为研究对象,ig左归降糖舒心方对其进行30 d治疗,设野生C57BL/6鼠同期对照。用透射电镜观察小鼠心肌形态学改变;比色法测定心肌中丙二醛（MDA）的量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性;全自动生化分析仪检测心功能指标肌酸激酶同工酶（CKMB）和乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果 经左归降糖舒心方治疗后,MKR鼠心肌组织形态学病变减轻,心肌细胞线粒体嵴部分消失,肌纤维排列较整齐;心肌组织MDA量下降（P＜0.05、0.01）,SOD活性升高（P＜0.01）,且呈剂量依赖性;血清CKMB和LDH活性下降（P＜0.05、0.01）,且呈剂量依赖性。结论 左归降糖舒心方可通过抗脂质过氧化,对MKR转基因2型糖尿病MKR鼠心肌产生保护作用。     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞podocin及nephrin表达的影响

[目的] 探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞podocin及nephrin表达水平的变化,及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用。[方法] 将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组)、高糖组(B组)、左归降糖益肾方含药血浆组(C组)、4-苯基丁酸含药血浆组(D组).采用间接免疫荧光细胞化学法鉴定足细胞podocin及nephrin蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)自动比色法检测足细胞活力,蛋白质印迹法,逆转录-聚合酶链反应法分别检测podocin及nephrin蛋白或mRNA表达水平的变化。[结果] 与A组相比,B组足细胞活力,podocin及nephrin蛋白或mRNA的表达水平均降低(P <0.01);与B组相比,C组、D组足细胞活力,podocin及nephrin蛋白或mRNA的表达水平均升高(P <0.01);与C组相比,D组足细胞活力升高(P<0.05).[结论] podocin及nephrin蛋白或mRNA表达水平的降低,是足细胞损伤的分子机制之一;左归降糖益肾方含药血浆可以通过升高podocin及nephrin蛋白或mRNA的表达水平,从而保护足细胞。     

左归降糖舒心方调控TLR4/NF-κB通路抑制糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化的机制研究

目的 基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路探讨左归降糖舒心方对糖尿病心肌病MKR小鼠心肌纤维化及炎症因子的影响。方法 以8周龄雄性MKR小鼠为实验对象,采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）40 mg/kg构建糖尿病心肌病模型,随机分为中药高剂量组[33.67 g/（kg·d）左归降糖舒心方2 g/mL]、中药低剂量组[16.84 g/（kg·d）左归降糖舒心方2 g/mL]、西药联合组[0.23 g/（kg·d）二甲双胍联合1.5 mg/（kg·d）依那普利]和模型组（等容量蒸馏水）;另设FVB小鼠为空白对照组（等容量蒸馏水）。每组10只,连续给药8周后取材。收集尾静脉血液检测空腹血糖水平;采用HE、Masson染色观察心肌病理改变,电镜观察心肌组织超微结构变化;采用ELISA检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;采用Wes...     

Rho／Rho激酶在哮喘小鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的研究Rho／Rho激酶（ROCK）信号通路在哮喘小鼠气道中的表达及其对气道重塑的作用。方法清洁级BALB／c雄性小鼠39只,随机分为对照组、哮喘组、Y-27632干预组、地塞米松干预组,每组10只（其中对照组9只）。建立哮喘小鼠模型,并应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632进行干预,光镜观察肺组织结构,Image—proplus图像分析软件测量支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白含量,RT—PCR法测定RhoA、ROCKⅡ mRNA含量。结果（1）哮喘组小鼠RhoA、ROCKⅡ表达明显增高,应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达。（2）Y-27632干预组小鼠Wat和Wam均明显低于哮喘组小鼠。结论哮喘小鼠肺组织RhoA及ROCKⅡ表达增多,ROCKll受体拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达,明显抑制哮喘小鼠Wat和Wam。     

法舒地尔对小鼠造影剂急性肾损伤的影响

目的 探讨法舒地尔是否可以通过抑制Rho/ROCK信号通路,减轻氧化应激损伤及炎性反应,从而减轻造影剂急性肾损伤的发生。方法 30只小鼠行单侧肾蒂结扎术,术后1周,随机分为模型组、法舒地尔干预组或对照组（n=10/组）。小鼠经尾静脉注射碘克沙醇注射液（4.0g I/kg）或等剂量的生理盐水（对照组）。法舒地尔干预组在注射碘克沙醇前12h、2h以及注射后4h 3个时间点给予法舒地尔（10mg/kg,腹腔注射）。造模后24h检测小鼠血清肾功能标志物、炎症、氧化应激相关蛋白的表达水平。结果 与模型组相比,法舒地尔可以显著的降低血清Cr水平,减少肾组织活性氧簇（ROS）的产生及其诱导的DNA损伤。Wester blot法检测结果显示,法舒地尔可以显著减少炎性细胞因子TNF-α、IL-6蛋白水平（P<0.05）。结论 法舒地尔可以改善造影剂诱导的血清肌酐升高,其肾脏保护作用机制主要是通过抑制Rho/ROCK信号通路,从而发挥抗炎、抗氧化应激作用。     

2型糖尿病患者血尿酸与糖尿病肾病的相关性

目的 探讨2型糖尿病患者血尿酸（SUA）水平与糖尿病肾病（DN）的相关性及糖尿病肾病发生的危险因素。方法 选取2012~2015年合肥市第二人民医院内分泌科2型糖尿病患者273例,根据尿清蛋白/肌酐（uACR）分为单纯糖尿病组（n=171）,早期糖尿病肾病组（n=62）和临床糖尿病肾病组（n=40）。所有受试者分别检测空腹血糖（FBG）、餐后2 h血糖（2 h PG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）、SUA等生化指标,并结合临床资料进行分析。结果 随DN进展,糖尿病病程、HbA1c、收缩压（SBP）、SUA呈增加趋势（P均 < 0.05）,临床DN组和早期DN组患者年龄、舒张压（DBP）、FBG、2 h PG大于单纯糖尿病组（P均 < 0.05）,临床DN组TG、TC、VLDL-C大于早期DN组和单纯糖尿病组（P均 < 0.05）。回归分析显示,糖尿病病程、SBP、HbA1c、SUA是DN发生的独立危险因素。结论 SUA是糖尿病肾病发生的独立危险因素,在糖尿病肾病的临床治疗中除了降糖、降压之外,有效地降低血尿酸水平也是治疗的一个重要环节。     

精氨酸特异性单腺苷二磷酸核糖基化对大肠癌自噬的影响

【立论依据】 精氨酸特异性单ADP核糖基化是蛋白质翻译后修饰重要形式,目前研究极少。 我们先前研究首次报道了精氨酸特异性单ADP核糖基化转移酶(ART1)对小鼠大肠癌细胞运动、黏附等具重要作用并与Rho 表达有关。有研究表明,自噬基因Beclin-1在大肠癌中表达率高,可促进大肠癌发生发展;Rho信号通路与自噬调节有关。但精氨酸特异性单ADP核糖基化是否可通过Rho影响大肠癌细胞自噬水平,对大肠癌细胞生长发挥调节作用尚不清楚。 【设计思路】 基于前期工作基础,本研究拟通过改变ART1在大肠癌细胞的表达改变精氨酸特异性单ADP核糖基化水平,观察大肠癌细胞自噬相关蛋白、Rho及其下游与肿瘤增殖相关效应分子表达以及癌细胞增殖能力和小鼠移植瘤生长变化,探讨精氨酸特异性单ADP核糖基化作用对大肠癌自噬的影响及其机制,为寻求大肠癌治疗新靶点提供实验依据。 【实验内容】 构建ART1基因沉默和过表达慢病毒载体转染大肠癌CT26细胞使精氨酸特异性单ADP核糖基化水平改变;电镜观察自噬小体的形成;蛋白质印迹或RT-PCR法检测自噬相关蛋白(Lc3、Beclin-1)表达、Rho蛋白家族Rho1、Rac和Cdc42及其下游与肿瘤增殖相关效应分子(c-fos、c-myc)的变化;采用CCK-8、流式细胞术和动物移植瘤模型,观察大肠癌细胞增殖和生长。 【材料】 小鼠大肠癌CT26细胞,相关蛋白抗体,逆转录试剂盒,Balb/c小鼠,CCK-8试剂盒等。 【可行性】 自噬是细胞存活的必要因素,其形成过程与Rho有关;大肠癌中,自噬相关基因Beclin-1表达高于正常组织,其可促进大肠癌肿瘤的发生发展。本研究前期研究已显示,抑制ART1可下调Rho相关信号转导。因此,我们推测通过下调ART1抑制精氨酸特异性单ADP核糖基化作用,可下调Rho信号转导,进而下调大肠癌细胞自噬水平具有充分的理论依据。先前对精氨酸特异性单ADP核糖基化在大肠癌黏附、迁移等方面的研究,也为本研究奠定了基础。 【创新性】 本研究首次通过观察精氨酸特异性单ADP核糖基化作用与大肠癌自噬以及与Rho信号通路关系,阐明精氨酸特异性单ADP核糖基化作用对大肠癌细胞自噬的调节作用和机制。     

Keap1-Nrf2/ARE信号通路介导黄连素调节氧化应激改善小鼠糖尿病肾病

目的 采用小鼠糖尿病肾病的模型并结合氧化应激,探讨黄连素改善糖尿病并发症中肾脏病变的作用和机制。方法 将糖尿病肾病（DN）小鼠分别灌胃给予二甲双胍（0.2g/kg）、黄连素低、中、高剂量（0.036、0.072、0.144g/kg）8周。检测血清中相应指标;检测肾脏中活性氧（ROS）及超氧化物歧化酶（SOD）水平,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）、核因子E2相关因子2（Nrf2）及还原型辅酶Ⅱ氧化酶4（NOX4）蛋白表达;检测24h尿蛋白等指标。结果 黄连素可显著降低DN小鼠血糖,增加胰岛素分泌,降低24h尿蛋白、血清尿素氮和肌酐、上调SOD和Nrf2水平,下调ROS、Keap1及NOX4水平。结论 黄连素具有改善小鼠糖尿病肾病的作用,且中、高剂量作用较优,其相关机制可能与调控Keap1-Nrf2/ARE信号通路,从而改善氧化应激有关。     

地黄多糖对糖尿病肾病大鼠模型的治疗作用及对RAGE/NF-κB信号通路的影响

[目的] 探讨地黄多糖(RG)对糖尿病肾病(DN)大鼠模型的治疗作用以及对RAGE/NF-κB信号通路的影响。[方法] 采用随机数字表法将健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠分为5组(n=10),腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建DN大鼠模型,给予低、中、高3种不同剂量的RG,通过检查体质量变化、空腹血糖、胰岛素水平、血清肌酐、血清尿素氮、24 h尿量及尿蛋白等指标,观察RG对DN大鼠模型的治疗作用;同时采用Western Blot测定各组动物肾脏组织晚期糖基化终末产物特异性受体(RAGE)、细胞核因子-κB(NF-κB)的表达水平。[结果] RG可以显着改善DN大鼠的相关生化指标,增加大鼠肾脏组织中RAGE和NF-κB表达,发挥抗炎作用。[结论] 地黄多糖对糖尿病肾病大鼠模型具有保护作用,其机制可能与RAGE/NF-κB信号通路有关。     

糖尿病肾病大鼠肾脏差异表达基因研究

目的 糖尿病肾病是糖尿病患者的重要死亡原因。本研究旨在探讨糖尿病肾病大鼠肾脏差异表达基因,以期揭示DN发病的机制。方法 将5周龄SD大鼠随机分为正常组和糖尿病肾病模型组。糖尿病肾病模型组给予高脂饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病模型。每4周测定空腹血糖、体重、24h尿白蛋白和尿肌酐水平。12周时处死大鼠,取血样测定血肌酐和血清尿素氮水平。取肾脏进行表达谱基因芯片实验。反转录实时定量PCR方法对芯片结果进行验证。结果 糖尿病肾病组空腹血糖,24h尿白蛋白、尿肌酐、血肌酐和尿素氮水平较正常组显著升高,而体重和尿肌酐显著降低。糖尿病肾病大鼠肾脏较正常组有624个基因差异表达,其中495个基因上调,129个基因下调。real-time PCR验证实验证实糖尿病肾病组ATP合成酶β亚基(Atp5b)、胶原蛋白1型α1(Col1α1)、细胞色素c氧化酶亚基Ⅵc(Cox6c)、NADH脱氢酶(辅酶Q)铁硫蛋白3(Ndufs3)和转化生长因子-β1(TGF-β1)显著上调。结论 氧化磷酸化通路和TGF-β1介导的细胞外基质(ECM)受体相互作用通路的激活可能与糖尿病肾病发生有关。     

腺苷蛋氨酸对过度激活的Rho-ROCK通路介导的糖尿病肝损伤的改善作用

目的探讨腺苷蛋氨酸对过度激活的Rho-ROCK通路介导的糖尿病肝损伤的改善作用。方法 40只清洁级Wistar大鼠依据随机数字表法为4组:对照组、2型糖尿病组、Y27632干预组及腺苷蛋氨酸干预组,各10只。对照组大鼠给予正常饲粮,自由饮水;糖尿病组、Y27632干预组及腺苷蛋氨酸干预组大鼠每日给予高糖高脂饲料,自由饮水,并于第35日时一次性腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg,腹膜内);Y27632干预组于第9~12周给予Y27632 10 mg/kg进行治疗。腺苷蛋氨酸干预组于第9~12周给予腺苷蛋氨酸10 mg/kg进行治疗。分析各组大鼠胰岛素抵抗系数、血脂水平及Rho A、ROCK1/2和基质金属蛋白酶的表达变化。同时分析各组大鼠肝脏组织细胞凋亡相关蛋白胱天蛋白酶(caspase)-3及caspase-9的表达变化。结果糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的胰岛素抵抗指数稳态模型、血糖、低密度脂蛋白胆固醇较对照组明显升高(P<0.01);糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的总胆固醇高于对照组(P<0.01);糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的高密度脂蛋白胆固醇低于对照组(P<0.01);糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的羟脯氨酸高于对照组(P<0.01)。糖尿病组大鼠肝脏组织的Rho及ROCK1/2蛋白的表达、MMP-2及MMP-9的表达及促凋亡蛋白相关蛋白caspase-3和caspase-9的表达较对照组明显升高(P<0.01),而Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组上述异常表达得到一定的恢复(P<0.01)。结论腺苷蛋氨酸通过抑制肝脏组织中过度激活的Rho/ROCK信号转导通路改善小剂量SZT合并高糖高脂饮食复制的2型糖尿病大鼠肝脏组织损伤。     

NADPH氧化酶来源的活性氧在2型糖尿病发生发展中的作用

【目的】 探讨NADPH氧化酶来源的活性氧在糖尿病发生发展中起到的作用。 【方法】 我们建立了长时程高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的大鼠模型来模拟人类2型糖尿病。在此模型基础上,运用常规的形态学和生物化学测定有关蛋白质的含量;运用免疫放射法测定胰岛素的含量。通过对糖代谢通路关键酶、血糖、胰岛素的测定来判定大鼠糖尿病的发生、发展。通过对大鼠体内ROS、MDA、TOAS的测定来判定大鼠体内氧化应激的状态。通过测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶及糖原磷酸化酶的活性来反映大鼠糖代谢通路的变化。 【结果】 apocynin可以明显降低糖尿病大鼠的血糖升高水平,于此同时,在apocynin的干预下,糖尿病大鼠体内的氧化应激的水平比其它各组明显降低,其还可降低糖尿病大鼠肝脏糖原分解关键酶的活性、使其更接近于正常水平。 【结论】 NADPH氧化酶来源的活性氧可能通过糖原分解通路,对2型糖尿病的发生发展发挥作用。     

虎杖苷在小鼠冠状动脉缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制研究

【立论依据】 心脏冠状动脉阻塞,再灌注疗法,极易造成大量自由基产生、钙超载和心肌细胞凋亡等损害。减少心肌细胞再灌注后凋亡仍是治疗冠心病的首要任务。研究表明虎杖苷在缺血再灌注损伤中有增加NO含量,减少自由基损害、提高心功能的保护作用,但其具体机制不明。 RhoA/ROCK通路的激活是缺血再灌注损伤中参与细胞凋亡的机制之一。新近研究表明,生理状态下,血管紧张素受体Ⅱ2型(AT2R)可通过激活RhoA-Pser188抑制ROCK下游通路,达到保护细胞正常生理状态的作用。因此,我们提出,病理状态下,AT2R对ROCK通路的影响是什么?虎杖苷对心肌缺血再灌注(I/R)是否通过该通路起到保护作用?因此,该项目的研究为虎杖苷改善冠脉血流、提高心功能提供实验依据和理论基础。 【设计思路】 实验分为正常对照组,I/R组,单纯虎杖组和虎杖治疗组。通过观察不同时间节点:术后1 h、24 h和7 d,通过心动超声及各种生化检测,研究缺血再灌注机制,并在此基础之上,研究虎杖对缺血再灌注的保护机制。 【实验内容】 (1) 建立小鼠缺血再灌注(I/R)模型。(2) TTC和evans blue染色,并检测凋亡。(3) 留取血清检测cTnT。(4) 留取蛋白检测ROCK激酶活性、RhoA-Pser188、AT2R。(5) 检测血清和组织中NOS、iNOS 活性及 NO 含量。 【材料】 C57小鼠24只,小动物超声仪,小动物心电图测量仪和各种生化检测仪器。 【可行性】 深圳大学机能平台具备所有小动物心功能检测和生化指标检测仪器。 【创新性】 本项目首次提出虎杖苷通过AT2R磷酸化RhoA-Pser188位点,从而抑制ROCK-心肌细胞凋亡通路,深入阐明虎杖苷保护缺血再灌注损伤机制。本项目首次在整体动物模型基础上,研究中药单体虎杖苷对心脏缺血-再灌注的治疗作用,摸索治疗的最佳浓度和作用的时间窗,具有很好的新药开发和临床应用前景。其次,本项目围绕虎杖苷改善冠脉血流,从分子、细胞、组织及整体水平等多个层次对其作用机制展开深入的研究,有较大的基础理论价值。     

运动训练联合黄芩苷干预高脂小鼠胰岛素抵抗的实验研究

【目的】 胰岛素抵抗贯穿于2型糖尿病的全过程,是2型糖尿病的病理学基础。骨骼肌是机体最大的胰岛素靶器官,是转运葡萄糖的主要场所,胰岛素抵抗的发生与骨骼肌相关性引起我们的兴趣。本课题拟建立高脂饮食诱导的肥胖小鼠胰岛素抵抗模型,用黄芩苷和运动训练进行干预,初步观察药物和运动干预对肥胖小鼠胰岛素抵抗的影响。 【方法】 将64只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为8组,正常喂食:空白组、运动组、黄芩苷组、运动+黄芩苷组;高脂喂食:高脂空白组、高脂运动组、高脂黄芩苷组、高脂运动+黄芩苷组。用高脂饲料喂养高脂组小鼠14周,测定体重、空腹血糖和糖耐量、胰岛素耐量指标,建立高脂小鼠模型,同时以正常饲料喂养正常组小鼠14周作为对照。 随之,给予相应组别灌胃黄芩苷或者进行运动训练11周,分别测定各组小鼠体重、空腹血糖、餐后血糖和血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、肌酸激酶等含量。取骨骼肌制作切片,油红染色观察脂质沉积的情况。黄芩苷剂量为(每日200 mg/kg);运动组小鼠用YLS-10B轮转式疲劳仪进项训练,20转/min,50 min/d,5 d/周。 【结果】 与高脂空白组相比,高脂黄芩苷组小鼠的体重、空腹血糖、血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白均明显下降,血清高密度脂蛋白明显升高,脂质沉积减少;与高脂空白组相比,高脂运动组小鼠的血清甘油三酯和低密度脂蛋白均明显下降,体重、空腹血糖、总胆固醇都有下降趋势,脂质沉积减少。与高脂运动组相比,高脂运动+黄芩苷组小鼠的空腹血糖和总胆固醇明显下降,体重、甘油三酯、低密度脂蛋白有下降趋势,高密度脂蛋白有升高趋势,脂质沉积减少。 【结论】 黄芩苷和运动训练对高脂小鼠均具有降脂作用、对高脂小鼠的异常糖代谢均具有改善空腹血糖和餐后血糖的作用,可能与改善骨骼肌的胰岛素抵抗有关。     

氯化钆对胰岛素原剪切的影响

【立论依据】 胰岛素是维持机体糖代谢平衡的最重要的激素。在胰岛β细胞中,胰岛素原需要经过激素原转化酶(PC3和PC2)的剪切才能生成真正具有降低血糖作用的胰岛素。因此,激素原转化酶对胰岛素的成熟具有决定作用。众多研究表明,糖尿病患者和动物胰岛中激素原转化酶的含量显著不足。而我们的前期实验提示,稀土化合物氯化钆(GdCl3)能够增加激素原转化酶的表达量,从而促进胰岛素原的剪切成熟。 【设计思路】 糖尿病小鼠经氯化钆治疗后,检测小鼠血清中胰岛素与胰岛素原的含量,以及胰岛中激素原转化酶的表达量。 【实验内容】 以高脂喂养的C57BL/6J糖尿病小鼠作为研究对象,随机分为两组,分别腹腔注射氯化钆(治疗组)和生理盐水(对照组)。注射4周后,抽取治疗组和对照组小鼠的血清,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰岛素原和胰岛素的含量,进而分析胰岛素的剪切成熟情况。同时,分离提纯两组小鼠的胰岛,通过实时定量PCR和Western方法检测胰岛中激素原转化酶(PC3和PC2)表达量的变化。 【材料】 C57BL/6J小鼠,高脂饲料,胰岛素原ELISA试剂盒,胰岛素ELISA试剂盒,PC3和PC2的引物及抗体。 【可行性】 该实验所需要的多项实验技术,如糖尿病小鼠模型的建立、小鼠胰岛的分离纯化、胰岛素及胰岛素原的检测等方法,均已成熟。设计实施该实验的团队,已经具备了一定的生理学、生物化学、分子生物学和细胞学等基础知识,并且参与过多项动物及分子生物学实验,在实验的基础操作方面已十分熟练,具备参加科研的基础知识和动手能力。同时,团队成员做事踏实认真,并能独立查阅国内外文献,具有较强的解决问题、设计实验的能力。此外,该团队的指导教师长期从事糖尿病治疗的相关研究,能够对该课题的实施进行必要的指导。 【创新性】 氯化钆对糖尿病的治疗作用鲜有报道,且作用机制尚未阐明。氯化钆对胰岛素的作用效果及机制尚无任何报道,本实验属首次。     

过度激活的Rho/ROCK通路介导的心肌缺血再灌注损伤及贝那普利的改善作用

目的 该研究探索过度激活的Rho/ROCK信号通路在缺血再灌注损伤中的参与机制及贝那普利的改善作用.方法 SD大鼠随机分为4组:假手术组、缺血再灌注组、Y27632组和贝那普利组.采用大鼠冠状动脉左前降支结扎法复制心肌缺血再灌注模型,Y27632组和贝那普利组分别给予对应药物灌胃治疗.分析各组血清中MDA、SOD、GSH-px、Rho/ROCK、MMP2/9及Bax/Bcl2和Caspase3/9的表达.结果 模型组血清MDA水平明显增高(15.6→24.1μg/mL)而SOD(83.1→34.6 U/mL)水平明显降低,Rho/ROCK(0.18→0.64;0.19→0.69;0.16→0.65)、MMP2/9(0.28→0.60;0.27→0.63)、Caspase9表达明显增强(0.25→0.68).Y27632和贝那普利组大鼠的上述异常得到显著的改善.结论 贝那普利通过抑制过度激活的Rho/ROCK、激活的细胞凋亡信号通路、改善细胞外基质降解与重构发挥保护缺血再灌注大鼠心肌损伤的作用.