针砂马准灸对兔膝骨关节炎软骨组织中JNK信号通路表达的影响

目的:观察回医针砂马准灸对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路中JNK1、2的表达,探讨针砂马准灸治疗膝骨性关节炎的作用机理。方法:新西兰大耳兔40只,随机分为针砂马准灸组、艾灸组、模型组和空白对照组,参照右后肢膝关节伸直位石膏固定法制备兔KOA模型。造模完成后,分别给予针砂马准灸治疗、艾灸治疗,模型组、空白组不予任何处理。治疗结束后取兔膝软骨组织。采用蛋白印迹法检测JNK1、JNK2蛋白表达。结果:相比空白组,模型组JNK1、JNK2表达均升高(P0.01),差异有统计学意义;与模型组比较,针砂马准灸组、艾灸组JNK1、JNK2表达均降低(P0.05),差异有统计学意义,针砂马准灸组与艾灸组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:针砂马准灸治疗兔KOA可能与激活JNK信号通路,引起JNK1、JNK2表达的下降有关。     

针砂马准灸血清对培养软骨细胞u PA、MMP-1及MMP-13水平的影响

目的通过研究回医针砂马准灸血清对培养软骨细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平的影响,探寻针砂马准灸对膝骨性关节炎(KOA)治疗的作用机制。方法将15只雄性新西兰大耳兔随机分为正常血清组、模型血清组和针砂马准灸血清组。造模采用右后肢膝关节伸直位石膏固定6周,结束后进行针砂马准灸治疗,取血清,配制完全培养液干预细胞。采用RT-PCR检测细胞中u PA、MMP-1、13mRNA表达水平; Western blot检测细胞u PA、MMP-1、13蛋白表达水平。结果模型血清组较正常血清组细胞u PA、MMP-1、13mRNA和蛋白表达显著升高(P 0. 05);针砂马准灸血清组较模型血清组细胞u PA、MMP-1、13mRNA和蛋白表达显著降低(P 0. 05);细胞u PA蛋白表达水平分别与MMP-1、13呈正相关(p 0. 05)。结论针砂马准灸血清可有效抑制软骨细胞中u PA、MMP-1、13的表达,提示针砂马准灸可能通过调控u PA的表达水平来影响细胞MMP-1、13的表达,从而达到治疗KOA的效果。     

回医烙灸对兔膝骨性关节炎基质金属蛋白酶及其抑制剂表达影响的研究

目的:探讨回医烙灸对兔膝骨性关节炎(KOA)软骨细胞外基质MMP2、MMP3、和TIMP-1表达的影响。方法:健康成年新西兰兔按随机数字表法分为空白对照组、模型对照组与烙灸干预组,每组各10只。采用Hulth法制备兔KOA模型,4周后烙灸干预组给予兔左后肢局部膝关节烙灸治疗,1次/天,20 min/次;空白对照组和模型对照组不予任何干预。4周后取兔膝关节软骨进行SP免疫组化检测,蛋白免疫印迹法、RT-PCR分别检测MMP2、MMP3和TIMP-1蛋白表达与mRNA表达。结果:烙灸干预组软骨组织的SP免疫组化、软骨外基质的MMP2、MMP3蛋白表达和mRNA均较模型对照组降低(P 0. 05),而TIMP-1的上述指标均较模型对照组增高(P 0. 05)。结论:烙灸疗法可以下调关节软骨细胞外基质的基质金属蛋白酶,上调其蛋白酶抑制剂,改善外基质环境,减少兔KOA关节软骨的破坏。     

筋针结合关节松动术对兔膝骨关节炎受体Notch2、配体Jagged-1影响的研究

目的观察筋针结合关节松动术对膝骨关节炎兔膝关节软骨中Notch信号通路Notch2、Jagged-1表达的影响,探讨筋针结合关节松动术治疗膝骨关节炎的可行性和相关作用机制。方法选取26只大耳白兔,随机取6只作为空白组,其余兔采用改良Hulth手术法建立左膝膝骨关节炎模型。将建模成功的18只兔随机分为模型组、氨糖组和筋针结合松动术组各6只,氨糖组给予盐酸氨基葡萄糖灌胃6周,筋针结合松动术组给予筋针结合关节松动术治疗6周,空白组和模型组不予任何干预。干预结束后取各组兔的左膝软骨,分别采用Western blot法和荧光PCR法检测软骨细胞中Notch2、Jagged-1的蛋白和mRNA表达量。结果模型组软骨细胞中Notch2、Jagged-1蛋白和mRNA表达量均明显高于空白组(P均<0.05),氨糖组和筋针结合松动术组均明显低于模型组(P均<0.05),且筋针结合松动术组均明显低于氨糖组(P均<0.05)。结论筋针结合关节松动术可以有效下调膝骨关节炎兔软骨中Notch2和Jagged-1的表达,从而保护关节软骨。     

艾灸对膝骨关节炎兔软骨Wnt信号通路及血清炎性因子的影响

目的：基于Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路探讨艾灸干预膝骨关节炎（KOA）模型兔的可能作用机制。方法：将24只新西兰兔随机分为正常组、模型组及艾灸组，每组8只。除正常组外，其余2组兔采用右膝关节腔内注射木瓜蛋白酶水溶液的方法制作KOA模型。造模成功后，艾灸组兔每日予艾条悬灸右膝犊鼻穴20 min，连续治疗21 d ；正常组和模型组正常饲养，不给予任何干预措施。干预结束后次日，各组兔麻醉后心脏采血，采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；取各组兔右膝关节股骨端软骨，采用苏木精-伊红（HE）染色法观察各组兔膝关节软骨的组织形态，采用蛋白免疫印迹（Western blot）法和实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）法分别测定各组兔膝关节软骨组织中Wnt信号蛋白-3α（Wnt3α）、β-连环蛋白（β-catenin）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）蛋白及mRNA的表达水平，采用免疫组化法检测各组兔膝关节软骨组织中IL-1β、TNF-α的表达，并分析其积分光密度（IOD）。结果：模型组兔血清IL-1β、TNF-α明显高于正常组（P＜0.05），艾灸组上述指标明显低于模型组（P＜0.05）。与正常组比较，模型组兔膝关节软骨细胞明显变性，软骨组织损伤严重；艾灸组兔膝关节软骨结构较为完整，软骨细胞数目较多且分布较均匀，细胞形态较为正常。模型组兔膝关节软骨组织中Wnt3α、β-catenin、MMP-13蛋白和mRNA相对表达量均明显高于正常组（P＜0.05），艾灸组兔膝关节软骨组织中上述指标蛋白和mRNA相对表达量均明显低于模型组（P＜0.05）。模型组兔膝关节软骨组织IL-1β、TNF-α蛋白表达显著高于正常组（P＜0.05），艾灸组兔膝关节软骨组织上述蛋白表达明显低于模型组（P＜0.05）。结论：艾灸犊鼻穴可下调KOA模型兔血清及软骨组织中炎性因子的表达，有效缓解膝关节软骨组织损伤，其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

基于纤溶酶途径介导的软骨细胞外基质损伤机制研究温针灸治疗膝骨性关节炎的作用机理

目的通过观察温针灸干预后膝骨性关节炎(KOA)兔关节软骨尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)因子表达的变化,探索温针灸治疗KOA的作用机制。方法将40只新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组、u PA抑制剂组,每组10只,采用右后肢石膏管型固定法制备KOA模型,空白组不予处理,模型组每天于兔架上固定15 min,温针灸组予以温针灸治疗,u PA抑制组每两日于关节腔注射u PA抑制剂稀释液1 m L/kg,干预结束后取兔关节软骨行TUNEL、RT-PCR、Western blot检测。结果 TUNEL细胞凋亡检测发现:较空白组,模型组软骨细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组及u PA抑制剂组软骨细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。RT-PCR检测结果发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);Western blot检测发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05) u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);相关性分析显示u PA与MMP-1、MMP-13均由相关关系。结论 (1)温针灸可抑制软骨细胞的过度凋亡;(2)温针灸可有效抑制软骨细胞中u PA、MMP-1、MMP-13的表达,且可通过抑制u PA的生成进而阻断MMP-1、MMP-13的活化,发挥保护关节软骨最终达到治疗KOA的作用。     

烙灸对兔膝骨性关节炎软骨细胞外基质Ⅱ型胶原、蛋白多糖表达的影响

目的:观察烙灸疗法对兔膝骨性关节炎(KOA)软骨细胞外基质Ⅱ型胶原、蛋白多糖蛋白表达的影响。方法:选取成年健康新西兰兔30只随机分为正常对照组(10只)、造模组(20只)。采用Hulth法复制兔膝骨性关节炎模型后随机分为模型对照组(10只)和烙灸干预组(10只)。烙灸干预组给以兔左后膝关节局部烙灸治疗,1次/天,20 min/次,连续4周。疗程结束后,取动物标本进行大体形态学和HE染色病理学检测,采用蛋白免疫印迹法检测软骨Ⅱ型胶原和蛋白多糖。结果:烙灸干预组软骨组织的改良Mankin's评分、软骨外基质的Ⅱ型胶原和蛋白多糖的蛋白表达均较模型对照组降低(P 0. 05)。结论:烙灸疗法可以抑制软骨细胞外基质Ⅱ型胶原和蛋白多糖降解,改善外基质环境,减少兔KOA关节软骨的破坏。     

内热针疗法对兔膝骨性关节炎软骨下骨中骨保护素及核因子κB受体活化因子表达的影响

目的:观察内热针疗法对兔膝骨性关节炎(KOA)软骨下骨中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体活化因子(RANK)表达的影响,探讨内热针治疗KOA的作用机制。方法:将30只新西兰兔随机分为空白组、模型组和治疗组,每组10只。采用Hulth法建立兔KOA模型。治疗组给予兔内热针治疗,1次/周,每次20 min,连续4周。干预前后采用改良版Lequesne量表对各组兔进行行为学评价。取各组兔左后膝关节标本行甲苯胺蓝染色,观察软骨下骨病理变化并分析骨组织形态计量学参数的差异;分别采用Western blot和实时荧光PCR法检测软骨下骨中OPG、RANKL、RANK蛋白和mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组Lequesne评分升高(P0.05),软骨下骨骨小梁面积百分比、骨小梁数目降低(P0.05),骨小梁分离度升高(P0.05),软骨下骨组织中OPG蛋白表达和mRNA均降低(P0.01,P0.05),RANKL、RANK蛋白表达和mRNA均升高(P0.01)。与模型组比较,治疗组Lequesne评分降低(P0.05),干预前后Lequesne评分差值升高(P0.05),软骨下骨骨小梁面积百分比、骨小梁数目升高(P0.05),骨小梁分离度降低(P0.05),软骨下骨组织中OPG蛋白表达和mRNA均升高(P0.05),RANKL、RANK蛋白表达和mRNA均降低(P0.05)。结论:内热针疗法治疗KOA的机制可能是通过上调兔KOA软骨下骨组织中OPG表达,下调RANKL和RANK的表达,从而抑制了骨吸收。     

基于NF-κB信号通路探讨热敏灸治疗膝骨性关节炎兔模型的效应机制

目的:观察热敏灸对KOA兔模型核因子κB亚基p65/p50(Nuclear factor κB-p65/p50,NF-κB p65/p50)、白介素-1β(lniierleukin-1β,IL-1β)、Ⅱ型胶原的影响,探讨热敏灸治疗KOA的作用机制。方法:42只雄性日本长耳兔按随机数字表随机分为空白组(6只)、模型组(6只)、艾灸组(24只)、假手术组(6只)。空白组正常饲养,模型组与艾灸组采用木瓜蛋白酶注射膝关节建立KOA模型,假手术组采用腔内注射生理盐水造模,每日强迫活动30min,造模15天。造模结束后,艾灸组艾灸犊鼻穴,每日1次,每次40min,共14天,根据家兔艾灸过程中温度变化分为热敏灸组和非热敏灸组,两组各随机抽取6只;空白组、模型组、假手术组正常饲养,不予任何干刺激。治疗结束后,采用放射免疫法检测IL-1β含量,Real-time PCR检测法检测软骨NF-κB p65/p50、Ⅱ型胶原。结果:(1)与空白组相比,模型组、热敏灸组、非热敏灸组、假手术组血清、关节炎IL-1β表达均升高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与模型组相比,热敏灸组、非热敏灸组、假手术组表达均明显偏低(P0.05,P0.01);与非热敏灸组相比,热敏灸组表达明显偏低(均P0.05)。(2)与空白组相比,模型组、热敏灸组、非热敏灸组、假手术组NF-κB p65/p50表达均升高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与模型组相比,热敏灸组、非热敏灸组、假手术组表达均明显降低(P0.01);与非热敏灸组相比,热敏灸组表达明显降低(均P0.05)。(3)与空白组相比,模型组、热敏灸组、非热敏灸组、假手术组Ⅱ型胶原表达均下降,差异有统计学意义(均P0.01);与模型组相比,热敏灸组、非热敏灸组、假手术组表达均明显升高(均P0.01);与非热敏灸组相比,热敏灸组表达明显升高(P0.05)。结论:热敏灸可能通过抑制NF-κB信号通路,减少炎症反应、保护关节软骨从而达到治疗KOA的目的。     

不同灸法对环磷酰胺所致免疫抑制兔脾组织程序性死亡因子-1及其配体表达的影响

目的观察不同灸法对环磷酰胺所致免疫抑制兔脾组织程序性死亡因子-1(PD-1)及其配体PD-L1表达的影响。方法大耳白兔32只随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、艾灸组。除空白组外,其余3组腹腔注射环磷酰胺制备免疫抑制兔模型,连续7 d。成模后,隔药饼灸组和艾灸组分别给予隔药饼灸、艾灸干预,隔日灸,共灸10次。治疗结束后次日动物麻醉,摘取脾脏。采用RT-qPCR检测PD-1、PD-L1m RNA表达,免疫组化检测PD-1蛋白表达。结果与空白组比较,模型组兔脾组织PD-1、PD-L1m RNA表达明显升高(P0.01);与模型组比较,隔药饼灸组兔脾组织PD-1、PD-L1m RNA表达明显降低(P0.01),艾灸组兔脾组织PD-L1 mRNA表达明显降低(P0.05),PD-1 mRNA表达虽有降低趋势但差异无统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示,兔脾组织棕褐色PD-1阳性表达主要在细胞浆、细胞膜或间质,与空白组比较,模型组兔脾组织PD-1蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,隔药饼灸组和艾灸组兔脾组织PD-1蛋白表达显著降低(P0.01,P0.05)。结论不同灸法对免疫抑制兔免疫功能均有明显改善作用,隔药饼灸较艾灸更具优势。     

热敏灸干预膝骨性关节炎兔模型效应机制的研究

目的:观察热敏灸对膝骨性关节炎(KOA)兔模型一氧化氮(NO)、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)、Ⅱ型胶原、蛋白多糖(PG)的影响,探讨热敏灸治疗KOA的作用机制。方法:42只雄性日本长耳兔按随机数字表随机分为空白组(6只)、模型组(6只)、艾灸组(24只)、假手术组(6只)。空白组正常饲养,模型组与艾灸组采用木瓜蛋白酶注射膝关节腔建立KOA模型,每日强迫活动30 min,造模15 d。假手术组腔内注射0.9%Na Cl溶液。造模结束后,艾灸组艾灸"犊鼻"穴,每日1次,每次40 min,共14 d,根据兔艾灸过程中温度变化分为热敏灸组和非热敏灸组,两组各随机抽取6只;空白组、模型组、假手术组正常饲养,不予任何刺激。观察各组兔体质量、行为学变化;干预结束后,采用硝酸还原法检测血清NO含量,Real-time PCR法检测软骨ADAMTS-4、Ⅱ型胶原、PG含量。结果:(1)造模后,与空白组相比,模型组、热敏灸组、非热敏灸组、假手术组兔体质量均下降,Lequesne MG评分升高(P0.05,P0.01)。干预后,与空白组相比,模型组、假手术组兔体质量仍下降,Lequesne MG评分升高(P0.05,P0.01);与模型组相比,热敏灸组、非热敏灸组、假手术组干预后兔体质量升高,Lequesne MG评分降低(P0.05,P0.01);与非热敏灸组相比,热敏灸组兔体质量明显升高(P0.05),但Lequesne MG评分比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)干预后,与空白组相比,模型组、热敏灸组、非热敏灸组、假手术组NO、ADAMTS-4表达均升高,Ⅱ型胶原、PG表达均下降(P0.05,P0.01);与模型组相比,热敏灸组、非热敏灸组、假手术组干预后NO、ADAMTS-4表达均明显降低,Ⅱ型胶原、PG均明显升高(P0.05,P0.01);与非热敏灸组相比,热敏灸组干预后NO、ADAMTS-4表达明显降低,Ⅱ型胶原、PG表达均明显升高(均P0.05)。结论:热敏灸可能通过抑制NO和ADAMTS-4表达,减少炎性反应、保护关节软骨从而达到治疗KOA的目的。     

基于OPG/RANKL及Notch1信号通路探讨温针灸对膝骨性关节炎兔软骨下骨损伤的影响

目的：观察温针灸对膝骨性关节炎(KOA)兔软骨下骨的骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化子配体(RANKL)及Notch1信号通路的影响，探讨温针灸治疗KOA的作用机制。方法：选取新西兰雌雄兔共50只(6个月),随机分为空白组、模型组、药物组和温针灸组。采用管型石膏伸直位固定法建立兔KOA模型。经6周实验干预后采用HE染色观察各组软骨下骨形态结构，蛋白质印迹法检测OPG、RANKL及Notch1蛋白表达，实时荧光定量PCR检测各组软骨下骨中OPG、RANKL及Notch1 mRNA含量。结果：与模型组比较，药物组和温针灸组软骨表面相对光滑完整，结构较为清晰，软骨下骨处细胞分布较为整齐均匀。与空白组比较，模型组Lequesne MG评分、Mankin评分、RANKL mRNA、Notch1 mRNA、RANKL及Notch1蛋白表达水平均明显升高，差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较，药物组和温针灸组Lequesne MG评分、Mankin评分、RANKL mRNA、Notch1 mRNA、RANKL及Notch1蛋白表达水平均明显降低，差异具有统计学意义(P<0.01),而OPG mRNA、OPG蛋白、OPG/RANKL及OPG/Notch1比值均明显升高，差异具有统计学意义(P<0.01)。温针灸组Lequesne MG评分及Mankin评分均明显低于药物组，差异具有统计学意义(P<0.01),而OPG蛋白、OPG/RANKL及OPG/Notch1水平均高于药物组，差异具有统计学意义(P<0.01)。结论：温针灸可促进OPG表达，抑制RANKL及Notch1表达，通过调控OPG/RANKL及Notch1信号通路，减轻KOA兔软骨下骨的损伤，从而起到治疗KOA的作用。     

丹参注射液对体外培养兔膝关节软骨细胞MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的:观察丹参注射液对体外培养兔膝关节软骨细胞MMP-9、TIMP-1表达情况的影响。方法:取12只6月龄新西兰大白兔关节软骨作体外细胞培养,培养后软骨细胞随机分为正常组、模型组、玻璃酸钠组、丹参组4组。采用Western blot法测定软骨细胞内MMP-9、TIMP-1蛋白表达,RT-PCR检测软骨细胞内MMP-9 mRNA、TIMP-1mRNA相对表达量。结果:Western Blot检测结果:相对正常组,OA模型组的软骨细胞组织中MMP-9、TIMP-1蛋白表达明显上调(P0.01);玻璃酸钠组MMP-9、TIMP-1蛋白表达低于空白模型组(P0.05),丹参组MMP-9、TIMP-1蛋白表达低于空白模型组(P0.01);丹参组MMP-9蛋白表达低于玻璃酸钠组,TIMP-1蛋白表达高于玻璃酸钠组。荧光定量PCR检测结果:与空白组相比,OA模型组家兔关节软骨组织MMP-9 mRNA相对表达量显著升高(P0.01),MMP-9/TIMP-1失衡;治疗后,与OA模型组相比,玻璃酸钠组、丹参组MMP-9mRNA相对表达量显著降低(P0.01),TIMP-1mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与玻璃酸钠组相比丹参组MMP-9mRNA相对表达量显著降低(P0.01),TIMP-1mRNA相对表达量显著升高(P0.01)。结论:丹参注射液能够有效纠正MMP-9和TIMP-1在骨性关节炎软骨组织中异常表达,减轻软骨损伤,有效治疗骨性关节炎。     

柔肝冲剂对血瘀型肝纤维化大鼠纤溶酶原激活系统影响的研究

目的:探讨柔肝冲剂对血瘀型肝纤维化大鼠纤溶酶原激活系统[尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)、纤溶酶原激活抑制因子-1(PAI-1)]在肝组织蛋白表达的调控作用。方法:将大鼠随机分为正常组、血瘀组和柔肝组。主要观察项目:大鼠血瘀体征;用免疫组化、酶联免疫吸附法检测肝组织中uPA、uPAR、PAI-1的表达。结果:血瘀组出现明显的血瘀表现,正常组与血瘀组体征差异显著。经柔肝冲剂治疗后,血瘀体征有明显改善。通过免疫组化、蛋白定量发现PAI-1、uPA、uPAR在各组大鼠肝组织中均有表达。PAI-1、uPA、uPAR表达在血瘀组较正常组为高,其差异有统计学意义,P<0.01。经柔肝冲剂治疗后它们表达均有下降,其差异有统计学意义,P<0.01。结论:uPA、uPAR、PAI-1在正常大鼠肝组织中有表达。血瘀型肝纤维化时,其在肝组织中蛋白表达增高,柔肝冲剂可降低其表达。柔肝冲剂可能通过影响纤溶酶原激活系统,起到抗肝纤维化作用。     

温针内、外膝眼穴对膝骨性关节炎大鼠RhoA/ROCK信号通路的影响

目的:探讨温针内、外膝眼穴对膝骨性关节炎大鼠RhoA/ROCK信号通路上关键因子的影响，进一步明确温针的作用靶点，为临床中使用温针治疗KOA提供分子理论依据。方法:将24只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组与温针组，每组各8只。采用木瓜蛋白酶法复制膝骨性关节炎模型；空白组与模型组同等抓取固定，温针组采用温针治疗；期间观察大鼠的一般情况。HE染色法观察膝关节软骨组织形态学变化，实时荧光定量PCR法(q-PCR)检测大鼠膝关节软骨组织内RhoA、ROCK与ERK1/2的基因表达。结果:空白组大鼠软骨组织四层结构规整清晰，基质染色均匀，未见异常。与空白组相比，模型组大鼠膝关节软骨表层可见局部缺损，软骨细胞排列紊乱，基质染色变浅，RhoA mRNA、ROCK mRNA及ERK2 mRNA的表达均明显上调，差异具有统计学意义(P<0.01),ERK1 mRNA表达变化未见明显差异(P>0.05)。温针组软骨组织形态总体优于模型组，ROCK mRNA的含量相较于模型组显著下降(P<0.01),其余指标两组间统计学差异不显著(P>0.05)。结论:本研究结果表明Rho...     

针刀对膝骨性关节炎兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖相关蛋白表达的影响

目的:观察针刀对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)相关蛋白表达的影响,探讨针刀治疗KOA的相关机制。方法:新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组和电针组,每组10只,以左后肢伸直位固定制动法制备KOA模型。针刀组以膝关节内、外侧副韧带及髌韧带为松解对象,以纵疏横剥法进行针刀松解,每周1次,共治疗3周;电针组电针左后肢"阴陵泉""阳陵泉""内膝眼""外膝眼",每次20min,每周治疗3次,共3周。X线观察膝关节影像学改变,光镜观察关节软骨形态学改变,Western blot法分别检测膝关节整合素β1(Integrinβ1)、Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶3(MMP-3)及Aggrecan的蛋白表达水平。结果:X线结果显示,造模后,模型制备成功,关节病损情况属于早中期膝骨关节炎。光镜结果显示,模型组关节软骨层表面粗糙不平,表层软骨细胞稀少,细胞排列紊乱,部分软骨细胞坏死,潮线模糊或扭曲不完整,部分软骨有血管通过或血管翳生成,电针组及针刀组关节软骨组织结构均较模型组明显改善,针刀组较电针组改善更明显。Mankin评分比较,模型组较空白组明显升高(P0.01),针刀组较模型组明显降低(P0.01)。Western blot结果显示,模型组膝关节组织中Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较空白组显著降低(P0.01),MMP-3蛋白表达显著升高(P0.01);针刀组Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较模型组显著升高(P0.01,P0.05),MMP-3蛋白表达较模型组显著降低(P0.01);电针组Integrinβ1蛋白表达较模型组明显升高(P0.05),其它指标与模型组的差异均无统计学意义(P0.05)。结论:针刀可能通过对软骨力学环境的影响,激活整合素力学信号转导通路,促进细胞外基质Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达,下调MMP-3的蛋白表达水平,阻抑软骨细胞外基质的降解,延缓软骨损伤与关节退变程度,达到治疗KOA的目的。     

温针灸对兔膝骨性关节炎模型软骨细胞中c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的 观察温针灸治疗兔膝骨性关节炎（KOA）模型软骨中c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路及基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP -13的表达,为温针灸治疗KOA提供现代医学理论支持。方法 40只新西兰大耳兔随机选择30只采用右膝关节伸直位石膏固定制备KOA模型,另10只为正常对照组。固定6周后行X线检查确定造模成功后随机分为温针灸组、双氯芬酸钠组、模型组,每组10只。温针灸组选取足三里、鹤顶、内膝眼穴给予温针灸治疗,每天1次,15 min/次,治疗2周;双氯芬酸钠组按15 mg/kg灌胃,每天1次,治疗2周;模型组及正常对照组不予任何干预,正常饲养。采用免疫组织化学法、RT-PCR、免疫蛋白印迹法（Western Blot）检测软骨中JNK1、JNK2、MMP-1、MMP-13的表达。结果 与正常对照组比较,模型组关节软骨中MMP-1、MMP-13、JNK1、JNK2 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）,且温针灸组、双氯芬酸钠组关节软骨中MMP-1、MMP-13、JNK1、JNK2 mRNA及蛋白表达较模型组降低（P<0.05）,同时温针灸组MMP-1、MMP-13 mRNA蛋白表达及JNK1、JNK2 mRNA表达较双氯芬酸钠组降低更为明显（P<0.05）。结论 温针灸可抑制KOA软骨细胞中JNK1、JNK2、MMP-1、MMP-13的表达,温针灸治疗KOA可能是通过激活JNK信号通路,抑制MMP-1、MMP-13的表达而达到治疗作用。     

艾灸治疗对兔KOA软骨损伤及TNF-α、TGF-β1和IGF-1表达调节作用的实验研究

目的：探讨艾灸对膝关节骨性关节炎（KOA）的治疗机理。方法：通过兔膝关节注射木瓜蛋白酶制造KOA模型,经艾灸和药物治疗6周后,病理组织评分判断软骨损伤情况,并采用定量图像分析技术检测膝关节软骨中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、转化生长因子β1（TGF—β1）和胰岛素样生长因子1（IGF—1）表达的改变。结果：艾灸组软骨病理评分和TNF-α表达黑度均低于模型组,差异有统计学意义,而TGF—β1和IGF-1的表达黑度与模型组比较差异无统计学意义、艾灸组疗效与药物组相似。结论：艾灸能够减轻KOA软骨破坏及关节病损,其对KOA的治疗机制可能主要通过减少炎症细胞因子TNF—α的破坏作用来实现。     

温针灸对不同时间点KOA模型兔关节软骨中MMP-1、MMP-13表达的影响

目的:观察温针灸(warming moxibustion)对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞中基质金属蛋白-1、13(matrix metalloproteinase-1、13,MMP-1、MMP-13)表达的影响,明确温针灸治疗KOA的作用机制。方法:选取70只新西兰大耳兔,其中10只作为空白对照组,剩余随机分为模型2周组、模型4周组、模型6周组、温针灸2周组、温针灸4周组、温针灸6周组。采用右后肢伸直位石膏固定制备KOA兔模型,模型2、4、6周组不予处理,温针灸2、4、6周组分别给予温针灸治疗2周,治疗结束后取材。采用免疫组化及RT-PCR检测各组治疗前后关节软骨中MMP-1、MMP-13蛋白及mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,模型2周组、模型4周组、模型6周组软骨中MMP-1、MMP-13表达明显升高(P0.05),且各组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。与相应模型组比较,温针灸治疗后,MMP-1、MMP-13的表达降低(P0.05),且各组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:温针灸可降低KOA兔软骨中MMP-1、MMP-13的表达,说明温针灸治疗KOA可能与其抑制MMP-1、MMP-13的表达有关。     

运用蛋白质组学技术探讨针刀抗KOA兔软骨细胞凋亡的作用机制（英文）

目的:通过蛋白组学检测筛选与凋亡相关差异表达蛋白,进行分析及验证,阐述针刀抗膝骨关节炎(KOA)兔软骨细胞凋亡的作用机制。方法:30只新西兰大白兔被随机分为正常组,模型组和针刀组,每组10只。模型组与针刀组参照经典Videman法行KOA造模。针刀组:取兔左膝关节髌韧带和内、外侧副韧带中点,作为针刀进针治疗点,每周1次,连续3周。然后对各组兔膝关节软骨蛋白定量,并通过蛋白质组学筛选出差异表达蛋白,再进一步筛选出与凋亡相关差异表达蛋白。将正常组、模型组和针刀组中与凋亡相关差异表达蛋白取交集,获得3组共有与凋亡相关差异表达蛋白,并对其进行聚类分析。使用HE染色检测软骨细胞的病理变化,运用电子显微镜观察软骨细胞凋亡。运用实时定量PCR (rt-PCR)和蛋白质印迹(WB)检测3组共有与凋亡相关差异表达蛋白的mRNA及蛋白质表达。结果:蛋白印迹和rt-PCR结果提示,与模型组相比,针刀组干预后的TXN、CAP1、FABP3的蛋白和mRNA表达较低,差异有统计学意义(all P<0.05);与模型组相比,针刀组干预后的LTF、SCIN、IL-10的蛋白和mRNA表达较高,差异有统计学意义(...