穴位埋药对脑缺血再灌注大鼠海马组织NF-кB表达的影响

目的:研究穴位埋药对脑缺血再灌注大鼠海马组织NF-кB表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组(24h组、72h组、120h组)、穴位埋药组(24h组、72h组、120h组).采用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌模型,以胶原川共芎嗪制备的缓释剂(药线),在大椎、双侧内关穴位埋药.运用免疫组化检测法观察各组大鼠海马神经细胞NF-кB-p65核转录因子蛋白的表达与含量.结果:各模型组大鼠缺血侧海马CA1区NF-кB-p65蛋白表达显著高于正常组和假手术组,且随再灌注时间而发生变化,72h表达达高峰.NF-кB移位于核明显;模型各组大鼠缺血侧海马组织NF-кB-p65蛋白表达比同时相穴位埋药各组含量高,有显著性差异.结论:穴位埋药能下调局灶性脑缺血再灌注海马组织NF-кB蛋白水平,阻滞其转位于核,发挥神经保护作用.     

栀子总环烯醚萜苷对脑出血大鼠血肿周围NF-кB表达的影响

目的:研究栀子总环烯醚萜苷对大鼠脑出血后核转录因子кB(NF-кB)表达影响.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、脑出血模型组、尼膜同组、栀子总环烯醚萜苷(20、10mg、5mg/kg)治疗组,采用自体血注入诱发大鼠脑出血模型,每组分别在术后12、24、48和96h 4个时间点取脑组织标本,免疫组化检测NF-кB蛋白表达,同时测量脑组织含水量.结果:20～10 mg/kg栀子环烯醚萜苷治疗组脑出血后NF-кB P65表达水平及脑含水量明显低于脑出血组.结论:栀子环烯醚萜苷可以抑制脑出血后NF-кB活化,减少炎症因子释放,从而减轻脑水肿.     

灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎小鼠胃黏膜组织NF-кB和Ⅰк Bα表达的影响

目的 探讨灭幽汤对幽门螺杆菌(H.pylori)感染小鼠胃黏膜组织核转录因子-к B(NF-к B)和核转录因子-кB抑制蛋白(Ⅰк Bα)表达的影响及其作用机制.方法 采用H.pylori菌液灌胃法造模,将造模成功的小鼠按体重分为模型组,灭幽汤组、三九胃泰组、丽珠胃三联组,除模型组每日予生理盐水外,其余组分别予灭幽汤、三九胃泰、丽珠胃三联给药.采用免疫组化法观察胃黏膜组织NF-кB和ⅠкBα蛋白的表达情况.HE染色观察小鼠胃黏膜的病理组织改变.结果 正常对照组胃黏膜细胞胞浆有少量NF-кB蛋白表达,胞核内无表达,而模型组NF-кB主要位于细胞核内.与模型组比较,灭幽汤组明显抑制胃组织细胞内NF-кB的核移位,灭幽汤组Ⅰк Bα的磷酸化程度较模型组明显降低(P<0.05).结论 灭幽汤可能通过对降低ⅠкBα的磷酸化程度,抑制NF-кB蛋白表达,发挥其治疗作用.     

藿朴夏苓汤对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠炎症性肠病的作用及机制

目的探讨藿朴夏苓汤(HPXL)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠炎症性肠病(IBD)的药效作用及机制。方法体外研究:采用荧光素酶报告基因测定HPXL对LS174T细胞中核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响;采用LPS刺激细胞,荧光定量PCR和ELISA法测定细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-ɑ表达与释放,研究HPXL对NF-κB炎症通路的调控作用。体内研究:采用饮用4%DSS的方法建立IBD小鼠模型。将C57BL/6小鼠随机分成6组(n=10):正常组,模型组,HPXL高、中、低剂量组和柳氮磺胺吡啶(SASP)组。除正常组外,其他组小鼠饮用水中加入4%DSS造模,各给药组于造模前2 d开始灌胃给药,共9 d,每天1次。于给药第9天处死小鼠,取结肠做HE染色并进行组织病理学研究;ELISA方法检测小鼠结肠黏膜髓过氧化物酶(MPO)活性以及IL-1β、IL-6、TNF-ɑ炎症因子的含量。采用Western Blot法检测结肠组织中NF-кB、磷酸化NF-кB(p-NF-кB)、核转录因子抑制蛋白(IкBα)和磷酸化IкBα(p-IкBα)的蛋白表达水平。结果 HPXL显著抑制TNF-ɑ诱导的NF-кB活性;抑制LPS诱导的炎症因子IL-1β、IL-6、i NOS和COX-2的m RNA表达水平(P0.01),并降低细胞中TNF-α和IL-1β含量的释放(P0.05)。与模型组比较,HPXL能显著对抗DSS诱导的模型小鼠体质量降低和便血。HPXL通过降低结肠组织中NF-кB和IкBα的磷酸化蛋白表达水平,降低结肠组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量以及MPO的活性,改善DSS诱导的IBD症状。结论 HPXL通过抑制NF-κB调节的炎症通路,改善DSS诱导的IBD症状。     

核因子кB对支气管哮喘大鼠淋巴细胞增殖和凋亡的调节作用及雷公藤甲素对其影响

目的 探讨核因子кB(NF-кB)是否参与支气管哮喘淋巴细胞增殖和凋亡的调节过程以及雷公藤甲素对哮喘淋巴细胞增殖和凋亡的调控作用是否通过NF-кB发挥。方法 分别给予哮喘大鼠模型NF-кB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和免疫抑制剂地塞米松及雷公藤甲素干预,进行病理检查、气道反应性测定,采用免疫荧光法检测肺组织和脾淋巴细胞NF-кB P65的表达,免疫组织化学法测定脾淋巴细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、流式细胞术检测脾淋巴细胞凋亡,电泳迁移率改变试验测定NF-кB活性。结果 哮喘气道及脾淋巴细胞NF-кB的核表达量和活性均明显高于正常对照(均P<0.05);哮喘脾淋巴细胞的增殖率明显高于正常对照(P<0.05),而凋亡率明显低于正常对照(P<0.05);NF-кB抑制剂PDTC的应用可使哮喘异常上调的NF-кB核表达量及活性下降,脾淋巴细胞增殖减少、凋亡增多;且NF-кB活性与脾淋巴细胞的增殖率呈显著正相关(r=0.89,P<0.05),而与其凋亡率呈显著负相关(r=-0.54,P<0.05)。在体应用雷公藤甲素后,哮喘气道及脾淋巴细胞NF-кB的核表达量及活性、脾淋巴细胞的增殖率均明显下降(均P<0.05),而凋亡率明显增加(P<0.05),同时气道炎性细胞的浸润及气道高反应性亦明显减轻(均P<0.05),且气道嗜酸粒细胞的数量及气道的反应性与NF-кB活性呈     

滨海当归根中的黄当归醇D通过抑制NF-кB阻止内皮素-1的生成

多种血管疾病与炎症过程密切相关;而在炎症过程中,转录因子核因子-кB(NF-кB)被激活后,可通过提高细胞因子、黏附分子、内皮素-1(ET-1)等多种基因的表达而发挥关键作用。研究表明滨海当归Angelica keiskei Koidzumi根提取物有较好的舒张血管、抗肿瘤和抗转移等作用。作者研究了该植物根中的查耳酮类成分黄当归醇、黄当归醇D、黄当归醇E、黄当归醇F对培养的猪主动脉内皮细胞(PAECS)中NF-кB活性和ET-1的作用。1)采用电泳迁移率转移试验(EMSA)测定试药对TNF-α诱导的PAECS中NF-κB激活的作用。结果显示:黄当归醇和黄当归醇E10…     

积芎解毒方对糖尿病肾病大鼠肾组织NF-кB、AngⅡ表达的影响

目的:观察积芎解毒方对糖尿病肾病大鼠肾组织NF-кB、AngⅡ表达的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、福辛普利组。除正常对照组外采用STZ腹腔注射制作糖尿病肾病大鼠模型,8周后检测大鼠24 h UTP,Real time PCR及Western Blot法检测大鼠肾组织NF-кB、AngⅡmRNA和蛋白的表达情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠肾组织NF-кB、AngⅡmRNA和蛋白的表达显著升高;与模型对照组比较,各治疗组24 h UTP明显下降,NF-кB、AngⅡ和蛋白表达均明显降低。结论:积芎解毒方高剂量对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用可能与通过降低炎症反应从而延缓肾功能发展有关。     

姜黄素对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后NF-кB和Hsp70的表达研究

目的 研究姜黄素对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后NF-кB和Hsp70的表达,进一步明确其作用机制.方法 72只雄性SD大鼠随机分为姜黄素实验组、缺血模型组和正常对照组,每组24只,前两组经夹闭左右肾动脉之间腹主动脉制作脊髓缺血再灌注损伤模型,对照组不做任何处理.实验组缺血前10 min舌下静脉注射20 mg/kg姜黄素;模型组缺血前10min舌下静脉注射同等量生理盐水;对照组经舌下静脉注射等量的生理盐水.再灌注3,12,24,72 h不同时间点各取6只大鼠腰段脊髓组织,分别经HE染色、免疫组织化学法和western blot法检测NF-кB和Hsp70的表达.结果 NF-кB、Hsp70在前两组脊髓组织中的表达均有统计学意义(P<0.05),姜黄素对各时间点脊髓组织中NF-кB表达的抑制率分别是13.12%,15.14%,19.18%和18.02%;同时可诱导Hsp70蛋白的表达,对Hsp70的诱导率分别为10.40%,12.71%,15.95%和13.18%.结论 姜黄素对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后可抑制早期炎症反应的发生,同时对脊髓缺血再灌注损伤具有保护作用,调控Hsp70的表达可能是其作用机制之一.     

开心胶囊预处理对犬心肺复苏后心肌细胞NF-кB活性的影响

目的:研究开心胶囊预处理对犬心跳骤停复苏后心肌细胞NF-кB活性的影响。方法:选健康杂种犬15只,随机分为假手术组、模型组、开心胶囊组,复制犬心跳骤停复苏模型。在恢复自主循环180min后迅速摘取心脏,提取核蛋白,进行凝胶电泳迁移率变化分析。结果:复苏后模型组心肌细胞NF-кB的活性明显高于假手术组(P<0.05)。与模型组相比,开心胶囊组心肌细胞NF-кB的活性明显下降(P<0.05)。结论:心肺复苏使心肌细胞NF-кB活化增加,开心胶囊预处理抗复苏后心功能不全机制可能是与抑制心肌细胞NF-кB的活化有关。     

黄芩苷对缺氧/复氧小胶质细胞TLR4通路的影响

目的:模拟脑梗塞时脑组织内的缺氧/再灌注病理过程,探索缺氧/复氧对原代培养的小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)通路的影响和黄芩苷的干预作用;方法:原代培养小胶质细胞,采用缺氧/复氧的方式制备模型,用黄芩苷25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L3个浓度梯度进行干预,用逆转录聚合酶链反应检测小胶质细胞TLR4 mRNA的表达,Western Blot检测TLR4、抑制因子(I-кB)、p38、ERK蛋白,免疫荧光双染观察髓性分化因子88(MyD88)和核因子кB(NF-кB)。结果:缺氧/复氧激活了TLR4通路,并通过MyD88依赖途径激活了TLR4和下游蛋白MyD88、NF-кB、ERK、I-кB和p38;黄芩苷高剂量组明显抑制了通路中TLR4、MyD88、NF-кB、ERK与p38蛋白的活性和I-кB蛋白的降解。结论:缺氧/复氧激活了小胶质细胞的TLR4通路,黄芩苷通过对TLR4通路蛋白的抑制降低了小胶质细胞的活性,发挥抗炎效应,促进脑缺血的恢复。     

山香圆总黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS,COX-2,NF-кB表达的影响

目的观察山香圆总黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS、COX-2及NF-кB表达的抑制作用。方法采用Griess法检测山香圆总黄酮对NO生成的影响,通过westernblot分析i NOS、COX-2及NF-кB的表达。结果山香圆总黄酮能显著抑制RAW264.7细胞中NO的生成以及iNOS、COX-2及NF-кB蛋白的表达,且随着浓度的增加,抑制效果明显。结论山香圆总黄酮的抗炎作用是通过下调NF-кB的活性进而抑制i NOS、COX-2的表达来实现的。     

3种不同治法方药对大鼠心肌缺血再灌注损伤核因子-кB信号转导通路的影响

目的:观察中医不同治法方药对大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)核因子-кB(NF-кB)信号转导通路的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、祛痰宽胸组、活血化瘀组及痰瘀同治组。可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min再灌注2 h复制I/R模型,应用Western blotting及RT-PCR法检测各组大鼠心肌核因子IкB诱导激酶(NIK)、IкB激酶β(IKKβ)、核转录因子抑制蛋白(IкBα)及NF-кBp65 mRNA的表达。结果:与模型组比较,各治疗组均能降低心肌NIK,IKKβ,NF-кBp65 mRNA水平并上调IкBα蛋白表达(P0.01)。结论:祛痰宽胸法、活血化瘀法及痰瘀同治法均对I/R大鼠有保护作用,其主要作用机制可能是通过抑制NIK,IKKβ蛋白表达,减少IкBα蛋白的磷酸化降解而增加其蛋白水平,从而抑制NF-кB的过度活化,发挥其对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。     

加味升降散对哮喘小鼠肺组织NF-кB表达的影响

目的探讨加味升降散对哮喘小鼠肺核因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)表达的影响。方法采用卵清白蛋白激发小鼠哮喘,然后采用加味升降散进行干预,免疫组织化学染色方法观察NF-κB在小鼠肺组织中的表达变化。结果NF-кB主要表达于气道壁上皮细胞及炎性细胞,各哮喘模型对照组小鼠肺支气管壁NF-кB面积及积分光密度值均明显高于正常组(P<0.01),各用药组小鼠支气管壁NF-кB面积及积分光密度值均显著小于模型对照组(P<0.01或P<0.05),且中药高剂量治疗组支气管上皮细胞及肺泡壁炎性细胞胞核阳性的细胞比例显著低于哮喘组(P<0.05)。结论加味升降散能显著降低哮喘小鼠气道壁细胞内NF-κB的表达,并有效抑制其核转位,提示抑制NF-κB的表达是加味升降散治疗哮喘的重要机制。     

5F诱导的HepG2细胞凋亡与NF-кB活性抑制有关

目的调查中草药半边旗(PsL)提取物Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法通过生存及细胞凋亡分析检测5F对HepG2的增殖抑制效果。同时,采用免疫印迹法评价5F对细胞株HepG2细胞核NF-кB/p65、胞浆IкBα表达的影响。结果 MTT分析证实5F处理呈剂量依赖、时间依赖方式抑制了HepG2增殖。形态分析及Annexin V-EGFP染色则确认了5F诱导的细胞凋亡。而且,该凋亡伴随着IкBα表达的提高、NF-кB/p65表达的降低。结论 5F所诱导HepG2细胞凋亡与IкB生成导致的NF-кB活性抑制有关。     

和中健脾方对混合反流性食管炎模型大鼠食管黏膜的保护作用及对核转录因子-кB信号通路的影响

目的观察和中健脾方对混合反流性食管炎模型大鼠食管黏膜损伤的保护作用及对介导炎性反应的核转录因子-кB(NF-кB)信号通路的影响。方法 60只健康SPF级SD雄性大鼠采用随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、和中健脾方组及西药奥美拉唑组,每组12只。建立混合反流性食管炎大鼠模型,造模3天后给予药物灌胃14天。观察食管组织形态学病理改变并评分,同时检测比较大鼠血清白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、NF-кB p65蛋白的表达。结果模型组大鼠食管黏膜肉眼积分、病理积分、血清NF-кB p65、IL-6、IL-8表达较正常组、假手术组、和中健脾方组及奥美拉唑组均明显升高(P0.05);和中健脾方组大鼠食管黏膜肉眼、病理积分与奥美拉唑组比较差异无统计学意义(P0.05);和中健脾方组血清NF-кB p65、IL-6、IL-8表达高于奥美拉唑组(P0.05)。结论和中健脾方能降低反流性食管炎大鼠食管黏膜的病理损伤程度,其作用机制可能是通过下调模型大鼠血清中促炎蛋白IL-6、IL-8、NF-кB p65的表达水平,从而减轻食管炎症反应达到抗炎作用。     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及TGF-β_1 mRNA和NF-κB表达的影响

目的:研究当归补血汤对培养在高糖条件下肾小球系膜细胞(GMC)增殖及GMC中转化生长因子-β1mRNA(TGF-β1mRNA)及核转录因子(NF-кB)蛋白的表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:①利用噻唑蓝(MTT)比色法动态观察各种处理因素的作用下各组GMC增殖情况;②用荧光定量PCR的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中TGF-β1mRNA表达的情况;③用Western-blot的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中NF-кB蛋白的表达情况。结果:高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,同时细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也增加(P0.05)。而当归补血汤能明显抑制GMC增殖及细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也相应减少(P0.05或P0.01),并呈一定量效关系,即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖及细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也相应增加或减少。结论:高糖可促进GMC增殖及GMC中TGF-β1mRNA和NF-кB蛋白的表达增加,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖,抑制细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达增加,说明当归补血汤能直接抑制GMC增殖、GMC中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达增加,从而发挥预防和治疗肾小球硬化和间质纤维化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

沙苑子黄酮对MCF-7细胞增殖抑制与诱导凋亡作用及其对NF-кB表达的影响

目的 研究沙苑子总黄酮(FAC)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用、诱导凋亡作用以及其对NF-кB表达作用影响.方法 以不同浓度(0.5,0.25,0.125,0.062 5 mg/ ml) 处理MCF-7细胞6,12,24,48,72 h后,SRB法测定细胞增殖抑制;FITC-AnnexinⅤ/PI 双染法检测凋亡率变化;用Western blot法检测NF-кB蛋白表达.结果 SRB法显示, 0.5,0.25 mg/ml浓度沙苑子黄酮作用24,48 72 h以及0.125 mg/ml作用48,72 h后MCF-7细胞增殖抑制作用与对照组相比差异具有显著性(P<0.01);0.062 5 mg/ml作用48,72 h后以及0.125 mg/ml作用24 h后对MCF-7的增殖抑制作用与对照组相比也有差异性(P<0.05).FITC-AnnexinⅤ/PI 双染法FCM(flow cytometry)检测显示,不同浓度沙苑子黄酮(0.5,0.25,0.125,0.062 5 mg/ ml)作用72 h后,MCF-7细胞早期凋亡率分别为71.46%,60.34%,51.27%,46.83%, 晚期凋亡率分别为4.12%,3.27%,2.59%,1.26%.与对照组比较0.5,0.25,0.125 mg/ml组早、晚期凋亡率差异具有显著性(P﹤0.01),0.062 5 mg/ml组的早、晚期凋亡率也有差异性(P﹤0.05),0.5 mg/ml剂量组的早、晚期凋亡率与5-Fu组比较差异无显著性(P﹥0.05).Western blot 检测NF-κB表达,再用 Band Leader软件分析.结果 0.125,0.25,0.5mg/ml浓度组与对照组相比NF-кB表达减少差异具有显著性(P<0.01);0.062 5 mg/ml组与对照组相比NF-кB表达也有差异性(P<0.05).结论 沙苑子黄酮对MCF-7具有增殖抑制和诱导凋亡作用;其作用可能与其下调NF-кB表达有关.     

藻酸双酯钠对类缺血再灌注神经元NF-кB表达的影响

目的研究藻酸双酯钠对神经元类缺血再灌注损伤的NF-кB表达的影响.方法利用免疫细胞化学法应用β-Tubulir及Gap-43对培养的皮质神经元进行鉴定,利用流式细胞仪对经藻酸双酯钠处理后的培养的类缺血再灌注损伤后的皮质神经元NF-κB表达情况进行研究.结果①在培养的神经元上β-Tubulin及Gap-43表达大概为80%左右;②再灌注30 min时,藻酸双酯钠浓度从0.01～0.1 mg·mL-1时,检测的NF-кB阳性细胞比率明显增加,当藻酸双酯钠浓度达1mg·mL-1时,阳性细胞数明显减少.结论不同浓度的藻酸双酯纳对培养的小鼠皮质神经元在类缺血再灌注时NF-кB的表达有较大影响,小剂量时有促进作用,大剂量时有抑制作用.     

Toll样受体/核因子-κB信号通路与恶性肿瘤的研究进展

Toll样受体是一类跨膜受体,与相应配体结合后可启动胞内信号转导,通过激活NF-кB介导多种生物学效应。目前研究发现,TLRs/NF-кB信号通路与肿瘤发生、发展、转移及耐药有密切的关系。     

芹黄素对脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的:观察芹黄素对脑缺血再灌注损伤沙土鼠脑保护作用及炎症反应的影响.方法:采用双侧颈总动脉夹闭手术法建立脑缺血再灌注损伤沙土鼠模型,将其随机分为模型组、尼莫地平组(2 mg/kg)、芹黄素组(40 mg/kg)、假手术组,建模前1周开始腹腔注射给药,再灌注6h内记录各组神经症状并做卒中评分,再灌注6h后以免疫组化法测定脑组织海马CA1区核转录因子-κB(NF-κB)的表达.结果:芹黄素组和尼莫地平组脑缺血再灌注损伤沙土鼠的卒中评分、脑部海马CA1区N F-κB,与模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);与假手术组脑部极低的NF-κB表达相比,模型组沙土鼠海马CA1区NF-κB表达明显升高(P＜0.01).结论:芹黄素可抑制核转录因子的激活,调控炎症因子表达,减轻脑部炎症反应,实现对脑缺血再灌注损伤沙土鼠的脑保护作用.