衰老大鼠肾上腺皮质VDR、CYP24A1、CYP27B1基因mRNA表达变化以及淫羊藿苷的干预作用

目的:探讨淫羊藿苷对D-半乳糖致衰老大鼠肾上腺皮质VDR、CYP24A1、CYP27B1基因mRNA表达的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为6组:对照组,衰老模型组,淫羊藿苷低、中、高剂量组,维生素D组。ELISA法观察大鼠血清25(OH)D_3,1,25(OH)_2D_3水平,Real-Time QPCR法观察大鼠肾上腺皮质VDR、CYP24A1、CYP27B1基因mRNA表达。结果:ELISA结果显示模型组的血清25(OH)D_3与1,25(OH)_2D_3水平均相对对照组降低(P0.05),维生素D组与部分淫羊藿苷不同剂量组的血清25(OH)D_3与1,25(OH)_2D_3水平相对衰老模型组上升(P0.05)。Real-Time QPCR结果显示相比对照组,模型组大鼠肾上腺皮质CYP27B1与VDR表达下降(P0.05),CYP24A1表达上升(P0.05);相比模型组,维生素D组与淫羊藿苷不同剂量组的大鼠肾上腺皮质CYP27B1与VDR基因相对模型组表达上升(P0.05),CYP24A1则相对下降(P0.05)。结论:淫羊藿苷可以通过影响相关基因表达上调衰老大鼠肾上腺皮质的维生素D活化水平。     

淫羊藿苷对维生素D缺乏大鼠肾上腺皮质CYP17A1mRNA表达及皮质醇的影响

目的观察淫羊藿苷对维生素D缺乏大鼠血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3、皮质醇及肾上腺皮质CYP17A1mRNA表达的影响。方法选用60只雄性SD大鼠,随机分为正常组,模型组[生理盐水4.0ml/(kg·d)灌胃],淫羊藿苷高剂量组[120mg/(kg·d)灌胃],淫羊藿苷中剂量组[60mg/(kg·d)灌胃],淫羊藿苷低剂量组[30mg/(kg·d)灌胃],维生素D组[30mg/(kg·d)灌胃]。造模1月后,药物干预2月,酶联免疫法(ELISA法)检测血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3、皮质醇;Real-Time PCR法检测肾上腺皮质CYP17A1mRNA表达。结果与正常组比较,模型组血清25(OH)D_3、1,25(OH)D3含量下降(P0.05),皮质醇含量下降(P0.05);淫羊藿苷干预后血清25(OH)D_3、1,25(OH)D3、皮质醇含量均上升(P0.05)。Real-Time PCR显示,模型组肾上腺皮质CYP17A1mRNA表达量下调(P0.05),淫羊藿苷干预后表达量均上调(P0.05)。结论淫羊藿苷可能改善维生素D缺乏大鼠皮质醇的分泌。     

淫羊藿苷对维生素D缺乏大鼠肾上腺皮质维生素D轴及VDR蛋白表达的影响

目的:观察淫羊藿苷对维生素D缺乏大鼠肾上腺皮质维生素D轴的影响。方法:选用60只雄性SD大鼠,随机分为:正常组;模型组(生理盐水4.0 mL·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷高剂量组(120 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷中剂量组(60 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷低剂量组(30 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);维生素D组(30ng·kg~(-1)·d~(-1)灌胃)。造模1月后,药物干预2月,酶联免疫法(ELISA法)检测血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3。免疫组化检测VDR蛋白表达。Real-Time PCR法检测肾上腺皮质维生素D受体(VDR)、25-羟维生素D_3-24-羟基化酶(CYP24A1)、25-羟维生素D1α-羟化酶(CYP27B1)mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3含量下降(P0.05);淫羊藿苷干预后血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3含量均上升(P0.05)。免疫组化显示,与正常组比较,模型组VDR蛋白表达下降(P0.05);经淫羊藿苷干预后,表达上升(P0.05)。Real-Time PCR显示,经淫羊藿苷干预后,表达量上调(P0.05),除VDRmRNA外,CYP24A1mRNA与CYP27B1mRNA变化趋势均与维生素D组表现一致。模型组基因表达均高于正常组(P0.05),Real-Time PCR检测结果与免疫组化检测的蛋白表达不完全一致。结论:淫羊藿苷可能调节维生素D轴促进VDR蛋白表达改善维生素D缺乏。     

淫羊藿苷对衰老大鼠肾上腺皮质CYP24A1、CYP27B1、CYP19A1、CYP17A1基因mRNA表达影响

目的探讨淫羊藿苷对D-半乳糖致衰老大鼠肾上腺皮质CYP24A1、CYP27B1、CYP19A1、CYP17A1基因mRNA表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为6组:正常组,衰老模型组,淫羊藿苷低、中、高剂量组,维生素D组。Elisa法观察大鼠血清25(OH)D3水平,高效液相检测大鼠血清DHEA、睾酮水平,Real-TimeQPCR法观察大鼠肾上腺皮质CYP24A1、CYP27B1、CYP19A1、CYP17A1基因mRNA表达。结果 Elisa结果显示模型组大鼠血清25(OH)D3水平相对于正常组降低(P0.05),淫羊藿苷不同剂量组以及维生素D组相对于模型组升高(P0.05)。高效液相显示模型组的血清DHEA、睾酮水平均相对正常组降低(P0.05),维生素D组与部分淫羊藿苷不同剂量组的血清DHEA、睾酮水平相对衰老模型组上升(P0.05)。Real-TimeQPCR结果显示相比正常组,模型组大鼠肾上腺皮质CYP27B1、CYP19A1、CYP17A1表达下降(P0.05),CYP24A1表达上升(P0.05);相比模型组,维生素D组与淫羊藿苷不同剂量组的大鼠肾上腺皮质CYP27B1、CYP19A1、CYP17A1基因相对模型组表达上升(P0.05),CYP24A1则相对下降(P0.05)。结论衰老大鼠体内肾上腺皮质性激素相关基因表达水平下调同时衰老大鼠肾上腺皮质维生素D活化与作用降低,淫羊藿苷可以提高衰老大鼠肾上腺皮质维生素D活化与作用水平同时增加衰老大鼠肾上腺皮质性激素相关基因表达与生成。     

淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导H9C2细胞心肌重塑模型CYP27B,维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导H9C2大鼠心肌细胞心肌重塑模型CYP27B与维生素D受体mRNA表达的影响。方法将H9C2细胞随机分为6个组:对照组,模型组,淫羊藿苷0.1μmol/L+模型组,淫羊藿苷1μmol/L+模型组,淫羊藿苷10μmol/L+模型组,淫羊藿苷100μmol/L+模型组,利用浓度为80μmol/L的异丙肾上腺素(ISO)进行造模。MTT法观察H9C2心肌细胞增殖活性,Real-Time QPCR法检测CYP27B与维生素D受体mRNA表达。结果 MTT结果显示与对照组相比模型组细胞存活率下降(P0.05),经过淫羊藿苷处理后细胞存活率提高(P0.05)。Real-TimeQPCR显示模型组CYP27B与维生素D受体基因mRNA表达量相对对照组均降低(P0.05),不同浓度淫羊藿苷作用后CYP27B与VDR基因表达量相对模型组则上升(P0.05)。结论淫羊藿苷可以通过调节维生素D轴对异丙肾上腺素诱导的H9C2细胞心肌重塑模型产生保护作用。     

淫羊藿苷对H9C2细胞心肌肥厚模型CYP24A、肾素RENIN、脑钠肽BNP基因表达的影响

目的:探讨淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导H9C2大鼠心肌细胞心肌肥大模型CYP24A,肾素RENIN,脑钠肽BNP基因mRNA表达的影响。方法:将H9C2细胞随机分为7个组:正常组,模型组(异丙肾上腺素ISO),模型+淫羊藿苷4个剂量组,模型+维生素D组进行干预。Real-Time QPCR法检测CYP24A,RENIN,BNP基因mRNA表达。结果:Real-Time PCR显示异丙肾上腺素(ISO)模型组的CYP24A基因表达量下调(P<0.05),BNP与RENIN表达量上调(P<0.05);不同浓度的淫羊藿苷+ISO组,CYP24A的表达量相比模型组均有不同程度上调(P<0.05),BNP与RENIN基因的表达与模型组相比则发生下调(P<0.05);ISO+维生素D组的RENIN和BNP的表达量相对模型组均下调(P<0.05),CYP24A组则上调(P<0.05)。结论:淫羊藿苷可能通过调节维生素D轴对抗RAS激活对异丙肾上腺素诱导的肥厚H9C2心肌细胞产生保护作用。     

淫羊藿苷对H295R细胞维生素D系统相关蛋白表达及孕酮、孕烯醇酮分泌的影响

目的:探讨淫羊藿苷对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)维生素D系统及孕酮、孕烯醇酮相关基因表达的影响。方法:MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷和维生素D对H295R细胞增殖率的影响。ELISA法检测孕酮、孕烯醇酮分泌水平。RT-qPCR检测VDR、CYP27B、CYP24A、CYP17A1、CYP21 mRNA表达。Western blot法检测VDR、CYP27B、CYP24A蛋白表达。结果:淫羊藿苷10~(-8) mol/L浓度,维生素D在0.25×10~(-11) mol/L和0.5×10~(-11) mol/L浓度,对H295R细胞增殖无显著影响。而淫羊藿苷10~(-4) mol/L,维生素D在2×10~(-11) mol/L和4×10~(-11) mol/L浓度时对H295R细胞增殖存在一定抑制作用。与对照组比较,维生素D组与淫羊藿苷10~(-5) mol/L、10~(-6) mol/L组的VDR、CYP27B mRNA与蛋白表达明显上调,维生素D组与淫羊藿苷10~(-6) mol/L、10~(-7) mol/L组的CYP24A mRNA与蛋白表达则明显下调,维生素D组与淫羊藿苷各剂量组孕酮、孕烯醇酮分泌水平均明显下降,维生素D组与淫羊藿苷10~(-6) mol/L组CYP17A1、CYP21 mRNA表达均明显上调。结论:淫羊藿苷可能通过调节H295R细胞维生素D系统对孕酮、孕烯醇酮合成分泌产生影响。     

淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导的肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导的小鼠肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量的影响。方法以2×10~4·ml~(-1)密度接种细胞,用异丙肾上腺素诱导小鼠HL-1心肌细胞损伤,实验分为正常组、模型组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷中剂量组、淫羊藿苷高剂量组、维生素D组。MTT法检测各组HL-1心肌细胞存活率。RealTime PCR法检测各组HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量。结果 MTT法显示不同剂量的淫羊藿苷均可提高小鼠肥大HL-1心肌细胞的存活率,且淫羊藿苷的浓度在10μmol·L-1时,细胞存活率最高。Real-Time PCR检测结果显示,与模型组比较,不同剂量的淫羊藿苷均可明显下调(P0.05)异丙肾上腺素诱导的小鼠肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量。结论淫羊藿苷对小鼠肥大HL-1心肌细胞具有保护作用,其机制可能通过维生素D轴调节VDR mRNA表达水平有关。     

基于VDR及CYP27B1对冠脉通片拆方补肾活血作用靶点研究

[目的]探讨冠脉通片及其拆方基于维生素D受体(VDR)及1α-羟化酶(CYP27B1)对补肾活血的作用。[方法]采用"腺嘌呤+左冠状动脉前降支结扎法"制备肾阳虚心梗模型。将大鼠分为假手术对照组、肾阳虚心梗模型对照组、冠脉通片全方组、补肾拆方组、活血开窍拆方组、维生素D对照组。采用预防性给药,于AMI术前2 d灌胃相应受试物,术后给药5 d,每日1次。检测评价肾阳虚的血清肌酐(Scr)、三碘甲状腺原氨素(T3)、甲状腺素(T4)水平。酶联免疫法测血清活化1,25(OH)_2D_3水平。免疫组化法观察心室肌组织、肾组织VDR、肾组织CYP27B1表达。Western blot法检测心室肌组织、肾组织VDR和肾组织CYP27B1蛋白相对表达量。[结果]冠脉通片全方降低Scr作用明显(P0.05),升高T3、T4作用明显(P0.05);可明显升高血清1,25(OH)_2D_3水平(P0.05)。全方组肾组织CPY27B1蛋白表达增多,全方及补肾组可增加心肌和肾组织中的VDR表达。[结论]冠脉通片可通过CPY27B1和VDR作为核心环节,对其用于肾虚血瘀的补肾活血作用机制提供了基础研究的数据支持。     

密骨打老儿丸对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎和肾脏维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨密骨打老儿丸(打老儿丸加淫羊藿、骨碎补、补骨脂、菟丝子等)对去卵巢骨质疏松大鼠生化指标的影响。方法 72只SD雌性大鼠,随机分为6组:假手术组、模型组、维生素D3(2 mg/kg)组和密骨打老儿丸小、中、大剂量组。假手术组仅行假手术,其余5组分别行卵巢切除术。术后1周分别灌胃给予密骨打老儿丸和维生素D33个月。采用酶联免疫吸附法检测血清1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)水平。测定股骨骨密度,采用实时荧光RT-PCR测定第2腰椎和肾脏组织维生素D受体(VDR)mRNA表达。结果与假手术组相比,模型组股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达均下降。与模型组比较,密骨打老儿丸中、大剂量组和维生素D3组均可使股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达增加。结论密骨打老儿丸和维生素D3显著提高去卵巢大鼠腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达,促进肠钙吸收与成骨细胞活性,增强骨质量。     

维生素D轴:淫羊藿干预女性生殖系统疾病的潜在靶点

维生素D轴由活性维生素D、VDR及CYP27A1、CYP27B1、CYP24A1等酶组成,除能改善骨骼系统疾病外,还对女性生殖系统有着较好的调节作用。淫羊藿具有补肾壮阳、祛风除湿之功效,常用于治疗女性不孕、月经不调、卵巢早衰等症。基于课题组前期研究发现,淫羊藿与维生素D轴存在密切关联。据此推测,淫羊藿可能是通过调节机体维生素D轴的表达水平治疗女性生殖系统疾病,维生素D轴可能是中药淫羊藿干预女性生殖系统疾病的潜在靶点。     

淫羊藿苷对哮喘大鼠醌氧化还原酶1及谷胱甘肽还原酶表达及氧化应激的影响

目的探讨淫羊藿苷对哮喘大鼠醌氧化还原酶1(NQO1)及谷胱甘肽还原酶(GR)表达及氧化应激的影响。方法选取40只健康雌性Wistar大鼠,随机将其分为正常组、模型组、布地奈德组及淫羊藿苷组,每组10只。除正常组外,其余组大鼠采用卵蛋白溶液造成慢性大鼠哮喘模型。实验期间正常组及模型组每天灌胃生理盐水,淫羊藿苷组每天灌胃淫羊藿苷120 mL/kg,布地奈德组致敏2周后在卵蛋白溶液雾化吸入后给予布地奈德吸入。于末次激发后24 h内处死各组(正常组同期处死)大鼠并取出右肺组织,以ELISA方法检测各组氧化因子活性氧(ROS)表达水平,采用RT-PCR法检测各组GR mRNA表达水平,采用Westernblot方法检测各组NQO1蛋白表达水平。结果模型组大鼠肺组织中ROS表达水平明显高于正常组(P<0.05),GR mRNA及NQO1蛋白表达水平均明显低于正常组(P均<0.05)。淫羊藿苷组及布地奈德组大鼠肺组织中ROS表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),GR mRNA及NQO1蛋白表达水平均明显高于模型组(P均<0.05),淫羊藿苷组与布地奈德组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论淫羊藿苷可上调哮喘大鼠GR mRNA及NQO1蛋白的表达,减轻哮喘大鼠氧化应激反应。     

淫羊藿苷对D-半乳糖诱导的脑衰老模型小鼠p53/p21信号通路的影响

目的:观察淫羊藿苷对脑衰老模型小鼠p53/p21信号通路的影响,并探讨淫羊藿苷抗衰老的可能机制。方法:将实验小鼠随机分为空白组、模型组、淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组,除空白组外,其他各组通过D-半乳糖诱导建立脑衰老模型。淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组灌胃淫羊藿苷药液,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水。用Morris水迷宫评价各组小鼠的学习记忆能力;用ELISA检测各组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST、MDA的表达。用Real time-PCR和免疫组化检测各组小鼠海马中p53和p21的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间都明显增加(P0.01),而小鼠穿越平台次数和目标象限时间则明显较少(P0.01)。与模型组相比,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间均有所较少(P0.01,P0.05),而小鼠越平台次数和目标象限时间有所增加(P0.01,P0.05)。与空白组比较,模型组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST明显降低(P0.01),而MDA明显升高(P0.01);与模型组比较,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST均有不同程度升高(P0.01,P0.05),而MDA则有所降低(P0.01)。与空白组比较,模型组小鼠海马中p53、p21 mRNA和蛋白表达水平升高(P0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠海马中p53、p21 mRNA和蛋白表达水平降低(P0.01,P0.05)。结论:淫羊藿苷具有延缓衰老作用,其机制可能与其抑制衰老信号通路p53/p21有关。     

冬虫夏草对VDR沉默大鼠卵巢颗粒细胞CYP19表达的影响

目的:探讨冬虫夏草对Vitamin D Receptor(VDR)沉默大鼠卵巢颗粒细胞中CYP19m RNA表达的影响。方法:将大鼠卵巢颗粒细胞随机分为6个组:1为空白对照组,2为基因沉默阴性对照组,3为VDR沉默组,4为VDR沉默+已烯雌酚组,5为VDR沉默+维生素D组,6为VDR沉默+虫草含药血清处理组。采用荧光定量PCR检测法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞中CYP19mRNA表达。结果:与对照组、基因沉默阴性对照组相比,VDR沉默组CYP19mRNA表达明显下调(P0.05),VDR沉默+己烯雌酚组、VDR沉默+VD组、VDR沉默+冬虫夏草含药血清组与VDR沉默组比较,CYP19m RNA表达明显上调(P0.05)。结论:冬虫夏草可以通过调节CYP19产生类维生素D样作用,对大鼠的卵巢颗粒细胞分泌功能产生影响,同时通过调节维生素D轴对大鼠的卵巢产生保护作用。     

淫羊藿苷对慢性哮喘大鼠氧化应激及肺组织Nrf2、HO-1表达的影响

目的:探究淫羊藿苷对慢性哮喘大鼠肺组织Nrf2、HO-1表达的影响及对氧化应激的干预作用。方法:采用OVA致敏法建立慢性哮喘大鼠模型。将模型大鼠随机分为正常对照组,模型组,布地奈德组及淫羊藿苷组。于末次激发24 h内处死大鼠,取右肺组织以ELISA方法检测氧化/抗氧化因子ROS及SOD的表达,并以RT-PCR及Western Blot方法分别检测Nrf2 mRNA和HO-1蛋白表达。结果:与模型组比较,淫羊藿苷组及布地奈德组均可提升哮喘大鼠肺组织中SOD、Nrf2 mRNA以及HO-1蛋白的表达,差异显著(P0.05),且组内比较无明显差异(P0.05);并可有效降低哮喘大鼠肺组织中ROS表达,与模型组比较差异显著(P0.05),且组内比较无明显差异(P0.05)。结论:淫羊藿苷可有效调控慢性哮喘大鼠氧化应激水平,且可显著上调慢性哮喘大鼠肺组织Nrf2、HO-1表达,其可能通过抗氧化方法对哮喘的治疗产生干预作用。     

苗医“石弱骨虚”大鼠模型复制及几种淫羊藿的干预作用

目的:复制苗医学说指导下的“石弱骨虚”模型大鼠并探讨几种淫羊藿对模型的作用。方法:在苗医药学说指导下采用手术去除大鼠双侧卵巢+肌肉注射地塞米松磷酸钠+给予2. 5%氯化锶水溶液的方法复制“石弱骨虚”模型,采用苗族常用的淫羊藿对模型动物进行干预,以方测证。检测大鼠胫骨和股骨重量;取大鼠血清用酶联免疫试剂盒(ELISA)测定雌二醇(E2)、钙离子(Ca2+)、无机磷(P)、25羟基维生素D3(25 (OH) D3)、1,25二羟基维生素D3(1,25 (OH)2D3)、骨钙素(osteocalcin,BGP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量。结果:与空白组比较,模型组大鼠胫骨和股骨重量;血清中E2、Ca2+、P、25 (OH) D3、1,25 (OH)2D3、BGP和ALP含量均降低;与模型组比较,不同种类淫羊藿组大鼠胫骨和股骨重量;血清中E2、Ca2+、P、25 (OH) D3、1,25 (OH)2D3、BGP和ALP含量出现不同程度的升高。结论:实验所复制的复合模型在一定程度上与苗医理论中“石弱骨虚”的含义相对应,表明“石弱骨虚”模型大鼠复制成功;淫羊藿可通过提高成骨细胞的活性、促进骨形成、增加骨矿化、增加骨量、稳定骨矿化速率、促进血钙、磷平衡、改善骨组织健康状态等方式增加大鼠胫骨和股骨的重量,升高血清中E2、Ca2+、P、25 (OH) D3、1,25 (OH)2D3、BGP和ALP的含量,改善大鼠“石弱骨虚”的状态,也一定程度上阐明了其应用于“石弱骨虚”的药理学基础。     

基于神经网络模型评价淫羊藿、女贞子配伍对自然衰老大鼠肾脏、睾丸及肾上腺的影响

目的:研究自然衰老大鼠肾脏、睾丸和肾上腺的病理变化、肾脏自由基损伤的增龄性改变,以及中药淫羊藿、女贞子对其的影响,基于神经网络模型评价药物作用的差异。方法:8月龄雄性SD大鼠,随机分为7组,包括9月龄组、12月龄组、15月龄组、17月龄组、淫羊藿组、女贞子组、淫羊藿女贞子组(配伍组);另以3月、6月龄雄性大鼠为青年对照组。3个用药组饲养至15月龄后开始灌胃给予相应药物2个月后处死,其他组大鼠饲养至相应月龄后处死。剖取肾脏、肾上腺及睾丸,HE染色观察病理改变;制备肾脏匀浆,检测相关指标与水平的变化。结果:与青年大鼠比较,17月龄组老年大鼠肾脏、睾丸及肾上腺出现退行性的病理改变,且肾脏组织一氧化氮(NO)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平降低,总一氧化氮合成酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)及丙二醛(MDA)水平升高(P0.05或P0.01)。与17月龄组比较,配伍组肾上腺及睾丸退行性病理改变减轻,肾脏组织T-AOC、SOD、GSH、NO水平升高,tNOS、iNOS及MDA水平降低(P0.05或P0.01)。基于多层感知(MLP)神经网络模型评价药物的综合作用,结果显示,淫羊藿、女贞子配伍可使17月龄自然衰老大鼠的上述指标改变逆转至(9.79±1.44)个月。结论:淫羊藿、女贞子配伍具有延缓衰老的作用,可能与改善衰老大鼠肾上腺及睾丸退行性病理改变、提高肾脏抗氧化能力有关。     

黄芪含药血清对衰老骨髓间充质干细胞CYP24A1，CYP27B1 mRNA和蛋白的影响

目的:通过探讨不同浓度黄芪含药血清对衰老骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化过程中24-羟基化酶(CYP24A1),1α羟化酶(CYP27B1)mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨其治疗原发性骨质疏松症作用机制。方法:将SD大鼠随机分为6组,正常组、模型组、黄芪含药血清低、中、高质量分数组(20%,40%,60%),维生素D组。细胞增殖毒性检测(CCK-8)法检测不同浓度黄芪含药血清对衰老BMSCs成骨分化细胞存活率的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度黄芪含药血清对衰老BMSCs成骨分化细胞CYP24A1,CYP27B1 mRNA和蛋白的表达情况。结果:CCK-8法显示,与正常组比较,模型组BMSCs成骨分化细胞经D-半乳糖诱导后细胞增殖存活率显著降低(P0.01);与模型组比较,黄芪含药血清中、高质量分数组及维生素D组均可在不同程度上提高衰老BMSCs成骨分化细胞增殖存活率(P0.01);Real-time PCR和Western blot结果显示,与正常组比较,模型组CYP27B1 mRNA和蛋白相对表达量显著降低,CYP24A1 mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P0.01);与模型组比较,黄芪高质量分数组均可升高CYP27B1 mRNA和蛋白相对表达量(P0.01),降低CYP24A1 mRNA和蛋白相对表达量(P0.01),呈质量分数依赖性。结论:不同浓度黄芪含药血清可治疗骨质疏松症,其机制可能与调节衰老骨髓间充质干细胞成骨分化过程中CYP24A1,CYP27B1 mRNA及蛋白表达水平有关。     

淫羊藿苷激活Nrf2/HO-1信号通路减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤研究

目的探究淫羊藿苷对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用及其分子机制。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为青年对照组(2月龄)、衰老模型组(16月龄)和淫羊藿苷低、高剂量组(2、6 mg/kg,16月龄),每组8只,给予普通或含药饲料饲养4个月,禁食12 h后处死大鼠。HE染色法观察睾丸组织形态变化;黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)水平;免疫荧光法检测睾丸组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)及DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达和定位;Western blotting法检测睾丸组织中Nrf2及其下游相关蛋白血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、γ-H2AX和DNA损伤修复相关蛋白p-p53和p21表达水平。结果HE染色结果表明,淫羊藿苷能明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态学变化,显著提高衰老大鼠睾丸组织SOD活力,降低MDA水平;免疫荧光结果显示,淫羊藿苷能明显上调衰老大鼠睾丸组织中各级生精细胞内Nrf2蛋白表达水平,明显下调初级精母细胞和精原细胞中γ-H2AX蛋白表达水平;Western blotting结果显示,淫羊藿苷能显著上调衰老大鼠睾丸组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平,下调γ-H2AX、p-p53和p21蛋白表达水平。结论淫羊藿苷可减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤,其机制与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

淫羊藿苷抑制大鼠静脉血栓形成及对血液流变学的影响

目的:研究淫羊藿苷对大鼠静脉血栓形成的影响,并探究其作用机制。方法:建立大鼠静脉血栓模型和血瘀模型,将实验大鼠分为淫羊藿苷低、中、高剂量组,分别测定血栓质量、凝血时间、优球蛋白溶解时间(ELT)和血液流变学等参数指标。结果:静脉血栓模型大鼠,淫羊藿苷低、中、高剂量(5、10、20 mg/kg)能明显降低静脉血栓质量、全血黏度、红细胞压积和红细胞聚集指数(P0.05或P0.01),抑制腺苷二磷酸(ADP)诱导的大鼠血小板聚集(P0.05);中、高剂量淫羊藿苷能明显缩短ELT,延长凝血活酶时间、凝血酶原时间和凝血酶时间(P0.05或P0.01)。血瘀模型大鼠,淫羊藿苷高剂量组的全血黏度、血浆黏度、红细胞压积和血沉均明显低于模型组(P0.05或P0.01),淫羊藿苷中剂量组的低切全血黏度、中切全血黏度、血浆黏度和血沉明显低于模型组(P0.05或P0.01),而淫羊藿苷低剂量虽有改善,但除血浆黏度及血沉外,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:在一定剂量下,淫羊藿苷能够抑制大鼠静脉血栓的形成,具有改善血液流变学性质、增加纤溶活性及抑制血小板聚集的作用。