蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL7402生长抑制和诱导凋亡作用的研究

目的 :探讨蒺藜皂苷 (STT)对体外培养的人肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法 :应用MTT与SRB法检测蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL-7402的抑制作用 ,采用形态学观察以及流式细胞术 (FCM)检测了STT诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的效应 ,采用流式细胞术检测BEL-7402细胞Bcl-2蛋白表达。结果 :①STT能够剂量依赖地抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖 ;②细胞显现典型的凋亡形态学改变 ,FCM出现凋亡峰 ;③STT能降低BEL-7402细胞的Bcl-2蛋白表达。结论 :STT在体外能抑制BEL-7402细胞的增殖并能诱导细胞凋亡 ,其诱导凋亡作用的途径之一是下调Bcl-2蛋白表达。     

白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其机制研究

目的探讨白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其相关机制。方法采用MTT法考察白头翁皂苷D对人肝癌细胞BEL-7402增殖的影响,同时观察BEL-7402细胞形态的变化,采用集落形成实验考察白头翁皂苷D对BEL-7402细胞集落形成的影响;Hoechest 33342染色观察BEL-7402细胞凋亡的形态变化;流式细胞术检测BEL-7402细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化;采用Western blotting法检测BEL-7402细胞Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果 MTT结果显示白头翁皂苷D对BEL-7402细胞增殖有抑制作用;集落形成实验结果显示白头翁皂苷D能明显抑制BEL-7402细胞集落的形成,白头翁皂苷D(25.00μg/m L)能显著诱导BEL-7402细胞凋亡;白头翁皂苷D(18.75、25.00μg/m L)能显著降低BEL-7402细胞线粒体膜电位;白头翁皂苷D(12.50、18.75、25.00μg/m L)可显著上调BEL-7402细胞中Caspase-3的表达;白头翁皂苷D(25.00μg/m L)可显著下调Bcl-2的表达。结论白头翁皂苷D有良好的体外抗肝癌作用,其机制与调节线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

青蒿酯钠诱导人肿瘤细胞凋亡及其分子机制的探讨

目的 研究青蒿酯钠诱导人肝癌细胞凋亡作用及探讨青蒿酯钠诱导人肝癌细胞凋亡的分子机制.方法 肝癌细胞(BEL-7402)经药物处理后,用荧光显微镜,透射电镜和流式细胞仪分析诱导凋亡作用,采用Western blot检测p53,p21和bcl-2.结果 与对照组相比,经青蒿酯钠处理后,肝癌细胞中p53,p21蛋白表达水平无明显变化,而bcl-2蛋白表达水平降低.结论 青蒿酯钠可诱导人肝癌细胞(BEL-7402)凋亡,其凋亡的分子机制是p53非依赖性的,即与p53,p21无关,而与凋亡调节基因bcl-2下调有关.     

吉马酮抑制肝癌BEL7402细胞增殖机制初步研究

目的研究吉马酮抑制肝癌Bel7402细胞增殖的作用机理。方法通过MTT法比较吉马酮对Bel7402和L02细胞增殖的影响,流式细胞仪检测并确定吉马酮对Bel7402细胞凋亡和活性氧含量的影响。Western-blot法检测吉马酮处理前后p53、Bax和Bcl-2蛋白合成的变化。结果实验浓度范围内,吉马酮可选择性浓度依赖性的抑制Bel7402细胞的增殖;吉马酮剂量依赖性的促进肝癌Bel7402细胞凋亡和上调活性氧含量;吉马酮显著促进抑癌蛋白p53和Bax的表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论吉马酮在体外能明显抑制肝癌Bel7402细胞的增殖,上述变化可能通过上调p53和Bax、下调Bcl-2及上调活性氧含量来完成。     

人参多糖注射液对肝细胞癌的增殖抑制作用及机制探讨

目的:观察人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2增殖抑制作用,并探讨其机制。方法:将不同浓度的人参多糖注射液与人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2作用,采用cell counting kit-8(CCK8)检测细胞的增殖抑制,通过倒置显微镜观察用药前后细胞形态、数量变化,透射电镜观察细胞坏死、凋亡等形态学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)蛋白表达情况。结果:人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显抑制作用(P0.05),并且与浓度和时间呈正相关。60,80,100 g·L~(-1)人参多糖注射液作用于人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 24,48,72h后,可显著抑制其增殖(P0.01),40 g·L~(-1)人参多糖注射液作用于人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 24,48,72 h后可明显抑制其增殖(P0.05)。人参多糖注射液作用人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 48 h后,细胞出现细胞核边集、凋亡小体等凋亡形态变化,72 h后部分细胞出现空泡样变等形态学变化。与空白组比较,40,60,80 g·L-1人参多糖注射液组作用人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2后,TNFR1蛋白相对表达量明显升高(P0.05,P0.01)。结论:人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显的抑制作用;诱导细胞凋亡可能是抑制作用的机制。     

沙棘籽渣黄酮类化合物诱导人肝癌细胞凋亡研究

目的：探讨沙棘籽渣黄酮类化合物(FSH)对人肝癌细胞BEL-7402的抑制和诱导凋亡作用。方法：采用SRB观察FSH对人肝癌细胞BEL-7402的生长抑制作用，采用wright染色、透射电镜和流式细胞术检测FSH对BEL-7402细胞的促凋亡作用。结果：200～1200μg／ml FSH能够剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞的增殖，wright染色观察到凋亡小体，透射电镜下发生染色质边集，流式细胞术检测出现亚二倍体峰。结论：FSH能够抑制BEL-7402的生长并能诱导细胞凋亡。     

大蒜多糖对人体肝癌BEL-7402的体外抑制作用

目的 探讨大蒜多糖(Garlic Polysaccharide,GP)对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用.方法 以10,30,100,300 μg/ml 的 GP 作用于体外培养的BEL-7402 细胞,并作用不同时间,通过 MTT 法检测 GP 对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 MTT 实验显示 GP可抑制 BEL-7402 细胞的生长,呈时间及浓度依赖性,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,流式细胞仪可检测到 BEL-7402 细胞凋亡率明显增加.结论 GP 能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制人肝癌 BEL-7402 细胞的生长.     

猫人参注射液对两种肝癌细胞及正常肝细胞的体外作用观察

目的:观察猫人参注射液体外对两种肝癌细胞株及正常肝细胞增殖的影响。方法:将人肝癌BEL-7402细胞株、小鼠肝癌H22细胞株和人正常肝细胞L-02细胞株进行体外培养,采用MTT法测定不同浓度、不同时间猫人参注射液的体外抑制作用。结果:猫人参注射液对人肝癌BEL-7402细胞和小鼠肝癌H22细胞具有较强抑制作用,对L-02细胞在较低浓度下抑制作用不明显。结论:猫人参注射液在体外对人肝癌BEL-7402细胞和小鼠肝癌H22细胞具有较强的抑制作用,而在较低浓度下对于L-02细胞则无明显抑制作用。     

白毛藤诱导Bel7402细胞凋亡及其作用机制

目的：探讨bcl-xl、p53基因在白毛藤诱导人肝癌Bel7402细胞凋亡中的作用。方法：荧光显微镜观察不同浓度白毛藤诱导Bel7402细胞凋亡作用情况,RT-PCR检测bcl-xl、p53基因表达量的变化。结果：白毛藤诱导Bel7402细胞凋亡,并且上调p53和降低bcl-xl表达。结论：白毛藤能促进Bel7402细胞凋亡,其机制可能与激活p53、抑制bcl-xl表达有关。     

黄芩甙对人肝癌细胞BEL-7402增殖、凋亡和分化的影响

目的：研究黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系增殖、凋亡和分化的影响。方法：培养BEL-7402细胞,应用MTT实验和软琼脂克隆形成实验观察黄芩甙对肝癌细胞增殖的作用,流式细胞术测定细胞凋亡率。光镜、电子显微镜观察细胞形态、超微结构,酶促反应试剂盒检测细胞浆中ALP、γ-GT活性,放免法检测细胞AFP、白蛋白分泌量和细胞内cAMP含量。结果：黄芩甙能明显抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡。黄芩甙作用后肝癌细胞趋于成熟分化,γ-GT降低,ALP比活力明显升高,ALP耐热型同工酶即胎盘型ALP活性显著低于对照,AFP合成和分泌量显著性降低,AIb分泌显著升高,细胞内cAMP含量增加。结论：黄芩甙能抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡,诱导肝癌细胞分化,     

瑞香狼毒药效组分诱导人肝癌细胞凋亡及对细胞周期依赖性蛋白激酶CDK2的影响

目的:探讨瑞香狼毒药效组分Zp1111对人肝癌细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用及机制。方法:MTT法比较瑞香狼毒药效组分Zp1111对体外培养的人来源肝癌细胞与正常肝细胞LO2抑制作用,采用流式细胞术检测用药前后BEL-7402细胞凋亡的变化并分析Zp1111对DNA周期分布的影响,荧光共振能量转移法检测Zp1111对细胞周期依赖性蛋白激酶CDK2的抑制作用。结果:Zp1111对体外培养的肝癌细胞HepG2、BEL-7402、SMMC-7721均有较好的抑制作用,IC50分别为37.75μg/ml、28.60μg/ml、29.22μg/ml,而对正常肝细胞LO2抑制作用不明显,在25μg/ml及以下的浓度对LO2细胞反而有一定促进作用。Zp1111能诱导BEL-7402细胞发生凋亡,一定药物浓度范围内凋亡率具有药物浓度依赖关系;Zp1111还能调控体外培养的BEL-7402细胞周期分布,显著下调S期的细胞比例,并且对CDK2具有较好的抑制作用。结论:瑞香狼毒药效组分Zp1111具有一定诱导凋亡作用,可使BEL-7402细胞周期阻滞在G1期,其作用机制可能与抑制CDK2有关。     

大茴香醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌细胞分化和凋亡的影响

 目的 观察大茴香醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌细胞 BEL-7402 的诱导分化和凋亡作用。 方法 用不同浓度的 3( 3- 吡啶 )-4-[ （ 4- 甲氧基 - 苯亚甲基）氨基 ]-5- 甲硫基 -1 , 2 , 4- 三唑（ LH-38 ）与 BEL-7402 细胞体外培养。 四甲基偶氮唑蓝（ MTT ）法检测细胞增殖和 LH-38 对细胞增殖的抑制作用。用 Hoechst 33258 荧光染色细胞形态学和 Annexin V/PI 双标记技术观察细胞凋亡变化。 放射免疫法检测 BEL-7402 细胞甲胎蛋白（ α-FP ）和白蛋白（ Alb ）的分泌量,以了解细胞分化状态。 蛋白质免疫印迹（ Western blotting ）半定量分析 Caspase-3 和 p53 的表达。可见光法测定超氧化物歧化酶（ SOD ）和过氧化氢酶（ CAT ）活力 。 结果 LH-38 在 0.1~10 μmol?L^-1 的浓度范围能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度和时间的增加而增高。 10 和 1.0 μmol?L^-1 的 LH-38 使细胞 Alb 、 Caspase-3 和 p53 的蛋白表达明显增加, α-FP 含量下降。 SOD 活性升高 ( P<0.01) ,而 CAT 活性降低,差异有显著性 ( P<0.01, P<0.05) 。药物浓度在 10 μmol?L^-1 作用 48 h , BEL-7402 细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率显著高于对照组 ( P<0.05) 。 结论 大茴香醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌 BEL-7402 细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用,作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关。     

吴茱萸碱通过Hippo-YAP通路诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

目的探讨吴茱萸碱对人肝癌细胞株BEL-7402凋亡的影响并阐明其发挥作用的可能机制。方法 CCK-8法检测吴茱萸碱对BEL-7402细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞凋亡现象的影响;流式细胞术观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞凋亡和周期的影响;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western blotting实验检测Hippo-YAP通路中哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)、MST2、大肿瘤抑制因子1(LATS1)和Yes相关蛋白(YAP)在正常人肝细胞株HL-7702与BEL-7402细胞中的表达差异及吴茱萸碱对BEL-7402细胞这些关键基因表达水平的影响;免疫荧光实验观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞中YAP表达水平的影响。结果吴茱萸碱对BEL-7402细胞增殖活力具有明显的抑制作用(P0.05),呈浓度和时间依赖性;Hoechst 33258染色显示吴茱萸碱能够引起BEL-7402细胞出现核固缩、核边集等凋亡的典型形态学改变。流式细胞术结果提示吴茱萸碱能够诱导BEL-7402细胞出现凋亡数目增多和G2/M期阻滞(P0.01);q RT-PCR和Western blotting检测结果提示,与HL-7702细胞相比,MST2和LATS1在BEL-7402细胞中的表达明显下调(P0.05),YAP则明显升高(P0.05);吴茱萸碱能够激活Hippo信号通路,分别上调MST2、LATS1和抑制YAP在BEL-7402细胞中的表达水平(P0.05)。免疫荧光结果显示吴茱萸碱能够显著抑制BEL-7402细胞中过表达的YAP荧光强度(P0.01)。结论吴茱萸碱能诱导BEL-7402细胞的凋亡,其机制可能是通过激活Hippo信号通路,进而抑制下游关键基因YAP的表达。     

苦参碱诱导人肝癌细胞BEL-7402自吞噬性死亡

目的研究苦参碱诱导人肝癌BEL-7402细胞自吞噬和自吞噬性死亡作用。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡,自噬体标记物LC3免疫荧光定量检测自吞噬,透射电镜分析细胞自吞噬死亡超微结构改变。结果苦参碱抑制细胞增殖呈质量浓度依赖性,作用48h的IC50值为1.1mg/mL;0.6～1.6mg/mL苦参碱作用12h可诱导BEL-7402细胞凋亡逐渐增多,1.2mg/mL作用12h时细胞凋亡率达(44.88±0.78)%;1.2mg/mL苦参碱持续作用可以诱导自吞噬阳性细胞逐渐增多,作用12h时自吞噬阳性细胞达(63.16±0.29)%;超微结构显示细胞凋亡呈现自噬性细胞死亡特点。结论苦参碱体外能诱导BEL-7402细胞自吞噬和自噬性死亡。     

半夏蛋白抗肿瘤活性组分的提取分离

目的分离半夏蛋白的抗肿瘤活性组分,研究该半夏蛋白组分的抗肿瘤作用。方法用凝胶柱分离纯化半夏粗总蛋白,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)观察半夏蛋白对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制,应用流式细胞术(FCM)检测其对细胞凋亡的影响。结果半夏粗总蛋白中30%硫酸铵沉淀部分、60%硫酸铵沉淀部分对肿瘤抑制的量效关系不明显,30%硫酸铵沉淀部分经分离后0.05mol/L和0.1mol/LNaCl的洗脱峰呈现较好的量效关系,且对Bel-7402细胞的抑制作用与空白对照组有显著性差异。30%硫酸铵沉淀蛋白有促进Bel-7402细胞凋亡的作用。结论半夏蛋白中30%硫酸铵沉淀部分对Bel-7402细胞生长具有明显抑制作用及促进Bel-7402细胞凋亡的作用。     

CecropinXJ抑制肝癌BEL-7402细胞增殖及机制研究

目的研究新疆家蚕抗菌肽Cecropin XJ抗肝癌细胞BEL-7402的功能并探讨其机制。方法分别利用CCK-8和体内移植瘤模型检测Cecropin XJ抑制肝癌细胞生长的功能,检测其对正常肝脏细胞(LO2细胞)和小鼠血液系统的影响,并通过Western blotting检测凋亡相关蛋白表达情况。结果 Cecropin XJ可显著抑制BEL-7402细胞的增殖和体内移植瘤的生长,对正常肝脏细胞和小鼠血液系统无明显影响,抑瘤率为36.7%,Western blotting结果显示Cecropin XJ可以显著上调Bax/Bcl-2的表达,促进Cleaved-Casp3的表达。结论Cecropin XJ具有抑制肝癌BEL-7402细胞增殖作用,并且无明显毒副作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡相关。     

WIN55,212-2对肝癌细胞BEL-7402增殖和凋亡的影响

目的探讨大麻素WIN55,212-2(WIN)对肝癌细胞BEL-7402增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步研究。方法将细胞分成对照组和WIN处理组,处理细胞后,利用MTT法分析WIN对BEL-7402细胞增殖的影响;DAPI染色分析各组细胞中细胞核的形态学改变;流式细胞术检测各实验组的细胞凋亡率;利用荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测WIN处理细胞后Bcl-2蛋白的表达;分光光度法检测Caspase-3、-8和-9的活性。结果WIN抑制了BEL-7402细胞增殖并诱导其凋亡,两者都具有剂量依赖性;WIN处理细胞后,Caspase-3、-8和-9活性总体上呈时间依赖性升高,而且Bcl-2蛋白表达下降。结论 WIN能抑制BEL-7402细胞增殖和诱导其凋亡,WIN诱导的BEL-7402细胞凋亡可能与线粒体途径和死亡受体途径都有关。这些结果为应用WIN来治疗肝癌奠定了一个基础。     

冬凌草甲素可抑制肝癌细胞增殖

中山大学第三附属医院研究人员以人肝癌细胞株BEL-7402细胞为研究对象，观察了不同浓度的冬凌草甲素对BEL-7402细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用。结果发现，冬凌草甲素可显著抑制BEL-7402细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系：冬凌草甲素作用48～60h后，在BEL-7402细胞荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征：同时，端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性明显降低。研究人员介绍，端粒酶是一种特殊的核糖蛋白多聚酶，大量的临床资料表明，肝脏肿瘤细胞普遍表现出端粒酶活性，端粒酶活性的高低对于判断肝癌的疗效、     

斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制

目的探讨斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制。方法磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测不同浓度(1.668、3.336、5.004、6.672μmol/L)斑蝥素酸镁对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用,将细胞随机分为空白对照组、斑蝥素酸镁组(2.43、4.86、9.72μmol/L)、冈田酸组(0.072 nmol/L)。作用24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)、线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞色素c、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、ERK1/2蛋白磷酸化表达。结果斑蝥素酸镁能明显抑制BEL-7402人肝癌细胞的增殖,呈剂量-效应关系,其IC_(50)为4.86μmol/L;与对照组比较,斑蝥素酸镁组凋亡率、细胞内活性氧(ROS)水平、Cyt-C、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白表达显著增加(P0.01),线粒体膜电位、ERK1/2蛋白磷酸化表达显著降低(P0.01)。结论斑蝥素酸镁可能通过抑制ERK1/2磷酸化水平来反向调节线粒体凋亡途径,最终诱导BEL-7402人肝癌细胞发生凋亡。     

脱氢枞胺对氟苯甲醛对人肝癌细胞的抑制作用

 目的 观察脱氢枞胺对氟苯甲醛对人肝癌细胞的抑制作用及其分子机制。方法 运用四甲基偶氮唑蓝、倒置显微镜、流式细胞仪、Western blot、荧光分光光度法等分别检测脱氢枞胺对氟苯甲醛对肝癌细胞增殖的抑制作用、观察凋亡细胞细胞核的形态变化、检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cyt-c的表达和caspase-3活性的影响。建立H22小鼠体内移植实体瘤模型,观察脱氢枞胺对氟苯甲醛对瘤体质量的影响。结果 四甲基偶氮唑蓝法显示脱氢枞胺对氟苯甲醛能显著抑制肝癌细胞株（SMMC-7721、HepG2和BEL-7402细胞）的增殖,IC₅₀值分别为SMMC-7721 (44.47±2.15)μmol·L^-1、HepG2（52.83±2.25）μmol·L^-1和BEL-7402 (48.64±1.76) μmol·L^-1。倒置显微镜下发生细胞皱缩变圆等变化,细胞凋亡率明显增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2表达减少,Bax、p53 和Cyt c表达增加,caspase-3活力增加,且均具有浓度依赖性。小鼠 H22 肝癌模型中,脱氢枞胺对氟苯甲醛对肿瘤的生长也有一定的抑制作用。结论 体内外实验显示脱氢枞胺对氟苯甲醛能明显抑制肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,可能是通过凋亡线粒体信号通路而实现的。