牡荆素人工抗原的合成与免疫原性的鉴定

目的合成牡荆素的人工抗原,并对其免疫原性进行了鉴定。方法利用高碘酸钠氧化法偶联牡荆素制备牡荆素-牛血清白蛋白的免疫抗原和牡荆素-卵清蛋白的包被原;用紫外分光光度法和薄层色谱法鉴定小分子与载体蛋白偶联反应,并用间接ELISA测定免疫抗原免疫小鼠抗体效价,间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测抗体特异性。结果紫外扫描和薄层色谱结果表明牡荆素与牛血清白蛋白/卵清蛋白偶联成功,小鼠经牡荆素-牛血清白蛋白免疫后,体内产生了抗牡荆素抗体,效价在1∶16 000以上,线性检测范围为0.028 8~18μg/m L。结论合成的牡荆素人工抗原和专属酶联免疫分析法可用于后续的单克隆抗体的制备。     

人参皂苷Rg1人工抗原的合成及免疫原性鉴定

目的 合成人参皂苷Rg1的人工免疫原和包被原,为后续制备人参皂苷Rg1的单克隆抗体及建立相应的免疫分析方法奠定基础.方法 采用NaIO4氧化法分别合成人参皂苷Rg1免疫抗原(Rg1-BSA)和包被抗原(Rg1-PLL);紫外光谱和薄层色谱法鉴定人工抗原偶联是否成功;用间接ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗体效价,用间接竞争ELISA检测抗体特异性.结果 经紫外光谱和薄层色谱法检测,人参皂苷Rg1与BSA/PLL偶联成功;免疫小鼠后Rg1-BSA可以使小鼠体内产生抗Rg1抗体;利用合成的偶联物成功建立间接ELISA和间接竞争ELISA方法,测得小鼠血清抗体效价在1∶80 000以上,并且所得抗体能特异性结合人参皂苷Rg1.结论 成功合成了人参皂苷Rg1人工免疫原和包被原,可用于下一步的人参皂苷Rg1单克隆抗体制备及建立相应免疫分析方法.     

芒果苷人工抗原的合成及免疫原性鉴定

目的:合成芒果苷人工抗原并进行免疫原性鉴定。方法:采用经典高碘酸钠法,将芒果苷(mangiferin,MRn)分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)相耦联合成MRn的人工抗原和包被原。用紫外扫描的方法测定其耦联比,并免疫动物,通过间接ELISA方法测定芒果苷抗体的效价,采用间接竞争ELISA(ic ELISA)法鉴定芒果苷人工抗原(MRn-BSA)的免疫原性。结果:MRn-BSA的耦联比为6∶1,ic ELISA实验结果表明,4只人工抗原MRn-BSA免疫的小鼠均有特异性抗体产生,抗体效价:1∶4 000以上,线性检测范围为1~100μg/m L。结论:该方法成功合成了MRn的人工抗原,并且在免疫小鼠的血清中产生了针对MRn的抗体,为下一步芒果苷的单克隆抗体制备以及相应免疫方法的建立奠定基础。     

绿原酸人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

目的 合成绿原酸（chlorogenic acid,CHA）人工抗原,制备CHA多克隆抗体,为制备过敏成分分析的免疫芯片奠定基础。方法 采用碳二亚胺法分别合成CHA免疫抗原（CHA-牛血清白蛋白）和包被抗原（CHA-卵清蛋白）;UV法和TLC法鉴定人工抗原偶联是否成功;间接ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗体效价;间接竞争ELISA方法检测抗体特异性。结果 经UV法和TLC法检测,CHA与BSA偶联成功。血清抗体效价为1∶128 000,CHA-PAbs的质量浓度与抑制率的线性方程为Y＝?0.10 lnX＋1.158,线性检测范围为15.6～250 ng/mL,R²＝0.995,并且和甘草酸、黄芩苷等与其常配伍应用的中药化合物均无交叉反应。结论 成功制备了灵敏度高、特应性好的CHA多克隆抗体,为CHA的微量检测和过敏性研究提供了实验依据。     

石杉碱甲多克隆抗体的制备及酶联免疫检测方法的建立

目的 制备珍稀药源植物蛇足石杉的活性成分石杉碱甲(huperzine A,HupA)的人工抗原及多克隆抗体,建立快速检测HupA的酶联免疫分析方法.方法 采用戊二醛法,将半抗原HupA与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备人工抗原HupA-BSA和包被抗原HupA-OVA.用HupA-BSA免疫新西兰大白兔,制备抗HupA的抗血清,通过间接ELISA法和竞争ELISA法检测抗血清的效价和特异性.采用Protein A亲和层析法对抗血清进行纯化,以纯化后的多克隆抗体建立HupA的标准竞争抑制曲线.结果 合成的人工抗原HupA-BSA的偶联比为10.8∶1,免疫兔子得到抗HupA的抗血清,其效价为1∶64000,HupA的标准竞争抑制曲线为Y=0.215 1X-0.095 5(R2=0.987 3).结论 成功合成石杉碱甲人工抗原,经过免疫兔子制备抗石杉碱甲的多克隆抗体,建立HupA的酶联免疫检测方法.     

斯皮诺素人工抗原的合成及免疫原性鉴定北大核心CSCD

采用高碘酸钠法,以BSA,OVA为载体蛋白合成斯皮诺素的免疫抗原和包被抗原,通过紫外扫描法鉴定,偶联率分别为17,13.7。采用间接ELISA和间接竞争ELISA测定小鼠血清,其最高效价达1∶32 000,灵敏度为211.6μg·L-1且交叉反应率低,表明小鼠经斯皮诺素-BSA免疫后可产生高效价、特异性好的抗斯皮诺素抗体。该实验首次成功制备了具有免疫原性的斯皮诺素人工抗原,为进一步制备斯皮诺素的单克隆抗体及建立斯皮诺素的免疫分析方法提供参考。     

斯皮诺素人工抗原的合成及免疫原性鉴定

采用高碘酸钠法,以BSA,OVA为载体蛋白合成斯皮诺素的免疫抗原和包被抗原,通过紫外扫描法鉴定,偶联率分别为17,13.7。采用间接ELISA和间接竞争ELISA测定小鼠血清,其最高效价达1∶32 000,灵敏度为211.6μg·L-1且交叉反应率低,表明小鼠经斯皮诺素-BSA免疫后可产生高效价、特异性好的抗斯皮诺素抗体。该实验首次成功制备了具有免疫原性的斯皮诺素人工抗原,为进一步制备斯皮诺素的单克隆抗体及建立斯皮诺素的免疫分析方法提供参考。     

马钱苷人工抗原的合成、鉴定及免疫原性的初步研究

目的首次合成并鉴定马钱苷(loganin)人工抗原,为进一步制备马钱苷单克隆抗体,建立相关免疫分析方法奠定基础。方法采用高碘酸钠氧化法合成马钱苷免疫原(loganin-BSA)和包被原(loganin-OVA);应用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法鉴定马钱苷人工抗原是否偶联成功;通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测免疫小鼠血清中抗马钱苷抗体效价及其特异性。结果经MALDI-TOF-MS检测,马钱苷与BSA偶联成功。竞争抑制曲线表明,血清中的抗体可与马钱苷产生特异性结合,血清抗体效价在1∶40 000。结论成功合成了马钱苷人工抗原,为马钱苷单克隆抗体的制备及其在中药质量评价和动物体内药动学方面的应用奠定了基础。     

芍药苷人工抗原的合成与鉴定

利用高碘酸钠法合成芍药苷免疫抗原PF-BSA和包被抗原PF-OVA,并通过紫外光谱检测芍药苷成功与BSA/OVA偶联。小鼠经PF-BSA免疫后,体内可产生抗芍药苷抗体,酶联免疫分析法分析证明其免疫小鼠所得抗体效价达 1：12 800,半数抑制浓度为0.791 mg·L^-1,且与黄芩苷等9种中药小分子交叉反应极低。芍药苷人工抗原的合成及抗体的获得为建立ELISA和研制免疫检测试剂盒奠定了基础。     

栀子苷单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备特异性的栀子苷(Geniposide,GEN)单克隆抗体。方法:采用高碘酸钠氧化法合成栀子苷免疫抗原,通过对BALB/c小鼠进行免疫;对血清进行检测阳性后,取上述免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14按10∶1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测。选择血清效价高且敏感性好的小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,筛选分泌栀子苷单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备栀子苷单克隆抗体,并通过正辛酸纯化的方法纯化腹水中抗体蛋白,采用SDS-PAGE法对抗体蛋白的纯化纯度进行检测。结果:获得了能分泌抗栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株。SDS-PAGE结果说明经过纯化腹水中大量的杂蛋白能够被除去,获得的栀子单克隆抗体纯度较高,纯化后腹水中抗体效价与纯化前比均为60 000∶1左右。结论:成功获得了能分泌栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株,特异性、灵敏度都比较高,为样品中的栀子苷快速微量检测及免疫亲和色谱柱的制备奠定了基础。     

钙调素免疫原的制备及检测

目的　研究钙调素免疫原的制备。方法　以碳化二亚胺法将钙调素—卵清蛋白偶联物作为免疫原 ,采用常规免疫方法免疫BALB/C小鼠 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测抗体效价。结果　用钙调素—卵清蛋白偶联物腹腔注射的BALB/C小鼠经 2次体内免疫后测血清中的抗体效价均为阳性。结论　将钙调素和卵清蛋白进行偶联来作为抗原是成功的。     

紫杉醇完全抗原的合成鉴定及免疫原性分析

目的 制备红豆杉属植物中抗癌成分紫杉醇(paclitaxel,TAX)的人工抗原及抗血清,为获取分泌抗紫杉醇抗体的单克隆细胞系及分离单链抗体基因、进而以之提高植物中紫杉醇的量,及建立快速检测TAX的酶联免疫吸附测定(ELISA)法提供技术基础.方法 将7-木糖基紫杉醇(7-xylotaxol,7-xyl-TAX)经NalO4氧化打开糖环,与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)反应偶联,制得半抗原-载体蛋白复合物后,用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定其中结合的半抗原数目;以此抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清.并通过ELISA法检测其抗体效价和特异性.结果 合成的人工抗原TAX-BSA中TAX与BSA的结合比约为4～5:1;免疫小鼠到特异针对TAX的抗血清,TAX抗体的效价为1:3 200.结论 成功地合成了TAX的人工抗原,且该抗原有较好的免疫原性.     

大黄酸兔源多克隆抗血清的制备与鉴定

目的合成大黄酸人工抗原,制备敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗血清。方法采用碳二亚胺法制备大黄酸人工抗原,将大黄酸分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白相偶联。用紫外扫描法鉴定大黄酸人工抗原是否偶联成功,免疫新西兰兔,制备多抗血清,通过间接竞争ELISA测定抗血清效价,通过间接竞争ELISA鉴定抗血清的敏感性和特异性,并分别用间接竞争ELISA和HPLC检测大黄中大黄酸的含量。结果 2只新西兰兔产生的多抗血清效价在1∶64 000以上,其中,2号兔多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度为0.09 ng/mL,且具有良好的特异性。兔抗血清测得大黄中大黄酸含量为(0.026±0.001)%,HPLC测得大黄中大黄酸含量为(0.027±0.000)%。结论本研究制备了敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗体血清,为建立大黄酸免疫亲和色谱分析技术和快速检测方法奠定了基础。     

桔梗皂苷D人工抗原的合成及鉴定

目的:合成桔梗皂苷D(PlatycodinD,PD)的人工完全抗原,为制备桔梗皂苷D的单克隆抗体及建立相应的免疫学分析方法奠定基础。方法:采用高碘酸钠(NaIO4)氧化法分别合成桔梗皂苷D免疫抗原(PD-BSA)和包被抗原(PD-OVA)。用薄层色谱法鉴定人工抗原是否偶联成功;用动物免疫法测定其抗原性;并融合后筛选阳性孔。结果:薄层色谱法显示PD与BSA/OVA偶联成功;用合成的PD-BSA免疫小鼠后可使小鼠体内产生抗PD抗体,效价在1∶8000以上;融合可得出阳性孔。结论:成功合成了PD人工免疫原和包被原,可用于下一步PD单克隆抗体的制备及建立相应免疫学分析方法。     

酸枣仁皂苷A人工抗原的制备及鉴定

采用高碘酸钠氧化法首次合成酸枣仁皂苷A(jujuboside A)人工抗原,利用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)鉴定酸枣仁皂苷A人工抗原偶联成功,通过酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫小鼠血清中抗酸枣仁皂苷A抗体效价及其特异性。竞争抑制曲线表明,血清中的抗体可与酸枣仁皂苷A产生特异性结合,血清抗体效价在1∶4 000。成功合成的酸枣仁皂苷A人工抗原,为酸枣仁皂苷A单克隆抗体的制备及研究酸枣仁皂苷A在机体内的药物代谢过程奠定了基础。     

羟基红花黄色素A人工抗原的制备

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)的偶联方法,获得具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。方法通过偶联物透析液的颜色变化、紫外图谱、红外扫描图谱及动物免疫试验来鉴定制备的人工抗原。结果HSYA-BSA人工抗原在紫外扫描中表现出HSYA和BSA的特征吸收峰;在红外扫描中HSYA-BSA具有HSYA特征官能团的吸收峰和氨基酸的特征吸收峰;间接ELISA检测结果显示产生抗HSYA的特异性抗体,血清效价可达1∶3 200;标准曲线方程计算得BSA和HSYA的结合率是1∶50。结论通过直接偶联法成功制备出具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。     

大黄酸人工抗原合成及免疫原性鉴定

大黄药理作用广泛,是临床常用中药材之一.大黄酸是其主要活性成分,大黄酸的含量是大黄质量控制的主要指标之一.目前对大黄酸的检测主要是通过仪器分析手段,如高效液相色谱法,但是仪器分析通常操作繁琐、耗时长、通量小且仪器设备昂贵.与之相比,酶联免疫检测法(ELISA)则具有灵敏度高、操作简单、设备仪器需求少、通量高等优点,是实现中药材快速检测的有效手段之一.该研究制备大黄酸(rhein)人工抗原及血清,为之后大黄酸单克隆抗体制备及建立酶联免疫吸附检测方法提供基础.通过碳二亚胺法活化大黄酸,分别与牛血清白蛋白(BSA)及鸡卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原及包被抗原;通过紫外分光光度法检测人工抗原的半抗原与载体蛋白偶联比,分别为4.0∶1(rhein-BSA)和2.6∶1 (rhein-OVA).用免疫原免疫Bal b/c雌性小鼠,制备抗血清,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗血清效价及特异性.结果表明血清效价均高于8 000,特异性强,免疫原性良好.     

梓醇人工抗原的合成、鉴定及免疫原性的初步研究

基于单克隆抗体的免疫分析方法具有高特异性、高灵敏性等特点,在中药的质量控制和动物体内微量成分的检测等方面均具有重要的意义,该方法建立的前提条件就是成功制备中药活性小分子化合物的人工抗原.该研究采用高碘酸钠氧化法,首次制备了梓醇的人工抗原,通过基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)和分子排阻色潽法鉴定梓醇与牛血清白蛋白(BSA)偶联成功,用间接ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗梓醇抗体效价在1∶8000以上,成功制备梓醇的人工抗原,为下一步单克隆抗体的制备和相关免疫方法的建立奠定基础.     

不同偶联率绿原酸全抗原的免疫原性研究

目的:研究不同偶联率人工抗原绿原酸-牛血清(CGA-BSA)的免疫原性,为确定绿原酸全抗原的致敏性研究提供技术和物质基础。方法:将不同数量的CGA与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联,制得不同偶联率的完全抗原后,用这些抗原免疫BALB/c小鼠和SD大鼠,制备抗血清,通过ELISA法检测其IgE抗体和组胺水平,并对不同偶联率的CGA-BSA进行被动皮肤过敏实验(PCA),测定其抗体效价。结果:CGA-BSA偶联率为20时所免疫的BALB/c小鼠产生的IgE和组胺抗体水平最高。PCA实验也证明偶联率为20的CGA-BSA致敏动物产生的IgE抗体滴度比其他偶联率的CGA-BSA致敏动物产生的IgE抗体滴度高,组胺含量也高于其他组。结论:CGA-BSA的偶联率为10~20时具有较好的免疫原性,可应用于绿原酸免疫原性的鉴定,其中以偶联率20的CGA-BSA免疫原性最好。     

连翘苷人工抗原的合成及免疫原性鉴定

基于高特异性,高灵敏度的小分子单克隆抗体的免疫分析方法的建立,对中药小分子化合物的的研究具有重要的意义,其中,小分子人工抗原的合成是中药小分子抗体制备的关键步骤。采用高碘酸钠氧化法分别合成连翘苷免疫抗原（FRn-BSA）和包被抗原（FRn-OVA）,通过紫外光谱和薄层色谱法检测到连翘苷成功与BSA/OVA偶联,小鼠经FRn-BSA免疫后,体内可产生抗连翘苷抗体,效价在1：8 000左右,线性范围为1~100 mg·L^-1。成功合成的连翘苷人工抗原,可为下一步的单克隆抗体制备以及相应免疫方法的建立奠定基础。