壮医药线点灸联合甲氨蝶呤对佐剂关节炎大鼠NF-κB/IκB信号通路的影响

目的:从分子生物学角度探究壮医药线点灸联合甲氨蝶呤对佐剂关节炎大鼠NF-κB/IκB信号通路的影响,为壮医药线点灸联合甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎(RA)提供理论依据。方法:建立佐剂关节炎大鼠模型,并分为正常对照组(NC)、关节炎模型组(RA)、甲氨蝶呤组(MTX)和壮医药线点灸联合甲氨蝶呤组(CT)。观察并评估大鼠关节炎指数; ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量; qPCR和Western blotting法检测滑膜组织中P65、I-k Bα、TNF-α、IL-1β和COX-2的表达。结果:与RA组相比,MTX组和CT组均能显著降低关节炎指数(P 0. 05),且CT组显著低于MTX组(P 0. 05);与RA组相比,MTX组和CT组大鼠血清中TNF-α和IL-1β含量均显著下降(P 0. 05),其中CT组下降更为显著(P 0. 05 VS MTX); MTX组和CT组大鼠关节滑膜组织中P65、TNF-α、IL-1β和COX-2的mRNA和蛋白表达显著下调(P 0. 05 VS RA),I-k Bα显著上调(P 0. 05 VS RA),且MTX组和CT组相比差异亦具有显著性差异(P 0. 05)。结论:壮医药线点灸联合甲氨蝶呤干预能够显著改善大鼠关节炎症状,且其作用机制可能是通过调控NF-κB/IκB信号通路,从而抑制炎症因子释放和环氧化酶的表达来实现的。     

橙皮苷对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及滑膜组织Bcl-2/Bax表达的影响

目的:研究橙皮苷(HDN)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用及滑膜组织Bcl-2/Bax表达的影响。方法:60只SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、HDN(40,80,160 mg.kg-1)剂量组和雷公藤多苷组;用弗氏完全佐剂诱导大鼠AA模型;DNA琼脂糖凝胶电泳观察滑膜组织凋亡情况;原位末端标记检测(TUNEL)法检测滑膜组织中滑膜细胞凋亡及凋亡指数;免疫组化法检测滑膜组织Bcl-2和Bax表达变化。结果:HDN(80,160 mg.kg-1)治疗组大鼠滑膜组织DNA经电泳分析可见凋亡细胞DNA梯状条带;HDN(80,160 mg.kg-1)组大鼠滑膜细胞凋亡指数较模型组显著升高;与模型组比较,HDN(80,160 mg.kg-1)组大鼠滑膜组织Bcl-2表达明显降低而Bax表达明显升高,各剂量HDN均可显著降低Bcl-2/Bax。结论:HDN能通过抑制滑膜组织Bcl-2和促进Bax的表达、降低Bcl-2/Bax,诱导AA大鼠滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗AA的作用机制之一。     

黄芪桂枝五物汤对CIA模型大鼠关节滑膜细胞凋亡的影响

目的:研究黄芪桂枝五物汤(HGW)对胶原诱导型关节炎(CIA)模型大鼠关节滑膜细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:选用SD大鼠72只,随机分为正常组,模型组,HGW低、中、高剂量组,Tofacitinib(TFN)组,HGW低、中、高剂量组药物剂量分别为16,32,64 g·kg~(-1),相当于临床常人用量的3,6,12倍,TFN给药剂量为15 mg·kg~(-1),正常组、模型组每日给予10 m L·kg~(-1)蒸馏水。以牛Ⅱ型胶原加弗氏完全佐剂建立CIA大鼠模型,经HGW治疗4周后光镜下观察各组大鼠踝关节病理形态;通过流式细胞术检测白细胞介素(IL)-4,IL~(-1)0含量,免疫组化法检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)染色检测滑膜细胞的凋亡。结果:与正常组比较,模型组,HGW低、中、高剂量组,TFN组大鼠滑膜中Bcl-2蛋白表达增多(P0.05),模型组Bax蛋白表达减少(P0.05);与模型组比较,HGW高剂量组,TFN组大鼠滑膜中Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增多(P0.05)。滑膜细胞凋亡可见,与正常组比较,模型组,HGW低、中、高剂量组,TFN组滑膜细胞增多,凋亡率下降(P0.05);与模型组比较,HGW低、中、高剂量组,TFN组大鼠滑膜细胞凋亡率上升(P0.05);与HGW低剂量组比较,HGW高剂量组滑膜细胞凋亡率显著上升(P0.01);与HGW-M组比较,HGW高剂量组滑膜细胞凋亡率上升(P0.05)。结论:黄芪桂枝五物汤可以促进RA大鼠异常亢进的滑膜细胞凋亡。     

甲氨蝶呤与雷公藤多苷片联用对类风湿性关节炎大鼠的治疗作用

目的观察甲氨蝶呤与雷公藤多苷片联用对大鼠类风湿性关节炎(RA)的治疗作用。方法 50只大鼠随机选取10只为正常组,其余40只建立Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠模型,然后分为模型组、甲氨蝶呤组、雷公藤组和联合治疗组,每组10只。采用甲氨蝶呤与雷公藤多苷片进行治疗,用药后每隔3 d评估其关节炎指数和肿胀度,治疗7周后,采用ELISA法检测关节液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,并通过实时荧光定量PCR法检测大鼠滑膜组织中血管内皮因子(VEGF)、转化生长因子(TGF-β1)m RNA的表达。结果与模型组相比,在用药第24日、36日和48日各治疗组大鼠关节炎指数评分和肿胀度显著降低(P0.05),并且联合治疗组大鼠在用药第24日、36日和48日的关节炎指数评分和肿胀度显著低于甲氨蝶呤组和雷公藤组(P0.05);与正常组相比,所有造模组大鼠关节液中TNF-α和IL-6水平均显著提高(P0.05);与模型组相比,各治疗组大鼠关节液中TNF-α和IL-6水平均显著降低(P0.05),并且联合治疗组大鼠关节液中IL-6的水平降低程度显著高于甲氨蝶呤组和雷公藤组(P0.05);与正常组相比,所有造模组大鼠关节滑膜组织中VEGF、TGF-β1 m RNA表达均显著提高(P0.05);与模型组相比,各治疗组VEGF、TGF-β1 m RNA表达均显著降低(P0.05),并且联合治疗组大鼠关节滑膜组织中VEGF、TGF-β1m RNA表达的降低程度显著高于甲氨蝶呤组和雷公藤组(P0.05)。结论甲氨蝶呤联合雷公藤多苷治疗RA能最大限度地发挥药物的协同作用,促进RA大鼠症状改善,其作用机制可能与降低关节液中TNF-α和IL-6水平和抑制关节滑膜组织中VEGF、TGF-β1 m RNA表达有关。     

艾灸对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及病理组织的观察

目的:探讨艾灸治疗类风湿性关节炎(RA)的作用机理.方法:复制佐剂性关节炎(AA)大鼠模型,应用放免、细胞凋亡和病理学等方法,观察艾灸"肾俞"穴的抗炎免疫作用和对关节滑膜组织形态学的影响.结果:(1)灸治能减轻关节的肿胀和多发性关节炎,减少血清中肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素I(IL-1)含量,提高IL-2和胸腺指数,与模型组比较差异显著(P＜0.05),表明艾灸具有抗炎免疫的作用;(2)艾灸能诱导AA大鼠关节滑膜细胞的调亡,能提高凋亡指数,减轻炎症反应;(3)病理学观察证实,灸治能减轻关节滑膜的充血水肿、炎细胞浸润、滑膜细胞增生、组织增厚等渗出性变.结论:艾灸主要通过抑制滑膜炎起到治疗关节炎的作用.抑制炎症细胞因子的产生、释放,诱导滑膜细胞凋亡、是艾灸治疗RA抗炎免疫作用的主要机制.     

壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响

目的观察壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响。方法 60只雄性Wistar大鼠随机选取10只作为正常对照组,其余50只采用牛Ⅱ胶原蛋白与弗氏不完全佐剂混合液诱导制作CIA模型,造模后分为模型组,甲氨蝶呤组(MTX组),壮药龙钻通痹方高、中、低剂量组(简称壮药高、中、低剂量组),每组10只。模型组灌服生理盐水,MTX组按0.27mg/100g大鼠体重灌胃MTX溶液,每周1次,灌胃4周;壮药高、中、低剂量组分别予以壮药龙钻通痹方汤剂(4.32、2.16、1.08g/mL)灌胃,每日2次,灌胃30日。HE染色观察滑膜形态变化;ELISA法定量检测干预后大鼠血清、滑膜组织匀浆液Fas/FasL的表达。结果正常组中为正常滑膜细胞,模型组中滑膜细胞增殖明显,下层脂肪细胞减少或变形,成纤维细胞增多,伴有淋巴细胞及单核细胞浸润;MTX组及壮药低、中、高剂量组较模型组明显改善。与正常组比较,模型组血清及滑膜组织Fas表达升高,血清FasL表达降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,MTX组、壮药中、高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,MTX组、壮药低、中、高剂量组血清及MTX组、壮药中、高剂量组滑膜组织FasL表达升高(P0.05,P0.01);与MTX组比较,壮药低剂量组血清及壮药低、中剂量组滑膜组织Fas表达升高,壮药高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,壮药低、中剂量组血清及滑膜组织FasL表达降低,壮药高剂量组血清及滑膜组织FasL表达升高(P0.05,P0.01)。结论调节Fas/FasL系统介导的细胞凋亡机制,减缓类风湿关节炎的病理反应可能是壮药龙钻通痹方控制与治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

TUNEL法检测新风胶囊对AA大鼠滑膜胸腺及胃粘膜细胞凋亡的影响

目的 :观察以终末脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记 (ter分钟aldeoxynucleotidyltrans ferasemediatedDUTPnickendlabeling ,TUNEL)技术检测新风胶囊对佐剂性关节炎 (adjuvantarthritis ,AA)大鼠滑膜、胸腺及胃粘膜细胞凋亡的影响 ,探讨新风胶囊的作用机制。方法 :采用弗氏完全佐剂造成佐剂性关节炎 (AA)大鼠模型 ,设立正常对照组、模型对照组、甲氨喋呤 (MTX)对照组、雷公藤多甙 (TriperygiumWilfordiiPolycorideTablet,TPT)对照组和新风胶囊 (XinfengCepsule ,XFC)治疗组。记录各组大鼠的关节炎指数及体重变化 ,应用流式细胞仪 (FCM)以TUNEL法测定各组大鼠滑膜、胸腺及胃粘膜细胞凋亡率。结果 :与治疗前相比 ,XFC、TPT及MTX组治疗后大鼠的关节炎指数显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ,XFC组治疗后AA大鼠体重显著增加 (P <0 .0 5 ) ,而TPT及MTX组体重无显著变化 (P >0 .0 5 ) ;模型组滑膜及胸腺细胞凋亡率显著低于、胃粘膜细胞凋亡率显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,XFC组滑膜及胸腺细胞凋亡率显著高于、胃粘膜细胞凋亡率显著低于模型组、TPT及MTX组 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。结论 :XFC与MTX、TPT一样能降低AA大鼠关节炎指数 ,在增加AA大鼠体重、促进滑膜、胸腺细胞凋亡及抑制胃粘膜细胞凋亡方     

热痹清片诱导AA大鼠滑膜细胞凋亡的作用及机制

目的：探讨热痹清片治疗类风湿关节炎（RA）的作用机制。方法：采用弗氏完全佐剂造成大鼠（AA）模型,设正常组、模型组、甲氨喋呤（MTX）组、雷公藤多苷（TPT）组和热痹清片组。分别采用电子显微镜、免疫组化法和流式细胞术检测各组大鼠滑膜细胞凋亡情况。结果：电镜观察显示,热痹清片组可见滑膜细胞核染色质呈凝块状,边聚呈月芽状,胞浆内及胞膜外可见凋亡小体;免疫组化法观察显示,热痹清片组Fas和FasL表达显著增加、Bcl-2表达显著减少（P〈0.05）,指标变化差异与TPT、MTX相当（P〉0.05）。流式细胞术观察表明,热痹清片组滑膜细胞凋亡率显著高于TPT组及MTX组（P〈0.05）。结论：热痹清片通过促进Fas、FasL表达,抑制Bcl-2的表达,促进了滑膜细胞凋亡,从而发挥治疗作用。     

虎杖大黄素对类风湿关节炎大鼠Bax及Bcl-2表达的影响

目的通过虎杖大黄素对类风湿关节炎大鼠Bax、Bcl-2表达的影响的具体实验,研究并阐述虎杖大黄素对治疗类风湿关节炎相关机制。方法将40只Wistart大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、虎杖大黄素组,每组10只。除正常组外其余组大鼠均用等量不完全氟氏佐剂及牛Ⅱ胶原乳化剂造模。虎杖大黄素40mg·kg-1,醋酸地塞米松7. 5mg·kg-1,连续灌胃20d。分别拍摄足爪照片及足爪X射线,用Elisa检测大鼠血清Bax、Bcl-2蛋白表达,用免疫组化检测关节滑膜组织Bax、Bcl-2蛋白表达,用PCR检测大鼠脾组织Bax、Bcl-2 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组中大鼠血清、膝关节滑膜组织、脾组织Bax、Bcl-2蛋白表达有显著差异(P 0. 01)。与模型组比较,虎杖大黄素组与地塞米松组大鼠脾组织Bax mRNA表达显著上调,Bcl-2 mRNA表达显著下调。结论虎杖大黄素可以促进RA大鼠促凋亡因子Bax表达上调,同时,下调抑凋亡因子Bcl-2表达从而缓解类风湿关节炎病情,研究为后续进一步完善虎杖大黄素干预类风湿关节炎机制奠定基础。     

电针干预佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜细胞凋亡的MMP-3、MMP-9分子调节机制

目的观察电针干预对佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜细胞凋亡和相关蛋白基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法32只雄性SD大鼠被随机分为生理盐水组、模型组、电针干预组和假电针干预组,每组8只。生理盐水组大鼠在双侧足垫部注射模拟造模,其余大鼠用弗氏完全佐剂在双侧足垫部注射造模。电针干预组大鼠予以电针干预。假电针干预组予以假电针刺激处理。HE染色观察模型大鼠踝关节炎症进展情况,Tunnel法检测模型大鼠踝关节滑膜细胞凋亡情况,RT-PCR检测踝关节滑膜的MMP-3、MMP-9的mRNA表达,Western blot检测踝关节滑膜的MMP-3、MMP-9的蛋白表达。结果HE染色显示,电针干预组大鼠的关节炎症显著轻于模型组。Tunnel法检测,电针干预可以促进关节炎大鼠的滑膜细胞凋亡。RT-PCR和Western blot检测结果显示,电针干预可以显著降低关节炎大鼠踝关节滑膜组织中的MMP-3、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论电针干预可以显著减轻佐剂性关节炎大鼠的关节炎症和增殖的滑膜细胞数量,其分子机制可能和电针降低局部的MMP-3、MMP-9蛋白的表达有关。     

木瓜醇提物对大鼠类风湿性关节炎模型关节炎症及滑膜细胞凋亡的影响

目的:探讨木瓜醇提取物(CFE)对类风湿性关节炎(RA)大鼠模型的作用及机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,CFE低、中、高剂量组及雷公藤多苷片组。除正常组外,其余各组分别从每只大鼠右后足跖皮内注入完全弗氏佐剂0.1 mL,复制RA模型。灌胃给药,CFE低、中、高剂量组剂量分别为0.15,0.30,0.60 g·kg~(-1)·d~(-1),雷公藤多苷片组的剂量为0.009 g·kg~(-1)·d~(-1),正常组及模型组灌胃等体积的蒸馏水,每天1次,连续30 d。观察大鼠足肿胀度、炎症指数、脏器指数,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠滑膜组织病理变化情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠关节B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)及死亡因子(Fas)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠足肿胀度、炎症指数显著升高(P0.01);血清中的促炎因子IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高(P0.01),抗炎因子IL-10显著降低(P0.01),滑膜组织中Bcl-2表达明显升高(P0.05);与模型组比较,CFE中、高剂量组足趾肿胀程度及炎症指数显著降低(P0.01),CFE各剂量组滑膜组织增生及炎症细胞浸润等病理变化减轻,血清中的促炎因子IL-1β,IL-6,TNF-α水平明显降低(P0.05),抗炎因子IL-10明显升高(P0.05),Bax,Fas的表达量升高,Bcl-2的蛋白表达量显著降低(P0.01)。结论:CFE能够降低RA关节炎症程度,具有较好的抗RA功效,这可能与CFE诱导的关节滑膜细胞凋亡有关。     

京尼平苷酸对佐剂性关节炎大鼠抗炎作用及滑膜细胞凋亡机制研究

目的:研究京尼平苷酸(GA)对佐剂性关节炎(AA)大鼠抗炎作用,探讨GA对AA大鼠滑膜细胞增殖影响的可能凋亡机制.方法:Wistar大鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,200,100,50 mg·kg~(-1) GA组和0.75 mg·kg~(-1)甲氨蝶呤(MTX)组,右后足趾皮内注射弗氏完全佐剂后第19天给药,治疗4周,测定足肿胀指标和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)水平.培养AA大鼠滑膜细胞给予GA(1,2,4μmol·L~(-1))和4μmol·L~(-1) MTX处理,MTT法检测细胞增殖,Hoechst/PI双染观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡细胞率,RT-PCR法检测Bcl-2和Bax基因mRNA表达水平.结果:200,100mg·kg~(-1) GA可以明显降低足肿胀度和关节炎指数(P＜0.05或P＜0.01),肿胀抑制率分别为25.4%,21.37%,并抑制血清中TNF-αIL-1β水平(P＜0.05),TNF-α抑制率为34.61%,28%,IL-1β抑制率为29.05%,21.65%.GA(1～4μmol·L~(-1))处理AA大鼠滑膜细胞5 d,明显抑制细胞增殖.流式细胞仪检测显示1,2,4μmol·L~(-1) GA组凋亡率分别为15.8%,24.3%,40.7%(P＜0.01).RT-PCR结果显示,不同浓度GA明显抑制Bcl-2 mRNA表达,而促进Ba)(mRNA表达(P＜0.05或P＜0.01).结论:京尼平苷酸可抑制AA大鼠继发性炎症,降低血清TNF-α,IL-1β水平,体外可抑制AA大鼠滑膜细胞增殖及诱导细胞凋亡,作用机制与其下调Bcl-2和上调Bax基因mRNA表达有关.     

TUNEL法检测新风胶囊对AA大鼠滑膜胸腺及胃粘膜细胞凋亡的影响

目的：观察以终末脱氧核糖核酸转移梅介导的原位缺口末端标记（ter分钟al deoxynucleotidyl transferase mediated DUTP nick end labeling,TUNEL)技术检测新风胶囊对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis,AA)大鼠滑膜，胸腺及胃粘膜细胞凋亡的影响，探讨新风胶囊的作用机制。方法：采用弗氏完全佐剂造成佐剂性关节炎（AA）大鼠模型，设立正常对照组，模型对照组，甲氨喋呤（MTX）对照组，雷公藤多甙（Triperygium Wilfordii Polycoride Tablet,TPT)对照组和新风胶囊（Xinfeng Cepsule,XFC)治疗组。记录各组大鼠的关节炎指数及体重变化，应用流式细胞仪（FCM）以TUNEL法测定各组大鼠没,鹕腺及胃粘膜细胞凋亡率。结果：与治疗前相比，XFC、TPT及MTX组治疗后大鼠的关节炎指数显著降低（P＜0．05－0．01），XFC组治疗后AA大鼠体重增加（P＜0．05），而TPT及MTX组体重无显著变化（P＞0．05）；模型组滑膜胸腺细胞凋亡率显著低于，胃粘膜细胞凋亡率显著高于正常对照组（P＜0．05），XFC组滑膜及胸腺细胞凋亡率显著高于，胃粘膜细胞凋亡率显著低于模型组、TPT及MTX组（P＜0．05－0．01），结论：XFC与MTX，TPT一样能降低AA大鼠关节炎指数，在增加AA大鼠体重，促进滑膜，胸腺细胞凋亡及抑制胃粘膜细胞凋亡方面优于MTX和TPT。新风胶囊的作用机理是促进滑膜细胞凋亡，抑制滑膜增生，促进胸腺细胞凋亡，抑制自身免疫反应以及抑制胃粘膜细胞凋亡，保护胃粘膜。     

当归拈痛汤对类风湿关节炎大鼠滑膜细胞凋亡通路的影响

目的:观察当归拈痛汤对类风湿关节炎大鼠足趾关节的改变情况及探讨其对滑膜细胞凋亡通路的影响。方法:选取50只Wistar雄性大鼠,并随机分为模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组;除对照组外其余均建立胶原诱导的关节炎(Collagen Induced Arthritis,CIA)模型,在类风湿关节炎模型制备成功后开始给药:对照组和模型组予以6.5 g/kg生理盐水,低剂量组、中剂量组和高剂量组均为当归拈痛汤灌胃给药,分别给予生药6.5 g/kg,13.0 g/kg,19.5 g/kg。干预时间28d。采用容积法测量双后肢的足趾关节肿胀度;采用足趾关节苏木精-伊红(HE)染色计算细胞凋亡数;采用免疫印迹法(Western Blotting,WB)检测Bcl-2、PI3K、Bax的蛋白表达情况。结果:对照组未见足趾肿胀情况,给药1 d模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组间比较,差异无统计学意义(P0.05),给药7~28 d各剂量给药组肿胀度均低于模型组(P0.05),至14~28 d中、高剂量组的肿胀度显著低于低剂量组(P0.05),而28 d高剂量组的肿胀度又明显低于中剂量组(P0.05)。足趾关节HE染色中,对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组中的细胞凋亡数呈逐渐上升的趋势(P0.05)。PI3K和Bcl-2蛋白在模型组中表达上调,经过给药治疗,随着剂量的逐渐升高而下调(P0.05);而Bax蛋白的表达情况则与PI3K相反,随着剂量的增加而上调(P0.05)。结论:当归拈痛汤能有效改善类风湿关节炎大鼠足趾关节肿胀度,促进滑膜细胞的细胞凋亡数进而抑制滑膜细胞增殖的进程,而PI3K通路对细胞凋亡的调控起到关键的作用。     

壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响北大核心CSCD

目的观察壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响。方法 60只雄性Wistar大鼠随机选取10只作为正常对照组,其余50只采用牛Ⅱ胶原蛋白与弗氏不完全佐剂混合液诱导制作CIA模型,造模后分为模型组,甲氨蝶呤组(MTX组),壮药龙钻通痹方高、中、低剂量组(简称壮药高、中、低剂量组),每组10只。模型组灌服生理盐水,MTX组按0.27mg/100g大鼠体重灌胃MTX溶液,每周1次,灌胃4周;壮药高、中、低剂量组分别予以壮药龙钻通痹方汤剂(4.32、2.16、1.08g/mL)灌胃,每日2次,灌胃30日。HE染色观察滑膜形态变化;ELISA法定量检测干预后大鼠血清、滑膜组织匀浆液Fas/FasL的表达。结果正常组中为正常滑膜细胞,模型组中滑膜细胞增殖明显,下层脂肪细胞减少或变形,成纤维细胞增多,伴有淋巴细胞及单核细胞浸润;MTX组及壮药低、中、高剂量组较模型组明显改善。与正常组比较,模型组血清及滑膜组织Fas表达升高,血清FasL表达降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,MTX组、壮药中、高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,MTX组、壮药低、中、高剂量组血清及MTX组、壮药中、高剂量组滑膜组织FasL表达升高(P<0.05,P<0.01);与MTX组比较,壮药低剂量组血清及壮药低、中剂量组滑膜组织Fas表达升高,壮药高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,壮药低、中剂量组血清及滑膜组织FasL表达降低,壮药高剂量组血清及滑膜组织FasL表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论调节Fas/FasL系统介导的细胞凋亡机制,减缓类风湿关节炎的病理反应可能是壮药龙钻通痹方控制与治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

加味宫外孕Ⅱ号方对早孕大鼠滋养细胞凋亡因子Bax、Bcl-2的影响

目的探索加味宫外孕Ⅱ号方对早孕大鼠滋养细胞凋亡因子Bax(促凋亡基因)、Bcl-2(抗凋亡基因)的影响。方法将造模成功的早孕大鼠随机分为6组:西药组(甲氨蝶呤组)、中西药结合组(甲氨蝶呤和加味宫外孕Ⅱ号方)、中药加味宫外孕Ⅱ号方低、中、高剂量组和空白组(生理盐水),分别给予甲氨蝶呤1次肌注、中药或生理盐水每天灌胃1次,连续7 d,用药后第8 d处死孕鼠取出其子宫及孕囊,用免疫组化法检测滋养细胞凋亡因子Bax、Bcl-2的表达。结果 5个实验组孕鼠滋养叶细胞Bcl-2评分降低,Bax评分升高,Bcl-2/Bax比值下降,与空白组比较均有差异(P0.05);而中西药结合组变化最明显,与其他几组比较有差异(P0.05),中药高、中剂量组、西药组间比较无差异,P0.05,但与中药低剂量组比较有差异(P0.05)。结论加味宫外孕II号方和甲氨蝶呤均可通过降低妊娠大鼠滋养叶细胞的Bcl-2、升高Bax的表达,使Bcl-2/Bax比值下降从而促进细胞凋亡,达到杀胚的目的;且中西医结合效果最好,中药随剂量增加,杀胚作用逐渐加强。     

隔药灸脐对卵巢早衰模型大鼠Bcl-2、Bax蛋白和mRNA表达的影响

目的观察隔药灸脐对卵巢早衰模型大鼠Bcl-2和Bax表达的影响,探讨其对卵巢的保护机制。方法采用腹腔注射环磷酰胺建立大鼠卵巢早衰模型。48只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸脐组、西药组,每组12只。隔药灸脐组大鼠隔药灸"神阙",30 min/d,隔日1次,连续14 d;西药组大鼠予戊酸雌二醇灌胃,每日1次,连续14 d。采用免疫组化、Western blot和实时荧光定量PCR检测大鼠卵巢凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白和mRNA的表达。结果模型组大鼠卵巢质量明显低于正常组(P0.05)。Bcl-2、Bax蛋白主要表达在细胞胞浆中,隔药灸脐组和西药组较模型组卵泡颗粒细胞Bax表达范围明显缩小,Bcl-2表达范围明显增加。与正常组比较,模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白和mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01),Bax蛋白和mRNA表达显著升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,隔药灸脐组和西药组大鼠卵巢Bcl-2蛋白和mRNA表达显著升高(P0.05,P0.01),Bax蛋白和mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论隔药灸脐可能通过上调卵巢早衰模型大鼠卵巢Bcl-2和下调Bax的表达,改善卵巢功能。     

通痹灵、雷公藤多苷及青藤碱对CIA大鼠滑膜细胞凋亡与P53表达的比较研究

目的 :研究通痹灵、雷公藤多苷及青藤碱对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节炎模型 (CIA)滑膜组织细胞凋亡及P53蛋白表达的影响。方法 :原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平 ,免疫组化法检测各组原代大鼠滑膜细胞P53的表达。结果 :通痹灵高低组、雷公藤高低组、青藤碱高低组、MTX高低组滑膜细胞凋亡的数量上明显高于造模组 ;P53蛋白的表达方面 ,造模组远远高于各组 ,与细胞凋亡的结果几乎相反。结论 :通痹灵、雷公藤多苷、青藤碱和MTX对RA滑膜细胞有较强的诱导凋亡作用 ,但并非通过对介导滑膜细胞P53的表达来诱导滑膜组织细胞凋亡。     

壮药龙钻通痹方对佐剂性关节炎大鼠成骨转录因子BMP2和Smad1的影响

目的:探讨壮药龙钻通痹方(LZTB)对佐剂性关节炎大鼠成骨细胞转录因子BMP2、Smad1的表达影响。方法:以Westert blot检测滑膜组织BMP2、Smad1的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测大鼠滑膜BMP2 mRNA与Smad1 mRNA的表达水平;HE染色观察大鼠踝关节形态学变化。结果:给药21 d后,与模型组比较,Westert blot壮药高剂量组BMP2、Smad1蛋白表达明显上调(P0.05),壮药高剂量组与甲氨蝶呤对照组无显著性差异;RT-PCR壮药高剂量组与甲氨蝶呤对照组的BMP2 mRNA及Smad1 mRNA表达明显高于模型组(P0.05),壮药低剂量组与模型组差异不明显。HE染色提示,与正常组比较,模型组滑膜表面毛糙,成骨细胞较少且排列不整齐;壮药高剂量组与甲氨蝶呤对照组滑膜表面光滑,关节腔无炎性渗出物,成骨细胞数量相对较多。结论:LZTB对RA大鼠具有骨保护作用,其作用机制可能与上调成骨细胞转录因子BMP2、Smad1的表达有关。     

黄芪水煎剂对IR损伤大鼠肾小管细胞凋亡的影响及机制分析

目的:研究黄芪水煎剂(AE)对肾缺血再灌注损伤大鼠肾小管细胞凋亡的影响及机制。方法:选择雄性SD大鼠30只,随机将其分成假手术组、缺血再灌注损伤(IR)组和AE预处理组,每组10只,检测肾小管上皮细胞凋亡、肾组织caspase-3、caspase-8、caspase-9、肾小管上皮细胞凋亡指数和肾组织Bax、Bcl-2表达情况。结果:假手术组大鼠肾组织中极少见到凋亡细胞,细胞凋亡率为(2.91±0.41)%;IR组为(39.52±6.33)%,显著高于假手术组(P0.05);AE预处理组肾组织细胞凋亡率为(19.47±5.75)%,显著低于IR组(P0.05)。与假手术组相比,IR组肾组织Bax、Bcl-2表达均显著上调(P0.05),Bax/Bcl-2升高(P0.05);与IR组相比,AE预处理组Bax和Fas的表达明显减少(P0.05),而Bcl-2的表达显著增加(P0.05),故Bax/Bcl-2降低(P0.05)。与假手术组相比,IR组大鼠肾组织caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达均显著升高(P0.05);AE预处理组肾组织caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达较IR组明显降低(P0.05)。结论:黄芪水煎剂可改善IR大鼠肾组织再灌注后损伤,对肾小管细胞凋亡有显著抑制作用,其机理可能与其对Bcl-2、Bax表达的调节有关。