左归丸对衰老大鼠骨髓MSC形态学影响的研究

目的研究补肾益精代表方左归丸对衰老大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)形态学方面的影响。方法通过腹腔注射D-半乳糖造模,制备衰老大鼠模型,分离培养骨髓MSC。光镜观察各组大鼠MSC一般形态学特征,电镜观察其超微结构特点。结果光镜观察模型组P3代大鼠骨髓MSCs呈现衰老细胞形态学特征,左归丸组大鼠BMSCs的细胞形态与正常组相近。透射电镜观察显示,模型组大鼠P3代骨髓MSCs细胞内结构改变呈现衰老特征,左归丸中剂量组大鼠的骨髓MSCs电镜下的超微结构与正常组最相近。结论衰老大鼠骨髓MSCs的细胞形态各方面表现有明显改变,左归丸水提液在一定浓度范围内能延缓大鼠骨髓MSCs的衰老。     

二苯乙烯苷对肾虚大鼠MSCs增殖及旁分泌的影响

目的 观察何首乌主要成分二苯乙烯苷(THSG)对去卵巢肾虚大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖及旁分泌细胞因子mRNA的影响。方法 切除SD雌性大鼠双侧卵巢复制肾虚大鼠模型,密度梯度离心法收集各组大鼠MSCs进行体外培养,观察THSG对大鼠第3代MSCs增殖及旁分泌细胞因子mRNA的影响。结果 模型组大鼠第3代MSCs增殖的OD值明显低于正常组(P ＜ 0.05,P ＜ 0.01),THSG组明显高于模型组(P ＜ 0.05)。模型组MSCs表达粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白血病抑制因子(LIF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、骨形成蛋白-2(BMP-2)mRNA明显低于正常组(P ＜ 0.05);THSG组MSCs表达G-CSF mRNA明显高于模型组(P ＜ 0.05)。结论 与正常大鼠比较,去卵巢大鼠MSCs增殖能力减弱,可能与其MSCs旁分泌GM-CSF、LIF、G-CSF、BMP-2 mRNA减少有关。THSG改善去卵巢肾虚大鼠MSCs增殖能力,可能与其促进MSCs表达G-CSF mRNA有关。     

左归丸对衰老大鼠骨髓间充质干细胞成骨和成脂分化的影响

目的研究左归丸对衰老大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨与成脂分化的影响。方法通过腹腔注射D-半乳糖建模,制备衰老大鼠模型,分离培养MSCs,并诱导MSCs成骨和成脂分化。通过碱性磷酸酶(ALP)活性检测、ALP染色观察MSCs成骨分化能力,通过甘油三酯(TG)表达量和油红O染色观察MSCs成脂分化能力。结果模型组MSCs ALP染色阳性率明显低于正常组,左归丸组MSCs染色阳性率明显高于模型组(P0.05)。成骨诱导14 d,模型组MSCs ALP活性值明显低于正常组而左归丸组明显高于模型组(P0.05)。油红O染色,模型组MSCs染色阳性率明显高于正常组,左归丸组MSCs染色阳性率明显低于模型组(P0.05)。成脂诱导7 d,模型组MSCs TG表达量明显高于正常组而左归丸组MSCs TG表达量明显低于模型组(P0.05)。结论左归丸可促进衰老大鼠MSCs向成骨细胞分化,同时可抑制其向脂肪细胞分化。     

左归丸对间充质干细胞向软骨细胞分化过程中Ⅱ型胶原及蛋白多糖基因表达的影响

目的观察左归丸含药血清对间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）向软骨细胞定向分化过程中MSCs增殖、Ⅱ型胶原及蛋白多糖基因表达的影响。方法分离培养大鼠MSCs,体外诱导其向软骨细胞分化,诱导同时分别以高（57 g/kg）、中（28.5 g/kg）、低（9.5 g/kg）浓度左归丸含药血清及大鼠空白血清刺激细胞。CCK-8法检测各组对MSCs增殖的影响。将第3代MSCs分为空白对照组（加入大鼠空白血清）、诱导对照组（加入诱导液及大鼠空白血清）及左归丸含药血清组（加入诱导液及中浓度左归丸含药血清）,采用RT-PCR、免疫组织化学和Real-time PCR检测诱导分化软骨细胞中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达。结果与空白对照组比较,不同浓度左归丸含药血清均能促进MSCs增殖（P〈0.05）,其中以中浓度组最为明显（P〈0.05）。诱导第21天RT-PCR和免疫组织化学显示诱导对照组和左归丸含药血清组MSCs中均可见Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达,其中左归丸含药血清组中Ⅱ型胶原mRNA表达明显高于诱导对照组。Real-time PCR结果显示,诱导第21天左归丸含药血清组蛋白多糖mRNA相对表达定量分别约是第7、14天表达量的16倍和3倍（P〈0.05）,并明显高于同期诱导对照组（P〈0.05）。结论左归丸含药血清能促进MSCs增殖、Ⅱ型胶原和蛋白多糖基因表达,可能是其软骨保护作用的分子基础之一。     

左归丸、右归丸对成骨细胞骨硬化蛋白的影响

目的:观察左归丸、右归丸对体外培养的成骨细胞骨硬化蛋白(Sclerostin)及β连环蛋白(β-catenin)表达的影响。方法:成年SD大鼠灌胃法获得左归丸、右归丸含药血清。体外培养SD乳鼠颅骨成骨细胞,取第3代细胞分对照组、左归丸组、右归丸组,各组含药血清培养后分别测细胞增殖、Sclerostin和β-catenin蛋白表达。结果:与对照组比较,右归丸组在5d、7d、9d时细胞明显增殖,左归丸组在7d、9d时细胞显著增殖(P<0.01),与左归丸组比较,右归丸组在5d时细胞明显增殖(P<0.05)。右归丸组在24h、48hSclerostin蛋白表达较对照组增高(P<0.05),左归丸组在24h较对照组减少(P<0.05)。与右归丸组相比,左归丸组在24h、48h Sclerostin蛋白表达显著下降(P<0.01)。右归丸组β-catenin蛋白表达在48h时较对照组有显著增高(P<0.05),左归丸组β-catenin蛋白表达在24h、48h均显著高于对照组(P<0.01)和右归丸组(P<0.05)。结论:右归丸、左归丸对成骨细胞均具有显著的促增殖作用,而右归丸较左归丸作用更明显。左归丸可能是通过抑制Sclerostin蛋白的表达发挥促成骨作用,右归丸无抑制Sclerostin蛋白表达作用。     

补肾中药对肾虚质大鼠生长发育及脑组织胆碱乙酰化酶含量的影响

目的探讨补肾中药对肾虚体质大鼠生长发育及脑组织胆碱乙酰化酶(CHAc)含量的调节作用。方法采用"猫吓鼠"方法制作先天不足加后天失养复合型肾虚模型。造模大鼠随机分为模型组、左归丸组和右归丸组,空白组大鼠产自正常孕鼠。对仔鼠恐吓同时开始灌胃给药,药物组给予左归丸和右归丸混悬液,空白组和模型组予等量生理盐水,每日1次,连续3个月。观察大鼠生长发育一般状况,记录5~8周龄各组大鼠体质量和平均食物利用率,ELISA检测大鼠脑组织CHAc含量。结果仔鼠5~8周龄时,模型组较空白组体质量明显减少(P0.01),左归丸组和右归丸组体质量较模型组明显增加(P0.05,P0.01),平均食物利用率与体质量呈正相关;模型组脑组织CHAc含量较空白组明显降低(P0.01),左归丸组、右归丸组较模型组明显升高(P0.01)。结论补肾中药可改善肾虚质大鼠生长发育落后状态并调节脑内CHAc含量,从而提高肾虚质大鼠学习记忆能力。     

左归丸对肾虚仔鼠胸腺内CD4-CD8-T细胞分化的影响

目的:研究左归丸对肾虚仔鼠发育过程中CD4-CD8-T细胞在胸腺内分化的影响以及补肾填精法的应用价值,探索“肾为先天之本”的理论内涵。方法:采用大鼠2∶1进行雌雄配对,3种应激法复合构建肾虚模型,将孕鼠分为正常组,模型组,胸腺肽组(0.003 g·kg^-1),左归丸低、高剂量组(2,8 g·kg^-1)。正常组不造模给予生理盐水灌胃;模型组造模给予生理盐水灌胃,胸腺肽组造模给予胸腺肽胶囊溶液灌胃,左归丸低、高剂量组造模给予左归丸悬浊液灌胃,选取胚胎16,19 d及出生第1天(E16,E19,P1)3个时期,计算仔鼠胸腺指数,电镜观察仔鼠胸腺上皮细胞超微结构形态,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测仔鼠胸腺内胸腺肽β4(TMSβ4)和胸腺肽α1(Tα1)的含量,流式细胞学检测仔鼠胸腺细胞表面CD4,CD8,CD25,CD44表达以鉴定T细胞类型。结果:电镜下模型组胸腺上皮细胞形态不规则,细胞核变形,核染色质明显聚集增加,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组胸腺上皮细胞变形不明显;ELISA法检测结果显示,与正常组比较,模型组不同时期的TMSβ4,Tα1含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组胸腺内TMSβ4和Tα1的含量明显升高(P<0.05);流式细胞检测显示,与正常组比较,模型组在E16,E19,P13个时期CD4^-CD8^-T细胞均明显增加(P<0.05),CD4^-CD8^-CD25^-CD44^-T(DN4)明显增加(P<0.05);与模型组比较,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组在E16,E19,P1时期CD4-CD8^-T细胞均明显减少(P<0.05),同时DN4也明显减少(P<0.05)。结论:左归丸可以改善肾虚仔鼠胸腺上皮细胞的结构,并通过增加仔鼠胸腺内TMSβ4和Tα1的分泌诱导胚胎期胸腺内T细胞从DN4至DP阶段的分化,说明左归丸通过补肾填精,促进T细胞发育成熟,调节仔鼠肾虚免疫失调状态。     

左归丸对大鼠卵巢血管生成与胎盘生长因子、肝细胞生长因子及其受体关系的影响

目的?观察左归丸对初老大鼠卵巢中胎盘生长因子（PLGF）及酪氨酸激酶受体（Flt-1）和肝细胞生长因子（HGF）及间质上皮细胞转化因子（c-Met）受体表达的影响。方法?初老大鼠40只按随机数字表法分为模型组、结合雌激素组、左归丸11、33 g/kg剂量组，每组10只，另取10只4月龄大鼠作为正常对照组。正常对照组以蒸馏水20 g/kg灌胃；结合雌激素组灌胃65 μg/kg结合雌激素混悬液；左归丸11、33 g/kg组分别灌胃左归丸浸膏11、33 g/kg，1次/天，连续20天；观察大鼠生殖器官形态学变化，计算卵巢、子宫、阴道脏器指数，采用免疫组化法及Western Blot法检测大鼠卵巢 PLGF、Flt-1、HGF、c-Met 蛋白表达水平，原位杂交技术检测PLGF、Flt-1、HGF、c-Met mRNA表达水平，ELISA 法检测雌二醇（E2）、孕激素（P）、促卵泡生成激素（FSH）水平。结果?与正常对照组比较，模型组大鼠生长卵泡数、黄体数、血管数更少，闭锁卵泡数多，卵巢、子宫、阴道指数及E2、P含量明显降低，FSH含量明显升高，大鼠卵巢PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平显著降低（P<0.01)；与模型组比较，左归丸11、33 g/kg组及结合雌激素组的生长卵泡数、黄体数、血管数增多，闭锁卵泡数明显减少，卵巢指数、子宫指数、阴道指数及E2、P水平明显升高，FSH水平明显降低，PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平显著升高（P<0.05，P<0.01）；与结合雌激素组比较，左归丸33 g/kg组E2、P升高（P<0.05 ），左归丸11、33 g/kg组中生长卵泡数、黄体数、血管数更少，闭锁卵泡数更多，卵巢、子宫、阴道指数，FSH水平，PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；与左归丸11 g/kg组比较，左归丸33 g/kg组生长卵泡数、黄体数、血管数增多，锁卵泡数减少，卵巢、子宫、阴道指数及E2、P水平均有所上升，FSH水平下降，PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平升高（P<0.05，P<0.01）。结论?左归丸可能通过上调 PLGF、Flt-1、HGF、c-Met 蛋白及mRNA水平，促进初老大鼠卵巢血管生成，进而改善大鼠卵巢功能，且高剂量优于低剂量。     

左归丸对骨髓抑制小鼠造血调控的影响

目的 观察左归丸对骨髓抑制小鼠外周血、造血干细胞增殖能力、骨髓细胞周期和凋亡的影响,并探讨其可能的造血调控机制.方法 将48只大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型组、阳性对照组和左归丸低、中、高剂量组,各8只,除正常对照组外,其余各组采用60Coγ射线和环磷酰胺联合制作骨髓抑制大鼠模型,于造模结束后第2 d开始给药,模型组、正常对照组予0.9%氯化钠注射液,左归丸低、中、高剂量组予相应浓度左归丸,阳性对照组予重组人粒细胞集落刺激因子注射液.各组均给药7 d.用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法、造血祖细胞培养和流式细胞术分别检测左归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数、体外培养各系造血祖细胞的集落数以及骨髓细胞周期和调亡的影响.结果 左归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞、血红蛋白、骨髓有核细胞(P＜0.05,P＜0.01),左归丸中剂量对血小板和左归丸高剂量对白细胞有明显升高作用(P＜0.05).左归丸中剂量组和阳性对照组能提高体外培养各系造血祖细胞的集落数(P＜0.05,P＜0.01),左归丸高剂量组粒单系细胞集落生成单位、红系细胞集落生成单位和爆增型红细胞集落生成单位数提高显著(P＜0.05,P＜0.01).左归丸各剂量组均能促进骨髓G0/G1 期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2/M期细胞的转化,从而导致G2/M期细胞比例和增殖指数(PI)明显升高(P＜0.05,P＜0.01).左归丸各剂量组的骨髓细胞凋亡比例与模型组比较均显著下降(P＜0.01),与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 左归丸可能通过促进G0期造血干细胞进入细胞周期,进行增殖;加速骨髓细胞修复受损的DNA,通过G1/S和S期监测点;抑制造血细胞的凋亡等机制,从而促进损伤骨髓造血功能恢复.     

中药何首乌饮对衰老大鼠卵巢组织胰岛素样生长因子Ⅰ及胰岛素样生长因子结合蛋白3表达的影响

目的 探讨何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理,为抗女性性腺的衰老研究提供理论指导和实验依据.方法 将60只SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、预防组.采用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型,预防组在造模的同时以中药方剂何首乌饮灌胃.应用原位杂交方法检测各组大鼠卵巢组织胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)蛋白的表达,用RT-PCR方法检测各组大鼠卵巢组织胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)基因的表达情况.结果 何首乌饮明显抑制了衰老大鼠卵巢组织中IGFBP3基因表达的上调趋势(P＜0.05),且明显提高了衰老大鼠卵巢组织中IGF-Ⅰ蛋白的表达(P＜0.05).结论 何首乌饮通过影响衰老大鼠卵巢中细胞因子IGF-Ⅰ、IGFBP3的表达,起到抗大鼠性腺衰老的作用.     

左归丸对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠血清中E_2、PTH含量的影响

目的:探讨左归丸对糖皮质激素性骨质疏松症的治疗作用及机理。方法:将42只雌性Wistar大鼠随机分为3组:空白对照组12只,模型组15只,左归丸组15只。造模给药8周后,采用骨组织形态计量学方法对不脱钙骨切片进行形态计量,并采用ELISA法检测大鼠外周血血清中E2、PTH的含量。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠胫骨TBV%及TFS%显著降低,TRS%显著增高;且大鼠血清中PTH含量显著增高,E2含量则显著降低。而左归丸组大鼠TBV%则显著高于模型组,TFS%亦显著增高,TRS%虽无差异,但有明显降低趋势;且血清中PTH含量显著降低,E2含量较之模型组显著增高。结论:左归丸可使糖皮质激素所致骨质疏松大鼠血清中PTH的水平下调,同时上调E2水平,使其紊乱状态基本恢复正常,这可能是其治疗糖皮质激素所致大鼠骨质疏松症的机理之一。     

左归丸对去卵巢大鼠股骨中核心结合因子α1 mRNA表达的影响

目的:观察左归丸对去卵巢骨质疏松大鼠股骨中核心结合因子α1 mRNA表达的影响,探讨其对骨质疏松的防治机制.方法:280只SPF级SD雌性大鼠,分为3组:正常组40只、假手术组40只、其余采取双侧背部卵巢切除术进行绝经后骨质疏松症造模.21 d后,随机分为5组:模型组、尼尔雌醇组、左归丸高、中、低剂量组.左归丸高、中、低剂量组分别给予ig6.4,3.2,1.6 g·kg-1剂量的左归丸混悬液,1次/d;尼尔雌醇组ig尼尔雌醇混悬液0.21 mg·kg-1,每周1次.于连续给药60,120,180 d,分别取大鼠左后肢股骨近端1/3部分,采用RT-PCR方法测定核心结合因子α1的mRNA表达水平.结果:与正常组比较,模型组股骨中核心结合因子α1 mRNA水平明显降低(P＜0.01);和模型组比较,给药60,120,180 d的左归丸各剂量组,股骨中核心结合因子α1 mRNA水平显著升高(P＜0.05).结论:骨组织中核心结合因子α1 mRNA表达水平的下调可能是PMOP发生的重要机制之一,左归丸能够上调骨组织中核心结合因子α1 mRNA表达,从而有效防治骨质疏松.     

补肾方药对D-半乳糖致衰大鼠心肌组织氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:观察补肾方药对D-半乳糖致衰大鼠心肌组织氧化应激及细胞凋亡的影响。方法:2 months雄性SD大鼠40只,随机分为青年对照组、衰老组、左归丸组、右归丸组,每组10只。衰老组每日腹腔注射D-半乳糖400mg·kg-1,连续60天;青年对照组每日腹腔注射等体积生理盐水;左归丸组和右归丸组处理同衰老组,同时分别按每日相当生药量4.97g·kg-1和4.94g·kg-1灌胃给药。采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸(TBA)法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;采用Western Blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平并测定组织Caspase-3相对活性。结果:与青年组对照组相比,D-半乳糖致衰组大鼠心肌组织SOD活性下降、MDA含量升高,Bcl-2蛋白表达下调、Bax蛋白表达上调,Caspase-3活性升高;给予左归丸、右归丸能显著改善D-半乳糖致衰大鼠心肌组织氧化应激水平,减少细胞凋亡。结论:补肾方药左归丸、右归丸可通过提高抗氧化能力和减少细胞凋亡而发挥其延缓心肌组织衰老的作用。     

补肾方对自然衰老大鼠海马CA1区GR、MR基因mRNA表达的影响

目的从海马GR、MR基因mRNA表达的变化探讨自然衰老的机理及补肾方的作用机制。方法以自然衰老SD雄性大鼠（24月龄）为肾虚模型,左归丸和右归丸进行干预,大鼠自20月龄始,左归丸、右归丸均按相当于生药7.5g.kg-1（成人临床用量的15倍）自由饮用稀释药液,每周停药2天,连续4个月;原位杂交检测海马CA1区神经元GR、MR基因mRNA表达。结果与青年组比较,老年组大鼠海马CA1区GR、MR mRNA表达水平均下降（P〈0.05）;与老年组比较,左归组和右归组大鼠海马CA1区GR、MR mRNA表达水平均升高。差异均有显著性（P〈0.05）。结论大鼠衰老与海马GR、MR mRNA表达变化密切相关,补肾方可通过调节海马CA1区神经细胞GR、MR基因mRNA的表达,改善海马功能、延缓机体衰老。     

JNK通路对左归丸含药血清调控MC3T3 成骨细胞Runx2 mRNA表达的影响

目的:探讨c-Jun氨端激酶(JNK)信号通路在左归丸含药血清调控成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖和成骨特异转录因子核心结合因子(Runx2) mRNA表达中的作用.方法:以MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,选用JNK特异抑制剂SP 600125,实验分为空白对照组、SP 600125组、左归丸组、左归丸加SP 600125组、倍美力组、倍美力加SP 600125组.孵育48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测SP600125对左归丸含药血清干预MC3T3-E1成骨前体细胞增殖作用的影响,采用Western blot法分析JNK蛋白磷酸化水平,采用Real Time RT-PCR法检测成骨细胞特异转录因子Runx2 mRNA表达情况.结果:与空白对照组比较,左归丸含药血清组显著促进细胞增殖,明显上调p-JNK蛋白和Runx2 mRNA表达(P＜0.01);SP600125显著抑制左归丸含药血清诱导的增殖和p-JNK蛋白表达(P＜0.01),对Runx2 mRNA表达的影响不显著.结论:JNK信号通路的激活可能参与了左归丸含药血清诱导的MC3T3-E1成骨前体细胞增殖,但左归丸含药血清诱导的Runx2mRNA高表达对JNK信号通路依赖不显著.     

补肾壮骨颗粒含药血清对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：探讨补肾壮骨颗粒含药血清对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞（ MSCs）体外增殖的影响。方法：选用10只6月龄SD大鼠去卵巢制作骨质疏松模型,对骨质疏松骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,传代后的 MSCs分为OP组、OP＋补肾壮骨颗粒含药血清组和OP＋空白血清组,倒置显微镜观察各组MSCs的生长情况,进行形态学观察,并用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法测定生长曲线。结果：OP＋含药血清组,MSCs呈典型的集落生长,细胞呈长梭形,突起细长且多,细胞增殖较旺盛,细胞数量不断增加,随着传代次数的增多,细胞增殖速度减慢。OP组及OP＋空白血清组MSCs接种后胞体立体感下降,体积较大,细胞偏圆形,突起收缩,增殖速度较慢,细胞数量减少;随着传代次数的增多,细胞增殖速度显著减慢。OP＋补肾壮骨颗粒含药血清组骨髓间充质干细胞增殖能力明显提高,生长曲线有显著性差异。结论：补肾壮骨颗粒含药血清能促进去卵巢骨质疏松大鼠MSCs的增殖。     

叶绿素铜钠促进再障小鼠骨髓MSC对T细胞的干预作用

目的:探讨叶绿素铜钠促进免疫介导再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)小鼠骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cells,MSC)对T淋巴细胞的干预作用。方法:建立免疫介导AA小鼠模型,随机分为正常对照组(N)、AA模型组(M)、环孢菌素组(Cs)、叶绿素铜钠小剂量组(X)、叶绿素铜钠中剂量组(Z)、叶绿素铜钠高剂量组(G)6组,每组6只,15日后处死,观察各组的骨髓病理,骨髓进行MSC培养,第3代MSC诱导成骨细胞,观察光镜下第2代MSC(F2MSC)、成骨细胞的形态学变化,MSC调节植物血凝素(PHA)对T淋巴细胞转化实验,ELISA检测MSC的转化生长因子(TGF-β1)。结果:N、Cs、X、Z、G组的骨髓增生均比M组活跃。各组F2MSC细胞呈长梭形,第3代MSC可被诱导为成骨细胞。N、X、Z、G组的CD2+5FOXP3+明显大于M组(P0.05)。N、Cs、Z组的TGF-β1显著大于M组(P0.05)。结论:叶绿素铜钠能促进AA小鼠MSC对T淋巴细胞的干预作用。     

鳖甲生血丸对骨髓纤维化大鼠作用机制的实验研究

目的研究鳖甲生血丸治疗骨髓纤维化大鼠的作用机制。方法将72只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、鳖甲生血丸低剂量组、鳖甲生血丸中剂量组、鳖甲生血丸高剂量组及肝复康丸组,每组12只。除正常对照组外,其余5组均采用四氯化碳制备肝纤维化模型进行(由于目前骨髓纤维化模型大鼠制备技术尚不成熟,故本实验采用肝纤维化模型大鼠进行实验)。从造模开始的第5周,正常对照组及模型对照组分别予1 m L/100 g蒸馏水灌胃,每日1次;鳖甲生血丸低、中、高剂量组分别予1 m L/100 g(生药含量分别为0.07、0.14、0.28 g/m L)的鳖甲生血丸药液灌胃,每日1次;肝复康丸组予0.42 g/100 g的肝复康丸灌胃,每日1次。各组大鼠均灌胃5周后脱颈处死,观察各组大鼠实验期间的一般情况,比较各组大鼠肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量变化情况,血清血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)及血管内皮生长因子(VEGF)水平变化情况,肝细胞损伤程度分级及肝纤维化程度分级情况。结果正常对照组12只大鼠均无异常,模型对照组大鼠死亡5只,鳖甲生血丸低、中、高剂量组大鼠分别死亡3、2、2只,肝复康组大鼠死亡3只。模型对照组大鼠灌胃5周后肝组织Hyp含量明显高于正常对照组(P<0.05);鳖甲生血丸中、高剂量组及肝复康丸组大鼠灌胃5周后肝组织Hyp含量均低于模型对照组(P<0.05),但各组组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);鳖甲生血丸低剂量组肝组织Hyp含量较模型对照组虽有下降趋势,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型对照组灌胃5周后血清PDGF、TGF-β1及VEGF水平均明显高于正常对照组(P<0.05);鳖甲生血丸低、中、高剂量组及肝复康丸组大鼠灌胃5周后血清PDGF、TGF-β1及VEGF水平均低于模型对照组(P<0.05),但各组组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。经Ridit分析显示,模型对照组灌胃5周后肝细胞损伤程度重于正常对照组(P<0.05);鳖甲生血丸低、中、高剂量组及肝复康丸组大鼠灌胃5周后肝细胞损伤程度均轻于模型对照组(P<0.05),但各组组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。经Ridit分析显示,模型对照组灌胃5周后肝纤维化程度重于正常对照组(P<0.05);鳖甲生血丸低、中、高剂量组及肝复康丸组大鼠灌胃5周后肝纤维化程度均轻于模型对照组(P<0.05);鳖甲生血丸中、高剂量组及肝复康丸组大鼠灌胃5周后肝纤维化程度均轻于鳖甲生血丸低剂量组(P<0.05),但鳖甲生血丸中、高剂量组及肝复康丸组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论鳖甲生血丸可明显抑制纤维组织增生,减少组织内胶原的形成和沉积,且中、高剂量组效果更好,其治疗骨髓纤维化的作用机制可能与降低TGF-β1、PDGF及VEGF水平有关。     

补肾方药对衰老大鼠海马学习记忆相关基因BDNF及其受体TrkB mRNA表达的影响

目的:观察补肾方药左归丸、右归丸对衰老大鼠海马学习记忆相关基因脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB mRNA表达的影响,探讨老年大鼠学习记忆功能减退的部分分子机理,以及左归丸、右归丸的改善作用。方法:以自然衰老SD大鼠为动物模型,随机分设4组:青年对照组、老年对照组、老年左归丸组、老年右归丸组。采用原位杂交技术,观察各组大鼠大脑切片海马各分区(CA1、CA2、CA3、DG)BDNF、TrkB mRNA表达变化。结果:与青年对照组相比,老年对照组大鼠海马各分区的BDNF、TrkB mRNA表达均明显减弱(P<0.05),而左归丸、右归丸能不同程度地提高老年对照组大鼠海马DG、CA1、CA2、和CA3分区低下的BDNF、TrkB mRNA的表达。结论:老年大鼠的学习记忆功能退化,与学习记忆相关的基因BDNF、Trk B表达异常有关。而滋补肾阴方药左归丸、温补肾阳方药有归丸能通过提高BDNF、TrkB基因的表达,进而改善老年大鼠的学习记忆功能,延缓机体衰老。