小檗碱联合厚朴酚及和厚朴酚对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响

目的 通过体外试验研究小檗碱与厚朴酚、和厚朴酚联合对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响及其干预途径.方法 以氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导THP-1巨噬细胞泡沫化为模型,采用HPLC-MS测定泡沫细胞中总胆固醇的含量;ELISA法测定巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;FCM检测巨噬细胞CD36的表达.结果 经小檗碱与厚朴酚、和厚朴酚联合作用后,泡沫细胞中总胆固醇的含量显著减少,细胞培养上清液中TNF-α分泌量降低,细胞表面CD36表达被抑制.结论 小檗碱联合厚朴酚及和厚朴酚抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成与抗炎和下调脂质的受体CD36表达有关.     

化瘀祛痰方药对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1、CD36表达的影响

目的:观察化瘀祛痰方药及其拆方对THP-1源性泡沫细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、CD36表达的影响,探讨该方药的作用机制,并比较方药全方及各拆方的疗效及调控作用。方法:体外培养THP-1细胞,佛波酯(PMA)使之巨噬化,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)使巨噬细胞泡沫化。细胞随机分为空白对照组、模型组、补气组、化瘀组、祛痰组和全方组。油红O染色观察细胞浆脂滴变化,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量分析ABCA1、CD36 mRNA水平。结果:模型组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.01);与模型组相比,全方组和祛痰组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低。RT-PCR结果提示模型组细胞ABCA1、CD36 mRNA水平显著升高;而化瘀祛痰方药及祛痰拆方含药血清可显著升高ABCA1 mRNA,显著降低CD36 mRNA水平。结论:化瘀祛痰方药及祛痰方可抑制ox-LDL诱导的THP-1细胞泡沫化,该作用可能与其上调ABCA1基因、下调CD36基因表达,从而减弱THP-1细胞对ox-LDL摄取有关。     

通脉降浊煎剂含药血清对泡沫细胞胆固醇流出率的影响

目的研究通脉降浊煎剂含药血清(TDMS)对泡沫细胞胆固醇流出率的影响及可能机制。方法采用50mg/L ox-LDL诱导巨噬细胞48h,建立巨噬细胞源泡沫细胞模型,添加TDMS,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞),ox-LDL组(50mg/L ox-LDL),β-环糊精(β-CD)组(50mg/L ox-LDL+10mmol/Lβ-CD),正常血清(CS)组(50mg/L ox-LDL+等体积正常血清),TDMS组(50mg/L oxLDL+5%TDMS)。检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和细胞胆固醇流出率;采用Western blot方法检测细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达;Real-time PCR方法检测细胞内ABCA1、miR-33a、miR-33bmRNA表达。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和胆固醇流出率均增加(P0.05,P0.01),ABCA1mRNA和蛋白表达水平降低(P0.01),miR-33a和miR-33bmRNA表达水平均升高(P0.01)。与ox-LDL组比较,β-CD组与TDMS组细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量均下降,胆固醇流出率增大(P0.05,P0.01),ABCA1mRNA和蛋白表达水平升高(P0.01),细胞内miR-33a和miR-33bmRNA表达水平均降低(P0.01)。结论 TDMS通过调节miR-33a/b和ABCA1表达,从而提高胆固醇流出率,降低泡沫细胞内胆固醇含量。     

氟伐他汀对冠心病患者单核细胞ABCA1表达的影响

目的:以冠心病患者外周血单核细胞为研究对象,观察氟伐他汀对体外培养的冠心病患者外周血单核细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法:于冠脉造影时无菌采集血液标本,肝素抗凝,密度梯度离心法分离患者外周血单核细胞,按作用时间与浓度分组,分别与10.0μmol/L氟伐他汀作用0h、6h、12h、24h,以及0、1.0、10、100μmol/L浓度的氟伐他汀作用24h。提取各组细胞总RNA,逆转录多聚酶链反应检测ABCA1 mRNA的表达。结果:与对照组比较,10.0μmol/L氟伐他汀作用于单核细胞6h、12h、24h以及不同浓度的氟伐他汀与单核细胞孵育24h均不能增强单核细胞ABCA1 mRNA(P>0.05)。结论:氟伐他汀不能增强冠心病患者单核细胞ABCA1的表达。     

黄连与厚朴配伍对盐酸小檗碱在大鼠体内药动学的影响

黄连、厚朴两味药为经典古方连朴饮中的君药和臣药,古代医书<普济方>中也有由两药配伍组成的方剂黄连厚朴汤.方中黄连清热燥湿,厚朴行气化湿,两药合用,苦降辛开,使气行湿化,湿去热清,为治湿热霍乱的良方,临床以呕吐腹泻,胸膈满闷,不思饮食为主要症状[1].黄连中的主要活性成分小檗碱已被证明具有抗菌,抗腹泻的作用[2].     

厚朴的不同药用部位中酚类成分的含量及其产地加工对含量的影响

报道了同株厚朴不同药用部位及产地加工各工序的样品中厚朴酚(Magnolol)及和厚朴酚(Honokiol)的含量分布与变化情况。会测结果说明,同株厚朴中地下部分或接近地下部分的树皮含量较地上部分树皮含量高,经产地加工品比未经产地加工品含量稍高。     

中药基于ABCA1介导巨噬细胞胆固醇流出防治动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化( atherosclerosis,AS)是以胆固醇为主的脂质在动脉内膜沉积,引起内膜灶性纤维性增厚,泡沫细胞崩解、坏死,形成粥样物为特征的慢性炎症性疾病.AS早期的主要特征是泡沫细胞在动脉内膜集聚,而泡沫细胞是主要源于脂质超负荷的单核-巨噬细胞.以胆固醇为主的脂质在动脉内膜上沉积过多是导致动脉粥样硬化的基...     

中药黄蛭口服液对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

目的：通过观察中药黄蛭口服液对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCAl）表达的影响，探讨中药黄蛭口服液对动脉粥样硬化的影响。方法：采用流式细胞术检测细胞平均AB-CA1荧光强度。运用逆转录多聚酶链反应检测ABCA1mRNA的表达。结果：OX-LDL能够引起THP-1细胞ABCA1水平的上调；相对于阴性对照组中药黄蛭口服液能明显提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1荧光强度以及ABCA1mRNA的表达。结论：研究显示中药黄蛭口服液能显著上调THP-1细胞ABCA1的水平。     

小檗碱与吴茱萸碱配伍对高胆固醇血症大鼠小肠ACAT2、ApoB48和NPC1L1表达的影响

目的研究小檗碱与吴茱萸碱配伍对高胆固醇血症大鼠小肠酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶2(ACAT2)、载脂蛋白B48(ApoB48)和尼曼-匹克C1型类似蛋白1(NPC1L1)表达的影响。方法 50只SD大鼠分成空白对照组和4个造模组,造模组40只大鼠给予高脂、高胆固醇饲料喂养建立高胆固醇血症大鼠模型,将造模成功的大鼠随机均分为模型对照组、阿托伐他汀组、小檗碱-吴茱萸碱配伍组(89.2、178.4 mg/kg),给予相应药物干预4周,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,气相色谱法测定各组动物血清中总胆固醇、β-谷固醇水平,免疫组化法测定各组大鼠小肠组织ACAT2、ApoB48和NPC1L1蛋白表达。结果 89.2、178.4 mg/kg配伍组能显著降低高胆固醇血症大鼠血清TC、TG和肝脏TC水平(P0.01),89.2 mg/kg配伍组还能显著降低高胆固醇血症大鼠血清LDL-C和肝脏TG水平(P0.05);气相色谱结果表明,178.4 mg/kg配伍组大鼠血清总胆固醇、β-谷固醇水平较模型对照组显著降低(P0.05),89.2 mg/kg配伍组极显著降低(P0.01);免疫组化结果显示,小檗碱与吴茱萸碱配伍2个剂量组ACAT2、ApoB48和NPC1L1平均光密度值较模型对照组均显著降低(P0.05或P0.01)。结论小檗碱与吴茱萸碱配伍可通过下调高胆固醇血症大鼠小肠ACAT2、ApoB48和NPC1L1的表达调节机体胆固醇代谢。     

人参炔三醇抑制氧化低密度脂蛋白诱导泡沫细胞形成的作用机制研究

目的 探讨人参炔三醇(panaxytriol, PXT)抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, oxLDL)诱导单核巨噬细胞脂质沉积的作用机制。方法 单核细胞THP-1经佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate, PMA)诱导成巨噬细胞后,采用不同浓度(0、1、5、10、20μmol/L) PXT处理单核巨噬细胞24小时,通过MTT法检测其对细胞存活率的影响。THP-1单核巨噬细胞经PMA刺激后,利用oxLDL诱导脂质蓄积,PXT处理后利用流式细胞仪,荧光显微镜和油红O染色检测巨噬细胞对oxLDL的摄取。采用Western blot检测细胞内白细胞分化抗原36(cluster of differentiation, CD36)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体B1(scavenger receptor class B type 1, SRB1)的蛋白表达水平变化。结果 MTT实验结果显示,与正常组比较,20μmol/...     

高糖及AGE对高压下THP-1源泡沫细胞ABCA1表达的影响

目的观察高糖、AGE及罗格列酮对高压力培养下THP-1源泡沫细胞ABCA1蛋白表达的影响,探讨ABCA1在高血压和糖尿病动脉粥样硬化中的作用机制。方法根据不同处理因素将THP-1源泡沫细胞分为11组:CON组,HP组,HG组,AGE组,HG-HP组,AGE-HP组,HP-R组,HG-R组,AGE-R组,HG-HR组,AGE-HR组。用Westernblot法测定其ABCA1蛋白表达。结果高糖、AGE、高压力及高压与高糖、AGE联合作用明显减弱ABCA1表达(P<0.01),罗格列酮能减弱或取消这种作用。结论THP-1源泡沫细胞ABCA1表达下调可能是高血压及糖尿病动脉粥样硬化的原因之一,其机制可能与PPARγ有关。     

黄芪注射液对人单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇外流的影响

目的观察黄芪注射液是否对人外周血单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇外流产生作用和影响,从机体胆固醇逆转运（RCT）的角度探讨黄芪的调脂机制和抗动脉粥样硬化的作用。方法采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离出单核细胞,以50nmol／I。佛波酯（PMA）刺激48h使之转化为巨噬细胞。细胞分为对照组与实验组,以黄芪注射液干预后分别测定细胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）与蛋白（Pro）含量的变化,观察黄芪注射液对细胞内TC／Pro影响的量效关系和时效关系。结果成功建立人单核细胞源性泡沫细胞模型。经不同浓度黄芪注射液作用后,细胞中TC／Pro随黄芪注射液浓度的增加而呈剂量依赖性降低,细胞泡沫化程度也随着药物浓度的升高而降低（P〈0．01）,且在药物浓度一定的情况下,细胞中TC／Pro随黄芪注射液处理时间的延长而呈时间依赖性降低（P〈0．01）。结论黄芪注射液通过降低细胞内TC含量,一定程度上减轻巨噬细胞的泡沫化程度,推测可能与其抑制巨噬细胞上SR—B1受体功能从而抑制细胞对胆固醇摄取,或是通过增强巨噬细胞上ABCA1转运体的功能而促进了细胞内胆固醇的外流有关,或者是两者共同作用的结果。     

艳山姜挥发油通过调控巨噬细胞CD36和ABCA1表达抑制泡沫细胞的形成

目的:观察艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞转化为泡沫细胞的抑制作用,并探索其机制。方法:使用佛波酯(PMA,100μg·L^-1)诱导人白血病单核细胞(THP-1)24 h后形成巨噬细胞,实验分为4组,分别为空白组(无血清RPMI 1640),模型组(80 mg·L^-1ox-LDL),艳山姜挥发油低剂量组(80 mg·L^-1ox-LDL+4μg·L^-1艳山姜挥发油),艳山姜挥发油高剂量组(80 g·L^-1ox-LDL+20μg·L^-1艳山姜挥发油)。噻唑蓝(MTT)比色法检测艳山姜挥发油对巨噬细胞的活性的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞中白细胞分化抗原36(CD36)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测巨噬细胞内胆固醇酯含量,油红O染色法检测巨噬细胞中脂质小滴的含量。结果:艳山姜挥发油对巨噬细胞无毒性。与空白组比较,模型组的巨噬细胞内脂滴和胆固醇酯的含量显著增加(P<0.01),CD36蛋白表达显著上升(P<0.01),ABCA1蛋白表达无显著变化;与模型组比较,艳山姜挥发油显著抑制巨噬细胞中脂滴和胆固醇酯的含量(P<0.01),下调CD36的蛋白表达(P<0.01),上调ABCA1蛋白的表达(P<0.01),艳山姜挥发油可抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化。结论:艳山姜挥发油对ox-LDL诱导的巨噬细胞向泡沫细胞的形成具有抑制作用,该药理作用与艳山姜挥发油下调巨噬细胞CD36和上调ABCA1蛋白的表达有关。     

“发汗”对厚朴质量的影响

目的:对"发汗"与未"发汗"厚朴药材中化学成分进行比较研究,探讨"发汗"对厚朴质量的影响。方法:采用HPLC方法对"发汗"和未"发汗"厚朴中酚类成分进行指纹图谱分析和含量测定;以GC-MS方法,对"发汗"于未"发汗"厚朴中挥发油成分进行指纹图谱分析和β-桉叶醇含量测定。结果:"发汗"样品相比于未"发汗"样品,HPLC图谱中有6个峰单位质量峰面积差异极显著;GC-MS图谱中有10个特征峰相对峰面积具显著差异。结论:"发汗"与未"发汗"厚朴酚类成分和挥发油类成分在含量上存在差异,其中"发汗"厚朴较未"发汗"者厚朴酚、和厚朴酚含量升高,magnoloside A和β-桉叶醇含量降低。magnoloside A为首次从该植物中分离得到。     

小檗碱对NIT-1细胞核内外葡萄糖激酶表达的影响

 目的观察小檗碱对不同浓度葡萄糖刺激下葡萄糖激酶(GK)在NIT-1细胞核内外表达的影响。方法将NIT-1细胞培养于含低浓度(5.5mmol·L^-1)或高浓度(16.5mmol·L^-1)葡萄糖的培养基,以不同浓度小檗碱和生物素干预后,分别用放免法检测胰岛素分泌水平,生物发光技术检测细胞浆内ATP含量,酶法分析检测GK活性,免疫荧光检测GK在细胞核内外表达。结果与对照组相比较,小檗碱能使高浓度葡萄糖刺激下NIT-1细胞分泌胰岛素水平升高,胞内ATP总量增加,GK酶活性增强,GK在细胞浆内表达增加;而小檗碱的这些作用在低浓度葡萄糖刺激下与对照组比较无显著差异。结论小檗碱能促进高浓度葡萄糖刺激下GK在NIT-1细胞浆内的表达。     

艳山姜挥发油调控PPAR γ/ABCA1信号抑制巨噬细胞源性泡沫细胞形成的作用机制

目的:探讨艳山姜挥发油(EOFAZ)调控PPARγ/ABCA1抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成的作用机制.方法:将THP-1细胞用佛波酯(PMA,100 μg/L)诱导分化为巨噬细胞,噻唑蓝(MTT)法检测EOFAZ对巨噬细胞活力的影响.油红0染色法检测脂滴的含量;酶法检测总胆固醇(T...     

小檗碱对HeLa细胞诱导的血管内皮细胞增殖作用的影响

目的:探讨小檗碱对HeLa细胞诱导血管内皮细胞增殖作用的影响及其作用机制.方法:用MTT法检测小檗碱对HUVECs增殖及HeLa细胞条件培养液诱导HUVECs增殖的影响;用ELISA检测HeLa细胞上清液中VEGF的含量.结果:在0～48h范围内小檗碱对HUVECs的增殖有明显抑制作用,并有浓度时间依赖关系;经浓度为5μg/ml～40μg/ml小檗碱作用后的HeLa细胞条件培养液对HUVECs增殖的抑制率为24.4%～44.2%,而HeLa细胞条件培养液对HUVECs增殖有明显促进作用;小檗碱抑制HeLa细胞VEGF的表达.结论:小檗碱可能通过抑制HeLa细胞VEGF的表达从而抑制肿瘤血管生成.     

右归丸含药血清对THP-1源性泡沫细胞胆固醇代谢的影响及机制研究

目的 观察右归丸含药血清对THP-1源性泡沫细胞内SREBP-1c和ABCA1因子表达的影响,以探讨右归丸对泡沫细胞内胆固醇代谢的影响及机制.方法 THP-1细胞诱导分化成巨噬细胞后,在ox-LDL刺激48 h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞,给予右归丸大、中、小剂量含药血清干预,通过油红O染色检测细胞内脂滴的形态,大小和数...     

星点设计-效应面法优化负载和厚朴酚的当归多糖-小檗碱聚合物胶束的处方工艺研究

目的 通过星点设计-效应面法优化负载和厚朴酚(honokiol,HNK)的当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)-小檗碱(berberine,Ber)聚合物胶束(ASP-SS-Ber/HNK)的处方工艺并考察其制剂学性质.方法 HPLC法测定HNK的含量;采用薄膜水化法制备...     

蒙古族ATP结合盒转运子A1基因R219K多态性与冠心病的相关性

目的探讨ATP结合盒转运子A1基因（ATP binding cassette transporter 1,ABCA1）R219K多态性在内蒙古地区蒙古族人群中的分布及其与冠心病的关系。方法采用聚合酶链反应-限制片段长度多态性方法检测115名蒙古族冠心病患者和对照组ABCA1基因相应片段的多态性。结果两组基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡。内蒙古地区蒙古族人群中ABCA1基因R219K多态性位点存在RR、RK、KK三种基因型,对照组的KK基因型的频率显著高于CHD组（32.7% vs 16.7%,P〈0.05）。KK基因型的OR值为0.411（95% CI0.17~0.99）。结论 ABCA1基因R219K多态性与内蒙古地区蒙古族人群冠心病的遗传易感性相关,其中基因型KK可能是冠心病的保护因子。