塞来昔布对急性白血病原代细胞凋亡的影响

目的：探讨塞来昔布对急性白血病原代细胞的增殖抑制与诱导凋亡的作用。方法：采用MTT法检测塞来昔布对急眭白血病原代细胞的增殖抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：塞来昔布能显著抑制急性白血病原代细胞的增殖,且呈时间和剂量具有依赖性（P〈0．05）;流式细胞仪结果分析发现,实验组与对照组的凋亡率有显著差异,且实验组的凋亡率明显升高,呈剂量依赖性（P〈0．01）。结论：塞来昔布能有效抑制急性白血病原代细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制有待进一步研究。     

选择性COX-2抑制剂对大肠癌细胞生长的影响

目的　观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT -2 9细胞增殖和凋亡的影响 ,为治疗结肠癌寻找安全有效的化疗药物。方法　采用噻唑蓝 (MTT)比色法 ,流式细胞仪 (FCM)、吖啶橙 /溴化乙啶染色结合荧光显微镜等技术 ,研究塞来昔布对HT -2 9细胞增殖和凋亡的影响。结果　MTT比色法显示体外塞来昔布抑制HT -2 9细胞生长 ,呈浓度和时间依赖性。FCM结果显示典型的亚二倍体“凋亡峰” ,凋亡率在 ( 7 3 1± 2 3 7) %～ ( 4 8 3± 2 86) %;使G0 /G1 期细胞比例升高 ,S期和G2 /M期比例下降 ,呈一定剂量依赖关系。荧光显微镜下见典型的凋亡形态学改变 :细胞体积缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量和时间依赖。结论　体外塞来昔布抑制HT -2 9细胞增殖 ,并诱导细胞凋亡。这种作用可能与阻止细胞周期进展有关     

舒林酸抑制结肠癌细胞株增殖及其转移机制的研究

目的 研究非选择性COX抑制荆舒林酸对结肠癌细胞株HT-29生长的影响及其参与引起细胞死亡的可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测舒林酸对结肠癌细胞增殖的抑制,激光共聚焦显微镜(LSM)及荧光显微镜观察细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)分析其对细胞凋亡及细胞周期的影响.结果 MTT显示舒林酸能呈剂量和浓度依赖性抑制HT-29的增殖.TUNEL染色荧光显微镜下观察凋亡细胞呈棕褐色,AnnexinV/PI染色后LSM观察凋亡细胞胞膜绿染,胞核红染或呈桔黄色,FCM显示此药促进细胞的凋亡,使处于G0/G1期的细胞比例显著降低.结论 舒林酸可抑制结肠癌细胞株HT-29生长,促进其凋亡,其机制可能与其阻止细胞周期的进展有关.     

石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡机制研究

目的 探讨石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡及机制。方法 不同浓度的石蒜碱处理体外结肠癌HT-29 细胞,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;Real time PCR实验检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA水平;Western blot方法检测Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果 48h时石蒜碱对HT-29 细胞IC50为8.878μmol/L;与对照组比较,1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L石蒜碱能诱导细胞凋亡(P<0.05),上调Caspase-3、Bax的mRNA和Caspase-3、Bax蛋白水平,下调Bcl-2的mRNA和Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 石蒜碱能通过调节Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平,抑制结肠癌HT-29 细胞生长,诱导细胞凋亡,具有明显的体内抗肿瘤作用。     

Eicosapentaenoate对软脂酸诱导细胞株INS-1凋亡的保护作用研究

目的探讨eicosapentaenoate（EPA）对软脂酸诱导的大鼠胰岛B细胞瘤株INS．1凋亡的保护作用。方法根据不同干预条件分为空白对照组,EPA干预组,软脂酸干预组,EPA及软脂酸联合干预组,24h、48h后分别应用MTY检测各组细胞生长活力,48h同时应用分光光度法检测Caspase-3,Western blot检测Bax及SREBP1c的表达,ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果EPA及软脂酸联合干预组细胞生长活力较软脂酸干预组显著升高[24h：（37．33±1．15）OD vs（30．79±1．55）OD,P〈0．01;48h：（31．50±1．56）OD vs（23．94±1．10）OD,P〈0．01],但低于空白对照组[24h：（37．33±1．15）OD vs（44．26±0．94）OD;48h：（31．50±1．56）OD vs（40．92±0．60）OD,P〈0．01]及EPA干预组[24h：（37．33±1．15）OD vs（44．37±0．79）OD;48h：（31．50±1．56）ODvs（39．45±3．42）OD,P〈0．01],联合干预组细胞Caspase-3活力及ROS含量（3566．67±305．51）OD显著低于软脂酸干预组（4233．33±416．33）OD,高于空白对照组（2233．33±503．32）OD及EPA干预组（2566．67±321．46）OD。联合干预组较软脂酸干预组下调Bax及SREBP1c表达。结论EPA可以抑制软脂酸诱导的胰岛β细胞凋亡。     

基于三维细胞模型的反式白藜芦醇对HT-29增殖凋亡影响及机制研究

目的探讨反式白藜芦醇(trans-resveratrol,trans-Res)对人结肠癌HT-29细胞的生长抑制和凋亡诱导作用及机制。方法以鼠尾I型胶原为支架建立HT-29三维细胞模型,以5氟尿嘧啶(5-Fu)为阳性对照,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)方法、Annexin V/PI双染法观察不同剂量trans-Res对人源结肠癌HT-29细胞系的生长和凋亡率的影响,运用实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR, qPCR)检测HT-29细胞的Lgr5、Bcl-2、Caspase-3mRNA表达水平。结果不同剂量trans-Res均具有显著的抑制HT-29细胞增殖的作用,同时诱导HT-29细胞凋亡,呈现时间与剂量依赖性(P0.05),效果优于与相同实验条件下的阳性对照5-Fu。经trans-Res作用后,相较对照组,HT-29细胞Lgr5表达下调(P0.05)、Bcl-2mRNA表达上调(P0.05),在药物浓度高于240μmol,作用时间大于24h时,其Caspase-3mRNA表达上调。结论 trans-Res能够显著抑制HT-29细胞的体外增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,其作用可能与Lgr5、Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达改变有关。     

塞来昔布抑制PI3K-Akt信号转导通路及COX-2表达的作用研究

目的:观察塞来昔布降调节COX-2的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用及阻止PI3K-Akt信号转导的可能机制。方法:采用MTT法检测塞来昔布对HeLa细胞的增殖抑制作用,应用流式细胞术检测塞来昔布对HeLa细胞增殖周期和凋亡的影响,并用免疫组化SP法和RT-PCR法检测塞来昔布对细胞PI3K-Akt信号转导通路的影响。结果:塞来昔布抑制HeLa细胞增殖和诱导HeLa细胞的凋亡作用均呈剂量和时间依赖性,经不同浓度的塞来昔布处理24 h后,HeLa细胞周期的G1期、G2/M期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显下降,细胞被阻滞于G2/M期。塞来昔布能阻止PI3K-Akt的信号转导,并呈浓度和时间依赖性。结论:塞来昔布在体外能下调COX-2的表达,抑制HeLa细胞的增殖,并诱导其凋亡,其作用机制与阻滞细胞周期于G2/M期及阻止PI3K-Akt信号转导通路有关。     

姜黄素诱导人结肠癌细胞凋亡作用

目的探讨姜黄素对人的结肠癌细胞系(HT-29)体外增殖及凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定姜黄素在不同浓度对HT-29细胞的抑制作用;利用流式分光光度技术、荧光显微镜技术和电镜技术,观察姜黄素对HT-29细胞诱发凋亡及细胞周期的变化。结果姜黄素可明显抑制HT-29细胞的生长,其抑制率与药物浓度成剂量依赖关系,半数抑制浓度为(15.9±1.96)μmol/L。流式细胞分析仪结果表明,姜黄素能使HT-29在加药后24h出现凋亡峰;荧光显微镜下可见姜黄素处理组织细胞核呈现深染、致密的颗粒块状荧光。电镜观察可见姜黄素能使细胞发生凋亡,出现核边集及染色质浓缩成块状。结论姜黄素可抑制大肠癌细胞的生长,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

肌醇六磷酸诱导HT-29细胞凋亡及相关基因表达

目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人结肠癌细胞系(HT-29)的凋亡诱导作用。方法将不同浓度IP6以不同时间作用于HT-29细胞,运用透射电镜观察IP6对HT-29细胞凋亡作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;钙离子荧光探针(Fura-2/AM)法测定细胞内Ca2+浓度变化;RT-PCR法检测细胞内caspase-3 mRNA表达。结果IP6诱导HT-29细胞发生凋亡的形态学变化为染色体固缩,可见凋亡小体;3.3mmol/L IP6作用6个月HT-29细胞凋亡率为4.4%,细胞内Ca2+浓度为38.66 mmol/L,与对照组比较明显升高(P0.05);各IP6组Caspase-3mRNA表达均升高(P0.05);IP6诱导HT-29细胞凋亡作用及Ca2+、Caspase-3mRNA的表达变化具有时间依赖关系。结论IP6对HT-29细胞有诱导凋亡作用,其机制可能是通过调节细胞内Ca2+浓度及Caspase-3的表达来实现。     

神经生长因子诱导肝星状细胞凋亡及其相关机制的研究

目的观察神经生长因子（nerve growthfactor,NGF）对大鼠肝星状细胞（hepatic stellatecell,HSC）凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC—T6,将HSC—T6与100ng／mlNGF孵育24h后,流式细胞术检测细胞凋亡;细胞免疫化学法检测HSC中凋亡相关基因P^53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的情况;免疫荧光法检测NGF、神经生长因子低亲和力受体p75NTR表达的情况。结果NGF作用HSC后凋亡率较对照组明显增高[（22．364±9．51）％VS（5．88±1．36）％,P〈0．05]。凋亡相关蛋白P^53、Caspase-3的阳性细胞百分率与对照组比较明显增高[（78．41±4．00）％、（39．26±1．57）％VS（34．96±3．84）％、（9．27±1．01）％,P〈0．05],而Bcl-2表达实验组阳性细胞百分率较对照组降低[（18．12±1．38）％vs（91．53±2．98）％,P〈0．05]。NGF作用HSC后NGF表达增多（6．53±1．40vs1．77±0．17,P〈0．05）,而p75NTR表达无明显变化（3．52±0．36VS4．24±0．38,P〉0．05）。结论NGF可能通过使凋亡相关基因p、Caspase-3表达上调、Bcl-2表达下调,而诱导HSC凋亡。NGF作用HSC后可作为始动因子和效应因子增加NGF的表达,而对p75NTR表达无影响。     

肌酐代谢产物对人肾小管上皮细胞毒性作用的比较研究

目的比较观察甲基胍、1。甲脲乙醇酸酐对人肾小管上皮细胞的毒性作用。方法HK．2细胞作为研究对象,分为三组培养：正常对照（A）组,甲基胍（B）组、1－甲脲乙醇酸酐（C）组,用MTr比色试验法检测细胞增殖,NAG酶释放检测对细胞的毒性,Hoechst染色及AnnexinV—FITC／PI流式细胞术检测凋亡。结果HK－2细胞加入甲基胍、1－甲脲乙醇酸酐后,较正常对照组吸光度值显著下降（0．188±0．011,0．176±0．010VS0．545±0．021,F=1557．74,P〈0．01）,NAG酶浓度显著上升（20．488±0．473,22．225±0．565VS5．1254-0．198,F：3848．22,P〈0．01）。Hoechst33258染色显示凋亡细胞呈现核固缩,染色加深,并出现凋亡小体。流式细胞术显示B组、C组HK-2细胞凋亡率显著高于A组（18．23±1．1581,20．22±1．1433VS2．4734-0．321,F=526．06,P〈0．01）。C组吸光度值显著低于B组（0．176±0．010VS0．1884-0．011,t=2．26,P〈0．05）,NAG酶浓度显著高于B组（22．225±0．565VS20．488±0．473,t=－6．67．P〈0．01）,凋亡率显著高于B组（20．224-1．1433VS18．23±1．1581,t=－2．762,P〈0．05）。结论1．甲脲乙醇酸酐对肾小管上皮细胞的毒性作用强于甲基胍。     

长期过量饮酒对精子质量及生精细胞凋亡的影响

目的探讨长期高浓度过量饮酒者精液中一氧化氮（NO）含量其精子质量和生精细胞凋亡与不育的关系。方法116例过量饮酒男性患者精液分为4组,30例不饮酒男性精液为对照,采用硝酸还原酶法特异地将NO代谢产物硝酸盐（NO3^-）测还原成亚硝酸盐（NO2^-）总量代表NO水平。用脱氧核苷酸末端转移酶（TdT）介导的缺口末端标记（TUNEL）法和双目光学显微镜,分别检测和观察生精细胞的凋亡率及形态结构。用SQA—V全自动精子质量分析仪,测定精子质量。结果未饮酒生育组精液中NO的含量为（54．81±11．45）μmol／L,生精细胞的凋亡率（4．52±I．23）％,精子质量活率（80．24±0．17）％、活力a＋b（78．32±0．12）％、畸形率（5．304±0．13）％,与长期高浓度过量饮酒C组[（128．83±22．73）μmol／L,（17．34±2．53）％,（51．18±0．58）％,（21．45±0．26）％,（21．12±3．24）％]相比,差异均有统计学意义（t：10．04,17．38,6．69,15．59,17．02,P〈0．01）。长期高浓度过量饮酒各组NO的含量和生精细胞的凋亡率呈正相关（r=0．93,P〈0．01）。凋亡的生精细胞核染色质浓缩于核周形成新月形,核裂解形成凋亡小体。结论长期高浓度过量饮酒者精液中NO的含量和生精细胞的凋亡率均升高,精子质量低下。提示长期高浓度过量饮酒可致机体NO过度产生而促使生精细胞凋亡致男性不育的因素之一。     

金雀异黄酮对结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响

目的观察植物雌激素金雀异黄酮(GS)对人结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子生物学作用机制。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测GS对HT-29细胞增殖活力和细胞周期分布的影响;CellDeathELISA和流式细胞术从不同方面检测GS对HT-29细胞凋亡的影响;RT-PCR和Western-blot技术检测GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2和baxmRNA和蛋白质表达的影响。结果与对照组相比,在15~120μmol/L浓度范围内,GS能够抑制HT-29细胞增殖活力;降低S细胞分布比例,将细胞周期滞留在G2/M期;显著性诱导HT-29细胞凋亡(>30μmol/L,P<0.05),并呈现出良好的剂量-效应关系。检测GS对PCNA、bcl-2和bax表达的影响显示,GS能够抑制PCNA和bcl-2mRNA和蛋白质表达,对bax的表达则表现出促进作用。结论GS通过诱导HT-29细胞凋亡而抑制其增殖活力,这些效应与PCNA、bcl-2和bax的表达变化有关。这些资料可为结肠癌的早期预防提供膳食干预新途径,并为临床新药的开发提供新方案。     

大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的探讨大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用,并探讨其作用机制。方法建立人膀胱癌细胞株BIU87裸鼠移植瘤模型,并随机分为4组：对照组、大黄素组、Z—VAD—FMK组、大黄素＋Z—VAD—FMK组。观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,4周后处死全部裸鼠,取出肿瘤组织,称瘤质量;HE染色观察肿瘤细胞形态,流式细胞分析仪细胞凋亡,RT-PCR检测各组肿瘤组织中AIF和EndoGmRNA的表达,Western blot检测各组肿瘤组织中AIF和EndoG蛋白的表达。结果大黄素组肿瘤生长速度明显慢于其他3组,大黄素组[（0．41±0．05）g]和大黄素＋Z-VAD—FMK组[（0．69±0．07）g]肿瘤较其他2组[（1．08±0．13、1．04±0．09）g]轻,差异有统计学意义（F=90．56、27．49,P〈0．01）,大黄素组与大黄素＋Z—VAD—FMK组相比差异也有统计学意义（t=10．01,P〈0．01）。流式细胞仪检测凋亡显示大黄素组细胞凋亡率[（42．71±2．69）％]明显高于大黄素＋Z-VAD—FMK组[（34．38±1．73）％]（t=6．38,P〈0．01）。RT—PCR和Western blot结果显示,大黄素＋Z—VAD—FMK组中AIF和EndoG的表达水平显著上调,与其他各组比较[（1．65±0．12）vs（1．24±0．08）、（0．51±0．07）、（0．48±0．04）;（2．12±0．16）vs（1．75±0．13）、（0．57±0．06）、（0．59±0．07）;（2．42±0．13）vs（1．73±0．11）、（0．78±0．07）;（0．75±0．08）;（3．13±0．25）vs（2．15±0．18）、（0．85±0．09）、（0．81±0．14）],差异均有统计学意义（F=303．22,319．32,409．38,258．53,P〈0．01）。结论大黄素能够明显抑制人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能部分与大黄素可上调膀胱癌细胞BIU87中AIF和EndoG的表达,通过启动非Caspase依赖途径诱导细胞凋亡有关。     

神经酰胺诱导人结肠癌细胞凋亡的作用

目的 探讨外源性神经酰胺诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的作用。方法 采用噻唑兰(MTT)显色法、荧光显微镜、电镜观察以及通过免疫组化方法检测Fas、P53的表达情况。结果 神经酰胺对HT-29细胞的生长有明显抑制作用，并可诱导HT-29细胞产生凋亡，并随着神经酰胺浓度的增加，细胞凋亡率逐渐增加；Fas蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现逐渐升高的趋势，p53蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现降低的趋势。结论 神经酰胺能诱导HT-29细胞产生凋亡。     

跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗诱导黑色素瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗诱导恶性黑色素瘤细胞B16凋亡的作用。方法采用脂质体转染法分别将前期构建的模拟肽疫苗稳定转染B16细胞，加入终浓度为2．5μg／ml、5μg／ml、10μg／ml及20μg／ml的抗血型A单克隆抗体培养72h，AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡率。结果P／F-M-pIRES组的B16细胞经10μg/ml抗血型A单克隆抗体诱导后凋亡率为74．74％，转染有模拟肽／Fas融合基因的P／F-M-pIRES组和P／F-pIRES组凋亡率明显高于未转染的M-pIRES组和pIRES组。析因设计的方差分析显示不同实验分组之间的差异主效应差异有统计学意义（F=669．707，P〈0．01），不同浓度分组之间的主效应差异有统计学意义（F=106．596，P〈0．01），不同实验分组不同浓度之间的交互效应差异也有统计学意义（F=34．806，P〈0．01）。结论跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗可诱导黑色素瘤细胞B16凋亡，在黑色素瘤治疗中可能是一种有潜在价值的方法。     

染料木黄酮和叶酸对β淀粉样肽31-35诱导的细胞及线粒体膜损伤的拮抗作用

目的 探讨染料木黄酮(Gen)和叶酸(FA)对β淀粉样肽31-35(Aβ31-35)诱导的神经细胞膜及线粒体膜损伤的拮抗作用.方法 按照简单随机抽样的方法,将原代培养的大鼠大脑皮质神经细胞分为5组,即对照组、Aβ31-35(25μmol/L)、Gen(27μg/ml)、FA(40μg/ml)及Gen和FA(Gen 27μg/ml+FA 40μg/ml)联合干预组.各干预组预先在培养液中加入Gen和(或)FA,2 h后加入Aβ31-35,继续培养24 h后收集细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞的活性、荧光偏振法检测细胞膜流动性、激光扫描共聚焦显微镜(LCM)检测线粒体膜电位和流式细胞术(FCM)检测线粒体膜通透性转运作用.每个实验至少重复3次.结果 Gen组、FA组和Gen+FA组的A570值分别为0.982±0.110、0.947±0.061和0.996±0.090,与Aβ31-35组相比差异有统计学意义(t值分别为3.523、2.745和3.966,P值均＜0.01).细胞膜的黏度值与Aβ31-35组相比,Gen组(1.75±0.28,t=2.085,P＜0.05)和FA(1.66±0.37,t=2.357,P＜0.05)单独或联合(1.50±0.20,t=3.784,P＜0.05)干预后,细胞膜的黏度值显著降低,差异有统计学意义,表示细胞膜流动性升高.线粒体膜电位结果显示,Gen、FA与Gen+FA联合干预后,线粒体膜电位(荧光强度差值依次为5.286±1.792,5.884±2.022,6.120±2.124)比Aβ31-35组(3.364±1.140,F=7.585,P＜0.01;t值分别为:2.406、2.887、3.040,P值均＜0.01)显著增高.流式实验结果显示,经Aβ处理神经细胞的线粒体通透性转运孔(MPTP)开放,而此现象可经Gen和FA的干预有效逆转.结论 Gen和(或)FA对Aβ31-35引起的神经细胞膜及线粒体膜损伤具有拮抗作用.