阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注后GRP78和GADD153表达的影响

目的观察阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注损伤后内质网分子伴侣GRP78(endoplasmic reticulummolecular chaperon)和GADD153(growth arrest and DNA damage-inducible gene 153)表达变化的影响,探讨阿托伐他汀在心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制。方法将54只SD大鼠随机分为阿托伐他汀干预组24只、模型对照组24只和假手术组6只,制作大鼠心肌再灌注损伤模型。阿托伐他汀干预组和模型对照组再灌注2 h6、h、24 h、48 h分别分为4个亚组,每个亚组动物6只。通过TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学检测GRP78和GADD153表达变化。结果假手术组大鼠偶可见凋亡细胞,对照组和干预组大鼠缺血再灌注2 h缺血周围区可见少量凋亡细胞,再灌注6 h凋亡细胞有所增多,再灌注24 h凋亡细胞数量达高峰,再灌注48 h凋亡细胞有所减少(P<0.05或0.01)。相同各时间点比较,干预组大鼠心肌细胞凋亡显著少于对照组(P<0.05或0.01)。假手术组大鼠心尖部相应区域心肌细胞未见明显GRP78及GADD153阳性表达。对照组和干预组大鼠再灌注2 h后心尖部GRP78表达开始增加,6 h达高峰,24 h时表达水平明显下降(P<0.01)。在相应时间点,干预组的GRP78蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.01)。对照组和干预组大鼠缺血周围区GADD153从再灌注6 h开始在神经细胞内明显表达,并逐渐增强,于再灌注24~48 h达高峰(P<0.01)。在相应时间点,干预组的GADD153蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.01)。结论干预心肌缺血再灌注后心肌细胞内质网伴侣GRP78和GADD153的表达可能是阿托伐他汀抑制心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制之一。     

高脂饮食喂养大鼠脂肪组织GRP78mRNA的表达及意义

目的 通过观察高脂喂养的胰岛素抵抗大鼠内脏脂肪组织中GRP78mRNA的表达,探讨其在胰岛素抵抗发病机制中的意义.方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为正常饮食组（NC组）和高脂饮食组（HF组）,每组15只.喂养10周后,应用高胰岛素-正常血糖钳夹实验技术评估胰岛素抵抗模型的建立.采用实时荧光定量PCR（Real time PCR）法检测脂肪组织GRP78mRNA的表达.同时检测血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、测定血糖（BG）、胰岛素（INS）,测定各组大鼠内脏脂肪的重量与体重的比值.结果 （1）喂养10周后HF组的葡萄搪输注率（GIR）明显低于NC组（P〈0.01）,HF组胰岛素明显高于NC组（P〈0.05）;（2）HF组大鼠内脏脂肪组织中GRP78mRNA的表达明显增高,与NC组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;（3）10周末,HF组大鼠甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、及内脏脂肪相对含量均明显升高（P〈0.01）.结论 高脂喂养10周大鼠胰岛素抵抗模型建立成功,高脂饮食可诱导内脏脂肪组织GRP78mRNA表达增强.     

尼莫地平对惊厥持续状态幼年大鼠海马GRP78、CHOP表达及细胞凋亡的影响

目的观察尼莫地平对惊厥持续状态（statusconvulsion,SC）幼年大鼠海马葡萄糖调节蛋白78／免疫球蛋白重链结合蛋白Bip（GRP78／Bip）、前凋亡因子（CHOP／GADD153）表达及神经元凋亡的影响。方法雄性幼年SD大鼠117只,随机分为正常对照组（NC组）、惊厥持续状态组（SC组）、尼莫地平预处理组（NM组）三大组;分别予生理盐水、氯化锂-匹罗卡品、尼莫地平和氯化锂-匹罗卡品进行处理,各组又均随机分为3个亚组,分别于4、24、48h处死。采用氯化锂-匹罗卡品法制作SC模型;RT—PCR技术检测海马GRP78／Bip和CHOP／GADD153mRNA表达的动态变化。原位末端标记（TUNEL）检测海马CA1区中神经细胞的凋亡。结果SC组各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞表达均明显高于NC组（均P〈005或001oNM组各时间点TUNEL阳性细胞较SC组低,但高于NC组（P〈0．05或0．01）。与NC组相比,SC组各时间点海马GRP78／BipmRNA和CHoP／GADD153mRNA表达均升高。NM组GRP78／BipmRNA、CHOP／GADD153mRNA表达情况与SC组表达规律类似,但表达水平有差别。结论NM预处理可以影响CHOP／GADD153和GRP78／Bip的表达,缓解内质网应激,减轻惊厥后海马神经元细胞凋亡程度。     

谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞JNK,pJNK,CHOP,GRP78表达水平的影响

[目的]探讨谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞的保护作用.[方法]取A549细胞进行培养,分为5个组,其中空白对照组培养液中只有A549细胞,衣霉素组培养液中加入A549细胞和衣霉素1mg/L,GLN4组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和4mmol/L谷氨酰胺,GLN8组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和8mmol/L谷氨酰胺,GLN12组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和12mmol/L谷氨酰胺.利用Western blot方法检测各组细胞培养12h后的JNK,pJNK,CHOP及GRP78表达水平.[结果]与空白对照组比较,衣霉素组pJNK,CHOP及GRP78表达水平均明显升高(P<0.001),而JNK表达水平未见明显改变(P>0.05),提示衣霉素诱导A549细胞产生了内质网应激.与衣霉素组比较,GLN4,GLN8及GLN12组pJNK,CHOP,GRP78表达水平均明显降低(P<0.05).[结论]谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞具有保护作用.     

内质网分子伴侣GRP78在人肺癌组织中的高表达及其临床意义

ＧＲＰ78 ,即糖调节蛋白 78,也叫免疫球蛋白重链结合蛋白 (ＢｉＰ) ,广泛存在于内质网内 ,在低糖、缺氧等应激条件下合成量明显提高[1] ,并能协助蛋白质的折叠、装配和运输 ,还与许多疾病有关 ,因此被称为内质网分子伴侣[2 ] 。但目前关于ＧＲＰ78的研究主要集中在动物和标准细胞株的体外实验 ,特别是它在人类肺癌中的表达 ,临床研究很少。本研究通过探讨ＧＲＰ78在 5 4例肺癌患者中的表达来说明其在人类肺癌中的作用。一、对象与方法1 材料 :收集 2 0 0 0年 1月至 2 0 0 0年 12月在大连医科大学第一、第二临床学院及中国医科大学第一、第二…     

糖尿病脑缺血患者GRP78表达与凋亡关系研究

目的 观察糖尿病患者脑缺血后内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78( glucose-regulated protein78,GRP78)的表达,探讨其在糖尿病患者脑缺血损伤中的作用.方法 选取因脑梗死而死亡的尸检脑标本14例,按其是否合并糖尿病分为糖尿病合并脑梗死(DM+CI)组和单纯脑梗死(CI)组.选取因其它疾病死亡的...     

利拉鲁肽降低高脂喂养大鼠胰腺GRP78的表达

目的:通过观察利拉鲁肽对高脂喂养大鼠胰腺GRP78表达的影响,探讨利拉鲁肽对胰腺内质网应激的作用.方法:雄性Wistar大鼠24只随机分为对照组、高脂组、干预组1(低剂量利拉鲁肽100μg/kg/d皮下注射2周)、干预组2(高剂量利拉鲁肽200μg/kg/d皮下注射2周),每组6只.分别检测各组大鼠的空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、血清游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG),并计算HOMA-β.采用Western blottkg法和Realtime-PCR技术检测胰腺GRP78蛋白和mRNA的表达.结果:与对照组相比,高脂组大鼠FBG、FINS、FFA、TC、TG以及胰腺GRP78蛋白和mRNA的表达明显升高,HOMA-β明显降低(P＜0.01);利拉鲁肽可呈剂量依赖性地改善高脂喂养大鼠血脂代谢紊乱并降低胰腺GRP78蛋白和mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.05).结论:利拉鲁肽可能通过降低胰腺GRP78蛋白和mRNA表达,改善胰腺的内质网应激,从而保护胰岛β细胞.     

缺氧预处理对颅脑外伤大鼠海马GADD34表达及神经元细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧预处理对颅脑外伤大鼠海马生长停滞与DNA损害可诱导基因34(GADD34)表达及神经元细胞凋亡的影响.方法 208只SD雄性大鼠,随机分为假手术(Con,n=8)组、缺氧预处理(HPC,n=8)组、颅脑外伤(TBI,n=96)组、缺氧预处理颅脑外伤(HPCT,n=96)组;TBI和HPCT组再根据不同处死时间分为1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d八个亚组.大鼠颅脑外伤模型采用改良的自由落体装置制作,预先将大鼠在低压氧仓(-50.47 kPa)内处理3 h/d,连续3 d制作缺氧预处理模型.采用改良Sugrwara法对大鼠伤后行为学评估;RT-PCR和Western blot法检测海马组织中GADD34的表达变化,TUNEL染色法检测凋亡神经元细胞.结果 海马中GADD34 mRNA和蛋白伤后1 h即有表达,3~12 h呈上升趋势,伤后24 h达高峰,3~14 d呈下降趋势,TBI与Con组,HPCT与HPC组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);伤后24 h各指标进行比较,Con和HPC组比较,差异无统计学意义,其中HPCT组中伤后行为学评估得分及GADD34的表达较TBI组显著增高,细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 缺氧预处理可降低颅脑外伤大鼠海马行为学损伤,其机制可能是通过上调海马GADD34的表达,降低海马神经元细胞凋亡,从而发挥脑保护作用.     

GRP78和CHOP蛋白表达增加与脓毒性休克大鼠肺血管通透性改变的关系

目的研究脓毒性休克大鼠内质网应激模型中葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)蛋白表达的变化及其与血管通透性改变的关系。方法 42只成年SD大鼠,雌雄各半,体质量200～220 g,随机分为3组:①假手术组;②盲肠造瘘组,按照术后时间长短盲肠造瘘组又分为术后1、2、4、6、8 h等5个亚组;③盲肠造瘘+牛磺酸组(n=6)。用异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白注入肺组织,在术后1、2、4、6、8 h时分别取各组相应大鼠肺脏,牛磺酸干预组于术后6 h取出,生理盐水进行肺灌洗,观察其荧光物质渗透率的变化测量肺毛细血管通透性;Western blot方法测量肺血管内皮细胞GRP78和CHOP蛋白的表达并对各组进行比较。结果①大鼠盲肠造瘘术后1、2、4、6、8 h后GRP78和CHOP蛋白表达均呈递增趋势[(P(GRP78)<0.05;P(CHOP)<0.05],肺血管荧光物质渗透率也随着时间的延长呈直线递增的趋势(P=0.006<0.05),盲肠造瘘组各组GRP78和CHOP蛋白的表达与肺血管荧光物质渗透率的改变呈正相关(R2=0.785,P<0.05;R2=0.881,P<0.05);②牛磺酸处理后,6 h点肺血管荧光物质渗透率显著低于单纯盲肠造瘘术后(P=0.007<0.05),GRP78和CHOP蛋白的表达也较盲肠造瘘组低(P=0.004<0.05)。结论脓毒性休克内质网应激参与了血管通透性增高的发生,GRP78和CHOP蛋白为重要的参与分子。     

糖脂清对糖尿病大鼠海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12表达的影响

目的 通过观察糖脂清对糖尿病大鼠海马组织的内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的影响,探讨其在改善糖尿病大鼠认知功能的作用机制。方法 采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射复制2型糖尿病大鼠模型,并给予糖脂清高、中、低剂量组干预8周后,采用ELISA法检测血清空腹葡萄糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）,计算稳态模型的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛素敏感指数（ISI）;qPCR和Western blot法检测海马组织内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达水平。结果 糖脂清各剂量组均能够显著降低FPG及HOMA-IR（ P <0.01）,除低剂量组外,糖脂清均可显著提高ISI（ P <0.01）,3组FINS水平无显著性差异（ P >0.05）。与模型组比较,糖脂清低、中、高3个剂量组GRP78 mRNA和蛋白相对表达均显著增加,CHOP、Caspase-12 mRNA表达均减少（ P <0.01）,中、高剂量组CHOP、Caspase-12蛋白表达显著减少（ P <0.01）。结论 糖脂清能够控制血糖,改善胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性,同时能够调节海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达。      

丁苯酞氯化钠注射液预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠GRP78及caspase-12表达的影响

目的:探讨丁苯酞氯化钠注射液预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及caspase-12表达的影响.方法:健康成年雄性SD大鼠36只,SPF级,体质量260～280 g,月龄2～3月,采用随机数字表法,将其随机分为3组:假手术组(S组)、局灶性脑缺血再灌注组(I/R组)及丁苯酞氯化钠注射液预处理组(NBP组).I/R组和NBP组大鼠采用改良线栓法阻断右侧大脑中动脉2h,再灌注24 h,制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型;S组仅分离血管.NBP组于缺血前1h经尾静脉注射NBP注射液2.5 mg/kg;I/R组经尾静脉注射等容量生理盐水.各组大鼠于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分,随后断头取脑组织,采用TUNEL法计数凋亡神经细胞,计算凋亡指数;免疫组化法检测缺血侧皮质GRP78及caspase-12表达.结果:与S组比较,I/R组和NBP组神经功能缺陷评分升高的大鼠例数增多(P＜0.01),神经细胞凋亡指数升高,GRP78及caspase-12表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,NBP组神经功能缺陷评分升高的大鼠例数减少,神经细胞凋亡指数降低,GRP78表达上调,caspase-12表达下调(P＜0.05).结论:丁苯酞氯化钠注射液预处理可通过上调GRP78表达和下调caspase-12表达,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

GRP78及CHOP在大鼠心肌缺血后处理中的表达变化

目的：观察内质网应激标志蛋白GRP78及其下游调控分子CHOP在大鼠心肌缺血后处理过程中的表达变化,探讨其可能的作用机制.方法：选取SD大鼠30只,随机分为假手术组、缺血-再灌注组和缺血后处理组,每组各10只.观察各组大鼠心肌梗死面积并测定各组大鼠血清中乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶的含量;采用western blot检测心肌组织中GRP78、CHOP的表达变化.结果：与假手术组比较,缺血-再灌注组大鼠心肌梗死面积、血清中乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶的含量均显著增高,而心肌组织中总Akt及p-Akt的表达则明显减少;与缺血-再灌注组比较,缺血后处理组大鼠心肌梗死面积、血清中乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶的含量均有所降低,而心肌组织中GRP78及CHOP的表达显著高于缺血-再灌注组,差异具有显著性（P＜0.05）.结论：GRP78及CHOP的表达变化可能在大鼠心肌缺血后处理保护机制中发挥重要的作用.     

GRP78蛋白在胃癌中的表达及作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在胃癌中的表达及作用。方法收集不同临床分期和分化程度的胃癌标本48例,癌旁正常胃黏膜组织28例。运用免疫组织化学技术检测胃癌及其转移癌组织中GRP78蛋白的表达;采用MTT及Transwell观察GRP78蛋白对SGC-7901胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果免疫组织化学结合临床病理分析结果显示:GRP78蛋白位于胞质,且在胃癌组织中GRP78蛋白较正常胃黏膜组织明显增加,其阳性表达率与胃癌的直径、分化、淋巴结转移、分期、复发有关(P＜0.05)。MTT及Transwell结果显示:干扰GRP78蛋白表达可抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖和迁移能力。结论GRP78蛋白在胃癌组织中高表达,其表达水平与胃癌肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期及预后有关。     

子痫前期内质网应激相关蛋白CHOP/GADDl53的表达及其意义

目的:研究内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其意义.方法:选择2009年6月～2010年6月在南京医科大学第一附属医院产科住院分娩的子痫前期患者30例(子痫前期组),以同期正常孕妇35例为对照组.采用RT-PCR技术、蛋向印迹(western-blot)法和免疫组化检测两组孕妇胎...     

胆囊良恶性病变组织中GRP78和GRP94蛋白表达及临床病理意义

目的 研究胆囊腺癌、癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和94(GRP94)蛋白表达水平及其临床病理意义.方法 应用EnVisionTM免疫组化法检测108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、15例腺瘤性息肉和35例慢性胆囊炎组织中GRP78和GRP94蛋白的表达;分析两者表达与胆囊腺癌临床病理特征的相关性及患者生存期的关系.结果 胆囊腺癌中GRP78和GRP94蛋白表达明显高于癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎(P ＜0.01);GRP78和/或GRP94蛋白阳性表达的良性病变胆囊上皮呈不同程度非典型增生.高分化腺癌、淋巴结未转移及未侵犯周围组织器官病例GRP78和GRP94蛋白表达明显低于低分化腺癌、淋巴结转移及侵犯周围组织器官病例(P ＜0.05或P＜0.01).Kaplan-Meier单因素生存分析显示GRP78(P=0.009)或GRP94(P=0.022)蛋白阳性表达与生存期减少密切相关,Cox回归多因素因素分析显示GRP78(P =0.014)或GRP94(P =0.020)蛋白阳性表达是胆囊腺癌预后不良的独立评估指标.结论 GRP78和GRP94蛋白表达水平可能是反映胆囊腺癌发生发展、临床生物学行为及预后的重要标记物,检测胆囊腺癌中GRP78和GRP94蛋白表达水平可能对指导临床辅助治疗有重要临床价值.此外,检测胆囊良性病变组织中GRP78和GRP94蛋白表达水平对早期发现胆囊腺癌可能有较重要的临床意义.     

GRP78、GRP94蛋白和mRNA在人胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨GRP78及GRP94蛋白和mRNA在人胃癌组织中的表达及临床意义。方法收集胃癌手术标本183例,制成组织芯片,用免疫组化法检测GRP78和GRP94的蛋白表达;取30例胃癌新鲜组织用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测GRP78、GRP94 mRNA相对表达。结果免疫组化法检测结果显示:GRP78、GRP94蛋白的阳性表达率分别为80.1%和73.8%,与癌旁正常胃黏膜比较差异有统计学意义(P<0.05);与肿瘤的大小、浸润、转移、分期有关(P<0.05);与性别、年龄和组织分化无关。半定量RT-PCR结果显示癌组织和癌旁组织中的GRP78、GRP94mRNA均有表达,胃癌组织的表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。结论 GRP78、GRP94蛋白在人胃癌中呈高表达并与胃癌的转移和侵袭有关,可作为判断胃癌恶性程度的有用指标。GRP78、GRP94 mRNA的高表达可能与胃癌组织中的转录调控相关。     

金纳多对大鼠急性脊髓损伤内质网应激蛋白GADD153/CHOP表达的影响

目的 探讨金纳多(Ginaton)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后脊髓组织内质网应激相关蛋白GADD 153/CHOP表达的影响.方法 选取健康SD大鼠64只,随机分为治疗组和对照组各32只.所有大鼠均以改良Allen's法制备脊髓损伤模型,治疗组在模型制备的基础上给予金纳多注射治疗,对照组给予同等剂量的生理盐水.分别于致伤后3h、1d、3d、7d时各取8只,以改良Tarlov评分法评价其神经功能;评分后处死,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色,观察形态学改变和CHOP表达的特点;并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况.其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A (Modc.med 6.0)软件,结果分别用累积光密度(IOD)及细胞凋亡指数(AI)来表示.结果 所有实验大鼠脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死.治疗组Tarlov评分除3h时间点外,其他各时间点Tarlov评分明显高于对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组与对照组不同时间点CHOP表达、细胞凋亡,除3h时间点外,其他各个时间点治疗组CHOP表达及细胞凋亡均明显低于对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 金纳多对急性脊髓损伤有保护作用,能改善损伤脊髓的神经功能,这可能与其能够抑制CHOP表达及脊髓细胞凋亡有关.     

肾气丸对Zucker糖尿病肥胖大鼠肾损伤、GRP78及自噬相关因子的影响

目的 研究肾气丸对Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠肾脏损伤的影响及其可能机制。方法 20只雄性8周龄ZDF大鼠给予5C08高脂饲料诱导4周后,随意分为模型组与肾气丸组,7只同周龄雄性Zucker瘦型大鼠为对照组。肾气丸组大鼠每日灌服肾气丸水煎液(8.12 g/kg),模型组和对照组大鼠每日灌服等量生理盐水,连续给药4周。观察大鼠一般情况并检测空腹血糖(FBG)与24 h尿微量白蛋白(24 h U-mAlb);观察肾组织病理变化;实时荧光PCR和蛋白质印迹法分别检测肾组织GRP78、Beclin-1和LC3的基因与蛋白表达。结果 相比于模型组,肾气丸组大鼠表现出较好的一般状态,体质量增长率升高(P<0.05);FBG和24 h U-mAlb有所降低(P<0.05)。可见模型组大鼠肾小球毛细血管扩张,基底膜出现不规则增厚,系膜区增宽及节段性硬化,肾小管萎缩,肾间质纤维组织增生,足细胞足突融合,线粒体和内质网溶解及自噬小体数量减少。肾气丸组大鼠肾脏病理改变减轻。与模型组相比,肾气丸组大鼠肾组织GRP78基因和蛋白表达水平降低(P<0.05),Beclin-1蛋白表达水平...     

人GRP78基因真核表达载体的构建及鉴定

目的利用PCR技术克隆人GRP78基因编码基因（约2000bp）。方法将PCR产物连接到pcDNA3.1（＋）载体上,酶切鉴定后测序分析。结果序列分析表明,扩增片段与GenBank里登陆的序列同源性为100%。并以pcDNA3.1（＋）表达载体为框架结构,尝试构建真核表达载体。结论测序分析结果表明序列同源性为100%。