非小细胞肺癌患者外周血游离DNA中检测EGFR基因突变

目的检测非小细胞肺癌患者外周血游离DNA中表皮生长因子受体(EGFR)基因19和21外显子的突变情况,并与相应的肿瘤组织检测结果进行比较,探讨非小细胞肺癌患者应用外周血游离DNA检测EGFR突变的临床意义。方法应用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术检测32例非小细胞肺癌患者术后肿瘤组织和术前外周血游离DNA中EGFR基因19和21外显子的突变,所有扩增标本均经基因测序法验证。结果 32份外周血标本中,共检测到13份EGFR基因突变,突变率达40.6%,肿瘤组织中有16份EGFR基因突变,突变率达50.0%,外周血和肿瘤组织EGFR基因同时突变的有13份,两者突变一致性达到81.2%,两者间差异无统计学意义(P0.05)。结论外周血游离DNA代替肿瘤组织进行EGFR基因突变检测具有可行性,为无法取得肿瘤组织的非小细胞肺癌患者提供一种更快捷、简便的EGFR基因突变检测方法,其检测结果可为临床选择靶向药物治疗提供依据。     

非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体及K-Ras基因突变特征与临床病理特征的关系

目的分析非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)及K-Ras基因突变情况,分析突变与患者临床病理特征的相关性。方法选取本地区非小细胞肺癌手术标本90例,运用突变扩增阻滞系统(ARMS)-Taqman探针法检测EGFR及K-Ras基因外显子突变状态,并分析基因突变与临床病理特征的相关性。结果 90例非小细胞肺癌患者有39例检测到EGFR突变,包括18例19-del和12例L858R,另有9例存在L858R和T790 M双突变;33例K-Ras突变,主要为12密码子突变;3例患者检测到EGFR和K-Ras同时突变,为无吸烟史晚期肺腺癌患者;不同性别、吸烟史、肿瘤类型等亚组患者中EGFR突变率有差异,二元logistic回归分析结果显示EGFR与性别、年龄、肿瘤类型相关,未发现K-Ras与以上临床病理因素的相关性。结论 EGFR基因突变类型以及是否伴随K-Ras突变对于非小细胞肺癌患者临床用药具有重要的指导意义,K-Ras基因与临床病理特征的相关性尚需进一步研究。     

江西地区非小细胞肺癌EGFR基因突变分析

目的探讨江西地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变类型、突变率及其与临床特征的关系。方法收集2014年3月至2015年6月南昌大学第一附属医院非小细胞肺癌患者石蜡包埋组织78例,采用等位基因特异性扩增-聚合酶链反应(ARMS-PCR)方法,对非小细胞肺癌患者肿瘤组织EGFR基因18~21外显子突变进行检测,并分析其突变类型、突变发生率及其与临床特征之间的关系。结果在78例非小细胞肺癌患者中,共有27例发生EGFR基因突变,总突变率为34.6%。其中,第18、19、20、21号外显子突变率分别2.6%(2/78),12.8%(10/78),3.9%(3/78),14.1%(11/78)。一例既有21号外显子突变,又有20号外显子突变,其中,19号外显子的突变均为第746~750密码子的碱基缺失,21号外显子突变类型以L858R为主,且19号外显子的突变率与21号外显子的突变率无统计学差异(P0.05),女性EGFR基因的突变率显著高于男性,不吸烟者显著高于吸烟者,腺癌患者显著高于鳞癌患者(P0.05),而EGFR基因的突变率与非小细胞肺癌患者的年龄、临床分期无相关性(P0.05)。结论江西地区的非小细胞肺癌EGFR基因突变以19、21号外显子为主,常见于女性、不吸烟、腺癌的非小细胞肺癌患者。     

非小细胞肺癌中EGFR和K-ras基因突变检测分析与病理特征的关系

目的探讨不同分型非小细胞肺癌的EGFR与K-ras基因突变及其相关病理特征的关系。方法基因测序方法检测260例非小细胞肺肿瘤患者肿瘤组织中的EGFR(18,19,20,21外显子)和K-ras(12,13,61密码子)基因的突变。结果 260例样本中,EGFR基因突变检出率为48.8%(127/260),突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变。K-ras基因突变检出率为10%(26/260),其中12、13和61密码子均发现突变。受检的所有样本中没有发现EGFR与K-ras基因同时出现突变的情况。腺癌的EGFR突变检出率明显高于鳞状细胞癌等其他组织类型。在分化程度上,高分化与中分化癌基因突变检出率和中分化与低分化突变检出率比较差异显著(P<0.01)。EGFR突变与有无淋巴结转移无关(P>0.05)。K-ras基因突变与组织类型、患者性别、分化程度、有无淋巴结转移间无相关性。结论非小细胞肺癌EGFR基因突变检出率较高,K-ras基因突变检出率较低,且两种突变并不同时出现。EGFR基因突变与性别、肺癌组织类型、分化程度有关,存在多种突变。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR和KRAS基因突变的 分子病理检测分析

目的:探讨非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR和KRAS基因各亚型突变情况。方法:应用直接测序方法检测非小细胞肺癌石蜡组织中1 273例EGFR基因和1 062例KRAS基因突变情况。结果:非小细胞肺癌肿瘤组织中EGFR基因总突变率为36.68%(467/1 273),外显子18、19、20和21的突变率分别为1.02%(13/1 273)、18.93%(241/1 273)、2.59%(33/1 273)和15.95%(203/1 273);EGFR基因各外显子之间双重突变共17例(1.34%),其中18外显子与20外显子双重突变3例(0.24%),19外显子与20外显子双重突变7例(0.55%),19外显子与21外显子双重突变4例(0.31%)和20外显子与21外显子双重突变3例(0.24%);EGFR基因各外显子内双重突变共2例(2.18%),均为21外显子双重突变。KRAS基因总突变率为3.01%(32/1 062),外显子2的密码子5、12、13和25的突变率分别为0.09%(1/1 062)、2.64%(28/1 062)、0.18%(2/1 062)和0.09%(1/1 062),外显子3密码子61的突变率为0.09%(1/1 062)。结论:非小细胞肺癌患者中EGFR基因存在较高的突变率,尤其为19和21外显子突变,其基因突变亚型分类能指导EGFR-TKI的肿瘤靶向治疗,KRAS基因突变率虽低但不容忽视,其基因突变预示着EGFR-TKI原发耐药。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中驱动基因的分子病理检测分析

目的:探讨非小细胞肺癌患者肿瘤组织中驱动基因EGFR、KRAS、ALK、ROSI、c-Met和Her-2基因各亚型改变情况。方法:应用Taqman-ARMS方法检测273例非小细胞肺癌石蜡组织中EGFR基因、KRAS基因、ALK基因、ROSI基因、c-Met基因和Her-2基因改变情况。结果:非小细胞肺癌肿瘤组织中EGFR基因总突变率为36.26%(99/273),外显子18、19、20和21的突变率分别为0(0/273)、16.12%(44/273)、4.49%(15/273)和17.95%(49/273);EGFR基因各外显子之间双重突变共12例(4.40%);KRAS基因总突变率为4.76%(13/273);ALK融合基因总阳性率为9.16%(25/273);ROSI融合基因总阳性率为2.20%(6/273);c-Met基因总扩增率为3.66%(10/273);Her-2基因总突变率为0.73%(2/273);各驱动基因双突变共存型11例(4.03%),其中EGFR基因突变与ALK融合基因阳性共存型2例(0.73%),EGFR基因突变与KRAS基因突变共存型3例(1.10%),EGFR基因突变与c-Met基因扩增共存型6例(2.20%)。结论:非小细胞肺癌患者中EGFR基因19和21外显子突变和ALK融合基因均存在较高的突变率,基因突变亚型分类能指导精准医学的个体化靶向治疗,KRAS、ROSI、c-Met、Her-2基因改变以及驱动基因双突变共存型基因突变率虽低但不容忽视。     

EGFR外显子19、21突变等位基因特异性PCR检测方法的建立

目的 建立一种人表皮生成因子受体(EGFR)外显子19、21突变等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)检测方法.方法 根据EGFR外显子19、21野生型和突变型设计特异性引物,提取健康人和非小细胞肺癌患者血中有核细胞的基因组DNA作为模板,采用等位基因特异性聚合酶链式反应扩增EGFR外显子19、21突变基因.结果 特异性引物可以扩增EGFR外显子19缺失突变的2种类型和外显子21的错义突变.结论 等位基因特异性PCR法可以用于检测人EGFR外显子19、21突变.     

非小细胞肺癌EGFR基因突变与扩增的比较及其与血清CEA水平的关系

目的 比较分析非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与扩增的关系,并探讨其与血清癌胚抗原(CEA)水平有无相关性. 方法 对270例确诊非小细胞肺癌的肺组织标本(包括手术切除及经纤支镜活检取得)用实时荧光定量PCR法技术检测EGFR基因突变状态,用荧光原位杂交技术检测EGFR基因的扩增情况.治疗前抽取患者静脉血,用化学发光法检测血清CEA水平. 结果 270例NSCLC中EGFR基因突变率为31.11％,EGFR基因扩增率为20％,基因突变并扩增的占10.74％.基因突变组、基因扩增组、基因突变并扩增组和基因无突变无扩增组血清CEA平均水平分别为[3.03(1.68-6.22)] ng/mL、[3.19(1.8-17.17)]ng/mL、[3.39(1.85-20.87)] ng/mL和[2.54(1.5-4.62)] ng/mL.基因突变组与基因扩增组、基因突变组与基因无突变无扩增组血清CEA比较无显著性差异(P＞0.05).基因扩增组与基因无突变无扩增组、基因突变并扩增组与基因无突变无扩增组血清CEA比较有显著性差异(P＜0.05).EGFR基因突变、基因扩增及基因突变并扩增与血清CEA水平有明显相关性. 结论 在NSCLC中EGFR基因突变率大于扩增率,其机制有待进一步阐明.EGFR基因与血清CEA水平有明显相关性.血清CEA水平有可能成为指导非小细胞肺癌EGFR靶向治疗的指标.     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体突变与表皮生长因子受体和ki67表达相关性分析

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因外显子的突变情况并探讨其与EGFR和ki67表达之间的联系。方法用测序法检测80例NSCLC患者标本的基因突变情况,并用免疫组织化学法检测EGFR和ki67的表达。结果 80例NSCLC患者中有16例存在EGFR基因突变,其中5例为第19外显子缺失突变,11例为第21外显子替代突变。女性患者突变率高于男性患者;腺癌患者突变率高于非腺癌患者。EGFR和ki67的表达与EGFR基因突变无关。结论 EGFR基因突变率以女性和腺癌患者较高,且与EGFR和ki67表达无关。     

非小细胞肺癌EGFR基因少见突变分析

在晚期非小细胞肺癌(NSCLC)中,表皮生长因子受体(EGFR)经典突变类型患者的治疗已从EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)的使用中获益,而携带少见EGFR突变的非小细胞肺癌患者约占所有EGFR突变的10%,其临床意义还不清楚,特别是对EGFR-TKIs的反应。本文综述少见EGFR突变的发生率,并对EGFR-TKIs治疗结果进行总结。     

实时荧光定量PCR法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的总结分析

目的:采用实时荧光定量PCR法检测临床送检的非小细胞肺癌(NSCLC)标本中表皮生长因子受体(EGFR)基因的突变情况,分析其突变率、突变特征及其与临床病理间的相关性。方法:将101例石蜡包埋NSCLC标本行显微切割后抽提DNA,采用实时荧光定量PCR法检测EGFR基因酪氨酸激酶编码区第19和21号外显子的突变。结果:101例NSCLC标本中共检出EGFR基因第19号、第21号外显子突变21例(20.8%),突变率分别为61.9%(13/21)和38.1%(8/21),其又以19 del-E746-A750和21 L858R为主要突变类型,发生率分别为42.9%(9/21)和38.1%(8/21)。EGFR基因总突变率与年龄无关(P>0.05);但女性患者中EGFR基因突变率(27.3%,12/44)高于男性患者(15.8%,9/57;P     

406例肺癌小活检标本中表皮生长因子受体基因的突变分析

目的探讨肺癌小活检标本中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因的突变情况。方法采用蝎形探针扩增阻滞突变系统（Scorpions ARMS）检测406例肺癌小活检标本中EGFR基因第18、19、20和21外显子的突变情况。结果在406例肺癌小活检标本中,检测到190例存在EGFR突变（占46.8%）,其中80例为第19外显子框内多核苷酸缺失、88例为第21外显子L858R突变、4例为第21外显子L861Q突变、9例为第18外显子G719X突变、2例为第20外显子S768I突变、1例为第20外显子T790M突变;此外,发现6例存在双位点突变。肺腺癌EGFR突变率为55.5%（186/335）,鳞状细胞癌突变率为5.8%（3/52）,5例腺鳞癌中有1例检测到EGFR基因突变,其它类型肺癌均未检测到EGFR基因突变（0/14）。女性患者EGFR基因突变率（62.4%）明显高于男性患者（32.1%,P〈0.01）,非吸烟患者EGFR基因突变率（59.8%）明显高于吸烟患者（24.7%,P〈0.01）。结论 EGFR基因突变多见于女性、非吸烟和肺腺癌患者;Scorpions ARMS是检测活检小标本EGFR基因突变的可靠方法。     

新疆维吾尔族非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体及KRAS基因突变与临床病理特征的关系

目的探讨新疆维吾尔族非小细胞肺癌（NSCLC）患者组织中表皮生长因子受体（EGFR）及KRAS基因突变与临床病理特征的关系。方法应用探针扩增阻滞突变系统（ARMS）检测50例NSCLC组织中EGFR基因第18、19、20和21外显子及KRAS基因12、13密码子上7种热点体细胞的突变情况,分析EGFR及KRAS基因突变与维吾尔族NSCLC患者临床病理特征之间的相关性。结果50例标本中,EGFR总检出率为12．0％,其中4例为19外显子缺失突变,2例为21外显子L858R点突变;KRAS总检出率为10％,均位于12密码子Glyl2Ala突变;无1例发生EGFR与KRAS同时突变。腺癌、鳞癌、大细胞癌EGFR及KRAS基因突变检出率分别为27．8％、3．5％、0％和22．2％、3．5％、0％。腺癌患者EGFR基因突变率（27．8％）明显高于非腺癌者（3．1％）,差异有统计学意义。腺癌与非腺癌患者KRAS基因突变比较,差异有统计学意义。维吾尔族患者EGFR及KRAS基因突变与年龄、性别、吸烟状况、TNM分期及ECOG评分均无关。结论与汉族人群相比,新疆维吾尔族NSCLC患者EGFR突变率较低,KRAS突变率较高,类似于欧美高加索人群的突变特点。     

非小细胞肺癌组织及胸水中EGFR基因TKD结构域突变的临床病理研究

目的检测非小细胞肺癌（NSCLC）EGFR基因酪氨酸蛋白激酶结构域（TKD）18—21外显子突变情况;比较常见突变（19号外显子的缺失突变及21号外显子错义突变-L858R）和非常见突变患者的临床病理改变。方法从91例NSCLC组织及胸水标本中提取基因组DNA;巢式PCR方法扩增EGFR基因18～21外显子;应用PCR-LIS-SSCP及直接测序方法检测EGFR基因18～21外显子突变情况;对存在常见及非常见突变患者的组织病理、酪氨酸蛋白激酶小分子抑制剂（TKIs）的治疗反应和预后等的临床病理改变进行分析。结果91例NSCLC患者中27例存在EGFR基因TKD突变,其中常见突变19例,突变率为20．9％（19／91）;非常见突变8例（其中4例为20号外显子的短片段插入突变）,突变率为8．8％（8／91）。两组患者组织学类型均为腺癌,且对TKIs治疗均有较好反应。2例非常见突变患者化疗时出现肺间质纤维化（ILD）。结论NSCLC患者EGFR基因TKD存在多种非常见突变;具有非常见突变的患者可能存在独特的临床病理改变。     

宁夏某医院225例非小细胞肺癌患者EGFR基因突变检测结果分析

目的分析宁夏某医院非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测结果。方法选择2014年1月至2017年12月在宁夏医科大学总医院住院的NSCLC患者225例进行回顾性分析,用扩增阻滞突变系统-聚合酶链反应(ARMS-PCR)检测EGFR基因突变情况。结果 EGFR基因总突变率50.22%(113/225),最常见突变位点为19外显子19-del及21外显子L858R,突变率分别为21.33%及17.78%,20外显子T790M耐药突变率及20-Ins插入突变(非敏感突变)的突变率分别为3.56%及1.33%;EGFR各外显子双突变共10例;EGFR基因突变率在性别、年龄、民族、季节、标本类型之间差异无统计学意义(P>0.05),在年份、病理类型之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ARMS-PCR可有效应用于临床病理石蜡标本基因突变检测,EGFR基因在19和21外显子存在较高的突变率,其突变亚型能指导小分子表皮生长因子酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKI)的肿瘤靶向治疗。     

150例青海地区非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体突变状态分析

目的探讨青海地区非小细胞肺癌(NSCLC)治疗过程中表皮生长因子受体(EGFR)突变状态。方法利用实时荧光Taqman探针法,采用PCR体外扩增,回顾性分析150例晚期NSCLC患者的临床特征、EGFR突变状态。结果 150例NSCLC患者标本检测发现EGFR(exon18)突变2例,突变率1.3%;EGFR(exon19)突变18例,突变率12.0%;EGFR(exon20)未检测出;EGFR(exon21)突变27例,突变率18.0%。结论青海地区NSCLC患者EGFR基因外显子19和21的突变(体细胞突变)率较高,可接受EGFR-TKIs治疗。     

吸烟对吉非替尼联合放疗治疗化疗失败的Ⅲ、Ⅳ期非小细胞肺癌患者临床疗效的影响

目的应用吉非替尼联合放疗治疗既往含铂类化疗方案失败的Ⅲ、Ⅳ期非小细胞肺癌（NSCLC）患者,观察吸烟与不吸烟患者疗效、生存以及EGFR突变率的差异。方法 40例晚期NSCLC患者,吉非替尼250 mg/d,自放疗第1天开始口服直至放疗结束后60 d,联合胸腔放疗（4个剂量组）。收集患者组织27例,血浆40份,应用ARMS方法进行EGFR突变检测。结果不吸烟患者中,有效率35%,疾病控制率90%。吸烟患者中,有效率25%,疾病控制率75%。不吸烟与吸烟患者中位生存时间分别为14.6个月（95%CI：9.2~20.0个月）和10.7个月（95%CI：9.4~12.0个月）（P=0.8）;中位无疾病进展时间分别为6.9个月（95%CI：4.0~9.7个月）和4.5个月（95%CI：3.4~5.6个月）（P=0.7）,1年生存率两者分别为70%和45%。在27例可分析的组织标本以及40份血浆中,共检测出9例EGFR突变,包括6例19号外显子的缺失突变（Del 19突变）,2例21号外显子的L868R点突变以及1例T790M点突变。其中,与治疗有效相关的8例突变中,5例（25%,5/20）为不吸烟患者,3例（15%,3/20）为吸烟患者。结论在以吉非替尼为组成部分的综合治疗中,非吸烟患者治疗效果优于吸烟患者,EGFR突变发生率在非吸烟组明显高于吸烟组。     

Rapid polymerase chain reaction-based detection of epidermal growth factor receptor gene mutations in lung adenocarcinomas

Somatic mutations in the tyrosine kinase domain of the epidermal growth factor receptor (EGFR) gene are present in lung adenocarcinomas that respond to the EGFR inhibitors gefitinib and erlotinib. Two types of mutations account for approximately 90% of mutated cases: short in-frame deletions in exon 19 and a specific point mutation in exon 21 at codon 858 (L858R). Screening for these mutations has been based mainly on direct sequencing. We report here the development and validation of polymerase chain reaction-based assays for these two predominant types of EGFR mutations. The assay for exon 19 mutations is based on length analysis of fluorescently labeled polymerase chain reaction products, and the assay for the exon 21 L858R mutation is based on a new Sau96I restriction site created by this mutation. Using serial dilutions of DNAs from lung cancer cell lines harboring either exon 19 or 21 mutations, we detected these mutations in the presence of up to approximately 90% normal DNA. In a test set of 39 lung cancer samples, direct sequencing detected mutations in 25 cases whereas our assays were positive in 29 cases, including 4 cases in which mutations were not apparent by sequencing. These assays offer higher sensitivity and ease of scoring and eliminate the need for sequencing, providing a robust and accessible approach to the rapid identification of most lung cancer patients likely to respond to EGFR inhibitors.     

表皮生长因子受体突变与肿瘤标记物在晚期非小细胞肺癌靶向治疗中意义及相关性分析

目的 非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌总数的80％.本研究拟观察表皮生长因子受体(EGFR)基因突变和肿瘤标记物癌抗原125(CA125)与角蛋白19片段(CYFRA21-1)在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗晚期NSCLC患者中的意义及其之间的相关性,探讨晚期NSCLC靶向治疗疗效评价指标及预后相关因子.方法 自2008年1月至2011年8月间,我院肿瘤内科收治的晚期NSCLC患者74例,依据方案分为化疗组和靶向治疗组.化疗组:以顺铂为基础的联合化疗(吉西他滨1000mg/m2第1,8天;多西他赛75mg/m2,第1天;长春瑞滨30mg/m2第1,8天+顺铂80mg/m2第1天),21天为1个周期;靶向治疗组:吉非替尼250mg/d,或者厄洛替尼150mg/d,餐后2小时口服.比较化疗组与靶向治疗组治疗前后CA125、CYFRA21-1变化.靶向治疗组依据是否接受基因检测分为突变组和未检测组,分别记录靶向治疗组中EGFR突变患者与未检测患者的临床疗效,同时统计两组接受靶向治疗后肿瘤标记物CA125、CYFRA21-1降低率,以及靶向治疗患者EGFR突变与临床疗效关系及与标记物的相关性.结果 靶向治疗后肿瘤标记物CA125与CYFRA21-1分别为(33.96±7.03)kU/L和(4.02±1.76)μg/L,与治疗前比较均明显降低(P＜0.05);化疗组治疗后肿瘤标记物CA125与CYFRA21-1分别为(36.24±6.03)kU/L和(3.80±1.35)μg/L,与治疗前比较也均明显降低(P＜0.05).EGFR突变患者疾病控制率为84.2％(16/19),明显高于EGFR突变未检测患者(P＜0.05);在EGFR突变患者经靶向治疗是肿瘤标记物CA125和CYFRA21-1降低率分别为89.5％(17/19)和47.4％(9/19),均明显高于EGFR突变未检测组,差异有统计学意义(P ＜0.05).结论 基因突变的晚期NSCLC患者EGFR-TKI靶向治疗临床疗效好;在EGFR-TKI靶向治疗过程中有一定比例的患者肿瘤标记物CA125和CYFRA21-1均有降低,且EGFR基因突变的患者接受靶向治疗后CA125、CYFRA21-1降低人数比率更高,CA125、CYFRA21-1变化可能与EGFR基因突变有关;CA125和CYFRA21-1可以作为潜在判定靶向治疗疗效的血清学指标,值得临床进一步研究.