冬凌草甲素通过激活ERK途径诱导U937细胞凋亡

目的:研究冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤U937细胞凋亡的机制及ERK激酶在凋亡过程中的作用。方法:噻唑蓝(MTT)法,Hoechst 33258染色法,DNA凝胶电泳及Western blot检测法。结果:冬凌草甲素对U937细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性。27μmol.L^-1冬凌草甲素作用细胞12 h后,Hoechst 33258染色细胞,出现明显凋亡小体,并诱导ERK发生磷酸化。ERK磷酸化抑制剂PD98059阻断了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制及DNA片段化。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-X_L表达量时间依赖性减少,促凋亡蛋白Bax表达量增加,而ERK抑制剂可逆转这种作用。结论:冬凌草甲素(27μmol.L^-1)诱导U937细胞凋亡,这种作用是通过活化ERK激酶,改变其下游Bax/Bcl-X_L的表达比率,从而促进U937细胞发生凋亡。     

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??OBJECTIVE To evaluate hepatoprotection in Nrf2/ARE oxidation/chemical stress defense pathwaycaused by isoliquiritigenin (Iso) based on analysis of bile acids using profile of bile acids. METHODS High performance liquid chromatography coupled with quadrupole mass spectrometry (HPLC-MS/MS) was applied to determine the contents of all kinds of endogenous bile acids including free bile acids, taurine conjugates and glycine conjugates. By the luciferase reporter gene assay for screening Nrf2-ARE signal targeting molecular experiments in liquorice extract,isoliquiritigenin was capable of markedly activating Nrf2-driven gene expression, therefore it was used to evaluate hepatoprotection in Nrf2/ARE oxidation / chemical stress defense pathway.RESULTS Based on the analysis using principle components analysis (PCA)??partial least square-discriminant analysis (PLS-DA), Nrf2^+/+, Nrf2^-/- and Iso Nrf2^+/+ groups could be distinguished from their Iso Nrf2^-/-group, which suggested that the variance of the contents of bile acids could evaluate hepatoprotection caused by Iso. Bile acids of ursodeoxycholic acid(UDCA), chenodeoxycholic acid(CDCA), cholic acid(CA), sodium taurodeoxycholate hydrate(TDCA), deoxycholic acid(DCA), taurocholic acid(TCA) proved to be important corresponds to Iso induced liver protection according to analysis of partial least square-discriminant analysis (PLS-DA) and the statistical analysis showed that there were significant differences among the four groups. It indicated that UDCA, CDCA, CA, TDCA, DCA and TCA could be considered as sensitive biomarkers of Iso induced liver protection. CONCLUSION This work can provide the base for the further research on the evaluation and mechanism of hepatoprotection caused by liquorice.
     

中医药通过Nrf2/ARE发挥抗肝纤维化作用的研究进展

中医药在肝纤维化防治中的地位日益受到关注,越来越多的研究证实了中药在肝纤维化的治疗方面具有广泛的前景,因而也成为诸多研究者关注的热点。Nrf2/ARE是体内一条极为重要的抗氧化应激反应的信号通路,核因子E2相关因子(Nrf2)是亮氨酸拉链家族中调整细胞或机体氧化应激反应中的重要转录因子,是细胞或组织抗氧化还原反应的中枢调节者,Nrf2通过识别并结合抗氧化反应构件(antioxidant response element,ARE),从而启动下游抗氧化保护基因和II相解毒酶基因的转录,在肝纤维化的防御与保护中发挥重要作用。机体或细胞内活性氧(ROS)引发的氧化应激是多种肝病的共同病理生理基础,抗氧化应激是防治各种慢性肝病的重要方法,因此Nrf2/ARE通路也成为中医药防治肝纤维化的重要靶点。     

紫草素通过线粒体途径诱导A375-S2细胞凋亡

目的 :研究紫草素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制。方法 :MTT法测定紫草素对A375-S2细胞的生长抑制实验 ,形态学观察分析细胞凋亡的形态学变化 ,DNA电泳研究细胞死亡的机制 ,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。结果 :紫草素可明显地抑制A375-S2细胞的生长 ,在 25～40 μmol·L^-1之间呈明显的量效关系和时效关系。 10μmol·L^-1紫草素可诱导A375-S2细胞凋亡 ,琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA“梯状”条道。caspase-3和caspase-9的抑制剂阻止紫草素诱导的凋亡 ,紫草素可诱导A375-S2细胞caspase-9的活力增加 ,免疫印迹结果显示的上调的Bax和下调的Bcl-X_L 表达证实了紫草素诱导的A375-S2细胞的凋亡是通过线粒体途径发挥作用的。结论 :10μmol·L^-1紫草素可明显地诱导A375-S2细胞凋亡 ,并经历了caspase-9激活的线粒体信号转导途径。     

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??Nrf2/ARE pathway has become an attractive target using phytochemicals for the prevention and treatment of oxidative stress-related diseases including neurodegenerative diseases,such as Alzheimer??s disease(AD), and Parkinson??s disease(PD). Among phytochemicals, sulforaphane (SFN) has demonstrated neuroprotective effects in several in vitro and in vivo studies. In particular, evidence suggests that beneficial effects of SFN could be mainly ascribed to its peculiar ability to activate the Nrf2/ARE pathway. Therefore, SFN appears to be a promising compound with neuroprotective properties that may play an important role in preventing neurodegeneration. This contribution focuses on Nrf2/ARE-mediated signaling pathways, particularly in relation to neuroprotective effects of sulforaphane.     

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨高良姜总黄酮对铅诱导HK-2细胞损伤的保护作用

目的 探讨高良姜总黄酮对铅(Pb)诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞损伤的保护作用。方法 体外培养HK-2细胞,MTT法检测不同质量浓度高良姜总黄酮和Pb对HK-2细胞活力的影响。设置对照组、高良姜总黄酮对照组、模型组和高良姜总黄酮组,除对照组和高良姜总黄酮对照组外各组均给予200μmol/L Pb诱导细胞损伤,同时高良姜总黄酮对照组和高良姜总黄酮组给予100μg/mL高良姜总黄酮干预24 h。通过Hoechst 33258荧光染色法联合annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜法观察Pb诱导及高良姜总黄酮干预对细胞内ROS水平的影响,试剂盒法检测细胞内氧化应激指标ROS、MDA、GSH水平和GSH-Px、CAT、SOD活性,ELISA法检测细胞培养上清液IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western bolt法检测细胞Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白及caspase-3蛋白表达。结果 与对照组比较,高良姜总黄酮(12.5～200μg/mL)对HK-2细胞活力没有显著影响。与模型组比较,高良姜总黄酮可减少Pb诱导HK-2...     

紫草素诱导细胞凋亡及凋亡信号途径研究进展

细胞凋亡又称程序性细胞死亡,是指细胞为维持内环境稳态由基因控制的自主有序性死亡。细胞凋亡主要通过内质网、线粒体和死亡受体3种途径介导。紫草素是一类萘醌类化合物,为中药紫草的主要有效成分之一,具有多种生理活性,其抗肿瘤功效是目前研究热点。紫草素抗肿瘤机制与3种细胞凋亡信号途径密切相关。本文就紫草素诱导细胞凋亡及细胞凋亡信号途径的研究进展作一综述。     

人参皂苷通过Nrf2/ARE信号通路发挥抗氧化应激作用的研究进展

人参皂苷作为一种从人参属药材中提炼的物质,被视为是人参中的活性成分,因而成为热门的研究目标。而Nrf2/ARE信号通路是迄今为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路,其调控的下游抗氧化基因在抗氧化应激中发挥了重要的作用。就人参皂苷通过调控Nrf2/ARE信号通路下游多种保护性基因的表达发挥其抗氧化应激的作用进行综述,为今后人参皂苷用于氧化应激的治疗提供科学依据。     

中药基于Nrf2/ARE通路改善糖尿病心肌病的研究进展

糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病心血管并发症之一,约30％糖尿病患者会出现心功能障碍,并逐渐发展为DCM,最终导致心力衰竭而死亡.核因子E2相关因子2(nuclear factor NF-E2-related factor 2,Nrf2)是治疗DCM的作用靶点之一,在增强心...     

萝卜硫素通过Nrf2/ARE通路对人结肠上皮细胞氧化应激损伤的调控作用

目的:探讨萝卜硫素对H_2O_2诱导的氧化应激损伤人结肠上皮细胞的保护作用。方法:体外原代培养人结肠上皮细胞,并将细胞分为空白对照组、H_2O_2诱导组、H_2O_2+低剂量萝卜硫素组、H_2O_2+中剂量萝卜硫素组及H_2O_2+高剂量萝卜硫素组,用H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,CCK8法检测萝卜硫素对细胞存活率的影响,同时检测细胞匀浆中的氧化应激产物,免疫印迹法检测核转录因子(Nrf2)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、醌氧化还原酶1(NQO1)及血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果:H_2O_2能诱导人结肠上皮细胞氧化应激损伤;与H_2O_2诱导组相比,不同剂量萝卜硫素可增加细胞存活率、降低氧化应激产物丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的释放并增强超氧化物歧化酶(SOD)酶活性,差异均有统计学意义(P0.05);萝卜硫素可增强Nrf2转位,诱导GCLC、NQO1及HO-1蛋白的表达,与H_2O_2诱导组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:萝卜硫素可降低人结肠上皮细胞的氧化应激损伤,其作用机制可能与活化Nrf2/ARE信号通路有关。     

羊栖菜多糖通过激活JNK/Nrf2/ARE信号通路延缓小鼠衰老进程作用研究

目的研究羊栖菜多糖(SFPS)发挥抗氧化、抗衰老的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western blotting法检测不同月龄雄性小鼠和ig给予SFPS的老年雄性小鼠肝脏中c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)的表达;RT-PCR特异性区分JNK的各蛋白异构体,并检测各异构体在ig SFPS或生理盐水的自然衰老小鼠肝脏中的表达水平;免疫共沉淀和ARE-荧光素酶报告基因检测JNK激活转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/ARE信号通路的分子机制。结果 JNK1/2的表达水平与小鼠的衰老进程呈负相关,JNK1-β2、JNK2-α1、JNK2-β2 mRNA表达水平在小鼠衰老过程中显著下降,而ig给予SFPS能够显著提高老年小鼠JNK1-β2(5.4×10~4)的表达水平,JNK(5.4×10~4)蛋白与抗氧化因子Nrf2存在相互作用,且JNK1-β2(5.4×10~4)能够显著激活Nrf2/ARE信号通路。结论 JNK1-β2、JNK2-α1和JNK2-β2与衰老进程负相关,含有C-terminaltail的JNK1-β2能够显著激活Nrf2/ARE抗氧化信号通路。SFPS能显著提高老年小鼠JNK1-β2(5.4×10~4)和Nrf2/ARE信号通路的表达水平,进而提高机体的抗氧化能力,最终延缓小鼠的衰老进程。     

蟾蜍灵对白血病U937细胞生长抑制和凋亡诱导作用

蟾蜍灵是蟾蜍毒素的主要成分之一,蟾蜍毒素具有强心、麻醉、解毒、止痛、开窍、醒神等药理作用,已被广泛应用于临床。近年来发现,含有蟾蜍毒素的中药制剂在体外能抑制多种肿瘤细胞生长,诱导白血病细胞的分化。临床观察提示,含有蟾蜍毒素的中药制剂对肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、白血病等具有明显的抑制作用。Numazawa[1]研究表明,蟾蜍毒素的各种成分以剂量依赖的方式抑制K562细胞生长。在所有的蟾蜍毒素中,蟾蜍灵是诱导白血病细胞分化最有效的成分,蟾蜍灵在较低浓度(1×10-8~1×10-9mol/L)能够在较宽的范围内(有较宽的白血病细胞谱)引起人…     

紫草、紫草素、紫朱草素对鼠郎格罕氏细胞的诱导作用

两种来源于骨髓的树突状细胞:郎格罕氏细胞(LCs)和树状表皮T细胞(DETCs)构成了皮肤的免疫系统。研究表明,紫草素及其衍生物具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用,然而,其对树状免疫细胞的作用还不明确。本次对紫草、紫草素、紫朱草素(Alkannin)等诱导的鼠体内LCs和DETCs进行形态学研究。 材料和方法:按照文献报道的条件经HPLC从紫草中制备紫草素(R型)、紫朱草素(S型)。紫草素、紫朱草素溶于含1％吐     

基于Nrf2/ARE信号通路研究姜叶三七挥发油对氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究姜叶三七挥发油(essential oil from Stahlianthus involucratus rhizomes,EOSIR)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制.方法 实验采用ox-LDL诱导...     

糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠Nrf2/ARE通路的影响

目的探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠Nrf2/ARE通路相关蛋白的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为空白对照组和链脲佐菌素(STZ)组,STZ组大鼠一次性腹腔注射60 mg/kg STZ,造模1周后,将空腹血糖浓度≥16.7 mmol/L的大鼠稳定1个月后,随机分为模型对照组、α-硫辛酸组、糖络宁低剂量组和糖络宁高剂量组,并给予相应药物12周。麻醉取大鼠坐骨神经,采用免疫组织化学方法检测大鼠坐骨神经Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1),核转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、及谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱,脱髓鞘严重,坐骨神经中Keap1、Nrf2、HO-1和γ-GCS的表达增加,差异有统计学意义(P0.05);与模型对照组比较,糖络宁低、高剂量组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱和脱髓鞘现象得到改善,其中糖络宁低剂量组Keap1、Nrf2表达增加,糖络宁高剂量组HO-1、γ-GCS表达增加,差异均有统计学意义(P0.05)。结论糖络宁能够改善DPN大鼠坐骨神经的病理状态,上调Nrf2/ARE信号通路中Keap1、Nrf2、HO-1及γ-GCS的表达,增强机体抗氧化应激的能力。     

参苓白术散对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝组织Nrf2/ARE信号通路的影响

摘要：目的 观察参苓白术散对高脂饮食建立的非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝组织核转录因子2 /抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路相关蛋白表达的影响。方法 选用SPF级SD大鼠32只,随机分为正常组（NC）、高脂组（HFD）、参苓白术散高剂量组（SLH）（ig,30.0g·kg-1·d-1）、参苓白术散低剂量组（SLL）（ig,10.0g·kg-1·d-1）,每组8只。采用高脂饲料喂养大鼠16周建立NAFLD大鼠模型,用药组大鼠同时灌服参苓白术散浸膏剂进行干预,16周后取血和肝组织样本,全自动生化仪检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天门冬氨酸转氨酶（AST）含量;油红O染色观察肝组织脂质蓄积程度;Western blot法检测肝组织Nrf2/ARE信号通路相关蛋白（Nrf2）、醌氧化还原酶(NQO1)和血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达水平。结果 模型组大鼠肝组织油红O染色结果证实肝细胞脂质蓄积严重,提示高脂饲料诱导的NAFLD大鼠模型建立成功。与NC组比较,HFD组血清TC、TG、LDL-C、AST水平显著升高（P＜0.01）,HDL-C水平显著降低(P＜0.01);肝组织Nrf2、NQO1、HO-1蛋白水平显著升高（P＜0.01）;与HFD组比较,SLH组和SLL组大鼠肝组织脂质蓄积程度明显改善,两组血清TC、TG、LDL-C含量及AST水平均呈不同程度下降,血清HDL-C呈不同程度升高,肝组织Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平呈不同程度升高（P<0.05,P<0.01）,其中SLH组变化更为显著。结论 参苓白术散能够改善高脂饮食16周诱导的NAFLD大鼠肝脏脂肪代谢紊乱、减轻肝脏脂质蓄积,其作用机制可能与其激活Nrf2-ARE通路有关。     

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路的天然产物在神经保护方面的研究进展

阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化等神经退行性疾病的病理表现为异常蛋白质的聚集和积累、小胶质细胞激活和线粒体功能障碍等,最终导致神经元结构或功能逐渐丧失,并随着时间的推移而恶化,这些病理过程与活性氧（ROS）的产生有关,ROS会引起氧化应激并破坏蛋白质、脂质和DNA,引发细胞和组织损伤。Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件（ARE）信号通路是维持机体氧化还原平衡、防御氧化应激损伤的主要机制,Nrf2通过与细胞质中Keap1的解离和核转移,激活ARE相关的一系列抗氧化基因的表达,以保护机体免受氧化损伤,因此Keap1/Nrf2/ARE信号通路激活剂的发现与研究对神经退行性疾病的防治具有重要意义。天然产物因有显著的生物活性、不良反应小等特点,是新药研发的宝库。研究表明,多种天然产物能够激活Keap1/Nrf2/ARE信号通路,发挥神经保护作用。根据天然产物的结构特点,可分为黄酮类、萜类及挥发油类、多酚类和苯丙素类等。该文概述了Keap1/Nrf2/ARE信号通路调节疾病的内在机制,并总结了基于该信号通路的天然产物在神经保护方面的研究进...