正清风痛宁片联合甲氨蝶呤对胶原诱导的关节炎大鼠血清OPG/RANKL、IL-17的影响

目的探讨正清风痛宁片联合甲氨蝶呤(MTX)对胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠血清骨保护素(OPG)、核周因子κB受体活化因子配体(RANKL)、白细胞介素17(IL-17)的作用,了解其联合治疗的骨保护作用。方法于大鼠背部皮内、尾根注射Ⅱ型胶原乳剂建立CIA大鼠模型,选取造模成功且关节炎指数(AI)>2分的大鼠28只,随机分为模型组、中药组、MTX组、联合组,每组7只,另选取7只作为正常对照组。造模后7天开始灌胃给药,MTX组予MTX(3.8mg/kg)每周1次;中药组予正清风痛宁片[130mg/(kg·d)];联合组予正清风痛宁片[130mg/(kg·d)]和MTX(3.8mg/kg)每周1次;模型组与正常对照组予等体积生理盐水灌胃,各组均干预26天。采用X线摄片观察大鼠四肢关节破坏情况,记录大鼠AI评分,实验结束后检测各组大鼠血清OPG、RANKL、IL-17表达水平。结果实验过程中,除模型组外,其余大鼠状态良好。造模第21天,各组大鼠AI评分均达到峰值,干预后各组AI评分均降低,与模型组比较,干预第26天中药组、MTX组、联合组AI评分降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,MTX组干预后OPG、RANKL降低,中药组OPG升高,OPG/RANKL升高,联合组OPG、RANKL及OPG/RANKL升高,IL-17降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与MTX及中药组比较,联合组OPG/RANKL升高(P<0.05),IL-17降低(P<0.05)。结论正清风痛宁片联合MTX能够协同提高CIA模型大鼠外周血OPG/RANKL,下调IL-17。     

蓬草除痹汤对Ⅱ型胶原蛋白诱导SD大鼠关节炎模型OPG/RANKL/RANK通路影响

目的:探讨蓬草除痹汤对Ⅱ型胶原蛋白诱导SD大鼠关节炎模型OPG/RANKL/RANK通路的影响。方法:选取60只SD大鼠,随机分为正常组、模型组、蓬草除痹汤高、中、低剂量组和雷公藤组,每组10只,除正常组外,其它各组采用胶原蛋白诱导法建立关节炎(CIA)大鼠模型,造模成功后,按设计给予灌胃药物,连续干预4周,观察干预期间各组大鼠关节炎指数(AI),检测干预4周后踝关节病理形态学评分、骨密度、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素17 (IL-17)、护骨素(OPG)、核因子-k B受体活化因子受体配体(RANKL)表达水平差异。结果:与正常组对比,模型组大鼠AI值、病理形态学评分、TNF-α、IL-17表达显著升高,骨密度显著降低,差异有统计学意义(P 0. 05);与模型组相比,干预4周后,蓬草除痹汤各组、雷公藤组AI值、病理形态学评分、TNF-α、IL-17显著降低,差异有统计学意义(P 0. 05);蓬草除痹汤高、中剂量组TNF-α、IL-17降低程度与雷公藤组相当,差异无统计学意义(P 0. 05);与正常组对比,模型组RANKL、OPG阳性表达显著升高,差异有统计学意义(P 0. 05);随着蓬草除痹汤用量的增加,RANKL、OPG阳性表达逐渐降低。结论:蓬草除痹汤能有效改善Ⅱ型胶原蛋白诱导SD大鼠关节炎症状,降低关节炎指数,其机制可能与抑制CIA大鼠RANKL表达,抑制OPG/RANKL/RANK信号对破骨细胞分化、成熟相关。     

熊果酸对CIA大鼠关节软组织RANKL、RANK、OPG mRNA表达的影响

目的:探讨熊果酸(UA)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节软组织RANKL、RANK、OPG mRNA表达的影响。方法:选取雌性SD大鼠复制CIA模型,造模成功后随机分为CIA模型组、熊果酸低剂量组、熊果酸高剂量组、甲氨蝶呤组、熊果酸+甲氨蝶呤组,并给予相应处理。于初次免疫30d后处死大鼠,取炎症关节进行研究,荧光定量PCR法检测RANKL、RANK、OPG在大鼠关节匀浆中的表达。结果:与CIA模型组比较,UA大鼠高剂量组关节RANKL mRNA的表达明显降低(P0.01);与MTA组比较,UA+MTA组关节RANKL mRNA的表达明显降低(P0.05)。结论:UA影响CIA大鼠关节软组织RANKL mRNA的表达,其机理可能与抗炎作用有关。     

从RANK/RANKL/OPG信号通路探讨四仙逐痹汤减轻CIA模型大鼠骨破坏的作用机制

目的 观察四仙逐痹汤对类风湿关节炎模型大鼠骨破坏的作用，并初步探索其作用机制。方法 雄性SD大鼠40只随机分为对照组、模型组、四仙逐痹汤组、甲氨蝶呤组。除对照组外，其余3组均采用牛II型胶原与不完全弗氏佐剂构建CIA大鼠模型，间断性进行大鼠关节炎评分及左后足关节肿胀度测量，HE染色法观察大鼠踝关节组织形态学变化，免疫印迹法(WB)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测关节核因子κB受体活化因子(RANK)、核因子-κB配体受体活化剂(RANKL)、骨保护素(OPG)蛋白及mRNA表达水平。结果 与模型组相比，四仙逐痹汤组及甲氨蝶呤组大鼠关节炎评分以及关节肿胀度明显改善，炎性细胞数量明显减少，关节破坏减轻；与模型组相比，RANK、RANKL蛋白和mRNA表达下调(P<0.05),OPG蛋白和mRNA表达水平上调(P<0.05)。结论 四仙逐痹汤可减轻CIA模型大鼠骨破坏，其机制可能与RANK/RANKL/OPG信号通路相关。     

热痹康汤对胶原诱导性关节炎大鼠血清TNF-α及IL-6的影响

目的:观察热痹康汤对大鼠关节炎模型(CIA)血清TNF-α及IL-6的影响,初步揭示热痹康汤治疗类风湿关节炎的机理.方法:采用牛Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎大鼠模型,以甲氨蝶呤为对照,观察热痹康汤对各组大鼠血清TNF-α、IL-6水平的影响.结果:热痹康汤能降低CIA大鼠血清TNF-α的水平,疗效优于甲氨蝶呤;能降低IL-6的水平,与甲氨蝶呤疗效相当.结论:热痹康汤能降低CIA大鼠血清TNF-α,IL-6水平,是其治疗类风湿关节炎的机理之一.     

磷酸川芎嗪片联合甲氨蝶呤干预对胶原诱导关节炎大鼠炎症反应及血液流变的影响

目的探讨磷酸川芎嗪片联合甲氨蝶呤干预对胶原诱导关节炎大鼠(collagen induced arthritis,CIA)炎症反应及血液流变的影响。方法将55只雄性SD大鼠按体重分层,随机选取9只作为正常对照组,其余46只采用牛Ⅱ型胶原诱导法制备大鼠关节炎模型。对成模大鼠(40只),按足趾肿胀程度分层随机方法分为模型(CIA)组、甲氨蝶呤(MTX)组、磷酸川芎嗪(TMP)组及联用(MTX+TMP)组,每组10只。各药物干预组分别给予以下药物灌胃:MTX组给予MTX 1.2 mg/kg,每周1次,连续4周;TMP组予TMP 40 mg/kg,每日1次,先连续给药10天,停药7天,再继续给药10天;MTX+TMP组分别给予等剂量两种药物,即在两药都给予时,给予两药的等剂量混合药物;在MTX停药时只给予TMP,则按照TMP组方法给药;正常对照组及CIA组给予等量生理盐水。分别于给药第0、4、1 1、18、26天检测大鼠脚掌厚度和踝关节直径。4周后杀鼠取材,观察各组大鼠关节病理变化;采用E LISA方法检测各组大鼠血清细胞因子IL-1β、IL-6及IL-17A变化,检测血浆血流变学指标纤维蛋白原(FIB)含量及血小板聚集率(PAg)变化。结果与正常对照组比较,CIA组大鼠脚掌厚度与踝关节直径明显增加(P0.01),FIB含量及PAg均升高(P0.05,P0.01);血清IL-1β、IL-6及IL-17A水平亦明显升高(P0.01);关节滑膜出现明显的细胞增生、炎细胞浸润、组织充血水肿,血管翳形成浸入软骨,出现明显的坏死。与CIA组比较,各药物干预组大鼠脚掌厚度与踝关节直径均减小(P0.05,P0.01),其中MTX组效果优于TMP组及MTX+TMP组(P0.05,P0.01);MTX组FIB含量降低(P0.05),血清IL-1β、IL-6水平亦降低(P0.05);TMP组和MTX+TMP组FIB含量、血清IL-1β、IL-6水平降低,且MTX+TMP组FIB和IL-6水平明显低于MTX组及TMP组,差异有统计学意义(P0.01);在降低PAg和血清IL-17A水平方面,TMP组优于MTX组及MTX+TMP组;各药物均可显著改善关节病理,联用效果最佳。结论 TMP联合MTX可以显著改善胶原诱导关节炎大鼠的炎症反应及全血FIB含量。     

正清风痛宁联合甲氨蝶呤对胶原诱导的关节炎大鼠模型血清OPG/RANKL的表达影响

目的:通过观察青藤碱(SN)联合甲氨蝶呤(MTX)对胶原诱导的关节炎大鼠模型血清OPG/RANKL的表达影响,探讨其防治类风湿关节炎(RA)骨质破坏的作用机制.方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导的SD大鼠关节炎模型.将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、MTX组和联合组(SN+MTX组).采用关节评分法评估关节炎症程度,并用...     

祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达的影响

目的研究中药祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠滑膜白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,探讨祛痹镇痛方治疗CIA的作用机制。方法选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组(50只)及正常对照组(正常组,10只),造模组采用牛Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen of bovine,BCⅡ)乳剂于大鼠尾根部及颈背部多点注射,建立CIA模型。造模成功后,选取30只造模成功大鼠随机分为模型组(10只)、甲氨喋呤(methotrexate,MTX)组(10只)、祛痹镇痛方组(中药组,10只)。中药组大鼠按22.9g/kg剂量灌胃中药祛痹镇痛方,正常组、模型组灌胃等量生理盐水,每日1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次。给药30天后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF水平,并予给药前后进行关节炎指数(arthritis index,AI)评分。结果与模型组及本组治疗前比较,治疗后中药组和MTX组大鼠AI评分明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组和MTX组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论降低CIA大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF水平可能是中药祛痹镇痛方治疗CIA的作用机制之一。     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠VEGF表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗胶原诱导性关节炎(CIA)的作用机制。方法:健康雄性大鼠随机分为造模组(60只)、正常对照组(简称正常组,10只),造模组采用牛Ⅱ型胶原(BCⅡ)乳剂于大鼠尾根部及颈背部多点注射,建立CIA模型。造模成功后,选取30只造模成功大鼠随机分为模型组(10只)、甲氨喋呤(MTX)组(10只)、温化蠲痹方组(简称中药组,10只)。给药30天后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜VEGF水平,观察各组大鼠足趾肿胀度。结果:与正常组比较,模型组、中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显,差异均有非常显著性意义(P0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异均有显著性意义(P0.01);中药组与MTX组比较,差异无显著性意义(P0.05);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有非常显著性意义(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜VEGF表达水平明显升高(P0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜VEGF表达水平明显降低(P0.01),中药组与MTX组比较,差异无显著性意义(P0.05)。结论:降低CIA大鼠滑膜VEGF水平可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。     

温化蠲痹方对CIA大鼠外周血TNF-α IL-1β的影响

目的：研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠外周血TNF-α、IL-1β的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法：选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组（10只,简称正常组）,造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再把造模组随机分为模型组（10只）、MTX组（10只）、温化蠲痹方组（10只,简称中药组）。正常组、模型组、中药组按22.9g/kg剂量分别灌胃生理盐水、温化蠲痹方,均每日1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次。给药30天后,运用ELISA法检测大鼠外周血TNF-α、IL-1β水平。结果：与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数（AI）评分明显降低（P〈0.01）;与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低（P〈0.01）。与正常组比较,模型组大鼠外周血TNF-α、IL-1水平明显升高（P〈0.01）;与模型组比较,中药组和MTX组大鼠外周血TNF-α、IL-1水平明显降低（P〈0.01）,两组之间比较差异无显著性（P〉0.05）。结论：CIA大鼠外周血TNF-α、IL-1水平升高,降低CIA大鼠外周血TNF-α、IL-1水平可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。     

温化蠲痹方对胶原诱导性大鼠滑膜IL-1β、IL-8表达的影响

目的：研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠滑膜白细胞介素-1β（IL-1β）、膜白细胞介素-8（IL–8）表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法：选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组（10只,简称正常组）,造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠30只随机分为模型组（10只）、MTX组（10只）、温化蠲痹方组（10只,简称中药组）。中药组给予温化蠲痹方22.9 g/kg·d灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30 d。给药结束后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜IL-1β、IL–8表达水平。结果：与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数（AI）评分明显降低（P〈0.01）;与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低（P〈0.01）。与正常组比较,模型组大鼠滑膜IL-1β、IL–8表达水平明显升高（P〈0.01）;与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜IL-1β、IL–8表达水平明显降低（P〈0.01）,中药组和MTX组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：中药温化蠲痹方可能通过下调CIA大鼠滑膜IL-1β、IL–8水平达到而治疗CIA目的。     

中药痹愈汤对类风湿关节炎骨破坏和修复的实验研究

目的:探讨痹愈汤、甲氨蝶呤(MTX)对SD大鼠类风湿关节炎(RA)骨破坏、修复的作用机制和疗效。方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导的SD大鼠关节炎模型,将50只SD大鼠随机分为正常组,模型组,大剂量、中剂量痹愈汤组,MTX组,造模后10天,开始给药,30天后取双侧踝关节切片进行骨保护素(OPG)mRNA和核刺激因子-KB受体配体(RANKL)mRNA原位杂交实验。结果:大、中剂量痹愈汤组和MTX组比模型组和正常组明显上调OPG的平均光密度和计数。其中大剂量痹愈汤组优于MTX组和中剂量痹愈汤组。大、中剂量痹愈汤组,MTX组和模型组均比正常组上调RANKL的平均光密度和计数。结论:中药痹愈汤、MTX通过上调OPG的表达,提高了OPG/RANKL的比例,从而竞争性抑制RANK和RANKL的结合,最终抑制了破骨细胞生成和活化,延缓关节周围的骨的破坏。     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单核细胞DNA甲基化转移酶表达的影响

目的观察温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(collagen-inducing arthritis,CIA)大鼠外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)DNA甲基化转移酶(DNA methyltrsansferases,DNMTs)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法将90只Wistar大鼠随机分为造模组(80只)及正常对照组(10只,简称正常组)。造模组在大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原乳剂制备CIA模型。将造模成功的50只大鼠随机分为模型组、甲氨喋呤组(MTX)、温化蠲痹方低、中、高剂量组(简称中药低、中、高剂量组),每组10只。模型组给予生理盐水灌胃;中药低、中、高剂量组分别给予温化蠲痹方22.9、45.8、68.7 g/(kg·d)灌胃,均每日1次;MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30日。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药干预后提取各组大鼠PBMCs,采用实时定量PCR法检测PBMCs DNMTs(DNMT1、DNMT3a及DNMT3b)mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾明显肿胀(P0.01);与模型组比较,中药低、中、高剂量组及MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻(P0.01)。与本组治疗前比较,中药各剂量组及MTX组大鼠足趾肿胀减轻(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠PBMCs DNMT1、DNMT3a及DNMT3b表达明显降低(P0.01);与模型组比较,中药各剂量组及MTX组DNMT1、DNMT3a及DNMT3b表达水平明显升高(均P0.01);中药各剂量组DNMT1、DNMT3a及DNMT3b表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 CIA大鼠PBMCs DNMTs表达降低。温化蠲痹方上调CIA大鼠PBMCs DNMTs表达无明显剂量依赖性。通过上调DNMTs表达,调节CIA大鼠甲基化状态可能是其治疗CIA作用机制之一。     

温化蠲痹方对胶原诱导性大鼠滑膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠30只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方组(10只,简称中药组)。中药组给予温化蠲痹方22.9 g/(kg·d)灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30天。给药结束后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜VEGF水平。结果:与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数(AI)评分明显降低(P<0.01);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组和MTX组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中药温化蠲痹方可能通过下调CIA大鼠滑膜VEGF水平,抑制血管翳形成而治疗CIA。     

温化蠲痹方对CIA大鼠外周血Th_1/Th_2细胞平衡的影响

目的：观察中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠外周血Th1/Th2细胞平衡的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法：采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。随机分为模型组、MTX组、温化蠲痹方组,另设正常对照组,各组分别给药30天后,运用ELISA法检测各组大鼠外周血Th1/Th2细胞水平。结果：与模型组比较,中药组和MTX组大鼠关节炎指数（AI）评分明显降低（P=0.000）;与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低（P=0.006;P=0.009）。与正常组比较,模型组大鼠外周血IFN-γ/IL-4比值明显升高（P=0.000）;与模型组比较,中药组和MTX组大鼠外周血IFN-γ/IL-4比值明显降低（P值均为0.000）,两组之间比较差异无显著性（P=0.642）。结论：CIA大鼠外周血Th1/Th2细胞亚群失衡,恢复CIA大鼠外周血Th1/Th2细胞平衡可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。     

益肾蠲痹丸对CIA大鼠辅助性T细胞相关细胞因子的影响

目的:探究益肾蠲痹丸对胶原诱导关节炎大鼠模型(CIA)辅助性T细胞分泌的细胞因子作用。方法:CIA模型大鼠按随机数字表法分为正常对照组、CIA模型组、阳性药组(甲氨喋呤)和益肾蠲痹丸治疗组4组各10只。治疗结束后采用Procarta PlexTM多因子免疫检测技术定量分析各组大鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A的含量。结果:益肾蠲痹丸能下调CIA大鼠机体IL-2、IL-6、IL-17A的表达,同时上调IL-10表达。讨论:益肾蠲痹丸可在一定程度上调节促炎细胞因子及抗炎细胞因子的平衡,其作用靶点可能与IL-2、IL-6、IL-17A及IL-10有关。     

敦煌消痹定痛酊对胶原诱导性大鼠关节炎模型TNF-a、IL-1和IL-6影响的实验研究

目的:研究敦煌消痹定痛酊治疗类风湿性关节炎的部分作用机制,探讨其对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型关节液中肿瘤坏死因子a(TNF-a)和白介素-1(IL-1)及白介素-6(IL-6)含量的影响。方法:建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测关节液中TNF-a、IL-1和IL-6含量。结果:敦煌消痹定痛酊能显著降低CIA大鼠关节液中TNF-a、IL-1和IL-6的含量。结论:提示敦煌消痹定痛酊对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节炎具有一定抑制作用,可通过降低大鼠关节液中的TNF-a、IL-1和IL-6含量,从而抑制滑膜细胞的增生,缓解炎性细胞的浸润,减轻关节滑膜的炎症。结果表明:敦煌消痹定痛酊能显著降低CIA大鼠关节液中TNF-a、IL-1和IL-6的含量。提示该制剂对CIA大鼠关节炎具有一定抑制作用。     

温化蠲痹方作用于鸟嘌呤释放蛋白1影响微小RNA-146a对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞DNA甲基化调控作用研究

目的:研究鸟嘌呤释放蛋白1(RASGRP1)在中药温化蠲痹方影响微小RNA-146a(miRNA-146a)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)DNA甲基化调控中的作用,探讨温化蠲痹方治疗CIA作用机制。方法:随机将健康雌性Wistar大鼠分为造模组和正常对照组(n=10,正常组),造模组在大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原乳剂,建立胶原诱导性关节炎模型。30只造模成功大鼠随机分组如下:模型组(n=10)、甲氨蝶呤组(n=10,MTX组)及中药温化蠲痹方组(n=10,中药组)。中药组大鼠按22.9 g/(kg·d)灌胃中药温化蠲痹方,模型组给予生理盐水灌胃,两组大鼠都是每天1次,MTX组灌胃MTX混悬液(0.78 mg/kg),每周1次,共观察30 d。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药结束后,对正常组、模型组PBMC细胞培养,模型组加入ras-MARKs阻断剂,阻断剂①SB230580、阻断剂②PD98059、阻断剂③SP600125,模型组加中药,正常组转染miRNA-146a,模型组转染反义miRNA-146a。采用实时定量PCR法检测miRNA-146a、DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)表达水平,Western Blot检测RASGRP1表达。结果:(1)与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P0.01);MTX组与中药组比较,大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P0.05);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P0.01)。(2)体内实验:与正常组比较,模型组大鼠外周血RASGRP1表达升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,中药组、MTX组RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P0.01)。中药组、MTX组之间比较,差异无统计学意义(P0.05)。体外实验:与正常组比较,模型组、正常转染miRNA-146a组PBMC RASGRP1表达升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,模型加中药组、模型转染反义miRNA-146a组RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,模型加阻断剂①组、加阻断剂②组、加阻断剂③组PBMC RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P0.01)。(3)相关性分析:模型组、模型加阻②、③、加中药组、转染miRNA-146a组、转染反义miRNA-146a组大鼠PBMC miRNA-146a表达水平与DNMT1、DNMT3a、DNMT3b呈显著负相关。结论:温化蠲痹方可能作用于RASGRP1影响ras-MARKs通路,发挥对微小RNA-146a调控CIA大鼠PBMC DNA甲基化作用,是其治疗胶原诱导性关节炎作用机制之一。     

和痹方联合MTX治疗肝脾失调型早期类风湿关节炎疗效及对患者血清MMP-3及RANK/RANKL/OPG表达的影响

目的观察和痹方联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)对肝脾失调型早期类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)疗效及患者血清基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)及核因子-κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)/核因子-κB受体活化因子受体(RANKL)/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法采用随机数字表法将72例肝脾失调型早期RA患者分为治疗组及对照组,每组36例,对照组采用MTX治疗,治疗组在此基础上联合和痹方治疗,两组MTX从7.5 mg逐渐加至12.5mg,每周1次,疗程24周。观察两组ACR20改善率、中医证候疗效、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、血沉(ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,CCP)及血清MMP-3、OPG、RANKL表达水平,并观察不良反应。结果治疗组ACR20达标率为82.86%(29/35),中医证候疗效有效率为85.7%(30/35),均明显高于对照组的51.52%(17/33)和63.6%(21/33),两组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。与本组治疗前比较,两组治疗后RF、ESR、CRP、MMP-3及RANKL水平降低,OPG水平升高(P0.05,P0.01)。与对照组比较,治疗组治疗后RF、ESR、CRP及RANKL均降低,差异均有统计学意义(P0.01,P0.05)。治疗组1例出现肝功能异常,对照组1例出现白细胞减低,2例出现肝功能异常。结论和痹方联合MTX可改善肝脾失调型早期RA患者的症状,调控RANK/RANKL/OPG系统诱导的骨质破坏。     

RANKL、OPG、LIGHT表达在CIA大鼠骨侵蚀中的意义

目的：研究RANKL、OPG、LIGHT表达在胶原诱导性关节炎（collagen—inducingarthritis,CIA）大鼠骨侵蚀中的意义。方法：选用健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为造模组、正常对照组（10只,简称正常组）,造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。在造模成功大鼠中随机选取10只作为模型组（10只）。30天后,观察各组大鼠足趾肿胀度,取各组大鼠膝关节滑膜及血清。运用westernblot、免疫组化法分别检测大鼠外周血、滑膜RANKL、OPG、LIGHT表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义（P〈0．01）;模型组大鼠外周血、滑膜RANKL、LIGHT表达显著增加,OPG表达显著减少,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：CIA大鼠外周血、滑膜RANKL、LIGHT表达水平升高,OPG表达减少。CIA大鼠骨侵蚀可能由于低表达的OPG不能竞争性抑制RANK和高表达的RANKL结合,加上高表达的LIGHT,促进破骨细胞生成和活化而致。